2008236期,b2008,3,趙金超易定華魏旭峰顧春虎顧繼偉李軍朋侯小東】目的探索對戊二醛鞣制豬主動脈瓣改性的新的防鈣化處理方法延長生物瓣使用壽命。方法對照組。將三組豬主動脈瓣埋植于大鼠皮下,分別于2、4、8周后取出通過原子吸收光譜法測定豬主動脈瓣鈣含量和,以評價環(huán)氧氯丙烷化學改性對戊二醛鞣制的豬主動脈瓣鈣化的影響。結(jié)果光鏡下顯示環(huán)氧氯丙烷改性處理組較少炎性細胞浸潤,片,則有大片狀鈣鹽沉積及較多炎性細胞浸潤,膠原纖維結(jié)構(gòu)破壞嚴重大鼠皮下包埋實驗各組瓣膜的氯丙烷對戊二醛鞣制的豬主動脈瓣改性處理,可顯著延緩豬主動脈瓣的鈣化進程。染色也顯示環(huán)氧氯丙烷改性處理明顯減輕了戊二醛鞣質(zhì)的生物瓣膜的鈣化。結(jié)論脈生物瓣進行進一步的化學改性處理,可顯著延緩豬主動脈生物瓣的鈣化進程,可望成為一種防止豬主動tO,,WEIX,,,,0032,a 2,48mn At8,

··論著戊二醛處理的各種生物瓣膜由于具有良好的血流動力學性能低的血栓發(fā)生率無需終生抗凝治療等突出優(yōu)點,因此廣泛應用于臨床1。但經(jīng)長期隨訪發(fā)現(xiàn)其鈣化發(fā)生率高,嚴重地影響著生物瓣的使用壽命2。鑒于豬主動脈瓣生物瓣的鈣化與所采用的組織處理保存方法關(guān)系密切,本研究通過采用環(huán)氧氯丙烷,對戊二醛鞣制的豬主動脈瓣進行化學改性,以期達到延緩其鈣化進程,從而延長生物瓣使用壽命。豬主動脈瓣采集及處理新鮮豬主動脈瓣取自正常成年,,豬齡為12個月左右,2以內(nèi),置入冰鹽水中保存,

基金項目:國家自然科學基金(項目編號:3060037,3067208,863”計劃重點研究課題(項目編號:2006AA02A作者單位:750004銀川,寧夏醫(yī)學院附屬醫(yī)院心臟外科(趙金超顧繼偉李軍朋侯小東院心血管外科(易定華魏旭峰,溶液充分漂洗3戊二醛處理及EC化學改性的豬主動脈瓣制備 好的豬主動脈瓣片置入新鮮配制的0.625%戊二醛溶液中鞣制72。取出的豬主動脈瓣片,用溶液充分漂洗,修剪為1cm×1大小的豬主動脈瓣試片,隨機分為兩組:戊二醛組,置于0.3%的戊二醛溶液中保存組,置于新鮮配制的2%EC溶液中化學改性處理48,均為室溫條件。實驗分組按不同處理方法將瓣膜分為3組,每組36個瓣膜片,即新鮮瓣膜組,戊二醛處理組,處理組。各組別皮下包埋前均經(jīng)輻照消毒(Co6012000Gy照射14備建立大鼠皮下包埋模型實驗動物均為大鼠24只雌雄不拘,130～60,Ⅱ,3組(2周組,4周組,8周組,每組2只由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供。在無菌操作下,取出保存在0.3%戊二醛溶液和改性液中的豬主動脈瓣試片,以去離子水充分漂洗,0.3%戊巴比妥鈉,按20劑量,腹腔內(nèi)注射麻醉大鼠。剪去大鼠背部毛發(fā),絡(luò)合碘消毒鋪蓋無菌小孔巾于大鼠背部皮膚做兩個長· 2008236期,Feb2008,,約1.2的縱切口,深達皮下,向兩側(cè)分離,取出豬主動脈瓣戊二醛組和EC組試片各片;50線連續(xù)縫合皮膚切標本采集及組織形態(tài)學觀察實驗大鼠喂養(yǎng)至24、8周分組織塊經(jīng)4%多聚甲醛溶液固定后脫水16,70℃石蠟包埋,切片(5～6,行HE鈣染色,另一部分3次,反復以濾紙輕輕觸及樣品除去表面水分,稱取0.5g左右25玻璃燒杯中HNO3HO4(4∶1)混合液4,蓋上表面皿置通風櫥內(nèi)過夜(DK型可控電熱板)上低溫消化至樣品透明,升高溫度,繼續(xù)消去離子水,待樣品殘液完全溶解后轉(zhuǎn)入5具塞刻度試管中,3次,合并溶液于試管中,用去離子18080

