第11章紫外可見(jiàn)分光光度法(UV-VIS)Ultraviolet-visiblespectrophotometry可見(jiàn)光本章主要內(nèi)容§11.1概述§11.2光吸收的基本定律§11.3紫外—可見(jiàn)分光光度計(jì)§11.4顯色反應(yīng)及其影響因素§11.5紫外—可見(jiàn)分光光度測(cè)定的方法§11.6紫外—可見(jiàn)分光光度法的誤差和測(cè)量條件的選擇§11.7紫外—可見(jiàn)分光光度法應(yīng)用實(shí)例紫外-可見(jiàn)分光光度法是基于物質(zhì)光化學(xué)性質(zhì)而建立起來(lái)的分析方法。其特點(diǎn)是：（1）靈敏度高：測(cè)定下限可達(dá)10-5～10-6mol·L-1；10-4%～10-5%（2）準(zhǔn)確度能夠滿足微量組分(<1%)的測(cè)定要求：

Er：1%～5%（3）儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便快速（4）應(yīng)用廣泛§11.1概述光學(xué)分析法包括：非光譜法：不以光的波長(zhǎng)為特征訊號(hào)例如折射法，濁度法，旋光法光譜法：在光（或其它能量）的作用下，通過(guò)測(cè)量物質(zhì)產(chǎn)生的發(fā)射光、吸收光或散射光的波長(zhǎng)和強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行分析的方法。分為：吸光光度法，發(fā)射光譜法吸光光度法基于被測(cè)物質(zhì)的分子對(duì)光具有選擇性吸收的特性而建立起來(lái)的分析方法。包括：比色法：比較有色溶液顏色深淺

分光光度法：根據(jù)物質(zhì)對(duì)一定波長(zhǎng)的光的吸收程度

依據(jù)物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)范圍光的吸收主要有：

真空紫外光度法：10～200nm（遠(yuǎn)紫外光）

紫外吸光光度法：200400nm（近紫外區(qū)）

可見(jiàn)吸光光度法：400750nm

紅外光度法：2.51000m波動(dòng)性粒子性

E光的折射光的衍射光的偏振光的干涉光電效應(yīng)光的波粒二象性1、光的基本性質(zhì)

c－真空中光速：~3.0×108m/s

－波長(zhǎng)：1

m=10-6m,1nm=10-9m,1?=10-10m

－頻率，單位：赫茲Hz次/秒

n－折射率，真空中為1：

=c

；波數(shù)=1/

=

/c光的傳播速度:波動(dòng)性

h－普朗克(Planck)常數(shù)6.626×10-34J·s

－頻率

E－光量子具有的能量單位：J(焦耳)，eV(電子伏特)1eV=1.602×10－19J微粒性光是由光子流組成，光子的能量：

結(jié)論：一定波長(zhǎng)的光具有一定的能量，波長(zhǎng)越長(zhǎng)(頻率越低)，光量子的能量越低。

波粒二象性光譜區(qū)間

射線x射線紫外光紅外光微波無(wú)線電波10-2nm10nm102nm104nm0.1cm10cm103cm105cm可見(jiàn)光400～750nm0.1nm～10nm~750nm~0.1cm0.1mm～1m1m～1000m10nm~200nm200~400nm遠(yuǎn)紫外近紫外（真空紫外）單色光,復(fù)合光

單色光復(fù)合光單一波長(zhǎng)的光由不同波長(zhǎng)的光組合而成的光白光青藍(lán)青綠黃橙紅紫藍(lán)互補(bǔ)色M+熱M+熒光或磷光M+

h

M*基態(tài)激發(fā)態(tài)E1

（△E）E22、物質(zhì)對(duì)光的吸收滿足Plank

條件物質(zhì)的電子結(jié)構(gòu)不同，所能吸收光的波長(zhǎng)也不同，這就構(gòu)成了物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收基礎(chǔ)。（1）.吸收光與透射光當(dāng)復(fù)合光照射到物體上時(shí)，一部分光被吸收，而另一部分光則被透射過(guò)去。即：入射光=吸收光＋透射光吸收光透射光互補(bǔ)物質(zhì)的顏色與光的關(guān)系完全吸收完全透過(guò)吸收黃色光光譜示意光的作用方式表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光不同顏色的可見(jiàn)光波長(zhǎng)及其互補(bǔ)光藍(lán)黃紫紅綠紫黃綠綠藍(lán)橙紅藍(lán)綠

