第一節(jié)物體表面衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)一、監(jiān)測(cè)范圍1類(lèi)環(huán)境：層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房。Ⅱ類(lèi)環(huán)境：普通手術(shù)室、重癥監(jiān)護(hù)室、器官移植病房、產(chǎn)房、母嬰室、新生兒室、血液透析室、供應(yīng)室無(wú)菌間。皿類(lèi)環(huán)境：治療室、換藥室、注射室、兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、內(nèi)鏡室、導(dǎo)管室、輸血科配血室、急診室、化驗(yàn)室、各類(lèi)普通病室和房間。Ⅳ類(lèi)環(huán)境：傳染科及病房。二、采樣時(shí)間1．監(jiān)測(cè)頻率：普通病房每季度監(jiān)測(cè)1次；重癥監(jiān)護(hù)病房、產(chǎn)房、新生兒室、供應(yīng)室無(wú)菌問(wèn)、手術(shù)室、血液透析室、輸血科配血室等每月監(jiān)測(cè)1次。2．具體采樣時(shí)間：常規(guī)監(jiān)測(cè)：消毒處理后進(jìn)行采樣；暴發(fā)流行時(shí)：對(duì)未處理的現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行采樣。三、采樣方法(一)采樣面積被采樣物體表面＜100cm2被采樣物體表面≥100cm2，則取100cm(二)采樣方法1．平面的物體，將5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液(吐溫-801g、蛋白胨10g、氯化鈉8.5g、蒸餾水1000ml配制而成,pH值7.2～7.4，121℃壓力蒸汽滅菌20分鐘)的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂抹各52．門(mén)把手等小型或不規(guī)則物體則用棉拭子直接涂抹采樣。四、檢測(cè)方法將采樣管在混勻器上振蕩20秒或用力振打80次，用無(wú)菌吸管吸取1.0ml待檢樣本接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，內(nèi)加入已融化的45～48℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固后，置于37℃溫箱培養(yǎng)48物體表面細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)＝eq\f(平皿上菌落數(shù)×采樣液稀釋倍數(shù),采樣面積(cm2))五、結(jié)果判斷Ⅰ類(lèi)環(huán)境：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。Ⅱ類(lèi)環(huán)境：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。Ⅲ類(lèi)環(huán)境：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。Ⅳ類(lèi)環(huán)境：細(xì)菌總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門(mén)菌。六、注意事項(xiàng)1．采取的標(biāo)本要有代表性。2．采樣時(shí)棉拭子要處于濕潤(rùn)狀態(tài)，禁止使用干棉拭子采樣。3．用于接種的培養(yǎng)基應(yīng)置于37℃培養(yǎng)24第二節(jié)手衛(wèi)生監(jiān)測(cè)一、采樣時(shí)間1．監(jiān)測(cè)頻率：普通病房醫(yī)務(wù)人員的手每季度監(jiān)測(cè)1次；重癥監(jiān)護(hù)病房、產(chǎn)房、新生兒室、供應(yīng)室無(wú)菌間、手術(shù)室、血液透析室、輸血科配血室等病房醫(yī)務(wù)人員的手，每月監(jiān)測(cè)1次。2．具體采樣時(shí)間。常規(guī)監(jiān)測(cè)：洗手后，從事診療操作前。特殊監(jiān)測(cè)：當(dāng)發(fā)生醫(yī)院感染流行，高度懷疑或確定與醫(yī)務(wù)人員手的污染有關(guān)時(shí)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。二、采樣方法被檢者五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液浸濕的棉拭子在雙手指曲面從指跟到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面積約30cm2，涂擦過(guò)程中同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，將棉拭子接觸操作者的部分剪去，投入10三、檢測(cè)方法將采樣管在混勻器上振蕩20秒或用力振打80次，用無(wú)菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，平皿內(nèi)加入已溶化的45～48℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/cm2)＝eq\f(平皿上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù),采樣面積(cm2))四、結(jié)果判斷1、Ⅱ類(lèi)區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)＜5cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌為消毒合格。Ⅲ類(lèi)區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。Ⅳ類(lèi)區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。母嬰室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門(mén)菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。五、注意事項(xiàng)1．用于接種的培養(yǎng)基應(yīng)置于37℃培養(yǎng)242．層流潔凈手術(shù)室每次抽檢人數(shù)不少于3人。3．所采樣本應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，室溫下存放不得超過(guò)2小時(shí)；4℃冰箱存放不得超過(guò)4第三節(jié)空氣衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)一、非潔凈區(qū)域空氣消毒效果監(jiān)測(cè)(一)采樣時(shí)間在消毒處理后、操作前進(jìn)行采樣。(二)采樣布點(diǎn)方法室內(nèi)面積≤30m2，設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線3點(diǎn)，距墻壁1m處各取1點(diǎn)；室內(nèi)面積＞30m2，設(shè)4角及中央5(三)采樣方法平板暴露法：將普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿(直徑為9cm)放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度距地面1.5m，采樣時(shí)將平皿蓋打開(kāi)，扣放于平板旁，暴露5分鐘后蓋好立即送檢。將送檢的平板置(四)結(jié)果計(jì)算空氣細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/m3)＝eq\f(50000×平均菌落數(shù),平板面積(cm2)×暴露時(shí)間)(五)結(jié)果判斷Ⅰ類(lèi)環(huán)境：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/m3(或0.2cfu/平皿)，并未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。Ⅱ類(lèi)環(huán)境：細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/m3(或4cfuf平皿)，并未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。Ⅲ類(lèi)環(huán)境：細(xì)菌總數(shù)≤500cfu/m3，并未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。