,計量資料經(jīng)方差齊性檢驗后t檢驗法進行統(tǒng)計分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。組織學觀察新鮮的豬主動脈瓣呈瓷白色,,柔韌性較好處理的豬主動脈瓣表面變黃質(zhì)硬,呈皮革樣,卷曲處理的豬的主動脈瓣表面的顏色無明顯變化,質(zhì)地較新鮮的瓣膜稍硬,不易卷曲,HE染色顯示酒精處理牛心包和對照組牛心包周邊都有少許細胞浸潤,且隨時間的延長細胞浸潤程度加重。2周時三組瓣膜質(zhì)地同前,未見明顯變化,鈣染色顯示未見明顯的鈣化。包埋4周時,鈣染色顯示戊二醛處理組可見鈣化斑,新鮮瓣膜組及EC改性處理組偶見鈣化。包埋周時,鈣染色顯示戊二醛處理組鈣化嚴重,新鮮瓣膜組可見明顯的鈣化點, 改性處理組可見少量鈣化點(見組織鈣含量檢測各處理組豬主動脈瓣試片組織鈣含量隨包埋時間的延長逐漸增加,改性處理組的鈣含量在包埋第2周時已明顯低于新鮮豬瓣膜組,第4周時明顯低于戊二醛組,與兩組鈣含量差異有統(tǒng)計學意義0。見表。圖1鈣染色 00(A、、G分別為環(huán)氧氯丙烷改性處理組包埋2、4、8周時鈣染色、、H分別為新鮮瓣膜組包埋2、4、8周時鈣染色、、分別為戊二醛組包埋2、4、8周時鈣染色)=12,x±,包埋第2包埋第4包埋第843805725645203426 6 5 4576343 4 5 2648 3生物瓣膜在臨床上有著廣泛的應用,但其鈣化問題,大限制了生物瓣膜的使用范圍4。目前生物瓣膜多采用戊二醛處理5。

高,嚴重地影響著生物瓣膜的使用壽命。6等在體外含鈣溶液沉積實驗證實:GA處理后的瓣膜鈣含量明顯高,織中殘留的醛基可誘導鈣晶核的形成有關(guān)制因GA交聯(lián)而被破壞,內(nèi)流并與胞膜中的磷結(jié)合導致鈣沉積此外,e7等研究認為戊二醛預處理后仍有未配對的羧基,生物材料膠原中氨基酸鏈節(jié)中含有的羧基最易與鈣鹽結(jié)合,再加戊二醛處理后的細胞毒性,使心內(nèi)膜細胞難以生長覆蓋,膠原纖維及其間隙長期外露,便可促使鈣鹽沉積致生物瓣膜鈣化。