/nm顏色互補(bǔ)光400-450紫黃綠450-480藍(lán)黃480-490綠藍(lán)橙490-500藍(lán)綠紅500-560綠紅紫560-580黃綠紫580-600黃藍(lán)600-650橙綠藍(lán)650-760紅藍(lán)綠300400500600700

/nm

5451.00.80.60.40.2AbsorbanceMnO4-的吸收光譜（2）.吸收光譜(AbsorptionSpectra)S2S1S0A

h

分子內(nèi)電子躍遷帶狀光譜用不同波長(zhǎng)的單色光照射，測(cè)吸光度—

吸收曲線紫外可見(jiàn)吸收光譜：分子價(jià)電子能級(jí)躍遷。電子躍遷的同時(shí)，伴隨著振動(dòng)能級(jí)、轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的躍遷。帶狀光譜。定性分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收在一定實(shí)驗(yàn)條件下,A∝cA

c增大AB

A

最大吸收波長(zhǎng)

max（1）吸收光譜的波長(zhǎng)分布是由產(chǎn)生譜帶的躍遷能級(jí)間的ΔΕ所決定，反映了分子內(nèi)部能級(jí)分布狀況——定性分析基礎(chǔ)（2）吸收譜帶強(qiáng)度與該物質(zhì)分子吸收的光子數(shù)成正比——定量分析基礎(chǔ)同一種物質(zhì)不同濃度下，其吸收曲線形狀相似λmax不變。在λmax處吸光度A隨濃度變化的幅度最大。所以測(cè)定最靈敏。此特性可作為定量分析時(shí)選擇入射光波長(zhǎng)的重要依據(jù)。

Lambert-Beer定律吸收曲線的討論：A.透光率(透射比,Transmittance)透光率定義:T取值為0.0%~100.0%全部吸收T=0.0%全部透射T=100.0%入射光強(qiáng)度

I0透射光強(qiáng)度It一束平行單色光B.吸光度(Absorbance)T=0.0%A=∞T=100.0%A=0.0溶液的T越大,說(shuō)明對(duì)光的吸收越小,濃度低;T越小，溶液對(duì)光的吸收越大，濃度高1.00.50AcA100500T%TA,T,C三者的關(guān)系吸光度的加合性在多組分體系中如果各吸光物質(zhì)之間無(wú)相互作用這時(shí)體系總的吸光度等于各個(gè)吸光物質(zhì)的吸光度之和。

吸光度的測(cè)量：用參比溶液調(diào)T=100%（A=0），再測(cè)樣品溶液的吸光度，即消除了吸收池對(duì)光的吸收、反射，溶劑、試劑對(duì)光的吸收等?！?1.2光吸收基本定律:K--吸光系數(shù)b--吸光液層的厚度(光程)，cmc--吸光物質(zhì)的濃度，g/L,mol/L

當(dāng)一束平行單色光通過(guò)均勻、透明的吸光介質(zhì)時(shí)，吸光度與吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度和吸收層厚度的乘積成正比.Lambert-Beer定律吸光度與光程的關(guān)系

A=Kbc

0.10b0.202b0.00光源檢測(cè)器顯示器參比朗伯定律(1760)吸光度與濃度的關(guān)系

A=Kbc0.10c0.202c0.00光源檢測(cè)器顯示器參比比爾定律(1852)K

K

a吸光系數(shù)，L·g–1·cm-1c：mol/Lc：g/Lc：g/100mLK

比吸光系數(shù),100mL·g-1·cm-1吸光系數(shù)(K)入射光波長(zhǎng)物質(zhì)的性質(zhì)溫度與濃度無(wú)關(guān),取值與濃度的單位相關(guān)摩爾吸光系數(shù)，L·mol–1·cm-1