(六)注意事項(xiàng)1．采樣前，關(guān)好門(mén)窗，在無(wú)人走動(dòng)的情況下，靜止10分鐘進(jìn)行采樣。2．采樣后立即送檢，培養(yǎng)皿禁止存放于冰箱中。二、潔凈區(qū)域空氣消毒效果監(jiān)測(cè)(一)等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)潔凈手術(shù)部用房分為四級(jí)，并以空氣潔凈度級(jí)別作為必要保障條件。在空態(tài)或靜態(tài)條件下，細(xì)菌濃度(沉降菌法濃度或浮游菌法濃度)和空氣潔凈度級(jí)別都必須符合表11-1、表11-2的要求。表11-1潔凈手術(shù)室分級(jí)等級(jí)手術(shù)室名稱(chēng)手術(shù)切口類(lèi)別適用手術(shù)類(lèi)型I特別潔凈手術(shù)室I關(guān)節(jié)置換手術(shù)、器官移植手術(shù)及腦外科、心臟外科和眼科等手術(shù)中的無(wú)菌手術(shù)Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)潔凈手術(shù)室I胸外科、整形外科、泌尿外科、肝膽胰外科、骨外科和普通外科中的I類(lèi)切口無(wú)菌手術(shù)Ⅲ一般潔凈手術(shù)室Ⅱ普通外科(除去l類(lèi)切口手術(shù))、婦產(chǎn)科等手術(shù)Ⅳ準(zhǔn)潔凈手術(shù)室Ⅲ肛腸外科及污染類(lèi)等手術(shù)表11-2主要潔凈輔助用房分級(jí)等級(jí)用房名稱(chēng)I需要無(wú)菌操作的特殊實(shí)驗(yàn)室Ⅱ體外循環(huán)灌注準(zhǔn)備室Ⅲ刷手間、消毒準(zhǔn)備室、預(yù)麻室、一次性物品和無(wú)菌敷料及器械與精密儀器的存放室、護(hù)士站、潔凈走廊、重癥護(hù)理單元(ICU)、恢復(fù)(麻醉蘇醒)室與更衣室Ⅳ清潔走廊。(二)監(jiān)測(cè)內(nèi)容與要求1．潔凈手術(shù)室投入運(yùn)行前，應(yīng)當(dāng)經(jīng)有資質(zhì)的工程質(zhì)檢部門(mén)進(jìn)行綜合性能全面評(píng)定，并作為手術(shù)室基礎(chǔ)材料存檔。2．潔凈手術(shù)室日常實(shí)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，必測(cè)項(xiàng)目為細(xì)菌濃度和空氣的氣壓差。3．每日可通過(guò)凈化自控系統(tǒng)進(jìn)行機(jī)組監(jiān)控并記錄，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)解決。4．每月對(duì)非潔凈區(qū)域局部?jī)艋?、回風(fēng)口設(shè)備進(jìn)行清潔狀況的檢查，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)解決。5．每月對(duì)各級(jí)別潔凈手術(shù)室至少進(jìn)行1間靜態(tài)空氣凈化效果的監(jiān)測(cè)并記錄。6．每半年對(duì)潔凈手術(shù)室進(jìn)行1次塵埃粒子、高效過(guò)濾器的使用狀況、測(cè)漏、零部件的工作狀況等在內(nèi)的綜合性能全面評(píng)定，監(jiān)控并記錄。7．每半年對(duì)潔凈手術(shù)室的正負(fù)壓力進(jìn)行監(jiān)測(cè)并記錄。(三)監(jiān)測(cè)方法分為靜態(tài)(空態(tài))監(jiān)測(cè)和動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。1．靜態(tài)監(jiān)測(cè)(1)測(cè)點(diǎn)位置：見(jiàn)表11-3。測(cè)點(diǎn)布置在距地面0.8m高的平面上，在手術(shù)區(qū)檢測(cè)時(shí)應(yīng)無(wú)手術(shù)臺(tái)。當(dāng)手術(shù)臺(tái)已固定時(shí)，測(cè)點(diǎn)高度在臺(tái)面之上0.25m。當(dāng)送風(fēng)表11-3測(cè)點(diǎn)位置表區(qū)域最少測(cè)點(diǎn)數(shù)布點(diǎn)位置1級(jí)1級(jí)Ⅱ～Ⅲ級(jí)Ⅱ級(jí)Ⅲ級(jí)Ⅳ級(jí)潔凈手術(shù)室、手術(shù)區(qū)和潔凈輔助用房，局部100級(jí)區(qū)周邊區(qū)潔凈手術(shù)室手術(shù)區(qū)周邊區(qū)周邊區(qū)潔凈手術(shù)室及分散布置送風(fēng)口的潔凈室面積>30m2面積、<30m25點(diǎn)8點(diǎn)3點(diǎn)6點(diǎn)4點(diǎn)4點(diǎn)2點(diǎn)雙對(duì)角線布點(diǎn)每邊內(nèi)2點(diǎn)單對(duì)角線布點(diǎn)長(zhǎng)邊內(nèi)2點(diǎn)，短邊內(nèi)1點(diǎn)每邊內(nèi)1點(diǎn)避開(kāi)送風(fēng)口正下方(2)監(jiān)測(cè)方法：將9cm直徑普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)，將平皿蓋打開(kāi)，扣放于平皿旁，暴露30分鐘后蓋好立即送檢。將送檢的平皿置37℃溫箱培養(yǎng)(3)監(jiān)測(cè)要求。1)1級(jí)潔凈手術(shù)室和潔凈輔助用房檢測(cè)前，系統(tǒng)應(yīng)已運(yùn)行15分鐘，其他潔凈房間應(yīng)已運(yùn)行40分鐘。2)每次采樣的最小采樣量：100級(jí)區(qū)域?yàn)?.66L3)在100級(jí)區(qū)域檢測(cè)時(shí)，采樣口應(yīng)對(duì)著氣流方向；在其他級(jí)別區(qū)域檢測(cè)時(shí)，采樣口均向上。4)當(dāng)檢測(cè)含塵濃度時(shí)，檢測(cè)人員不得多于2人，都應(yīng)穿潔凈工作服，處于測(cè)點(diǎn)下風(fēng)向的位置，盡量少動(dòng)作。(4)結(jié)果判斷根據(jù)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范》(GB50333-2002)，潔凈手術(shù)室等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)以及主要潔凈輔助用房等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分別見(jiàn)表11-4、表11-5。(5)注意事項(xiàng)。1)檢測(cè)細(xì)菌密度時(shí)，必須有2次空白對(duì)照。第1次對(duì)用于檢測(cè)的培養(yǎng)皿做對(duì)比試驗(yàn)，每批1個(gè)對(duì)照皿；第2次檢測(cè)時(shí)，每室或每區(qū)1個(gè)對(duì)照皿，對(duì)操作過(guò)程做對(duì)照試驗(yàn)，模擬操作過(guò)程，但培養(yǎng)皿打開(kāi)后應(yīng)立即封蓋。2次對(duì)照結(jié)果必須為陰性，整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)符合無(wú)菌操作要求。2)采用沉降法測(cè)定沉降菌密度時(shí)，細(xì)菌密度測(cè)點(diǎn)數(shù)應(yīng)滿足表11-6規(guī)定的最少培養(yǎng)皿數(shù)的要求(不含對(duì)照皿)，如沉降時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng)，最少要求培養(yǎng)皿數(shù)可按比例減少，但不能少于表11-3的最少測(cè)點(diǎn)數(shù)。表11-4潔凈手術(shù)室的等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(空態(tài)或靜態(tài))等級(jí)手術(shù)室名稱(chēng)沉降法(浮游法)細(xì)菌最大平均密度表面最大染菌密度(個(gè)/cm2)空氣潔凈度級(jí)別手術(shù)區(qū)周邊區(qū)手術(shù)區(qū)周邊區(qū)Ⅰ特別潔凈手術(shù)室0.2個(gè)/30分鐘φ90皿(5個(gè)/m3)0.4個(gè)/30分鐘φ90皿(10個(gè)/m3)5100級(jí)1000級(jí)Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)潔凈手術(shù)室0.75個(gè)/30分鐘φ90皿(25個(gè)/m3)1.5個(gè)/30分鐘φ90皿(50個(gè)/m3)51000級(jí)10000級(jí)Ⅲ一般潔凈手術(shù)室2個(gè)/30分鐘φ90皿(75個(gè)/m3)4個(gè)/30分鐘φ90皿(150個(gè)/m3)510000級(jí)100000級(jí)Ⅳ準(zhǔn)潔凈手術(shù)室5個(gè)/30分鐘φ90皿(175個(gè)/m3)5300000級(jí)注①浮游法的細(xì)菌最大平均密度采用括號(hào)內(nèi)數(shù)值。