AdvSci（IF=15.1）：質(zhì)譜流式（CyTOF）聯(lián)合單細胞多組學發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)的T細胞亞型小高系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的潛在免疫發(fā)病機制涉及血漿循環(huán)可溶性因子的產(chǎn)生，例如自身抗體和促炎細胞因子，以及多個先天性和適應性細胞亞群的激活。2023年10月24日，上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院丁顯廷/陳曉翔聯(lián)合中科院上海生命科學研究院陳洛南課題組合作在AdvSci（IF=15.1）雜志發(fā)表了一篇題為“IdentificationandCharacterizationofCD8+CD27+CXCR3?TCellDysregulationandProgression-AssociatedBiomarkersinSystemicLupusErythematosus”的文章，采用質(zhì)譜流式細胞技術(shù)（CyTOF）和單細胞RNA測序研究了由活動性SLE（aSLE）、緩解期SLE（rSLE）和健康對照（HC）組成的263份臨床外周血樣本，發(fā)現(xiàn)CD8+CD27+CXCR3?T細胞的豐度和功能失調(diào)可以作為SLE預后和伴隨診斷的潛在生物標志物。一、研究設計采用質(zhì)譜流式（CyTOF）檢測aSLE和rSLE樣本中的特異性免疫細胞亞群，采用配對的aSLE和rSLE，以及非配對SLE或其他自身免疫性疾病的外周血樣本通過流式細胞術(shù)（FCM）對其進行驗證。最后，研究通過單細胞RNA測序（scRNA-seq）檢測了外周血單核細胞（PBMC）在體外刺激/非刺激狀態(tài)下的基因表達情況，并結(jié)合公共數(shù)據(jù)庫中SLE的scRNA-seq數(shù)據(jù)進行功能分析（圖1）。圖1研究設計二、研究結(jié)果1、rSLE患者表現(xiàn)出升高的CD8+CD27+CXCR3?T細胞比例研究通過CyTOF分析了HC、aSLE和rSLE中的29種功能蛋白標志物。經(jīng)過預處理和手動門控CD45+細胞后，PBMC分為43個簇。與HC和aSLE相比，rSLE中CD8+CD27+CXCR3?T細胞（簇16）的比例顯著升高（圖2A），且在7例匹配的aSLE和rSLE中，臨床藥物治療顯著增加CD8+CD27+CXCR3?T細胞頻率（圖2B）。圖2rSLE表現(xiàn)出升高的CD8+CD27+CXCR3?T細胞2、aSLE中的CD8+CD27+CXCR3?T細胞功能過度活躍研究分析了與細胞激活和功能相關(guān)的生物標志物表達，發(fā)現(xiàn)CD69（早期細胞激活的標志物）在aSLE中的表達比rSLE更高。rSLE中CD27（通常在終末分化效應T細胞中低表達）的表達比HC和aSLE更高（圖3A）。這些結(jié)果表明，CD8+CD27+CXCR3?T細胞在aSLE中功能更活躍。研究進一步對來自另外6例aSLE和2例HC的PBMC進行scRNA-seq。對aSLE的CD8+CD27+CXCR3?T細胞與HC相比的1822個差異基因進行GO分析，結(jié)果顯示自噬相關(guān)過程顯著富集，與aSLE中自噬相關(guān)蛋白的增加一致（圖3B）。GSEA結(jié)果表明aSLE和HC之間的主要通路差異集中在干擾素信號通路（圖3C），與aSLE中IFNγ的高表達一致并進一步表明aSLE中過度活躍的效應器功能。此外，來自公共數(shù)據(jù)庫的HC、aSLE和rSLE的scRNA-seq結(jié)果也驗證了aSLE中CD8+CD27+CXCR3?T細胞的過度活躍效應功能。圖3aSLE中的CD8+CD27+CXCR3?T細胞功能過度活躍3、SLE臨床疾病活動與CD8+CD27+CXCR3?T細胞的效應功能和自噬活性正相關(guān)研究進一步發(fā)現(xiàn)SLEDAI評分（反映臨床疾病活動）與CD8+CD27+CXCR3?T細胞比例（圖4B）以及CD27表達呈負相關(guān)（圖4C）。