朗伯-比爾定律的適用條件單色光

應(yīng)選用

max處或肩峰處測(cè)定.稀溶液

濃度增大，分子之間作用增強(qiáng).吸光質(zhì)點(diǎn)形式不變

離解、絡(luò)合、締合會(huì)破壞線性關(guān)系,

應(yīng)控制條件(酸度、濃度、介質(zhì)等).溶液濃度的測(cè)定A＝

bc工作曲線法(校準(zhǔn)曲線)外標(biāo)法朗伯-比爾定律的分析應(yīng)用

01.02.03.04.0c(mg/mL)A。。。。*0.800.600.400.200.00Axcx

偏離朗伯—比耳定律的原因

標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定未知溶液的濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時(shí)），這種現(xiàn)象稱為對(duì)朗伯—比耳定律的偏離。引起這種偏離的因素：（1）物理性因素，即儀器的局限性，難于獲得單色光；（2）化學(xué)性因素。(2)化學(xué)性因素吸光質(zhì)點(diǎn)的相互作用，濃度較大時(shí)，產(chǎn)生負(fù)偏差，朗伯-比爾定律只適合于稀溶液（C<10-2mol/L)。

平衡效應(yīng)：溶液中存在著離解、聚合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學(xué)平衡時(shí)。使吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度發(fā)生變化，影響吸光度。

例：鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列平衡：

CrO42-＋2H＋

=Cr2O72-＋H2O

溶液中CrO42-、Cr2O72-的顏色不同，吸光性質(zhì)也不相同。故此時(shí)溶液pH對(duì)測(cè)定有重要影響。摩爾吸光系數(shù)ε的討論摩爾吸光系數(shù)ε

(L·mol-1·cm-1)在數(shù)值上等于濃度為1mol/L,液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下的吸光度吸收物質(zhì)在一定波長(zhǎng)和溶劑條件下的特征常數(shù)在溫度和波長(zhǎng)等條件一定時(shí)，ε僅與吸收物質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)，與待測(cè)物濃度無(wú)關(guān)；同一吸光物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的ε值是不同的。在最大吸收波長(zhǎng)λmax處的摩爾吸光系數(shù)，以εmax表示

表明了該吸收物質(zhì)最大限度的吸光能力，也反映了光度法測(cè)定該物質(zhì)可能達(dá)到的最大靈敏度。吸光光度法的靈敏度的表示方法

>105

超高靈敏度

=(6～10）×104

高靈敏

=(2～6)×104

中等靈敏度;

<2×104

不靈敏.

越大,靈敏度越高定義：當(dāng)產(chǎn)生吸光度為0.001時(shí)，單位截面積(1cm2)的液層內(nèi)所能檢測(cè)出的吸光物質(zhì)的最低含量。用S表示，單位：

g·cm-2S小靈敏度高;

相同的物質(zhì),M小則靈敏度高.Sandell(桑德?tīng)?靈敏度(S)A=

bc

=0.001

bc

＝0.001/

變換單位:bcmcmol/L=bcM106

g/1000cm2例1鄰二氮菲光度法測(cè)鐵:

(Fe)=1.0mg/L,

b=2cm,A=0.38,計(jì)算，S

解：c(Fe)=1.0mg/L=1.0×10-3g/L

/55.85g/mol=1.8×10-5mol/LS=M/

=55.85/1.1×104=0.0051(

g/cm2)§11.3紫外—可見(jiàn)分光光度計(jì)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)一般包括光源、單色器、吸收池和檢測(cè)顯示幾部分，基本結(jié)構(gòu)如下：通過(guò)棱鏡或光柵得到一束近似的單色光，波長(zhǎng)可調(diào),故選擇性好,準(zhǔn)確度高。光源單色器檢測(cè)系統(tǒng)吸收池

可見(jiàn)分光光度計(jì)廣州泰納UV-4501紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)

紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)1、光源：發(fā)出所需波長(zhǎng)范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有足夠 的光強(qiáng)度,穩(wěn)定。 可見(jiàn)光區(qū)：鎢燈，碘鎢燈(320～2500nm)

紫外區(qū)：氫燈，氘燈(180～375nm)

氙燈：紫外、可見(jiàn)光區(qū)均可用作光源

/nm鎢燈（熱輻射光源）4006008001000氙燈（氣體放電光源）氫燈強(qiáng)度一、分光光度計(jì)的主要部件氙燈氫燈鎢燈2、單色器：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的 裝置。

（1）棱鏡:依據(jù)不同波長(zhǎng)光通過(guò)棱鏡時(shí)折射率不同入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ2800