細(xì)菌密度是直接所測(cè)的結(jié)果，不是沉降法和浮游法互相換算的結(jié)果。②Ⅰ級(jí)眼科專(zhuān)用手術(shù)室周邊區(qū)按10000級(jí)要求。③φ90皿是采樣直徑為90mm的培養(yǎng)皿。表11-5輔助用房的等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(空態(tài)或靜態(tài))等級(jí)沉降法(浮游法)細(xì)菌最大平均密度表面最大染菌密度(個(gè)/cm2)空氣潔凈度級(jí)別Ⅰ局部：0.2個(gè)/30分鐘、φ90皿(5個(gè)/m3)其他區(qū)域：0.4個(gè)/30分鐘、φ90皿(10個(gè)/m3)5局部l00級(jí)其他區(qū)域1000級(jí)ⅡⅢⅣ1.5個(gè)/30分鐘、φ90皿(50個(gè)/m3)4個(gè)/30分鐘、φ90皿(150個(gè)/m3)5個(gè)/30分鐘、φ90皿(175個(gè)/m3)55510000級(jí)100000級(jí)300000級(jí)注浮游法的細(xì)菌最大平均密度采用括號(hào)內(nèi)數(shù)值。細(xì)菌密度是直接所測(cè)的結(jié)果，不是沉降法和浮游法互相換算的結(jié)果。表11-6沉降菌最少培養(yǎng)皿數(shù)被測(cè)區(qū)域潔凈度級(jí)別最少培養(yǎng)皿數(shù)(‘φ90，以沉降30分鐘計(jì))100級(jí)1000級(jí)10000級(jí)100000級(jí)300000級(jí)1353222．動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。(1)監(jiān)測(cè)方法及要求。1)空氣沉降菌密度應(yīng)在手術(shù)開(kāi)始、中間和結(jié)束前抽檢3～4次。2)在每個(gè)回風(fēng)口中部擺放3個(gè)直徑為9cm培養(yǎng)皿，沉降30分鐘后，置于37℃溫箱培養(yǎng)3)其他潔凈用房在當(dāng)天上午10時(shí)和下午4時(shí)各測(cè)1次，在每個(gè)回風(fēng)151中部擺放3個(gè)直徑為9cm培養(yǎng)皿，沉降30分鐘后，置于37℃4)菌落計(jì)數(shù)的每皿平均值應(yīng)符合表11-7的動(dòng)態(tài)要求，單皿最大值不應(yīng)超過(guò)平均值3倍。表11-7環(huán)境污染控制指標(biāo)級(jí)別空氣地面墻面與物體表面五指手套印微粒(粒/L)沉降菌密度染菌密度染菌密度染菌密度1≥0.5μmI≥5.0μm(個(gè)/φ90皿30分鐘)(個(gè)/cm2)(個(gè)/cm2)(個(gè)/手套)靜態(tài)動(dòng)態(tài)靜態(tài)動(dòng)態(tài)靜態(tài)動(dòng)態(tài)消毒后工作中消毒后工作中新手套工作中I≤3.5動(dòng)靜比=50動(dòng)靜比=5≤0.2動(dòng)靜比=7.5≤3動(dòng)靜比=10≤3動(dòng)靜比=50≤lⅡ≤350≤3≤1.5≤5≤50≤3Ⅲ≤3500≤30≤4≤5≤50≤5Ⅳ≤10500≤90≤5≤5≤50≤5非潔凈區(qū)////≤10/5分鐘/≤10≤10//(2)監(jiān)測(cè)頻率。Ⅰ～Ⅱ級(jí)：每月1次。Ⅲ級(jí)：每2個(gè)月1次。Ⅳ級(jí)：每3個(gè)月1次，疑有污染或檢測(cè)不符合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)隨時(shí)檢測(cè)直至達(dá)標(biāo)。第四節(jié)消毒劑衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)一、使用中消毒劑濃度監(jiān)測(cè)(試紙法)(一)G-1型消毒劑濃度試紙1．適用范圍：過(guò)氧乙酸、二氯異氰尿酸鈉、次氯酸鈉、氯胺T、二氧化氯、其他含氯消毒劑和含次氯酸鈉的清洗消毒劑等。2．使用方法：取一條試紙浸于所測(cè)消毒劑溶液中，片刻取出。半分鐘內(nèi)在自然光下與標(biāo)準(zhǔn)色比較，直接讀出該溶液所含有效成分的濃度值。3．注意事項(xiàng)。(1)應(yīng)使用干燥鑷子夾取試紙進(jìn)行測(cè)試，不要用手直接接觸試紙。(2)時(shí)間超過(guò)1分鐘，顏色即逐漸消退，應(yīng)及時(shí)讀數(shù)。(3)消毒劑濃度超過(guò)試紙測(cè)量范圍時(shí)，試紙有“發(fā)白”現(xiàn)象，應(yīng)稀釋后再作測(cè)定。(4)測(cè)試紙應(yīng)置陰涼、避光、防潮處保存，且在有效期內(nèi)使用。(二)戊二醛濃度試紙測(cè)試卡1．使用方法：從小瓶中取出一條試紙，并旋緊瓶蓋，將指示色塊完全浸沒(méi)于待測(cè)溶液中，取出后，沾一下瓶蓋上的紙墊，去除多余的液體，橫置于瓶蓋上，等候5～8分鐘，通過(guò)顏色變化判讀結(jié)果。指示色塊變成均勻黃色，表示溶液濃度＞2.0％；指示色塊全部或仍有部分白色，表示溶液濃度＜2.0％。2．注意事項(xiàng)。(1)靜置時(shí)不要將色塊面朝下，以免受到污染。(2)必須在5～8分鐘之間判讀結(jié)果。時(shí)間少于5分鐘，顏色變化不徹底；超過(guò)8分鐘，顏色將逐漸消退，都可使結(jié)果不正確。(3)開(kāi)瓶后在120日內(nèi)用完(或在產(chǎn)品注明的有效期內(nèi)使用)。二、細(xì)菌染菌量檢測(cè)1．采樣時(shí)間：更換前使用中的消毒劑與無(wú)菌器械保存液，采樣后1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。2．采樣方法：在無(wú)菌條件下，用無(wú)菌吸管吸取1ml被檢樣液，加入9ml含相應(yīng)中和劑的采樣管內(nèi)混均。稀釋液中需根據(jù)不同種類(lèi)消毒劑加入相應(yīng)中和劑，以中和被檢樣液的殘效作用。3．檢測(cè)方法。(1)涂抹法：用無(wú)菌吸管吸取中和采樣液0.2ml，涂抹于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，每份樣品同時(shí)做2個(gè)平行樣，一個(gè)平板置20℃培養(yǎng)7天，觀察真菌生長(zhǎng)情況，另一個(gè)平板置35℃消毒劑染菌量(cfu/ml)＝每個(gè)平板上的菌落數(shù)×50(2)傾注法：用無(wú)菌吸管分別吸取中和采樣液0.5ml注入2個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)，加入已融化的45～48℃的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂15～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固后，一個(gè)平板置20℃培養(yǎng)7日，觀察真菌生長(zhǎng)情況，另一個(gè)平板置37℃消毒劑染菌量(cfu/ml)＝每個(gè)平板上的菌落數(shù)×204．結(jié)果判定。使用中消毒劑細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100cfu/ml；不得檢出致病性微生物。無(wú)菌器械保存液必須無(wú)菌生長(zhǎng)。5．常用消毒劑的中和劑選擇。(1)醇類(lèi)和酚類(lèi)消毒劑：吐溫-80。(2)含氯、含碘、過(guò)氧化物消毒劑：0.1％硫代硫酸鈉。(3)季銨鹽類(lèi)消毒劑：3％吐溫-80或0.3％卵磷脂或0.1％硫代硫酸鈉。(4)醛類(lèi)消毒劑：1％甘氨酸。第五節(jié)醫(yī)療用品監(jiān)測(cè)醫(yī)院醫(yī)療用品的監(jiān)測(cè)，包括一次性醫(yī)療用品、一次性衛(wèi)生用品和消毒滅菌處理后的其他物品。一、采樣時(shí)間在消毒或滅菌處理后存放至有效期內(nèi)采樣。一般采用無(wú)菌試驗(yàn)法，但因其操作繁瑣，監(jiān)測(cè)周期較長(zhǎng)以及受抽樣量大小等因素的限制，故一般情況下可采用常規(guī)監(jiān)測(cè)法評(píng)價(jià)醫(yī)療器械滅菌效果。二、監(jiān)測(cè)方法(一)常規(guī)監(jiān)測(cè)1．采樣方法：用無(wú)菌方法將擬檢縫合針、針頭、手術(shù)刀片等小件醫(yī)療器械各5支，分別投入5ml無(wú)菌的0.9％氯化鈉溶液中；注射器則取5副在5ml無(wú)菌肉湯中分別抽吸5次，對(duì)手術(shù)鉗、鑷子等大的醫(yī)療器械在無(wú)菌操作下取2份以上用沾有無(wú)菌的0.9％氯化鈉溶液的棉拭子反復(fù)涂擦采樣，并將棉拭子投入5ml無(wú)菌的0.9％氯化鈉溶液中；對(duì)一些特殊醫(yī)療用品，可用浸有無(wú)菌的0.9％氯化鈉溶液采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂擦采樣。