醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)在核酸檢測上的應(yīng)用綜述報(bào)告目錄TOC\o"1-2"\h\u14889醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)在核酸檢測上的應(yīng)用綜述報(bào)告 17878摘要 125874一、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)展 130576二、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)展及在核酸檢測上的應(yīng)用 22945（一）采樣和采集 215617（二）RNA的不穩(wěn)定 212764（三）試劑盒質(zhì)量 332748參考文獻(xiàn) 3摘要嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2是一種可導(dǎo)致烈性傳染病——新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）的RNA病毒，該病毒感染早期隱匿、無癥狀，且潛伏期較長，影像顯示肺部無典型改變甚至無改變。這給新型冠狀病毒肺炎的診斷和鑒別診斷帶來了極大的困難。核酸檢測作為臨床唯一可用的“確診標(biāo)準(zhǔn)”，因其樣本選擇和方法學(xué)靈敏度等因素影響，導(dǎo)致“假陰性”較高，結(jié)果引起眾多質(zhì)疑。如何理性看待核酸檢測，甚至如何正確分析并接受實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果？在此戰(zhàn)“疫”之前，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)在醫(yī)療中的作用，較少被外界關(guān)注。為此，該文就醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)展及在核酸檢測上的應(yīng)用進(jìn)行研究?！娟P(guān)鍵詞】：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、進(jìn)展、核酸檢測一、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)展醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)是種技術(shù)手段，對(duì)取自人體分泌物，組織的檢驗(yàn)，從而為預(yù)防、診斷、治療人體疾病程度跟提供人體健康信息的一門技術(shù)性學(xué)科。醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)對(duì)所有病癥檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性都極高，對(duì)醫(yī)生的治療也提供很好的作用，也幫助了醫(yī)學(xué)界治療技術(shù)的提高，并可以尋找出引發(fā)病癥的具體原因，使醫(yī)生可以對(duì)癥下藥，及時(shí)治療，從而減少患者的病痛，提高醫(yī)院的整體服務(wù)質(zhì)量。檢驗(yàn)技術(shù)是一個(gè)能夠快速，準(zhǔn)確的篩查傳染病的一種有效手段，在傳染病的預(yù)防和控制中，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中我們對(duì)操作的環(huán)境和所用的試劑都有著嚴(yán)格的要求。而我們現(xiàn)在都以手工采樣為主，半自動(dòng)生化分析儀輔助手段。通過對(duì)群眾的一個(gè)普遍篩查，我們能夠有效地得出病人是否患有傳染疾病能夠有效的控制傳染病的傳播。檢驗(yàn)技術(shù)作為一門當(dāng)今新興發(fā)展的學(xué)科。十分具有前景。輔助檢驗(yàn)手段也再不斷完善，合理利用檢驗(yàn)技術(shù)才能夠?yàn)獒t(yī)學(xué)事業(yè)做出巨大貢獻(xiàn)。二、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)展及在核酸檢測上的應(yīng)用醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)是在預(yù)防和控制傳染病中經(jīng)常應(yīng)用的一種醫(yī)學(xué)技術(shù)手段，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在治療和預(yù)防傳染病前都是經(jīng)過嚴(yán)格的醫(yī)學(xué)防護(hù)和嚴(yán)格核對(duì)，多數(shù)情況下，臨床上醫(yī)學(xué)檢技術(shù)在傳染病的篩查中產(chǎn)生檢測錯(cuò)誤的比較少。實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果錯(cuò)誤率很低的狀況下，在機(jī)器檢測中有一種假陽性的結(jié)果?？