600

500400（2）光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。M1M2出射狹縫光屏透鏡平面透射光柵光柵衍射示意圖原理：利用光通過(guò)光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光.波長(zhǎng)范圍寬,色散均勻,分辨性能好,使用方便3、吸收池(比色皿)：用于盛待測(cè)及參比溶液。 可見(jiàn)光區(qū)：光學(xué)玻璃池（350～3200nm）

紫外區(qū)：石英池玻璃（185～4000nm）5、顯示器：

低檔儀器：刻度顯示中高檔儀器：數(shù)字顯示，自動(dòng)掃描記錄4、檢測(cè)器：利用光電效應(yīng)，將光能轉(zhuǎn)換成

電流訊號(hào)。 光電池，光電管，光電倍增管吸光光度法儀器主要差異比較可見(jiàn)光(400～750nm)紫外光(200～400nm)光源鎢燈碘鎢燈320～2500氫燈氘燈180～375吸收池材料玻璃（350～3200）石英（185～4000）二、分光光度計(jì)的類型1.單光束分光光度計(jì)2.雙光束分光光度計(jì)多通道儀器

同時(shí)測(cè)量200～820nm范圍內(nèi)的整個(gè)光譜,比單個(gè)檢測(cè)器快316倍,信噪比增加3161/2倍.

3.其他類型分光光度計(jì)纖維光度計(jì)

將光度計(jì)放入樣品中，原位測(cè)量.

對(duì)環(huán)境和過(guò)程監(jiān)測(cè)非常重要。0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示單波長(zhǎng)單光束分光光度計(jì)簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。單波長(zhǎng)雙光束分光光度計(jì)比值光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示光束分裂器自動(dòng)記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高?！?1.4顯色反應(yīng)及其影響因素顯色反應(yīng)

被測(cè)元素在某種試劑的作用下，轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)，稱之。

mX(待測(cè)物)＋nR(顯色劑)＝XmRn(有色化合物)主要有配位反應(yīng)(為主)和氧化還原反應(yīng)。

配位顯色反應(yīng)

當(dāng)金屬離子與有機(jī)顯色劑形成配合物時(shí)，通常會(huì)發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移躍遷，產(chǎn)生很強(qiáng)的紫外—可見(jiàn)吸收光譜。氧化還原顯色反應(yīng)例如：鋼中微量錳的測(cè)定，Mn2＋不能直接進(jìn)行光度測(cè)定

2Mn2＋＋5S2O82-＋8H2O=2MnO4-+10SO42-＋16H+將Mn2＋

氧化成紫紅色的MnO4-后，在525nm處進(jìn)行測(cè)定。二.顯色劑：：：：助色團(tuán)：－NH，－OH，－X(孤對(duì)電子)neO生色團(tuán)：－N＝N－，－N＝O，OC=S,－N（共軛雙鍵）πe無(wú)機(jī)顯色劑:

SCN-

[Fe(SCN)]2+

；H2O2

[TiO·H2O2]2+有機(jī)顯色劑:CH3－C－C－CH3HO－NN－OH＝＝NNOHCOOHSO3HOO型：NNNOH

OHON型：PARNHNHNSNS型：雙硫腙NN型：丁二酮肟鄰二氮菲磺基水楊酸

有機(jī)顯色劑三、顯色反應(yīng)的選擇

*靈敏度高，一般ε>104*選擇性好*顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)明顯吸收，且

λmax>60nm.（有色化合物與顯色劑之間的顏色差別）*反應(yīng)生成的有色化合物組成恒定，穩(wěn)定。Fe3++磺基水楊酸→三磺基水楊酸鐵(黃色)，（組成固定）。

Fe3++SCN-→FeSCN2+、Fe(SCN)2

+……，（組成不固定）

*顯色條件易于控制，重現(xiàn)性好。四、顯色條件的確定c(R)c(R)c(R)1.顯色劑用量

Mo(SCN)32+

淺紅Mo(SCN)5

橙紅Mo(SCN)6-淺紅Fe(SCN)n3-n選擇曲線變化平坦處。2.顯色反應(yīng)酸度

OH-酸度的影響副反應(yīng)M+nR=MRnH+存在型體的變化RH=R-+H+

生成不同配比的絡(luò)合物例，磺基水楊酸(ssal)–Fe3+pH=2~3FeR紫紅色pH=4~7FeR2橙色pH=8~10FeR3黃色

pH>12Fe(OH)3

沉淀pH1<pH<pH2選擇曲線中吸光度較大且恒定的平坦區(qū)ApH酸度的影響鄰二氮菲－亞鐵反應(yīng)完全度與pH的關(guān)系pH3～8(檸檬酸鹽介質(zhì))為適宜的酸度范圍32+3NNFe