采樣后馬上送檢。2．檢測(cè)方法：將采樣管用力振蕩80次，用無(wú)菌吸管取1ml待檢樣品放于滅菌平皿內(nèi)，加入已融化的45～48℃的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂15-18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固后，置37℃溫箱培養(yǎng)48(二)無(wú)菌檢驗(yàn)無(wú)菌檢驗(yàn)是指檢查經(jīng)滅菌的敷料、縫線、一次性使用的醫(yī)療用品、無(wú)菌器械以及適合于無(wú)菌檢查的其他品種是否無(wú)菌的一種方法。無(wú)菌檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈度為100級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染；對(duì)單向流空氣區(qū)域及工作臺(tái)面，必須進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。1．無(wú)菌檢驗(yàn)前準(zhǔn)備。(1)洗脫液與培養(yǎng)基無(wú)菌性試驗(yàn)：無(wú)菌試驗(yàn)前3日，于需一厭氧培養(yǎng)基與真菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種1ml洗脫液，分別置30～35℃與20～25℃培養(yǎng)(2)陽(yáng)性對(duì)照管菌液制備。1)在試驗(yàn)前一日取金黃色葡萄球菌(CMCC(B)26003]的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物，接種1環(huán)至需一厭氧培養(yǎng)基內(nèi)，在30～35℃培養(yǎng)16～18小時(shí)后，用0.9％無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至10～100cfu/ml2)取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基新鮮培養(yǎng)物1接種環(huán)種于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)后，用0.9％無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋10～100cfu/ml3)取白色念珠菌[CMCC(F)98001]真菌瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物1接種環(huán)種于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于20～25℃培養(yǎng)24小時(shí)后，用0.9％無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至10～100cfu/ml2．無(wú)菌操作：取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械5件直接浸入6管需一厭氧培養(yǎng)管(其中1管作陽(yáng)性對(duì)照)與4管真菌培養(yǎng)管。培養(yǎng)基用量為15ml/管。(1)取5付注射器，在5ml洗脫液中反復(fù)抽吸5次，洗下管內(nèi)細(xì)菌，混合后接種需一厭氧菌培養(yǎng)管(共6管，其中1管作陽(yáng)性對(duì)照)與真菌培養(yǎng)管(共4管)。接種量：1ml注射器為0.5ml，2ml注射器為1ml，5～10ml注射器為2ml，20～50ml注射器為5ml。培養(yǎng)基用量：接種量為2ml以下為15ml/管，接種量5ml為40ml/管。(2)手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械取2件用沾有無(wú)菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投入5ml無(wú)菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需一厭氧培養(yǎng)管(共6管，其中1管作陽(yáng)性對(duì)照)與真菌培養(yǎng)基(共4管)。接種量為1ml/管，培養(yǎng)基用量為15ml/管。3．培養(yǎng)：在待檢樣品的需一厭氧培養(yǎng)管中，接種預(yù)先準(zhǔn)備的金黃色葡萄球菌陽(yáng)性對(duì)照管液1∶1000稀釋1ml，將需一厭氧培養(yǎng)管以及陽(yáng)性與陰性對(duì)照管均于30～35℃培養(yǎng)5日，真菌培養(yǎng)管與陰性對(duì)照管于20～25℃培養(yǎng)7日，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長(zhǎng)，如加入試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時(shí)，可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另1支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48～724．結(jié)果判定：陽(yáng)性對(duì)照在24小時(shí)內(nèi)應(yīng)有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照在培養(yǎng)期間應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，如需一厭氧菌及真菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或雖顯混濁但經(jīng)證明并非有菌生長(zhǎng)，判為滅菌合格；如需一厭氧菌及真菌培養(yǎng)管中任何1管顯混濁并證實(shí)有菌生長(zhǎng)，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試2次，除陽(yáng)性對(duì)照外，其他各管均不得有菌生長(zhǎng)，否則判為滅菌不合格。5．注意事項(xiàng)。(1)送檢時(shí)間不得超過(guò)6小時(shí)，若樣品保存于0～4℃，則不得超過(guò)24(2)被采樣本表面積＜100cm2取全部表面；被采樣本表面積≥100cm2，取100(3)若消毒因子為化學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。第六節(jié)血液透析液監(jiān)測(cè)血液透析是指使用血液透析機(jī)及其相應(yīng)配件，利用血液透析器的彌散、對(duì)流、吸附和超濾原理，給患者進(jìn)行血液凈化治療措施。血液透析室接受血液透析的患者具有一定程度的腎衰竭，它們機(jī)體的免疫功能處于低下的狀態(tài)，很容易發(fā)生感染。因此做好透析機(jī)、透析用水、透析液、透析器的監(jiān)測(cè)尤為重要，同時(shí)也應(yīng)加強(qiáng)對(duì)患者的監(jiān)測(cè)。一、監(jiān)測(cè)范圍1．對(duì)進(jìn)入透析器的透析液每月進(jìn)行1次細(xì)菌培養(yǎng)，每3個(gè)月進(jìn)行1次內(nèi)毒素檢測(cè)。2．對(duì)透析用水每月進(jìn)行1次細(xì)菌培養(yǎng)。3．自行配置透析液的單位應(yīng)定期進(jìn)行透析液溶質(zhì)濃度的檢測(cè)。4．透析用水的化學(xué)污染物情況至少每年測(cè)定1次，軟水硬度及游離氯檢測(cè)至少每周進(jìn)行1次。5．當(dāng)疑有透析液污染或有嚴(yán)重感染病例時(shí)，應(yīng)增加采樣點(diǎn)，如原水口、軟化水出口、反滲水出口、透析液配液口等，并及時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。二、采樣方法采樣人員戴一次性手套，在水進(jìn)入血液透析機(jī)的位置收集2～3ml透析用水，注入無(wú)菌試管中送檢；在透析液進(jìn)入透析器的位置收集2～3ml透析液，注入無(wú)菌試管中送檢。