ICS

..CCS

B

DB

雙孢蘑菇菌種工廠化生產技術規(guī)程CODE

SPAWN

PRODUCTION

AGARICUS

--

發(fā)

布--

實

施江蘇省市場監(jiān)督管理局 發(fā)布DB

目 前言

……………………………Ⅲ1

范圍

…………………………12

規(guī)范性引用文件

……………13

術語和定義

…………………14

技術要求

……………………15

生產工藝

……………………36

質量控制與檢驗

……………47

標簽、標志、包裝、運輸及貯存………………5附錄A料

雙孢蘑菇各級菌種的常用培養(yǎng)基配方……………………7附錄B料

雙孢蘑菇各級菌種培養(yǎng)質量要求…………8DB

本文件按照

GB/T

—2020《標準化工作導則第

1

部分：標準化文件的結構和起草規(guī)規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由江蘇省農業(yè)農村廳提出并歸口。本文件起草單位：江蘇省農業(yè)技術推廣總站

、江蘇蕈源種業(yè)科技有限公司

、江蘇省質量和標準化研究院。本文件主要起草人：顧魯同、馬金駿、宋金俤、夏冬健、曹思齊、曹艷芳、陸敬利、曾曉萍。DB

雙孢蘑菇菌種工廠化生產技術規(guī)程

范圍本文件規(guī)定了雙孢蘑菇菌種工廠化生產的技術要求、生產工藝、質量控制與檢驗及標簽、標志、包裝、運輸和貯存。本文件適用于雙孢蘑菇菌種工廠化生產。

規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版括所有的修改用于本文件。GB/T

191包裝儲運圖示標志GB/T

12728食用菌術語GB

19171雙孢蘑菇菌種GB

50072冷庫設計規(guī)范GB

50073潔凈廠房設計規(guī)范NY/T

528食用菌菌種生產技術規(guī)程NY/T

1742食用菌菌種通用技術要求

術語和定義GB/T

12728

界定的以及下列術語和定義適用于本文件。.批次 SPAWN

BATCH同一來源、同一品種、同一培養(yǎng)基配方、同一天接種、同一培養(yǎng)條件和質量基本一致的符合規(guī)定數(shù)量的菌種?！?0

管（或皿）、原≥50

瓶（袋

KG

計）、栽≥2

000

袋（

KG

計）。

技術要求.

菌種廠條件..

廠區(qū)選址地勢高燥、通風良好、排水暢通、交通便利。1

000

M

之內無規(guī)模養(yǎng)殖的禽畜舍、垃圾和糞便堆積場，無污水、廢氣、廢渣、煙塵和粉塵污染源，500

M

內無食用菌栽培場、集貿市場。DB

..

廠房布局...

總體要求廠區(qū)應設置攤曬場、原材料庫、配料分裝室（場）、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、檢驗室、冷藏庫等。應符合

NY/T

528

的規(guī)定。...

攤曬場應地面平整、光照充足、空曠寬敞、相互隔離、遠離火源。...

原材料庫應防雨防潮、防蟲、防鼠、防火、防雜菌污染。...

配料分裝室（場）水電方便，空間充足。用于拌料機、裝袋機等大型機具作業(yè)。...

滅菌室水電安裝合理，操作安全，應用高溫高壓自動化控制滅菌柜，滅菌柜進、出口分離。...

冷卻室配

套

安

裝

新

風

輸

送

系

統(tǒng)，冷

卻

室

與

外

界

隔

絕，具

備

空

氣

萬

級

凈

化

度，潔

凈

、無

塵

、制

冷

散

熱。

應

符

合GB

50073

的規(guī)定。...

接種室配套安裝新風輸送系統(tǒng)，新風口處新風長期開通，保持室內風壓高于室外。接種平臺上層流罩下空氣凈化程度應達百級，內壁和地面光滑，易于清洗和消毒。應符合

GB

50073

的規(guī)定。...

培養(yǎng)室配套新風輸送系統(tǒng)，空氣凈化程度達萬級，溫度自動控制；內壁和房屋頂部光滑，便于清洗和消毒；墻壁厚度適當。應符合

GB

50073

的規(guī)定。...

檢驗室配套新風輸送系統(tǒng)。應符合

GB

50073

的規(guī)定。...

冷藏庫應符合

GB

50072

的要求。.

培養(yǎng)容器..

使用原則每批次菌種的容器規(guī)格保持一致。DB

..