桔紅色

max檸檬酸鹽介質(zhì)+Fe2+25℃50℃t/minA3.顯色溫度

另外，還有介質(zhì)條件、有機(jī)溶劑、表面活性劑等.一般盡量采用水相測(cè)定4、顯色時(shí)間不同的顯色反應(yīng)需要放置不同的時(shí)間，才能達(dá)到溶液顏色的穩(wěn)定形成。另一方面，不同的顯色物具有不同的穩(wěn)定持續(xù)時(shí)間，測(cè)定一定要在其穩(wěn)定期進(jìn)行，否則，有較大的測(cè)定偏差。五.共存干擾離子的消除

Co2＋,Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2(藍(lán))⑴NaFSCN－Co2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN－測(cè)Co2＋(含F(xiàn)e3+):

(掩蔽法)

化學(xué)法如無(wú)法通過(guò)控制酸度和掩蔽的辦法消除干擾，則需采取分離法。測(cè)Fe3＋:(控制pH)，用磺基水楊酸Fe3+,Cu2+Fe(ssal)+（紫紅）Cu2+pH2.5ssal

物理法—選擇適當(dāng)?shù)臏y(cè)定波長(zhǎng)415500鈷-亞硝基紅鹽

A絡(luò)合物試劑

/nm一、標(biāo)準(zhǔn)曲線法(校準(zhǔn)曲線，工作曲線法，外標(biāo)法）A＝

bc§11.5紫外—可見(jiàn)分光光度測(cè)定的方法01.02.03.04.0c(mg/mL)A。。。。*0.800.600.400.200.00Axcx標(biāo)準(zhǔn)系列未知樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線法在儀器、方法和條件都固定的情況下，標(biāo)準(zhǔn)曲線法可以多次使用而不必重新制作，因此它適用于大量的經(jīng)常性的工作。也可用直線回歸的方法，求出回歸的直線方程，再根據(jù)試樣溶液所測(cè)得的吸光度，從回歸方程求得試樣溶液的濃度。在帶有微機(jī)的分光光度計(jì)上，這些工作都能自動(dòng)完成2、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法

又稱直接對(duì)照法：不是用標(biāo)準(zhǔn)系列，而是用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液與試樣溶液在相同條件下進(jìn)行顯色、定容，并用同樣大小的比色皿分別測(cè)定其吸光度A。根據(jù)朗伯-比爾定律：Ax=kbCx;As=kbCs即：Cx=AxCs

/As（k、b都相等）

樣品較少，非經(jīng)常性工作使用。未知樣品標(biāo)準(zhǔn)樣品3、吸光系數(shù)法在沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)使用。用于計(jì)算試樣中待測(cè)物質(zhì)的含量。因?yàn)椋篴樣=A/bc

從文獻(xiàn)上查出a標(biāo)，然后按文獻(xiàn)規(guī)定條件測(cè)定樣品吸光度A，即可得a樣(c為試樣配制的濃度，b為所用比色皿的厚度）。則樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量為：

W=（a樣/a標(biāo)）×100%§11.6紫外—可見(jiàn)分光光度法的誤差和測(cè)量條件的選擇一、分光光度法的誤差主要有：1、方法本身局限性：?jiǎn)紊?，稀溶液，純樣?、儀器誤差：機(jī)械誤差、電子電路和光學(xué)系統(tǒng)誤差3、操作誤差。二、測(cè)量條件的選擇除高效顯色劑外，分光光度法的準(zhǔn)確度和靈敏度還與適宜的測(cè)量條件相關(guān)，包括入射光波長(zhǎng)、吸光度讀數(shù)范圍和參比溶液的選擇。1.入射光的波長(zhǎng)的選擇原則：“吸收最大，干擾最小”A