紅細胞沉降率（ESR，SLE常規(guī)臨床檢測指標）與CD27表達呈負相關(guān)（圖4D），與Atg5和LC3的豐度呈正相關(guān)（圖4A、4E）。這些結(jié)果表明，aSLE中CD8+CD27+CXCR3?T細胞的效應功能和自噬活性增強，可能是監(jiān)測疾病活動的潛在生物標志物。圖4SLE臨床疾病活動與CD8+CD27+CXCR3?T細胞相關(guān)總結(jié)與討論研究通過CyTOF技術(shù)發(fā)現(xiàn)rSLE中CD8+CD27+CXCR3?T細胞增加，同時結(jié)合CyTOF數(shù)據(jù)和scRNA-seq技術(shù)發(fā)現(xiàn)aSLE中CD8+CD27+CXCR3?T細胞的效應功能過度活躍。最后結(jié)合臨床資料發(fā)現(xiàn)，CD8+CD27+CXCR3?T細胞的效應功能與臨床SLE活動呈正相關(guān)。CyTOF作為近年來生物研究的尖端技術(shù)，可以對多種樣本實現(xiàn)全面的免疫細胞檢測，幫助我們發(fā)現(xiàn)疾病發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵細胞，進一步結(jié)合單細胞測序、空間組學技術(shù)可以對特定細胞的功能效應進行全面細致的挖掘。華盈生物：單細胞+空間+蛋白組系統(tǒng)性服務平臺1）“蛋白芯片”和“蛋白質(zhì)譜”雙平臺技術(shù)服務體系將完美助力于血液蛋白、細胞因子、外泌體蛋白標志物的發(fā)現(xiàn)，雙管齊下，最大限度的不漏篩低豐度的血液蛋白，發(fā)現(xiàn)最具臨床意義的標志物。2）包含大約2萬多種人類蛋白的“人類蛋白組芯片”，可用來全面篩選血液自身抗體，發(fā)現(xiàn)腫瘤、自身免疫疾病等新的自身抗體診斷標志物。3）“ISOP單細胞功能蛋白組”可實現(xiàn)對單個細胞亞群分泌蛋白組的檢測，發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵的多功能性細胞，作為腫瘤免疫治療、CAR-T細胞治療的預測標志物。4）質(zhì)譜流式細胞術(shù)（CyTOF）可以支持全血樣本、組織樣本、單細胞懸液等多種樣本類型的分析，抗體庫包含常用的人源抗體500多種，鼠源抗體300多種，可以實現(xiàn)對細胞亞型、細胞功能的精準分析。5）空間單細胞蛋白組學（IMC+PCF）可獲得特定組織結(jié)構(gòu)中細胞亞群數(shù)量、細胞鄰域的關(guān)系圖譜、細胞通訊網(wǎng)絡、以及免疫檢查點等關(guān)鍵功能蛋白在單個細胞上的表達定位等深度空間信息，可用于疾病機制靶點和診斷、療效、預后等標志物的發(fā)現(xiàn)。業(yè)務咨詢400-869-2936微信同號）相關(guān)文獻ZhangL,DuF,JinQ,etal.IdentificationandCharacterizationofCD8+CD27+CXCR3-TCellDysregulationandProgression-AssociatedBiomarkersinSystemicLupusErythematosus.AdvSci(Weinh).2023Oct24:e2300123.Epubaheadofprint.PMID:37875396.相關(guān)閱讀1）NeuroOncol（IF=15.9）：質(zhì)譜流式（CyTOF）揭示免疫治療相關(guān)不良事件的細胞亞群標志物2）CellRepMed（IF=14.3）：特定T細胞亞群預測兒童器官移植后的免疫反應3）Cell：質(zhì)譜流式細胞技術(shù)揭示阿片類藥物成癮的細胞真兇4）Med（IF=17.0）：復旦大學揭示胰腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的特異免疫細胞亞群5）Blood（IF=20.3）：急性移植物抗宿主病的指導療法決策相關(guān)細胞因子標志物發(fā)布6）ArthritisRheumatol（IF=15.483）：北京協(xié)和醫(yī)院揭示不同器官受累型白塞病血液蛋白質(zhì)圖譜并發(fā)現(xiàn)新標志