三、檢測(cè)方法用無(wú)菌吸管吸取透析液原液和10倍稀釋液0.5ml分別注入2個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)，加入已融化的45～48℃的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂15～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固后，置37℃培養(yǎng)24四、結(jié)果計(jì)算透析液細(xì)菌總數(shù)(cfu/ml)＝平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)。五、結(jié)果判斷透析用水細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/ml；透析液細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/ml。六、注意事項(xiàng)1．采集液體時(shí)要戴手套，采集不同透析機(jī)的進(jìn)口水時(shí)要更換手套。2．透析用水結(jié)果超標(biāo)時(shí)，須復(fù)查；懷疑或確定患者在透析中有熱原反應(yīng)和菌血癥，應(yīng)隨時(shí)監(jiān)測(cè)。第七節(jié)內(nèi)鏡消毒滅菌效果監(jiān)測(cè)一、采樣時(shí)間在消毒滅菌后、使用前進(jìn)行采樣。二、采樣方法監(jiān)測(cè)采樣部位為內(nèi)鏡的內(nèi)腔面。用無(wú)菌注射器抽取10ml含相應(yīng)中和劑的緩沖液，從待檢內(nèi)鏡活檢1：I注入，用15ml無(wú)菌試管從活檢出口收集，及時(shí)送檢，2小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。三、檢測(cè)方法將送檢液用旋渦器充分震蕩，取0.5ml，加入2只直徑9cm無(wú)菌平皿，每個(gè)平皿分別加入已經(jīng)熔化的45～48％營(yíng)養(yǎng)瓊脂15～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，于35％培養(yǎng)48四、結(jié)果計(jì)算菌落數(shù)/鏡＝2個(gè)平皿菌落數(shù)平均值×20。五、致病菌檢測(cè)將送檢液用旋渦器充分震蕩，取0.2ml分別接種直徑9cm血平皿、中國(guó)蘭平皿和SS平皿，均勻涂布，35％培養(yǎng)48六、結(jié)果判斷消毒后的內(nèi)鏡(如喉鏡、氣管鏡、支氣管鏡、胃鏡、腸鏡、乙狀結(jié)腸鏡、直腸鏡)：細(xì)菌總數(shù)≤20cfu/件，不得檢出致病菌。滅菌后的內(nèi)鏡(如腹腔鏡、關(guān)節(jié)鏡、膽道鏡、膀胱鏡、胸腔鏡)：不得檢出任何微生物。第八節(jié)壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測(cè)一、物理監(jiān)測(cè)1．監(jiān)測(cè)目的：判定物品在滅菌處理中，設(shè)備運(yùn)行狀況是否達(dá)到滅菌標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的條件。2．監(jiān)測(cè)頻次與方法：每次滅菌循環(huán)時(shí)必須進(jìn)行監(jiān)測(cè)和記錄。按照滅菌所確定的滅菌工藝和參數(shù)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，主要包括滅菌溫度、時(shí)間、壓力、真空度等參數(shù)。3．結(jié)果判定。(1)下排氣式壓力蒸汽滅菌器滅菌壓力為102.9kPa(1.05kg/cm2菌時(shí)間20～30分鐘。(2)預(yù)真空壓力蒸汽滅菌器的滅菌壓力為205.8kPa(2.1kg/cm2菌時(shí)間4分鐘，真空度-8.0kPa。脈動(dòng)預(yù)真空循環(huán)3次以上。4．注意事項(xiàng)(1)監(jiān)測(cè)結(jié)果記錄歸檔備查。(2)新安裝、移位或大修后的滅菌器，對(duì)各項(xiàng)滅菌參數(shù)必須進(jìn)行物理校正，合格后方可使用。(3)物理監(jiān)測(cè)不合格時(shí)，所有滅菌物品不能放行。二、化學(xué)監(jiān)測(cè)(一)B-D測(cè)試1．測(cè)試目的：對(duì)預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器進(jìn)行真空系統(tǒng)性能測(cè)試，以判定排除冷空氣的有效性。2．測(cè)試頻次：每日每臺(tái)滅菌器在開(kāi)始滅菌運(yùn)行前，必須進(jìn)行1次測(cè)試。監(jiān)測(cè)時(shí)使用標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包，宜使用一次性B-D測(cè)試包。如使用自制標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包，每次使用后應(yīng)清洗。3．測(cè)試方法。(1)B-D測(cè)試包的準(zhǔn)備：由100％脫脂純棉布折疊成長(zhǎng)30cm±2cm、寬25cm±2cm、高(2)操作方法：將專(zhuān)用的B-D測(cè)試紙，放入自制的測(cè)試包或?qū)Ｓ玫囊淮涡詼y(cè)試包的中間；將8-D測(cè)試包水平放于滅菌柜內(nèi)滅菌車(chē)的前底層，靠近柜門(mén)與排氣口前方；柜內(nèi)除測(cè)試包外無(wú)任何物品；測(cè)試溫度為134℃，時(shí)間3.5～44．結(jié)果判定：測(cè)試結(jié)束，取出B-D測(cè)試紙觀察顏色變化：變成均勻一致的黑色，說(shuō)明冷空氣排除效果好，滅菌器可以使用；反之，滅菌器內(nèi)有冷空氣殘留，測(cè)試不合格不能使用。5．注意事項(xiàng)：滅菌艙內(nèi)除測(cè)試包外不得放入任何物品。測(cè)試不合格時(shí)，必須檢查失敗的原因，直至8-D測(cè)試通過(guò)后才能使用該滅菌器。新安裝、移位或大修后的滅菌器必須連續(xù)進(jìn)行B-D測(cè)試3次，合格后方可使用。測(cè)試結(jié)果記錄存檔3年。監(jiān)測(cè)指示物須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)存放，并在有效期內(nèi)使用。(二)包外化學(xué)指示膠帶監(jiān)測(cè)1．監(jiān)測(cè)目的：指示和說(shuō)明物品是否經(jīng)過(guò)滅菌處理。2．監(jiān)測(cè)頻次與方法：每個(gè)單包裝物品，進(jìn)行滅菌處理時(shí)包外均要有指示標(biāo)志或粘貼指示膠帶。每條化學(xué)指示膠帶長(zhǎng)度應(yīng)為5～7cm，并有33．結(jié)果判定：經(jīng)過(guò)一個(gè)滅菌周期，觀察化學(xué)指示膠帶顏色在滅菌前后的變化，變成顏色均勻一致的黑色，以指示經(jīng)過(guò)完整滅菌周期，滅菌合格。反之，滅菌不合格。4．注意事項(xiàng)：變色不合格的物品包不能放行和使用。如發(fā)現(xiàn)變色不合格的物品分布在裝載架或籃筐的外層或表面，則該次滅菌的所有物品均視為滅菌不合格，查找原因重新更換膠帶，再次滅菌處理。監(jiān)測(cè)指示物須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)存放，并在有效期內(nèi)使用。(三)包內(nèi)化學(xué)指示卡1．監(jiān)測(cè)目的：指示和說(shuō)明物品在滅菌處理中接觸滅菌介質(zhì)、溫度、持續(xù)時(shí)間、壓力等條件是否達(dá)到滅菌標(biāo)準(zhǔn)要求。是快速判定滅菌效果的方法。2．監(jiān)測(cè)頻次與方法：每個(gè)滅菌包均應(yīng)使用化學(xué)指示卡。將化學(xué)指示卡放入物品包裹、容器的中央或?qū)翘?，?jīng)一個(gè)滅菌周期后取出指示卡，根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到滅菌條件。3．結(jié)果判定：包內(nèi)化學(xué)指示卡變色未達(dá)到均勻一致的黑色時(shí)，則該物品視為滅菌不合格，不能使用。應(yīng)用第5類(lèi)化學(xué)指示卡時(shí)，指示卡上的化學(xué)球溶解后變?yōu)楹谏⒀丶埿疽苿?dòng)進(jìn)入卡上的ACCEPT(成功)窗口，滅菌合格。如果沒(méi)有進(jìn)入這一窗口，則為滅菌失敗。4．注意事項(xiàng)：變色不合格的物品不能放行和使用。金屬器械量大的包內(nèi)宜選用第5類(lèi)化學(xué)指示卡。監(jiān)測(cè)指示物須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)存放，并在有效期內(nèi)使用。三、生物監(jiān)測(cè)1．監(jiān)測(cè)目的：對(duì)滅菌器進(jìn)行綜合性能監(jiān)測(cè)，最終判定物品滅菌質(zhì)量和處理效果。