乳結平顆粒質(zhì)量標準的研究

乳液平顆粒是一種新開發(fā)的中藥制劑，由紅芍、陰陽、柴胡等10多種中藥組成。溫陽腎陽，調(diào)拍沖任，舒肝解郁，軟結硬結。動物實驗顯示乳結平可減少乳腺增生大鼠乳腺組織雌激素受體和孕酮受體的含量,從而有效治療大鼠乳腺增生,具有重要的臨床研究價值。臨床上常用于乳腺增生病及乳瘤的預防和乳瘤的術后康復治療。目前,作者還未見有對乳結平顆粒質(zhì)量控制的相關研究報道。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量,本文采用薄層色譜法對淫羊藿、赤芍進行定性鑒別,采用高效液相色譜法對赤芍中的芍藥苷進行含量測定。報告如下。1儀器和試劑盒1.1色譜儀和儀器高效液相色譜儀,SIL-HTA自動進樣液相色譜儀(日本島津);SPD-10AVP檢測器;LC-10ADVP泵;N2000雙通道色譜工作站(浙江大學智達信息工程有限公司)。1.2藥品、試劑與儀器芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所;批號,110736-200422;規(guī)格,20mg)、淫羊藿苷對照品(中國藥品生物制品檢定所;批號,110737-200312;規(guī)格,20mg);乙腈(色譜純),甲醇(優(yōu)級純),其他試劑均為分析純,水為重蒸餾水;乳結平顆粒(張家口市第一醫(yī)院提供,批號,050428,050429,050430)。2性別標記2.1陰性對照品溶液取本品5g,研碎,加乙醇25mL,浸漬30min,超聲處理5min,濾過,濾液蒸干,殘渣加乙醇lmL使溶解,作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品,加甲醇制成每0.5mg/L的對照品溶液。取缺淫羊藿的陰性對照樣品5g,按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法《中國藥典》(2010年版一部附錄ⅥB)試驗,吸取上述3種溶液各6μL,分別點于同一硅膠H薄層板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10:1:1:1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,再置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜-相應的位置上,顯相同的黃綠色熒光斑點。陰性對照液無相應斑點。結果見圖1。2.2陰性對照品溶液取本品10g,研細,加乙醇30mL,超聲處理20min,濾過,濾液蒸干,殘渣加水10mL使溶解,用水飽和的正丁醇振搖提取3次,每次15mL,合并正丁醇液,用水洗滌2次,每次10mL,棄去水洗液,正丁醇液置水浴上濃縮至1mL,加適量氧化鋁,拌勻,在水浴上干燥,裝在中性氧化鋁小柱(200目,1g,內(nèi)徑約1cm)上,用乙醇50mL洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘渣加甲醇0.5mL使溶解,作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品,加甲醇制成1mg/L的溶液,作為對照品溶液。取赤芍的陰性對照樣品10g,按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法《中國藥典》(2010年版一部附錄ⅥB)試驗,吸取上述3種溶液各10μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸試液,加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同的藍紫色斑點。陰性對照液無相應斑點。結果見圖2。3重量測定3.1流動相、柱溫度色譜柱,Agilent-ZORBAXSB-C18,5μm;流動相,乙腈-水(15:85);流速,1.0mL/min;檢測波長,230nm;進樣量,10μL;柱溫,40℃。理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算應不低于3000。3.2標準曲線的繪制精密稱取芍藥苷對照品5mg,置25mL量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得對照品溶液。精密吸取該溶液3.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μL按上述色譜條件測定峰面積,以峰面積積分值為縱坐標,進樣量為橫坐標繪制標準曲線,計算回歸方程為,Y=269785X-8499,相關系數(shù)為r=0.9998。結果表明芍藥苷在0.592～4.998μg范圍內(nèi)呈良好線性關系。3.3儀器精密度試驗分別吸取上述對照品溶液10μL,重復進樣6次,記錄峰面積,計算進樣精密度,測得芍藥苷峰面積積分值的相對標準差(relativestandarddeviation,RSD)為0.38%,表明儀器精密度良好。3.4穩(wěn)定性試驗精密吸取含量測定項下的供試品溶液,分別于0、1、2、4、6、8、12h測定峰面積,結果表明待測溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。3.5重復試驗取同一批號(050429)的供試品,精密稱取6份,按含量測定項下的方法進行處理及測定,測得芍藥苷含量的RSD為2.7%。3.6加樣回收率試驗精密稱取已知含量的乳結平顆粒供試品6份,分別添加芍藥苷對照品溶液(濃度為0.1g/L的甲醇溶液)2.0、2.0、4.0、4.0、6.0、6.0mL按供試品溶液制備方法制備、測定,計算回收率,結果見表l,含量測定方法回收率良好。3.7不同含量的從乙酸乙酯-乙醇法制備pla-c-ms/ms液相色譜法取裝量差異項下的本品內(nèi)容物,研細,取約3.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中加乙醇50mL,超聲處理30min,濾過,殘渣加乙醇15mL洗滌,濾過,合并2次濾液,置80℃水浴上濃縮至約1mL,加1.5g氧化鋁,拌勻,在水浴上干燥,裝在中性氧化鋁柱(100～200目,2g,干法裝柱,內(nèi)徑12～15mm)上。先用乙酸乙酯-乙醇(4:1)30mL洗脫(90滴/min),棄去洗脫液,再用甲醇50mL洗脫(90滴/min),收集洗脫液,置80℃水浴上蒸干,殘渣加甲醇定容至5mL量瓶中,濾過,即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液,按上述色譜條件,注入液相色譜儀,計算芍藥苷含量。結果見表2,高效液相色譜法圖譜見圖2。4檢測波長的選擇淫羊藿薄層色譜鑒別中,溫度在25℃以上,控制濕度在18%～47%范圍內(nèi)色譜效果較好,斑點清晰。檢測波長的選擇,芍藥苷