X

maxY(2)2.參比溶液的選擇試液無(wú)吸收,顯色劑無(wú)吸收試液有吸收,顯色劑無(wú)吸收試液無(wú)吸收,顯色劑有吸收試液有吸收,顯色劑有吸收1086420204060800.70.40.20.1AT%Er(36.8)0.434濃度測(cè)量的相對(duì)誤差與T(或A)的關(guān)系實(shí)際工作中，應(yīng)控制T在10～70％,

A在0.2～0.7之間(調(diào)c,b,

)3.吸光度讀數(shù)范圍的選擇：

最佳值最佳讀數(shù)范圍微分：兩式相除得：以有限值表示可得：

若讀數(shù)的絕對(duì)誤差為△T=1%，用不同的T代入上式，可得相應(yīng)濃度測(cè)量的相對(duì)誤差△c/c，作圖測(cè)定結(jié)果的精度常用濃度的相對(duì)誤差△c/c表示,（Δc/c）不僅與儀器的透光度誤差ΔT有關(guān)，而且與其透光度讀數(shù)T的值也有關(guān)【例】某一有色溶液在2.0cm的吸收皿中，測(cè)得透光率T＝1％，若儀器透光度的絕對(duì)誤差△T＝0.5％，計(jì)算（1）測(cè)定的濃度的相對(duì)誤差△c/c（2）為使測(cè)得吸光度在最適讀數(shù)范圍內(nèi)，溶液應(yīng)稀釋或濃縮多少倍？（3）若濃度不變，而改變比色皿厚度（0.5cm,1.0cm，2.0cm,3.0cm）,則應(yīng)選擇那種厚度的吸收皿最合適，此時(shí)△c/c為多少？解（1）（2）A=-lgT=-lg1%=2設(shè)有色溶液原始濃度為co，當(dāng)b一定時(shí)，A＝εbc＝K

c,要使A＝0.2～0.7，則即稀釋3～10倍（3）當(dāng)c一定時(shí)即co，A＝εbc＝K

b,要使A＝0.2～0.7，則bo=2cmb=0.5cm§11.7紫外—可見(jiàn)分光光度法應(yīng)用實(shí)例11.7.1

微量組分的測(cè)定11.7.2

示差光度法11.7.3

絡(luò)合物組成的測(cè)定一、微量組分的測(cè)定

微量組分包括單一組分和多組分測(cè)定。1.單一組分的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)工作曲線法

先配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在最大吸收波長(zhǎng)處，測(cè)出它們的吸光度，作圖，同條件測(cè)未知液的吸光度，從圖中查出未知液的濃度cA標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖Axcxc1c2c3c4c5A1A2A3A4A5微量鐵的測(cè)定氨基酸的測(cè)定鄰二氮菲法茚三酮法(紫色化合物)蛋白質(zhì)的測(cè)定考馬斯亮藍(lán)法總磷的測(cè)定海水中營(yíng)養(yǎng)鹽的測(cè)定磷鉬藍(lán)法單組分的測(cè)定

磷的測(cè)定：DNA中含P～9.2%,RNA中含P～9.5%，可得核酸量。H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3=(NH4)3PO4·12MoO3+12NH4NO3+12H2O磷鉬黃(

小)磷鉬(V)藍(lán)(ε大)

λmax=660nmSn2+

2.多組分的測(cè)定根據(jù)加合性原則解聯(lián)立方程，可求得Cx,Cy為物質(zhì)的特征參數(shù)，可通過(guò)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)得:由x,y標(biāo)液在

1,

2處分別測(cè)得.如果兩組分吸收峰相互不重疊，可在不同λmax處測(cè)定A

XY

1

2x,y組分不能直接測(cè)定在

1處測(cè)組分x,在

2處測(cè)組分y.b)在

1處測(cè)組分x;在

2處測(cè)總吸收,扣除x吸收,可求y.2.多組分的測(cè)定二、示差光度法以濃度為Cs的標(biāo)準(zhǔn)溶液為參比（Cx>Cs）

ΔAx適宜高濃度的測(cè)定ΔA△C△CxΔAx差示工作曲線標(biāo)準(zhǔn)溶液cs

、

c1、c2、c3……。以cs作參比，調(diào)A=0.測(cè)

c1、

c2、c3……