2．監(jiān)測(cè)頻次：每臺(tái)滅菌器每周必須監(jiān)測(cè)1次。有植入物時(shí)每次滅菌循環(huán)必須進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)，合格后滅菌物品方可放行。3．監(jiān)測(cè)方法。(1)標(biāo)準(zhǔn)嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片滅菌效果監(jiān)測(cè)。1)指示菌株：指示菌株為嗜熱脂肪桿菌芽孢(ATCC7953或SSIK31株)，菌片含菌量為5.0×105～5.0×106cfu/片。在121℃±0.5℃條件下，D值為1.3～1.9分鐘，殺滅時(shí)間(KT值)≤19分鐘，存活時(shí)間(ST值)為≥2)培養(yǎng)基：試驗(yàn)用培養(yǎng)基為溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。3)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包的準(zhǔn)備：3件平紋長(zhǎng)袖手術(shù)衣，4塊小手術(shù)巾，2塊中手術(shù)巾，1塊大毛巾，30塊10cm×10cm8層紗布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小。手提壓力蒸汽滅菌器用通氣貯物盒(224)測(cè)試包及菌片放置：將2個(gè)嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片分別裝入滅菌小紙袋內(nèi)，置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包中心部位。在下排氣壓力蒸汽滅菌器、預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器滅菌柜內(nèi)，排氣口上方放置1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包；手提壓力蒸汽滅菌器的指示菌片放于中心部位的2只滅菌試管內(nèi)(試管口用滅菌牛皮紙包封)，將貯物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。5)菌片培養(yǎng)：經(jīng)1個(gè)滅菌周期后，在無(wú)菌條件下，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包或通氣貯物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)56℃±1℃培養(yǎng)6)結(jié)果判定：每個(gè)指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基都不變色，判定為滅菌合格；指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基，由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，則滅菌過(guò)程不合格。(2)自含式生物指示物測(cè)試方法。1)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包的準(zhǔn)備同嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片測(cè)試包。2)將2個(gè)自含式生物指示物分別裝入滅菌小紙袋內(nèi)，放于一標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包中心部位。3)預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器及下排氣壓力蒸汽滅菌器標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包均置于滅菌柜內(nèi)排氣口上方。手提壓力蒸汽滅菌器將儲(chǔ)物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。4)將滅菌后的菌管和1支同一批次的陽(yáng)性對(duì)照管擠破，置于培養(yǎng)器內(nèi)，經(jīng)56℃培養(yǎng)485)結(jié)果判定：滅菌菌管不變色，陽(yáng)性對(duì)照管變?yōu)辄S色時(shí)滅菌合格；滅菌菌管變?yōu)辄S色時(shí)，滅菌不合格。4．注意事項(xiàng)。(1)如使用自制生物監(jiān)測(cè)包，每次使用后應(yīng)清洗。(2)生物監(jiān)測(cè)不合格時(shí)，應(yīng)先重復(fù)一次生物監(jiān)測(cè)程序，如合格，滅菌器可繼續(xù)使用。仍不合格時(shí)，必須停止使用滅菌器查找原因，同時(shí)，應(yīng)盡快召回上次監(jiān)測(cè)合格以來(lái)所有尚未使用的滅菌物品，重新處理；滅菌器經(jīng)改進(jìn)后連續(xù)生物監(jiān)測(cè)3次合格，方可使用。(3)對(duì)新安裝、移位或大修后的滅菌器應(yīng)在物理監(jiān)測(cè)、化學(xué)監(jiān)測(cè)通過(guò)后，空載連續(xù)進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)3次，合格后方可使用。對(duì)于臺(tái)式壓力蒸汽滅菌器，生物監(jiān)測(cè)應(yīng)滿載連續(xù)監(jiān)測(cè)3次，合格后方可使用。(4)采用新的包裝材料和方法時(shí)必須進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)，以確定其方法的安全性。(5)生物監(jiān)測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確完整記錄并歸檔留存3年。(6)監(jiān)測(cè)所用菌片須經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，按要求存放，并在有效期內(nèi)使用。第九節(jié)干熱滅菌效果監(jiān)測(cè)干熱滅菌適用于高溫下不損壞、不變質(zhì)、不蒸發(fā)物品的滅菌；也可用于不耐濕熱的器械的滅菌以及蒸汽或氣體不能穿透物品的滅菌，如玻璃、油脂、粉劑和金屬等制品的消毒滅菌。對(duì)其滅菌效果的監(jiān)測(cè)方法有物理監(jiān)測(cè)法、化學(xué)監(jiān)測(cè)法和生物監(jiān)測(cè)法。一、物理監(jiān)測(cè)1．監(jiān)測(cè)頻次：每滅菌批次應(yīng)進(jìn)行物理監(jiān)測(cè)。2．監(jiān)測(cè)方法：將多點(diǎn)溫度檢測(cè)儀的多個(gè)探頭分別放于滅菌器各層內(nèi)、中、外各點(diǎn)，關(guān)好柜門(mén)，引出導(dǎo)線，由記錄儀中觀察溫度上升與持續(xù)時(shí)間。3．結(jié)果判定：溫度在設(shè)定時(shí)間內(nèi)均達(dá)到預(yù)置溫度，則物理監(jiān)測(cè)合格。二、化學(xué)監(jiān)測(cè)1．監(jiān)測(cè)頻次：每滅菌批次應(yīng)進(jìn)行化學(xué)監(jiān)測(cè)。2．監(jiān)測(cè)方法：將既能指示溫度又能指示溫度持續(xù)時(shí)間的化學(xué)指示物3～5個(gè)分別放入待滅菌的物品中，并置于滅菌器各層內(nèi)、中、外不同部位。經(jīng)過(guò)一個(gè)滅菌周期后取出，據(jù)其顏色的改變判斷是否達(dá)到滅菌要求。3．結(jié)果判定：檢測(cè)時(shí)，所放置的指示物顏色及性狀均變至規(guī)定的條件，則判為滅菌合格；若其中之一未達(dá)到規(guī)定的條件，則判為滅菌不合格。三、生物監(jiān)測(cè)1．監(jiān)測(cè)頻次：應(yīng)每周監(jiān)測(cè)1次。2．監(jiān)測(cè)方法。(1)指示菌株：菌株為枯草桿菌黑色變種芽孢(ATCC9372)，菌片含菌量為5.0×105～5.0×106cfu/片。其抗力應(yīng)符合以下條件：在溫度160％±2℃時(shí)，其D值為1.3～1.9分鐘，存活時(shí)間≥3.9分鐘，死亡時(shí)間≤19(2)將枯草桿菌芽孢菌片分別裝入中號(hào)滅菌試管內(nèi)(1片/管)。滅菌器與每層門(mén)把手對(duì)角線內(nèi)、外角處放置2個(gè)含菌片的試管，試管帽置于試管旁，關(guān)好柜門(mén)，經(jīng)1個(gè)滅菌周期后，待溫度降至80％時(shí)，加蓋試管帽后取出試管。