母種培養(yǎng)容器使用

20

MM×200

MM

規(guī)格玻璃試管，或直徑

9

CM

的培養(yǎng)皿。棉塞應使用梳棉或化纖棉，也可用硅膠塞代替棉塞，不可使用脫脂棉。..

原種培養(yǎng)容器使用耐

126

℃高溫、不影響觀察菌絲生長情況的帶蓋塑料瓶或玻璃瓶，或耐

126

℃高溫、具孔徑

μM^0.5

μM

透氣膜的聚丙烯塑料袋。..

栽培種培養(yǎng)容器使用尺寸≥18

CM×34

CM，耐

126

℃高溫的聚丙烯塑料折角袋，或耐

126

℃高溫、具

μM^1.5

μM孔徑透氣膜的聚丙烯塑料袋。.

培養(yǎng)基原料..

化學試劑類化學試劑類原料如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等，應使用化學純或以上級別的試劑。..

生物制劑和天然材料類生物制劑，如酵母粉和蛋白胨；天然材料，如棉籽殼、麥麩等。原料應新鮮、無霉變、潔凈、干燥。.

人員要求生產技術人員、檢驗人員應取得菌種生產檢驗所需相應資質。

生產工藝.

工藝流程..

母種生產工藝流程培養(yǎng)基配制→高壓滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)→成品→冷貯。..

原種、栽培種生產工藝流程培養(yǎng)基配制→浸泡→蒸煮→分裝→滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)→成品→裝箱→冷貯→冷鏈運輸。.

培養(yǎng)基配方配方見附錄

A。.

裝料..

原種培養(yǎng)基裝料宜用

850

ML

耐高溫塑料瓶、玻璃瓶，裝料

500

G

后，擦洗瓶口旋緊瓶蓋；或

18

CM×40

CM，具孔徑

μM^0.5

μM

透氣膜的聚丙烯塑料袋，裝料

1

000

G，料裝好后折下袋口與并排的菌袋靠緊。DB

..

栽培種培養(yǎng)基裝料宜用

18

CM×34

CM

聚丙烯塑料折角袋，裝料

1

000

G

后，套上蓋子；或

40

CM×60

CM，具孔徑

μM^1.5

μM

透氣膜的聚丙烯塑料袋，裝料

2

500

G，裝料后折下袋口與并排菌袋靠緊。.

滅菌應在培養(yǎng)基配制完成后

4

H

內進行滅菌。母種培養(yǎng)基滅菌條件：

MPA^0.12

MPA，121

℃，50

MIN。原種培養(yǎng)基、栽培種培養(yǎng)基滅菌條件

MPA^0.15

MPA，

H，121

℃。裝料容量較大時，滅菌時間要適當延長。.

冷卻滅菌完畢并降溫后，將料拖出滅菌柜。待接種的原種瓶（袋）或栽培種瓶（袋），經冷卻到

25

℃±1

℃，及時接種。.

接種..

接種準備接種前

15

H

內，將接種室室內空間和地面進行消毒，接種

2

H

前開啟室內循環(huán)風凈化空氣。接種人員在準備室穿上防護工作服，經過風淋門進入接種室。..

接種方法在無菌室內百級空氣凈化工作臺上按無菌操作程序接種。用塑料蓋子的菌種，開蓋接種時間不超過5

。用無菌透氣膜的聚丙烯塑料袋接種，原種接入一塊約

CM×1.5

CM

母種，栽培種播入約

50

G

菌種，及時將袋口用封口機封閉，并將袋內菌種與培養(yǎng)料搖勻，整理好菌袋豎立于周轉筐中。每一筐培養(yǎng)容器應接同一菌株，接種完成后及時貼好標簽。..

接種后處理接種后，要及時清理，掃除廢物，應用吸塵器吸除灰塵，并擦洗消毒傳送帶和地面。.

培養(yǎng)不同菌株應分區(qū)分室培養(yǎng)。培養(yǎng)室使用前

1

D^2

D，進行清潔消毒并開啟新風系統(tǒng)。在發(fā)菌

12

D

內室內溫度控制

24

℃±1

℃

，發(fā)菌

13

D^30

D

溫度控制

21

℃±1

℃

，發(fā)菌

30

D

至菌絲長滿溫度控制

19

℃±1

℃。保持空氣相對濕度

60%，二氧化碳濃度

5

000×10-6，黑暗培養(yǎng)。.

入庫當菌絲長滿時，應及時整架移入冷庫貯存。DB

質量控制與檢驗.

品種與種源質量檢驗..

品種從具有相應技術資質的供種單位引種，且種性清楚。不應使用來歷不明、種性不清的菌種和生產性狀未經系統(tǒng)試驗驗證的組織分離物作種源生產的菌種。..

