益智寧神顆粒對(duì)兒童注意缺陷多動(dòng)障礙adhd模型大鼠認(rèn)知功能的影響

兒童應(yīng)該注意多動(dòng)障礙。這是學(xué)齡兒童中發(fā)病率高的心理行為障礙疾病，可能會(huì)嚴(yán)重影響兒童的身心健康和學(xué)習(xí)能力。導(dǎo)師馬融教授開(kāi)展兒童多動(dòng)癥專病研究多年,結(jié)合豐富的臨證經(jīng)驗(yàn),首次提出“益腎填精,寧神益智”的治療法則,并總結(jié)出治療ADHD的有效方劑——益智寧神顆粒。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用目前國(guó)際上使用最為廣泛的ADHD動(dòng)物模型——自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneouslyhypertensiverat,SHR),通過(guò)對(duì)Morris水迷宮的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,評(píng)價(jià)各種藥物對(duì)ADHD動(dòng)物模型認(rèn)知功能的改善情況。實(shí)驗(yàn)方法1.大鼠智寧神模型將二級(jí)健康SHR清潔級(jí)雄性幼鼠48只,4周齡,體質(zhì)量(50±10)g,隨機(jī)分為6組,益智寧神高劑量組,益智寧神中劑量組,益智寧神低劑量組,靜靈口服液組,利他林組,模型組。將二級(jí)健康8只Wistar大鼠,體質(zhì)量(50±10)g,設(shè)為正常對(duì)照組。試驗(yàn)大鼠均購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。2.模型組及培養(yǎng)時(shí)間中藥組按高、中、低給藥劑量分別灌服益智寧神顆粒,給藥劑量分別為37.5g/kg,28.125g/kg,18.75g/kg,每日1次,持續(xù)7d。靜靈口服液組灌服靜靈口服液12.5ml/kg,每日1次,持續(xù)7d。利他林組灌服利他林6.25mg/kg,每日1次,持續(xù)7d。模型組予蒸餾水10m1/kg,每日1次,持續(xù)7d。正常對(duì)照組不作處理。3.不同劑量樹(shù),生藥量高,劑量低益智寧神顆粒:由紫河車、熟地黃、遠(yuǎn)志、澤瀉、石菖蒲、黃連等組成,江陰天江藥業(yè)有限公司提供,批號(hào):0512。按高、中、低給藥劑量以蒸餾水配成(每次灌胃時(shí)當(dāng)場(chǎng)配置),生藥含量分別為3.750g/ml,2.81253g/ml,1.875g/ml。利他林片:蘇州第一制藥廠生產(chǎn),批號(hào):041225。每次灌胃時(shí)當(dāng)場(chǎng)配置,所配懸濁液濃度0.625mg/ml。靜靈口服液:由熟地黃、山藥、茯苓、牡丹皮、遠(yuǎn)志、澤瀉、龍骨、女貞子、黃柏、知母、五味子、石菖蒲等組成,遼寧本溪市中藥廠生產(chǎn),批號(hào):20040506?？芍苯庸辔?。4.菲比水宮殿的實(shí)驗(yàn)4.1水池等的空間事物安排Morris水迷宮及其測(cè)試軟件由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所提供本實(shí)驗(yàn)。由直徑120cm,高50cm的圓形水池(黑色)組成。隨意將水池等分為4個(gè)象限(東北,東南,西南和西北象限)。每天實(shí)驗(yàn)水溫保持在(20+-2)℃。圓柱形平臺(tái)(黑色)可置于任一象限中央。水池四周存在豐富的空間參照物(門、窗、燈、桌椅及實(shí)驗(yàn)者等),且位置保持不變。一攝像頭置于水迷宮中央的上方,可自動(dòng)采集和分析逃避潛伏期等數(shù)據(jù)。給藥結(jié)束后,進(jìn)行適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)1d,工作記憶測(cè)試4d,排除視覺(jué)影響測(cè)試1d,以評(píng)價(jià)各組藥物對(duì)大鼠認(rèn)知功能的影響。4.2適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)4.3平臺(tái)內(nèi)定位問(wèn)題本實(shí)驗(yàn)根據(jù)1999年Wainwright首次提出的應(yīng)用Morris水迷宮測(cè)試大鼠工作記憶即短暫記憶功能的方法,對(duì)各組大鼠進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試共4d,4次/d,平臺(tái)位置在每天4次測(cè)試中固定不變,但每天更換所在象限。平臺(tái)沒(méi)于水面下2cm,其中點(diǎn)離池壁30cm。每個(gè)象限選一點(diǎn),共4點(diǎn)作為入水點(diǎn),訓(xùn)練時(shí)分別從4個(gè)入水點(diǎn)將動(dòng)物面朝池壁輕輕放入水中,記錄大鼠從入水至找到平臺(tái)的時(shí)間為逃避潛伏期,然后讓大鼠在平臺(tái)上停留l0s,再放回籠中。