在無(wú)菌條件下，加入普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(5ml/管)，置36％±1℃溫箱培養(yǎng)48小時(shí)，觀察初步結(jié)果，無(wú)菌生長(zhǎng)管繼續(xù)培養(yǎng)至第73．結(jié)果判定。若每個(gè)指示菌片接種的肉湯管均澄清，判為滅菌合格。若指示菌片之一接種的肉湯管渾濁，判為滅菌不合格。對(duì)難以判定的肉湯管，取0.1ml接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，用滅菌L棒涂勻，置36％±1℃溫箱培養(yǎng)484．注意事項(xiàng)。(1)檢測(cè)所用的指示菌片、指示卡需經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期內(nèi)使用。(2)物品包裝不能過(guò)大，不超過(guò)10cm×10cm×20cm，物品不能超過(guò)烤箱內(nèi)高度的2(3)滅菌器新安裝、移位和大修后，應(yīng)進(jìn)行物理監(jiān)測(cè)法、化學(xué)監(jiān)測(cè)法和生物監(jiān)測(cè)法監(jiān)測(cè)(重復(fù)3次)，監(jiān)測(cè)合格后，滅菌器方可使用。第十節(jié)環(huán)氧乙烷滅菌效果監(jiān)測(cè)一、物理監(jiān)測(cè)1．每次滅菌均應(yīng)進(jìn)行程序監(jiān)測(cè)，根據(jù)操作規(guī)程和滅菌的各種必要條件，逐項(xiàng)檢查所用環(huán)氧乙烷的濃度、劑量、溫度、相對(duì)濕度、持續(xù)時(shí)間、滅菌物品的性質(zhì)及記錄鍋號(hào)、滅菌日期、有效期、操作者姓名或代號(hào)。2．滅菌參數(shù)應(yīng)符合滅菌器的使用說(shuō)明或操作手冊(cè)的要求。3．監(jiān)測(cè)達(dá)到真空的程度和速度；加入環(huán)氧乙烷氣體時(shí)壓力升高的數(shù)值與速度；排出環(huán)氧乙烷時(shí)達(dá)到的真空度；通入空氣時(shí)壓力升高的程度與速度。二、化學(xué)監(jiān)測(cè)每個(gè)滅菌物品包外應(yīng)使用包外化學(xué)指示膠帶，作為滅菌過(guò)程的標(biāo)志；每包內(nèi)最難滅菌位置放置包內(nèi)化學(xué)指示卡。當(dāng)包外化學(xué)指示物變色有不符合要求的情況時(shí)，滅菌物品不應(yīng)發(fā)放；包內(nèi)化學(xué)指示物變色不符合要求時(shí)，滅菌物品不應(yīng)使用。三、生物監(jiān)測(cè)1．生物指示物：用枯草桿菌黑色變種芽孢(ATCC9372)?？沽σ鬄椋壕繛?×105～5×106cfu/片，在環(huán)氧乙烷劑量為(600±30)mg/L，作用溫度54％±2℃、相對(duì)濕度為60％±10％條件下，其殺滅90％該微生物的D值為2.6～5.8分鐘，存活時(shí)間應(yīng)≥7.8分鐘，殺滅時(shí)間應(yīng)≤582．監(jiān)測(cè)方法：環(huán)氧乙烷測(cè)試包分挑戰(zhàn)性測(cè)試包和常規(guī)測(cè)試包，前者主要用于對(duì)滅菌器的考核，后者作為平時(shí)的常規(guī)生物監(jiān)測(cè)之用。(1)挑戰(zhàn)性生物測(cè)試包的制備：將1生物指示劑放于1個(gè)20ml無(wú)菌注射器內(nèi)，去掉針頭和針頭套，生物指示劑帶孔的塑料帽應(yīng)朝向針頭處，再將注射器芯放在原位(注意不要碰及生物指示物)；另選1成人型氣管插管或1個(gè)塑料注射器(內(nèi)含化學(xué)指示卡)，1個(gè)琥珀色乳膠管(25.4cm長(zhǎng)，0.76cm內(nèi)徑，1.6mm管壁厚)和4條全棉清潔手術(shù)巾(46cm×76(2)常規(guī)生物測(cè)試包的制備：取1個(gè)20ml無(wú)菌注射器，去掉針頭，拔出針?biāo)?，將生物指示劑放入針筒?nèi)，帶孔的塑料帽應(yīng)朝向針頭處，再將注射器的針?biāo)ú寤蒯樛?注意不要碰及生物指示物)，之后用一條全棉小毛巾兩層包裹，置于紙塑包裝袋中封裝。(3)常規(guī)生物測(cè)試包放在滅菌器最難滅菌的部位，并均勻分布于整個(gè)滅菌物品中。滅菌周期完成后應(yīng)立即將生物指示物從被滅菌物品中取出，接種于含有復(fù)方中和劑的0.5％的葡萄糖肉湯培養(yǎng)基管中，以未經(jīng)處理的陽(yáng)性菌片做相同接種，兩者均置于36℃±1℃培養(yǎng)。24小時(shí)觀察初步結(jié)果，陽(yáng)性對(duì)照管在24小時(shí)內(nèi)有菌生長(zhǎng)，無(wú)菌生長(zhǎng)管繼續(xù)培養(yǎng)至第(4)結(jié)果判定：對(duì)照組培養(yǎng)陽(yáng)性，試驗(yàn)組培養(yǎng)陰性，判定為滅菌合格。對(duì)照組培養(yǎng)陽(yáng)性，試驗(yàn)組培養(yǎng)陽(yáng)性，則滅菌不合格；同時(shí)應(yīng)進(jìn)一步鑒定試驗(yàn)組陽(yáng)性的細(xì)菌是否為指示菌或是污染所致。3．布點(diǎn)數(shù)量：應(yīng)按滅菌器容積而定。在滅菌負(fù)載中，生物指示劑的數(shù)量，應(yīng)能驗(yàn)證整個(gè)滅菌負(fù)載的生物活性。(1)對(duì)新安裝、大修后或移位的環(huán)氧乙烷滅菌器，在啟動(dòng)初期，監(jiān)測(cè)用的生物指示劑分布于滅菌負(fù)載的數(shù)量應(yīng)足夠多。(2)滅菌器柜室可用體積＜5m3時(shí)，至少放置10個(gè)菌片；滅菌器柜室可用體積為5～10m3時(shí)，每增加1m3應(yīng)增加1個(gè)菌片；滅菌器柜室可用體積＞4．監(jiān)測(cè)頻率：每滅菌批次應(yīng)進(jìn)行常規(guī)生物監(jiān)測(cè)1次。設(shè)備性能每月進(jìn)行挑戰(zhàn)性生物測(cè)試1次。四、注意事項(xiàng)1．檢測(cè)所用化學(xué)和微生物指示物必須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。2．生物指示物應(yīng)在預(yù)處理之前放入被滅菌物品內(nèi)或被滅菌物品的試件中。3．應(yīng)盡量在滅菌周期完成后立即將生物指示物從被滅菌物品中取出并進(jìn)行培養(yǎng)。4．凡遇滅菌器新安裝、移位、大修及滅菌失敗、包裝材料或被滅菌物品改變，應(yīng)對(duì)滅菌效果進(jìn)行重新評(píng)價(jià)，包括采用物理監(jiān)測(cè)法、化學(xué)監(jiān)測(cè)法和生物監(jiān)測(cè)法進(jìn)行監(jiān)測(cè)(重復(fù)3次)，監(jiān)測(cè)合格后，滅菌器方可使用。5．監(jiān)測(cè)記錄準(zhǔn)確完整，保存3年。第十一節(jié)過(guò)氧化氫低溫等離子滅菌效果監(jiān)測(cè)一、物理監(jiān)測(cè)1．監(jiān)測(cè)目的：判定物品在滅菌處理中，設(shè)備運(yùn)行狀況是否達(dá)到滅菌標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的條件。2．監(jiān)測(cè)頻次與方法：每次滅菌應(yīng)連續(xù)監(jiān)測(cè)并記錄每個(gè)滅菌周期的臨界參數(shù)如艙內(nèi)壓、溫度、過(guò)氧化氫的濃度、電源輸入和滅菌時(shí)間等參數(shù)。3．結(jié)果判定：滅菌循環(huán)程序中各期參數(shù)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)為合格，反之為不合格。4．注意事項(xiàng)。(1)滅菌參數(shù)必須符合滅菌器的使用說(shuō)明或操作手冊(cè)的要求。(2)物理監(jiān)測(cè)不合格時(shí)，所有滅菌物品不能放行。(3)新安裝、移位或大修后的滅菌器，對(duì)各項(xiàng)滅菌的關(guān)鍵參數(shù)必須進(jìn)行物理校正，合格后方可使用。(4)打印監(jiān)測(cè)結(jié)果，資料留存3年。二、化學(xué)監(jiān)測(cè)1．監(jiān)測(cè)頻次：每個(gè)單包裝物品，進(jìn)行滅菌處理時(shí)包內(nèi)外均要有化學(xué)指示物。．2．化學(xué)指示膠帶監(jiān)測(cè)：將化學(xué)指示膠帶粘貼于每一滅菌物品包外，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，觀察其顏色的改變，以指示是否經(jīng)過(guò)滅菌處理。3．化學(xué)指示卡監(jiān)測(cè)：在包內(nèi)最難滅菌部位放置化學(xué)指示物，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，取出指示卡，根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到滅菌條件。