種源質量檢驗母種生產單位每年在種源進入擴大生產程序之前，應進行菌種質量和種性檢驗，包括純度、活力、菌絲長勢一致性、菌絲生長速度、菌落外觀等，做出菇試驗，驗證種性。種源出菇試驗方法及種源質量應符合

NY/T

1742

的規(guī)定。.

擴繁移植1

支母種擴大繁殖不應超過

20

支母種，擴繁代數(shù)不應超過

5

代。1

支母種移植擴大原種不應超過16

瓶（袋）；

瓶（袋）原種移植擴大栽培種不應超過

50

瓶（袋）。1.

滅菌效果檢驗母

種

培

養(yǎng)

基

隨

機

抽

取

3%^5%

的

試

管

，直

接

置

于

28

℃恒

溫

培

養(yǎng)；原

種

和

栽

培

種

培

養(yǎng)

基

按

每

次

滅

菌的數(shù)量隨機抽取

1%

作為樣品，挑取其中的基質顆粒經無菌操作接種于

PDA

培養(yǎng)基中，于

28

℃恒溫培養(yǎng)。48

H

后檢查，無微生物長出的為滅菌合格。.

培養(yǎng)質量要求各級菌種培養(yǎng)質量要求見附錄

B，應符合

GB

19171

的規(guī)定。.

記錄生產各個環(huán)節(jié)都應有詳細記錄，建立菌種可追溯制度，保存記錄至此批菌種栽培出菇采收結束。.

留樣各級菌種都應留樣備查，留樣的數(shù)量應以每個批號

2

、袋），母種于

4

℃±1

℃貯存；原種和栽培種于

5

℃±1

℃貯存，貯存至少

120

D。

標簽、標志、包裝、運輸及貯存.

標簽、標志出售的菌種應貼標簽，注明品種名稱、菌種級別、接種日期、生產單位、地址電話等。外包裝上應有防曬、防潮、防倒立、防高溫、防雨、防重壓等標志，標志應符合

GB/T

191

規(guī)定。.

包裝母種的外包裝用木盒或有足夠強度的紙盒，原種和裁培種的外包裝使用有足夠強度的紙箱。DB

內除菌種外的空隙用輕質材料填滿塞牢。.

運輸各級菌種運輸時不應與有毒有害物品混裝混運。運輸中應做好防曬、防潮、防雨、防凍、防高溫及防止雜菌污染等措施，當氣溫高于

20

℃時應使用冷鏈運送。.

貯存應在干燥、低溫、無陽光直射、無污染的冰箱或冷庫中貯存。母種置于

4

℃±1

℃冰箱、原種和栽培種置于

5

℃±1

℃的冷庫內貯存，母種貯存期不超過

90

D，原種貯存期不超過

40

D，栽培種貯存期不超過90

D。DB

附錄A料雙孢蘑菇各級菌種的常用培養(yǎng)基配方A.

母種培養(yǎng)基使用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）或綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（CPDA），加上

3%

發(fā)酵草料水煮液，PH值6.5^7.0。A.

原種培養(yǎng)基A..

小米棉籽殼培養(yǎng)基小米

20%^40%，棉籽殼發(fā)酵料

55%^75%，生石灰

2%，碳酸鈣

3%，含水量

55%^60%，PH

值8^9。A..

棉籽殼麥麩培養(yǎng)基棉籽殼和麥麩發(fā)酵料

98%，石灰

2%，含水量

50%^55%，PH值

8^9。培養(yǎng)料裝瓶填料要松緊適度，瓶中間打一小孔。A.

栽培種培養(yǎng)基A..

小麥棉籽殼紅皮小麥

86%，棉籽殼發(fā)酵料

10%，生石灰

1%，碳酸鈣

3%，經浸泡后小麥含水量

43%，浸泡后的小麥經100

℃蒸煮，蒸煮后小麥含水量45%，棉籽殼發(fā)酵料含水量52%，PH值8^9。A..

小米棉籽殼小米35%，棉籽殼發(fā)酵料60%，生石灰2%，碳酸鈣3%，含水量46%^50%，PH值8^9。菌種菌絲菌落或培養(yǎng)基培養(yǎng)物鏡檢氣味培養(yǎng)周期母種、濃、羽，菌、平、無，無分泌物，無、蠟菌落及霉菌菌落鏡檢菌絲粗壯，無雜菌菌絲及孢，無有雙孢蘑菇菌種特有的，無、霉溫（24

℃±1

℃）下