氣相色譜法測(cè)定蛋白油中樟腦、龍腦、乙酸龍腦酯的含量

杏仁是姜科豆科植物陽(yáng)春沙的干燥成熟果實(shí)。具有除濕、益氣、止咳、健脾、消食、安胎的功效。現(xiàn)代研究表明砂仁有促進(jìn)胃腸機(jī)能、促進(jìn)消化液分泌、抗炎鎮(zhèn)痛、抑制血小板集聚、利膽及抗氧化等作用,其主要有效成分是揮發(fā)油,其中樟腦、龍腦、乙酸龍腦酯等含量較高。砂仁中所含揮發(fā)性主要成分的生物活性研究在國(guó)內(nèi)外多有報(bào)道,因此,常將砂仁中揮發(fā)性成分的含量作為評(píng)價(jià)砂仁藥材質(zhì)量的指標(biāo)。本文采用頂空氣相色譜法測(cè)定了砂仁中揮發(fā)性成分的含量,現(xiàn)報(bào)道如下。1儀器和試劑盒1.1色譜站和自動(dòng)頂空進(jìn)樣器島津-2010氣相色譜儀,配有FID檢測(cè)器,GC-solutionversion2.30色譜工作站;自動(dòng)頂空進(jìn)樣器(AutoHS,成都科林);SARTORIUSAGBP211D十萬(wàn)分之一型電子天平(賽多利斯);100μL微量進(jìn)樣器(迪馬公司)。1.2-乙酸龍腦酯對(duì)照品樟腦對(duì)照品(批號(hào):747-200106),龍腦對(duì)照品(批號(hào):110881-200504),乙酸龍腦酯對(duì)照品(批號(hào):110759-200303)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;砂仁購(gòu)于廣州濟(jì)和堂藥業(yè)有限公司,經(jīng)筆者鑒定為姜科豆蒄屬植物陽(yáng)春砂AmomumvillosumLour.的干燥成熟果實(shí);其余試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1色譜條件及色譜條件色譜柱:RTX-5毛細(xì)管柱(30m×0.53mm×0.25μm);載氣:高純氮?dú)?流速:30mL/min,H2流速:40mL/min,Air流速:400mL/min;溫度:進(jìn)樣口:250℃,色譜柱:80℃,檢測(cè)器:260℃;分流比:1∶1;頂空條件:爐溫110℃,進(jìn)樣針溫度:120℃,傳輸線溫度:120℃,樣品平衡時(shí)間:37min,加壓時(shí)間:15s,放空時(shí)間:20s,進(jìn)樣時(shí)間:1min,進(jìn)樣量:0.7g。色譜圖見圖1。2.2溶液的制備2.2.1內(nèi)標(biāo)溶液精密量取水楊酸甲酯0.10mL,置10mL容量瓶中,以甲醇稀釋并定容,作為內(nèi)標(biāo)溶液。2.2.2對(duì)照品溶液的制備分別精密稱取樟腦、龍腦、乙酸龍腦酯對(duì)照品適量,以甲醇溶解并稀釋,制成樟腦、龍腦、乙酸龍腦酯濃度分別為2.609mg/mL、1.228mg/mL和3.612mg/mL的混合溶液,作為混合對(duì)照品溶液。2.2.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制取砂仁藥材粉末0.7g,精密稱取,置頂空瓶中,精密量取混合對(duì)照品溶液100μL,加入內(nèi)標(biāo)溶液50μL,加蓋密封,作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。2.2.4試驗(yàn)溶液取砂仁藥材粉末0.7g,精密稱取,置頂空瓶中,加入內(nèi)標(biāo)溶液50μL,加蓋密封,作為供試品溶液。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取0.7g砂仁粉末6份,精密稱取,置頂空瓶中,精密量取混合對(duì)照品溶液50、100、150、200、250、300μL于上述頂空瓶中,分別加入內(nèi)標(biāo)溶液50μL,加蓋密封,按測(cè)定方法測(cè)定,以標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比Ai/As為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量m為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見表1。2.4標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)回收率試驗(yàn)根據(jù)“2.3”項(xiàng)下6份試樣的測(cè)定結(jié)果,以實(shí)測(cè)量與加入量的峰面積比分別計(jì)算龍腦、樟腦及乙酸龍腦酯的加樣回收率,結(jié)果見表2。2.5檢測(cè)限的確定精密吸取“2.2”項(xiàng)下制備的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液適量,置頂空瓶中,測(cè)定信噪比,確定信噪比約為3時(shí)的檢測(cè)量作為檢測(cè)限,結(jié)果樟腦、龍腦、乙酸龍腦酯的檢測(cè)限分別為0.6、1.0、0.5μg/mL。