4．結(jié)果判定：化學(xué)指示物變色為橘黃色或黃色為合格，反之為不合格。三、生物監(jiān)測(cè)1．監(jiān)測(cè)頻次：每臺(tái)滅菌器每周必須監(jiān)測(cè)1次；有植入物時(shí)每次滅菌循環(huán)應(yīng)進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)，合格后滅菌物品方可放行。2．監(jiān)測(cè)方法。(1)指示菌株為嗜熱脂肪桿菌芽孢(ATCC7953)，含菌量為5×105～5×106cfu/片。(2)將1個(gè)專(zhuān)用自含式生物指示管，封裝于75～200mm(3)生物指示管經(jīng)一個(gè)滿載荷滅菌周期后取出，設(shè)同一批號(hào)的陽(yáng)性對(duì)照管1支，置于溫箱內(nèi)55～60℃培養(yǎng)483．結(jié)果判定：觀察指示菌管的變色情況：滅菌指示管不變色，陽(yáng)性對(duì)照管變?yōu)辄S色，滅菌合格。滅菌指示管變?yōu)辄S色，則滅菌不合格。4．注意事項(xiàng)。(1)生物監(jiān)測(cè)不合格時(shí)，應(yīng)先重復(fù)一次生物監(jiān)測(cè)程序，如合格，滅菌器可繼續(xù)使用。仍不合格時(shí)，必須停止使用滅菌器查找原因。同時(shí)，應(yīng)盡快召回上次監(jiān)測(cè)合格以來(lái)所有尚未使用的滅菌物品，重新處理。滅菌器經(jīng)改進(jìn)后生物監(jiān)測(cè)連續(xù)3次合格，方可使用。(2)對(duì)新安裝、移位或大修后的滅菌器應(yīng)在物理監(jiān)測(cè)、化學(xué)監(jiān)測(cè)通過(guò)后，空載連續(xù)進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)3次，合格后方可使用。(3)采用新的包裝材料和方法時(shí)必須進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)，以確定其方法的安全性。(4)生物監(jiān)測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確完整記錄并歸檔留存3年。．(5)指示菌管需經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，按要求存放，并在有效期內(nèi)使用。第十二節(jié)紫外線消毒效果監(jiān)測(cè)一、日常監(jiān)測(cè)1.13常監(jiān)測(cè)包括對(duì)燈管應(yīng)用時(shí)間、照射累計(jì)時(shí)間及物理化學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果記錄并簽名。2．記錄每次的具體照射時(shí)間，并累加該支燈管已經(jīng)使用的時(shí)間。二、物理監(jiān)測(cè)物理監(jiān)測(cè)是利用紫外線輻射照度計(jì)直接讀出其輻照度值的方法。1．監(jiān)測(cè)方法：開(kāi)啟紫外線燈5分鐘后，將測(cè)定波長(zhǎng)為253.7nm的紫外線輻照計(jì)探頭置于被檢紫外線燈下垂直1m的中央處，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該2．結(jié)果判斷：普通30W直管型紫外線燈，新燈管的輻照度值應(yīng)≥90μW/cm2為合格；使用中紫外線燈的輻照度值應(yīng)≥70μW/cm2為合格；30W高強(qiáng)度紫外線新燈的輻射強(qiáng)度≥180μW/cm2為合格。3．注意事項(xiàng)：測(cè)定時(shí)電壓應(yīng)穩(wěn)定在220V±5V，溫度20～25℃，相對(duì)濕度＜60％；紫外線照度計(jì)必須在計(jì)量部門(mén)檢定的有效期內(nèi)使用；紫外線照度儀至少1年標(biāo)定1三、化學(xué)指示物監(jiān)測(cè)紫外線化學(xué)指示卡主要用于檢測(cè)紫外線燈的照射強(qiáng)度，以檢驗(yàn)紫外線燈是否符合要求。1．監(jiān)測(cè)方法：開(kāi)啟紫外線燈5分鐘后，將指示卡置紫外線燈下垂直距離1m處，有圖案一面朝上，照射12．結(jié)果判斷：將指示卡中間光敏涂料的顏色與標(biāo)準(zhǔn)色塊比較，可以判斷出紫外線燈管照射強(qiáng)度的范圍。紫外線燈管是否合格的判斷標(biāo)準(zhǔn)與紫外線照度計(jì)檢測(cè)方法一致。3．注意事項(xiàng)。(1)指示卡應(yīng)獲得衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。(2)指示卡為一次性使用，使用過(guò)的指示卡退色后仍為乳白色，但不能再使用。應(yīng)將結(jié)果及時(shí)記錄于色卡上。(3)色卡背后記錄燈管編號(hào)或安裝位置，以備查和更換。(4)指示卡應(yīng)用避光紙包裝，置于4℃(5)燈管應(yīng)定期用酒精擦拭。(6)紫外線燈安置后及使用前應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，使用中的燈管照射強(qiáng)度監(jiān)測(cè)，應(yīng)每3～6個(gè)月監(jiān)測(cè)1次。監(jiān)測(cè)時(shí)應(yīng)特別注意照射距離和照射時(shí)間，以免影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。(7)檢測(cè)中注意防護(hù)，以防紫外線灼傷。四、微生物學(xué)監(jiān)測(cè)1．檢測(cè)方法：開(kāi)啟紫外線燈5分鐘后，將6片染菌玻片平放入滅菌器皿中，水平放于紫外線燈下適當(dāng)距離照射，于3個(gè)不同間隔時(shí)間各取出2片染菌玻片，分別投入2支盛有5ml洗脫液(含1％吐溫-80、1％蛋白胨的9g/L氯化鈉溶液)試管中振打80次，經(jīng)適當(dāng)稀釋后，取0.5ml洗脫液放入滅菌平皿內(nèi)，用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂作傾注培養(yǎng)，置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)計(jì)數(shù)菌落。另取2片未作照射處理的染菌玻片分別投入2支盛有5ml洗脫液試管中振打2．計(jì)算細(xì)菌殺滅率。殺滅率＝eq\f(未照射染菌玻片回收菌數(shù)一紫外線照射染菌玻片回收菌數(shù),未照射染菌玻片回收菌數(shù))×100％3．結(jié)果判斷：對(duì)指示菌殺滅率≥99.9％為消毒合格；對(duì)達(dá)到物理學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，作為消毒合格的參考標(biāo)準(zhǔn)。第十三節(jié)醫(yī)院污水消毒效果監(jiān)測(cè)醫(yī)院污水日常監(jiān)測(cè)多以余氯量和大腸菌群的測(cè)定結(jié)果來(lái)判斷消毒效果。一、污水總余氯量的檢測(cè)方法1．采樣時(shí)間：在消毒后1小時(shí)進(jìn)行采樣。2．采樣方法：污水水樣中余氯＜10mg/L時(shí)，取200ml污水樣；余氯多時(shí)，應(yīng)按比例減少水樣體積。3．檢測(cè)方法：以前采用碘量法來(lái)測(cè)得總余氯量，由于該方法操作繁瑣，故現(xiàn)在日常監(jiān)測(cè)一般采用比色法(鄰聯(lián)甲苯胺比色法)。(1)原理：在pH值＜1.8的酸性溶液中，余氯與鄰聯(lián)甲苯胺反應(yīng)，生成黃色的醌式化合物，用目視法進(jìn)行比色定量，還可用重鉻酸鉀-鉻酸鉀溶液配制的永久性余氯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行目視比色。(2)試劑的配制。永久性余氯比色溶液的配制：①磷酸鹽緩沖儲(chǔ)備溶液，將無(wú)水磷酸氫二鈉(Na2HPO4)和無(wú)水磷酸二氫鉀(KH2PO4)置于105℃烘箱內(nèi)2小時(shí)，冷卻后，分別稱(chēng)取22.869和46.149。將此2種試劑共溶于蒸餾水中，并稀釋至1000ml，至少靜置4日，使其中膠狀雜質(zhì)凝聚沉淀，過(guò)濾。②磷酸鹽緩沖液(pH值6.45)，吸取200ml磷酸鹽緩沖儲(chǔ)備溶液，加蒸餾水稀釋至1000ml。③重鉻酸鉀-鉻酸鉀溶液，精確稱(chēng)取0.1559干燥的重鉻酸鉀(K2Cr2O7)及0.4659鉻酸鉀(K2CrO4)，溶于磷酸鹽緩沖溶液中，并定容至1000ml。此溶液所產(chǎn)生的顏色相當(dāng)于1mg/L余氯與鄰聯(lián)甲苯胺所產(chǎn)生的顏色。④0.01～1.