牽引黃黃草水提取物對正常大鼠膽汁分泌量及血清l、gg、as和ai的影響

喬伊草科植物。收載于《中藥大辭典》和《四川中藥志》。其性溫、味甘,具有清熱、利尿消腫、解毒、退黃等功效,主治黃疸、水腫、經閉,以及各型肝炎、膽囊炎、脂肪肝等,尤其對黃疸性肝炎療效顯著。但目前對趕黃草的現(xiàn)代研究很少,僅見幾篇化學成分研究報道,少見藥理研究報道。本文對趕黃草水提取物的利膽退黃作用進行了藥理研究。1材料和方法1.1材料表面1.1.1檢測試劑和試劑盒趕黃草水提取物(取市售趕黃草,每次用8倍量水煎煮1h,共2次,合并2次煎煮液,濃縮,備用);α-萘異硫氰酸酯(alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT):Sigma生產,批號04903EC;優(yōu)思弗膠囊(熊去氧膽酸):LosanPharmaGmbH生產,批號06B17277L;茵梔黃口服液:北京雙鶴藥業(yè)生產,批號272064;思美泰注射液:美國雅培公司生產,批號39S158E04;TBIL、ALT、AST檢測試劑盒:上海榮盛生物技術有限公司生產,批號分別為20061030、20060920、20061012;ALP、GGT檢測試劑盒:南京建成生物工程研究中心生產,批號分別為20061116、20061120。1.1.2動物合格scxkSD大鼠,雌雄各半,體重180~250g,SPF級,由南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供,動物合格證號:SCXK(粵)2006-0015。1.1.3儀器紫外可見分光光度計:北京普析通用公司制造,型號:TU-1901。1.2方法1.2.1烏拉坦麻醉前處理取SD大鼠60只,隨機分為空白對照組、茵梔黃口服液組、趕黃草水提取物低劑量組、趕黃草水提取物中劑量組、趕黃草水提取物高劑量組,共5組,每組12只。各組大鼠實驗前禁食不禁水12h,實驗時按10ml/kg腹腔注射10%烏拉坦溶液使其麻醉,開腹分離總膽管,于近肝臟端封閉,遠肝臟端結扎,在封閉段朝肝臟方向剪一V字型缺口,插入口徑約為0.6mm的塑料管,結扎固定,松開近肝臟端,待穩(wěn)定15min后,收集30min內膽汁分泌量。給藥各組分別通過十二指腸給與相應藥物,空白組給予相應體積的0.9%生理鹽水,分段收集膽汁(30、60、90、120min),測量收集到的膽汁體積。分別合并每只大鼠給藥后收集到的膽汁,按照試劑盒操作測定TBIL值。1.2.2開腹后分離總有及其溶膠質模型取SD大鼠70只,隨機分為正常對照組、假手術組、模型對照組、優(yōu)思弗膠囊組、趕黃草水提取物低劑量組、趕黃草水提取物中劑量組、趕黃草水提取物高劑量組,共7組,每組10只,除正常對照組外,各組大鼠開腹后分離總膽管,上下端結扎后剪斷總膽管,造成梗阻性黃疸模型,假手術組開腹后分離總膽管但不進行結扎,縫合。各組大鼠在手術后5d,按10ml/kg體重進行灌胃給藥,1次/d,共10d,空白對照組、假手術組、模型對照組給等體積蒸餾水。末次給藥后1h,各組大鼠眼眶取血,3000r/min離心10min分離血清,按照試劑盒操作方法測定其TBIL、AST、ALT、ALP、GGT值。1.2.3灌胃給藥大鼠模型分組取SD大鼠60只,隨機分為正常對照組、模型對照組、思美泰組、趕黃草水提取物低劑量組、趕黃草水提取物中劑量組、趕黃草水提取物高劑量組,共6組,每組10只,各組大鼠按10ml/kg體重進行灌胃給藥,1次/d,共5d,其中思美泰組按照1ml/kg腹腔注射配制好的溶液,正常對照組、模型對照組給等體積蒸餾水。末次給藥后1h,除正常對照組外,其余各組動物均腹腔注射100mg/kgANIT植物油溶液進行造模,造模后繼續(xù)按劑量灌胃給藥,1次/d,48h后各組大鼠取血,3000r/min離心10min分離血清,按照試劑盒操作方法測定其TBIL、AST、ALT、ALP、GGT值。2結果2.1多元引物對大鼠臟器臟器tbil含量的影響給藥后趕黃草水提取物低、中、高劑量組各時間點的膽汁分泌量與空白對照組比較,均有顯著性差異(P<0.01或0.05),說明趕黃草水提取物能夠顯著提高正常大鼠膽汁分泌量;此外,趕黃草水提取物低、中、高劑量組的膽汁中TBIL含量與空白對照組比較,均無顯著性差異(表1)。提示趕黃草水提取物能促進正常大鼠膽汁的分泌,但對膽汁中TBIL的含量無明顯影響。2.2不同給藥劑量對出現(xiàn)梗阻性對tbir、alt和ast活性的影響趕黃草水提取物低、中、高劑量組均能顯著降低膽管結扎大鼠血清中TBIL含量、ALP活性、GGT活性、ALT和AST活性(趕黃草水提取物低、中、高劑量組的TBIL含量、ALP活性、GGT活性、ALT和AST活性與模型對照組比較,P<0.01或0.05,表2),提示趕黃草水提取物能夠抑制膽管結扎所致的梗阻性黃疸,具有較好的退黃功效。2.3不同劑量利用p活性、降血活性、alt和ast活性對k-ras基因突變的影響趕黃草水提取物低、中、高劑量組均能顯著降低ANIT所致大鼠血清中TBIL含量、ALP活性、GGT活性、ALT和AST活性(趕黃草水提取物低、中、高劑量組的TBIL含量、ALP活性、GGT活性、ALT和AST活性與模型對照組比較,P<0.01或0.05,表3),提示趕黃草水提取物能夠抑制ANIT所致的膽汁淤積,具有顯著退黃功效。3中草藥對對大鼠臟器病理學的作用黃疸是由于膽色素代謝障礙,血漿中膽紅素含量增高,使皮膚、鞏膜、粘膜等被染成黃色的一種病理變化和臨床表現(xiàn)。按病因學分為溶血性、肝細胞性、膽汁淤積性和先天性非溶血性黃疸。膽汁淤積性黃疸又分為肝內膽汁淤積性黃疸和肝外膽汁淤積性黃疸。黃疸可引起機體多系統(tǒng)的改變,包括中樞神經系統(tǒng)功能障礙、繼發(fā)性膽汁性肝硬化、肝損傷、肝細胞凋亡、脂肪瀉、內毒素血癥、心動過緩、心肌收縮力下降、血壓下降、腎功能不全、免疫功能失調等。因此積極治療黃疸有重要意義。目前治療黃疸的西藥主要著眼于改善肝功能,增加膽紅素代謝和排泄,增加膽汁分泌;而中醫(yī)藥多以清熱解毒、利濕退黃為主要治療方法,兼顧活血、化瘀。趕黃草為苗族民間草藥,在民間有悠久的用藥史,被譽為“神仙草”,臨床可用于治療各種急慢性肝炎、肝源性胃及十二指腸潰瘍、肝纖維化和藥物性肝損傷等,是中成藥肝蘇顆粒的主藥。有研究者從趕黃草的水溶性物質中分離得到具有抗乙肝病毒和保