中藥對應激小鼠脾淋巴細胞增殖的影響

持續(xù)適應可以導致身體功能紊亂，并導致和加重身體疾病的發(fā)生，如病毒感染、自身免疫性疾病和腫瘤。因此,緩解、降低應激的不利反應,對臨床多種疾病的治療有積極的意義。祖國醫(yī)學對持續(xù)性應激(七情、六淫)的臨床治療效果非常顯著,且多數(shù)補益中藥均有免疫增強作用,為此,本文用補益中藥及其復方觀察對應激小鼠脾淋巴細胞受抑的影響及其調整機制。1材料和方法1.1時藥對應激小鼠脾淋巴細胞胞漿鈣離子的影響動物6～8周齡的BALB/c雄性小鼠,由本校醫(yī)學動物部提供,將動物隨機分為對照組、應激模型組、給藥組。束縛性應激動物模型將小鼠裝入自制圓柱形小筒,后肢固定,禁食水,室溫下24h過夜。中藥菟絲子、川斷、女貞子、枸杞子等藥購自北京醫(yī)科大學第三臨床醫(yī)院,并組成不同復方:菟絲子、川斷組(簡稱絲斷);女貞子、枸杞子組(簡稱貞杞);菟絲子、川斷、女貞子、枸杞子組(簡稱合劑)。以上復方按1∶1比例,制成100%水煎劑,4℃保存?zhèn)溆?。灌胃給藥,每只小鼠每日0.4ml(約含0.4g生藥),應激小鼠在應激前連續(xù)給藥1周,對照組灌服等量自來水。補益中藥對應激后小鼠脾淋巴細胞胞漿內鈣離子的影響從表2可見應激后小鼠脾淋巴細胞胞漿內Ca2+濃度與對照組比較增加36%(P<0.05),灌服各藥組均可降低細胞胞漿內Ca2+濃度,其中合劑組作用最好,接近正常對照組水平(P<0.05)。補益中藥對應激后小鼠脾淋巴細胞膜的流動性的影響從表3可見應激后小鼠脾淋巴細胞膜的熒光偏振度(P)明顯降低(P<0.01),提示膜流動性增高,而灌服中藥后均可使P值顯著增高(P<0.05),合劑組的P值接近正常對照組水平(P>0.05)。表明補益中藥對細胞膜有保護作用。合劑對應激后小鼠脾淋巴細胞增殖周期的影響對照組、應激組、合劑組各組小鼠脾淋巴細胞在增殖過程中進入S期(DNA合成期)的細胞百分比分別為13.72±2.23,4.72±0.81及9.76±1.97。G2/M(DNA合成后期,有絲分裂)期分別為4.48±1.44,8.24±1.42及4.74±1.84。G0/G1(DNA合成準備期)分別為81.08±2.45,87.06±1.53及85.48±2.38。進入DNA合成期的細胞百分比,模型組明顯低于正常對照組(P<0.05),DNA合成后期及DNA合成準備期,模型組與對照組比較相對增多(P<0.05)。灌服中藥后進入DNA合成期細胞增多,滯留在DNA合成后期及DNA合成準備期的細胞相對減少。合劑組對應激后小鼠脾淋巴細胞IL-2活性、IL-2R陽性細胞的影響對照組、模型組、合劑組脾淋巴細胞IL-2活性分別為8.62±0.21,4.81±0.29,6.53±0.36U·ml-1。IL-2R陽性細胞分別為18.66±2.91,9.39±1.67及13.93±3.01。與對照組比較模型小鼠脾淋巴細胞合成的IL-2活性下降,IL-2R陽性細胞減少(P<0.01),合劑組可促進脾淋巴細胞IL-2的合成(P<0.05),增加IL-2R陽性細胞(P<0.01)。3應激對應激小鼠免疫細胞的作用現(xiàn)代醫(yī)學對應激的研究進展較深入,偏重于基礎理論的探討,但如何減少和緩解應激對機體的不利的影響,報道甚少。祖國醫(yī)學根據(jù)“陰平陽秘,精神乃治”的整體治療觀點,對各種應激(七情、六淫)所致疾病的治療,采用調整機體陰陽失調,多收到較好療效。為更深入、系統(tǒng)探討中醫(yī)藥緩解應激、提高免疫功能的作用機理,本文觀察了補益中藥對應激小鼠脾淋巴細胞增殖過程中IL-2,IL-2R、細胞周期、胞漿內鈣離子濃度、細胞膜流動性等的影響。本課題采用束縛性應激方法,表明應激后小鼠脾淋巴細胞增殖能力下降,胞漿內鈣離子濃度增加、IL-2產生的活性降低、IL-2R陽性細胞表達減少、細胞膜流動性增強,細胞增殖周期中進入S期細胞減少,滯留于G2/M與G0/G1期的細胞相對增多。灌服菟絲子、川斷及女貞子、枸杞子及四藥合劑后可使上述狀況改善,均可恢復或接近正常對照組水平。據(jù)報道菟絲子、川斷、女貞子、枸杞子各藥,對機體造血系統(tǒng)、細胞與體液免疫功能有調整功能,并有較廣泛的藥理作用。為此本試驗選用這兩組藥。試驗結果表明補陽類藥菟絲子、川斷與補陰類藥女貞子、枸杞子兩組藥均可改善對應激小鼠免疫細胞的影響,而兩組之間無明顯差異,但四藥合劑的作用較強,與正常組水平接近。提示中醫(yī)在組方治療應激所致疾病時,補陰藥與補陽藥相互配伍,可以提高療效。結合本試驗,表明上述補益中藥對應激小鼠免疫細胞的調整作用機理是多環(huán)節(jié),初步認為可對抗應激后小鼠淋巴細胞細胞胞漿內Ca2+亢進,恢復細胞膜流動性,增加白細胞介素-2受體陽性細胞,提高白細胞介素-2合成,調整細胞增殖周期,從而可緩解和降低應激對機體的不利反應。但應激對免疫細胞的影響是多方面的,本課題正在作進一步的研究。主要試劑RPMI-1640,MTT,DPH等為Sigma公司產品。Fura-2/AM為中國醫(yī)學科學院藥物研究所產品1.2細胞膜流動性測定小鼠脾淋巴細胞的增殖反應參見文獻方法。細胞胞漿游離鈣的測定參見文獻方法。淋巴細胞膜流動性測定參見文獻法。白細胞介素-2(IL-2)測定參見文獻方法白細胞介素-2受體(IL-2R)及細胞增殖周期測定參見文獻方法。1.3統(tǒng)計方法2結果試驗數(shù)據(jù)采用SPSS軟件t檢驗法。1.1.11.1.21.1.31.1.41.2.11.2.21.2.31.2.41.2.5灌服中藥后rea誘導的小鼠脾細胞增殖變化響從表1可見應激后小鼠淋巴細胞對ConA誘導的增殖反應低下,與對照組比較明顯下降(P<0.01),灌服中藥后均可提高ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞增殖,其增加百分率分