如果90s內(nèi)找不到平臺(tái),潛伏期記為90s,并將大鼠引導(dǎo)至平臺(tái)上并停留l0s,前3次連續(xù)不尋找平臺(tái)的大鼠篩除。以潛伏期作為這一天的成績(jī)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。4.4入水點(diǎn)對(duì)動(dòng)物的影響調(diào)節(jié)水面高度,使平臺(tái)高于水面2cm,將潛伏期<10s的大鼠分別從3個(gè)入水點(diǎn)將動(dòng)物面朝池壁輕輕放入水中,進(jìn)行測(cè)試。以潛伏期作為這次的測(cè)試成績(jī)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以排除視覺(jué)影響。5.小組精神處理工作記憶測(cè)試前1d,先讓動(dòng)物在不含平臺(tái)的水池中自由游泳2min,使其熟悉迷宮環(huán)境。所有數(shù)據(jù)用表示,并用spss10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。P<0.05為顯著差異。結(jié)果1.對(duì)認(rèn)知功能的影響見(jiàn)表1-表4,圖1。第3天第1次測(cè)試時(shí),正常對(duì)照組與模型組即開(kāi)始出現(xiàn)顯著差異(P<0.05),說(shuō)明模型組大鼠的認(rèn)知功能明顯降低。從第3天第3次測(cè)試開(kāi)始,益智寧神高劑量組與模型組比較有顯著差異(P<0.05);第4天第1次測(cè)試開(kāi)始,益智寧神中、低劑量組,靜靈口服液組與模型組比較亦有顯著差異(P<0.05),且以上差異均能持續(xù)到最后1次測(cè)試,說(shuō)明益智寧神各劑量組、靜靈口服液組可以持續(xù)性地顯著改善認(rèn)知功能,且益智寧神高劑量組起效時(shí)間早于其他治療組。利他林組始終與模型組無(wú)顯著差異,說(shuō)明該種西藥對(duì)認(rèn)知功能無(wú)明顯作用。除利他林組外,其余各治療組之間,組間比較P>0.05,說(shuō)明在改善認(rèn)知功能方面無(wú)明顯差異。2.排除視覺(jué)影響測(cè)試各組最后1天測(cè)試潛伏期<10s的大鼠,上臺(tái)時(shí)間無(wú)顯著差異,說(shuō)明潛伏期的顯著變化與視覺(jué)無(wú)關(guān)。見(jiàn)表5。智寧神顆?！懻揂DHD是兒童中常見(jiàn)的以活動(dòng)過(guò)度和注意力缺陷為主要特征的一種行為障礙綜合征。導(dǎo)師馬融教授結(jié)合臨證經(jīng)驗(yàn),認(rèn)為本病以腎精虧虛為主要特點(diǎn),因?yàn)槟I為先天之本,生命之根,主藏精,腎精所化生之腎氣,通過(guò)三焦巡行全身,是機(jī)體各種生命活動(dòng)的原動(dòng)力,可以調(diào)節(jié)人體各個(gè)臟腑、經(jīng)絡(luò)等組織器官的生理功能,所以患兒常見(jiàn)的臨床癥狀表現(xiàn),如肝腎陰虛、脾虛肝旺、心脾不足等方面證候,實(shí)際是由于腎精虧虛引起的。所以導(dǎo)師針對(duì)腎精虧虛,首次提出“益腎填精,寧神益智”的治療法則,并總結(jié)出治療ADHD的有效方劑——益智寧神顆粒。方中紫河車,味甘、咸、溫,入腎經(jīng),養(yǎng)血益精;熟地黃,甘、微溫,入肝、腎經(jīng),滋陰補(bǔ)血。兩者共為君藥,可“益腎填精”,以達(dá)治動(dòng)之本。石菖蒲、遠(yuǎn)志共為臣藥,其中石菖蒲,辛、微溫,入心肝經(jīng),開(kāi)竅、豁痰、理氣、活血;遠(yuǎn)志,辛溫,入心腎兩經(jīng),功可安神益智,解郁。兩藥相和,可寧神益智,以達(dá)治動(dòng)之標(biāo)。澤瀉,甘寒,入腎經(jīng),有瀉熱之效,為佐藥,可佐諸藥之辛溫,以免溫燥太過(guò)。黃連為使藥,性味苦寒,入心肝經(jīng),可瀉心肝之火熱。綜觀全方,共奏“益腎填精,寧神益智”之功,最終標(biāo)本兼治,使臨床癥狀得到改善。ADHD兒童智力大多正常或接近正常,但由于存在多動(dòng)、注意力集中困難、沖動(dòng)等癥,給學(xué)習(xí)帶來(lái)困難,但記憶力往往正常。在測(cè)試中,正常對(duì)照組大鼠的逃避潛伏期隨訓(xùn)練天數(shù)的增加而縮短,學(xué)習(xí)成績(jī)每天均有較明顯的進(jìn)步;模型組沒(méi)有表現(xiàn)出這種趨勢(shì),整個(gè)訓(xùn)練過(guò)程中其逃避潛伏期均維持在較高的水平,說(shuō)明模型組大鼠的學(xué)習(xí)過(guò)程明顯延長(zhǎng),其學(xué)習(xí)獲取能力即認(rèn)知功能明顯低于正常大鼠。從第3天開(kāi)始益智寧神高劑量組,第4天開(kāi)始益智寧神中、低劑量組,靜靈口服液組可以持續(xù)性地顯著縮短逃避潛伏期,改善認(rèn)知功能,且益智寧神高劑量組起效時(shí)間早于其他治療組。利他林組雖有縮