敗醬草多糖含量測定方法的研究

優(yōu)景草是優(yōu)良的晚生草本植物，廣泛分布于自然界，具有良好的藥物和食物價(jià)值。敗醬草多糖是敗醬草的主要活性成分之一,具有較強(qiáng)的抗氧化和抗病毒作用。關(guān)于敗醬草化學(xué)成分的報(bào)道主要集中在黃酮類和皂苷類成分,而對多糖的研究相對較少。植物多糖的含量測定常采用紫外-可見分光光度法。根據(jù)顯色劑選擇的不同,其方法主要有苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法、地衣酚-硫酸法、咔唑-硫酸法等。蒽酮-硫酸法操作簡單且蒽酮具有價(jià)格便宜、無毒等優(yōu)點(diǎn),易為研究者接受。如梁麗軍等采用蒽酮-硫酸法測定大蒜多糖的含量,李艷等采用蒽酮-硫酸法測定枸杞多糖的含量。該實(shí)驗(yàn)采用蒽酮-硫酸法測定敗醬草多糖的含量,擬為敗醬草的質(zhì)量控制及資源開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)參考。1材料和方法1.1儀器、試劑與儀器敗醬草,采自江西宜春;葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品,上海永葉生物科技有限公司;其他化學(xué)試劑均為分析純;實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。中草藥粉碎機(jī),天津市泰斯特儀器有限公司;KQ5200B型超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司;HH-W420數(shù)顯三用恒溫水箱,金壇市科析儀器有限公司;SHZ-IIIB循環(huán)水真空泵,上海儀表(集團(tuán))供銷公司;紫外-可見分光光度計(jì),北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;電子分析天平,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;YP601N電子天平,上海精密科學(xué)儀器有限公司。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1多酚測定1.2.1.標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密稱取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.108g,以水溶解后定容于100mL容量瓶中,配制濃度約1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密移取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL和0.8mL于10ml具塞試管中,加水2mL后迅速加入1g/L蒽酮-硫酸溶液6mL,搖勻,在沸水浴中加熱10min,取出,冰水浴冷卻10min。照紫外-可見分光光度法于波長585nm下測定吸光度,并作空白實(shí)驗(yàn)。根據(jù)數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程A=9.5063ρ+0.0334,R2=0.9949;ρ為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度(mg/mL)。多糖的質(zhì)量濃度在0.01mg/ml~0.08mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。1.2.1.敗醬草多糖含量的測定取適量的敗醬草粗多糖,加水溶解并稀釋至線性范圍,即得待測液,測定其吸光度。根據(jù)回歸方程計(jì)算敗醬草多糖的含量。其多糖的含量計(jì)算公式為:多糖含量(%)=m2ρV/1000mm1×100%。式中ρ為待測液的質(zhì)量濃度(mg/mL);V為待測液的體積(mL);m1為總敗醬草粗多糖(g);m2為配制待測液時(shí)稱取敗醬草粗提物粗多糖(g);m為敗醬草原料的質(zhì)量(g)。1.2.2黑加農(nóng)草提取工藝如圖1所示。1.2.3方法研究1.2.3.1.精細(xì)試驗(yàn)取對照品溶液分別配制低、中、高濃度的3個(gè)溶液,分別重復(fù)測定5次。1.2.3.2.重復(fù)試驗(yàn)取質(zhì)量相當(dāng)?shù)臄♂u草原料5份,分別按前述的提取工藝流程及敗醬草多糖含量測定項(xiàng)下方法制備待測液,測定其吸光度。1.2.3.3.穩(wěn)定性試驗(yàn)任取一份“1.2.3.2”項(xiàng)下的待測液,分別于0h、1h、2h、3h、4h后測定其吸收度,判斷待測液是否穩(wěn)定。1.2.3.加葡萄糖回收率的測定任取一份“1.2.3.2”項(xiàng)下的待測液50mL,平均分成5份,分別加入不同量的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL,測定混合溶液的吸光度,計(jì)算回收率。2結(jié)果與分析2.1敗醬草多糖的平均含量由表1可知,在同一提取工藝下連續(xù)三次實(shí)驗(yàn),測得敗醬草多糖的平均含量為4.27%,RSD值為4.04%(n=3),說明該法適用于敗醬草多糖的含量測定。2.2精密度實(shí)驗(yàn)由表2可知,葡萄糖溶液的質(zhì)量濃度在線性范圍內(nèi),所得的RSD值都符合要求,說明紫外可見分光光度計(jì)精密度較高。2.3重復(fù)實(shí)驗(yàn)由表3可知,該方法重復(fù)性良好,表明敗醬草多糖提取工藝穩(wěn)定,多糖含量測定結(jié)果可靠。2.4穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)由表4可知,同一待測溶液在4h內(nèi)測得的吸光度的RSD為0.47%,說明待測液的穩(wěn)定性良好。2.5加樣回收率試驗(yàn)由表5可知,敗醬草多糖溶液的加樣回收率都在95%-100%范圍內(nèi),平均回收率為96.32%,5次加樣回收率試驗(yàn)值的RSD為1.36%;表明該方法的系統(tǒng)誤差較小,方法準(zhǔn)確,可行性好。蒽酮-硫酸法可用于敗醬草多糖的含量測定。3結(jié)論和討論3.1加樣回收率試驗(yàn)采用蒽酮-硫酸法測定敗醬草多糖的含量,其敗醬草多糖的含量為4.27%。該法精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性及加樣回收率試驗(yàn)的RSD%值都在2%以內(nèi)。蒽酮-硫酸法適用于敗醬草多糖的含量測定。3.2紫外-可見分光光度法(1)實(shí)驗(yàn)只討論了蒽酮-硫酸法測定敗醬草多糖的含量,苯酚-硫酸法是否適用于敗醬草多糖的含量測定有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。(2)紫外-可見分光光度法用于多糖含量測定,主要在于對