2.6標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定樟腦、龍腦及乙酸龍腦酯含量照“2.2”項(xiàng)下方法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液和6份供試品溶液,頂空進(jìn)樣并記錄峰面積,采用標(biāo)準(zhǔn)加入法的計(jì)算方法,得樟腦、龍腦及乙酸龍腦酯的含量分別為0.058%、0.024%、0.066%,RSD分別為2.7%、3.1%、2.1%。2.7供試品溶液制備內(nèi)標(biāo)溶液:精密移取水楊酸甲酯200μL,置2mL容量瓶中,以甲醇稀釋并定容,作為內(nèi)標(biāo)溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液:精密移取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液2mL,置5mL容量瓶中,甲醇定容,加入內(nèi)標(biāo)溶液100μL,搖勻,作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。供試品溶液:取6份砂仁粉末150mg,精密稱取,分別置10mL容量瓶中,精密加入甲醇5mL,搖勻,稱重,超聲10min,放置24h后再超聲10min,用甲醇補(bǔ)回原重,加入內(nèi)標(biāo)溶液100μL搖勻,靜置,取上清液作為供試品溶液。以“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,進(jìn)樣量1.0μL,測(cè)定樟腦、龍腦及乙酸龍腦酯的含量分別為0.059%、0.025%、0.068%,與頂空氣相色譜法的測(cè)定結(jié)果基本一致。3討論3.1赤字條件的選擇3.1.1頂空瓶氮?dú)馄胶鉁囟瓤疾炝?0、90、100、110℃不同平衡溫度下各待測(cè)組分的峰面積,溫度升高各待測(cè)各組分的峰面積顯著增大,由于實(shí)驗(yàn)中所使用的頂空瓶氣墊最高耐受溫度為110℃,故選用110℃為平衡溫度。3.1.2峰面積的確定考察了25、30、35、40、45min不同平衡溫度下各待測(cè)組分的峰面積,在25min到35min,各待測(cè)組分的峰面積隨平衡時(shí)間的延長(zhǎng)而增大,35min后峰面積已無(wú)明顯變化,說(shuō)明已達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡,故選用37min。3.1.3樣品量的確定考察了0.5、0.7、0.85、1g不同進(jìn)樣量下各待測(cè)組分的峰面積,樣品量大于0.7g后,各待測(cè)組分的單位質(zhì)量峰面積逐漸減小,說(shuō)明進(jìn)樣量較多時(shí),樣品揮發(fā)不完全,故選用0.7g。3.2揮發(fā)性成分的檢測(cè)嘗試在樣品中加水作溶劑,結(jié)果表明,揮發(fā)性成分的分析靈敏度下降,可能是由于砂仁中的揮發(fā)性成分在水中溶解性不好。也考察了在樣品中加有機(jī)溶劑二甲基亞砜,結(jié)果表明,揮發(fā)性成分含量更低,原因可能是高溫下的有機(jī)溶劑在體系中分壓增大,嚴(yán)重抑制了待測(cè)組分的揮發(fā)。還通過(guò)改變水和二甲基亞砜的比例作為混合溶劑,綜合考察發(fā)現(xiàn),樣品直接加熱進(jìn)行頂空分析靈敏度最高。3.3龍腦及其他兩組分rsd實(shí)驗(yàn)樣品為藥材粉末,標(biāo)準(zhǔn)品需配制為溶液,為了消除基質(zhì)不同給測(cè)定帶來(lái)的影響,故選用標(biāo)準(zhǔn)加入法。單獨(dú)使用標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定,結(jié)果相關(guān)系數(shù)r在0.992~0.998之間,龍腦的RSD為3.8%,其他兩組分RSD均為2.8%。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品中加入內(nèi)標(biāo)溶液,可以避免由于進(jìn)樣的不一致性及樣品歧視效應(yīng)導(dǎo)致的誤差,從而得到更理想的線性關(guān)系和精密度,因此,本實(shí)驗(yàn)選用標(biāo)準(zhǔn)加入法和內(nèi)標(biāo)法結(jié)合進(jìn)行定量分析。3.4仁粉末在靜置前后的超聲測(cè)定砂仁樣品中樟腦、龍腦、乙酸龍腦酯的平均含量分別為0.052%、0.023%、0.062%。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),砂仁粉末在靜置前超聲10min和