基油酸10、紫外線照射11等方法,來克服戊二醛交聯(lián)法的缺點,取得了一定的防鈣化效果但其遠期效果仍待觀察。劉維永3等發(fā)現(xiàn)應用化學改性戊二醛處理豬瓣明顯提高了防鈣化效果,又保持了良好組織結(jié)構(gòu)和機械強度的一種新型生物心臟瓣膜前期臨床血流動力學滿意,預期將取得長期耐久性。我們應用對戊二醛交聯(lián)鞣制的豬主動脈瓣進行改性處理,通過大鼠皮下包埋的方法檢驗其抗鈣化性能。o鈣染色及鈣含量測定顯示各處理組豬主動脈瓣試片組織鈣含量隨包埋時間的延長逐漸增加,但新鮮瓣膜組在大鼠皮下包埋實驗起始時間表現(xiàn)了更高的鈣含量,可能與新鮮瓣膜中國實用醫(yī)藥2008年2月第3卷第6期,b2008,3, ·在動物皮下和宿主的免疫反應有關(guān)。改性處理組的鈣含量在包埋第4周時明顯低于戊二醛組,與兩組鈣含量差異有統(tǒng)計學意義,并且隨時間延長,差異更為顯著。說明化學改性具有減輕戊二醛鞣制的豬主動脈瓣鈣化的作用。王雪梅12等用戊二醛陽離子油三氧化二鉻及甘油等復合鞣制的生物材料鉻離子可與膠原分子的游離羧基形成配位絡(luò)合,從而大大減少了游離羧基的存在,使鈣化明顯減輕。我們選用的是一種廣泛應用的交聯(lián)劑,中的環(huán)氧基團及氯基團有較高的化學活性,可以和蛋白質(zhì)中多個親核基團發(fā)生親核取代反應。化學改性戊二醛鞣制的豬主動脈瓣防鈣化的機制可能是通過中雙功能基團,使組織中膠原蛋白發(fā)生交聯(lián)反應,使膠原多肽鏈中的羧基減少鈣鹽和組織結(jié)合減少,從而達到減輕組織鈣化的目的。本實驗中化學改性可顯著延緩豬主動脈瓣的鈣化進程可作為一種可行的能顯著降低生物瓣膜鈣化的方法其遠參考文 ,2000,2(22):225-223 999,47(4):439- 劉維永易定華譚紅梅等新型異種豬瓣的研制與臨床應用.中國胸心血管外科臨床雜志,9974:2932.

ma,,,e,,,,--,,992,53(3):487-,,,:,988,95:577-585.,,,3m,992,4,,,-ml,0ChenW,,mc,994,90:323-329. nnne,2000,3:65-73.王雪梅,許莉,,·臨床案例麥玲玲洪梅患兒男,歲,1個月,因站立不穩(wěn)、步態(tài)異常4于2004年6月9日入院。患兒無明顯誘因下出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)、蹣跚,12內(nèi)迅速發(fā)展至不能獨走,進而不能獨站,扶站時身體搖擺,雙手握物時震顫,少言,48出現(xiàn)雙眼水平震顫。患兒無發(fā)熱、無嘔吐、無抽搐。食欲、睡眠好,大小便無異常。既往體健,病前3個月否認感染、服藥史。家族史無特殊。外院頭顱片模糊,懷疑基底節(jié)有病變。入院查體:T37HR105次/,RR0次,精神稍差,神志清楚。雙眼球自發(fā)性水平粗震顫,,心、肺、腹無異常。四肢肌力Ⅴ級,肌張力稍減低,雙膝反射稍活躍,病理反射未引出。實驗C59,N,L,M1,06/,6。血K6/,a/,100/,/,P1.7。肝、腎功能未見異常。腰穿腦脊液壓力不高,,/,,

正常。入院后病情仍在進展病程第5天不能坐數(shù)小時后不能豎頭;予抗病毒、能量合劑及營養(yǎng)神經(jīng)作者單位:53002藥物病程第8天下午能豎頭次晨獨坐,能扶站,雙手仍有震顫,但可握物、拿東西吃,家長堅決要求出院。電話隨訪,出院10后能扶走,3周后患兒基本恢復正常。討論急性小腦共濟失調(diào)為兒童特有,好發(fā)于1～4歲兒童有地域性病例1～3周前有前驅(qū)呼吸道或消化道感染癥狀,1/2患兒有發(fā)疹性病毒感染史。最常見的前驅(qū)疾病是水痘。急性小腦共濟失調(diào)也可見于細菌支原體等感染。有接種疫苗后發(fā)病的報道。本例患兒有其特殊性在完全健康的基礎(chǔ)上發(fā)生共濟失調(diào),在玩耍過程