梢栽斐上喈?dāng)大的一種干擾，假陽性的結(jié)果的出現(xiàn)，要對(duì)身邊的檢測環(huán)境，包括采集標(biāo)本時(shí)的環(huán)境，還有患者是否與患病人員有過接觸，我們對(duì)這些都要有一定的掌握。在復(fù)查時(shí)，如果病人的狀況還是反復(fù)的話，要對(duì)病人進(jìn)行一種密切的隔離觀察，不能夠輕易下判斷。技術(shù)是一種客觀的技術(shù)手段，能夠直接的觀測到患者是否患病的可能。利用醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)，可以對(duì)傳染病方面進(jìn)行有效的預(yù)防。新型冠狀病毒肺炎具有早期隱匿、無癥狀，潛伏期較長，影像顯示肺部無典型改變甚至無改變的特點(diǎn)，為臨床診斷和鑒別診斷帶來了極大的困難。不同的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在新型冠狀病毒肺炎的檢測中發(fā)揮著不同的作用。目前，sars-cov-2的核酸檢測技術(shù)是基于實(shí)時(shí)熒光RT-PCR。RT-PCR技術(shù)已在臨床實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用多年。其檢測系統(tǒng)成熟。它不僅具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測周期短、定量檢測等優(yōu)點(diǎn)，而且可以動(dòng)態(tài)監(jiān)測。病毒感染及治療效果。然而，由于實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測sars-cov-2的陽性率較低，檢測的準(zhǔn)確性受到業(yè)內(nèi)人士的高度質(zhì)疑。陽性率低的主要原因可能有以下幾點(diǎn)。（一）采樣和采集根據(jù)國家衛(wèi)生委發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)指南》，用于檢測sars-cov-2的樣本類型包括上呼吸道樣本(如咽拭子、鼻拭子等)、下呼吸道樣本(如呼吸道噴霧劑、支氣管沖洗液、深咳痰等)、結(jié)膜拭子、糞便標(biāo)本、抗凝血標(biāo)本等。最高的陽性檢出率仍在探索中。此外，sars-cov-2的感染途徑還不完全清楚，最佳采樣時(shí)間也不確定。如果樣品中病毒載量濃度低于檢出限，將不可避免地出現(xiàn)假陰性結(jié)果;此外，目前實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果顯示，下呼吸道樣本中srs-cov-2核酸檢測的檢出率是最高的冠狀病毒診療方案(最新版本)。痰液是核酸檢測的首選樣本，但臨床檢測所需的樣本多為上呼吸道樣本。采集質(zhì)量的差異必然會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的陰性結(jié)果。（二）RNA的不穩(wěn)定由于環(huán)境條件和實(shí)驗(yàn)設(shè)備的限制，RNA病毒核酸穩(wěn)定性較差，容易降解，容易產(chǎn)生假陰性。（三）試劑盒質(zhì)量研究證實(shí)srs-cov-2的基因組結(jié)構(gòu)由5'untranslateregion(UTR)、轉(zhuǎn)錄復(fù)合物(orf1ab)、S基因、E基因、M基因、N基因和3'UTR從上到下依次組成。除了讀取之外，還有一些未知的幀序列。實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測srs-cov-2DNA需要根據(jù)這些具體結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步設(shè)計(jì)。理論上，探測到的目標(biāo)越多，探測率(靈敏度)越高。然而，在實(shí)際的研發(fā)中，目標(biāo)數(shù)量越多，設(shè)計(jì)前綴和查詢就越復(fù)雜，這無疑會(huì)給設(shè)計(jì)方法和產(chǎn)品加工帶來更多的困難。根據(jù)美國疾病控制與預(yù)防中心(CentersforDiseaseControlandprevention)的建議，orf1ab是準(zhǔn)確率最高的靶點(diǎn)，e基因是一線篩查的靶點(diǎn)，N基因是額外的靶點(diǎn)。因此，目前的sars-cov-2DNA檢測試劑盒可分為單靶點(diǎn)(orf1ab+N基因/E基因)、雙靶點(diǎn)(orf1ab+N基因/E基因)和三個(gè)靶點(diǎn)(orf1ab+N基因+E基因)。不完整的目標(biāo)設(shè)計(jì)自然會(huì)降低檢測率。此外，研究與開發(fā);D、生產(chǎn)sars-cov-2應(yīng)急檢測試劑盒缺乏足夠的臨床應(yīng)用驗(yàn)證和系統(tǒng)驗(yàn)證。擴(kuò)增區(qū)域的突變和試劑批次的變化可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果;此外，目前的檢測試劑是用來提取RNA的:質(zhì)量不保證，定量測量樣品通常是用于擴(kuò)增而不是RNA拷貝數(shù)。目前大多數(shù)檢測試劑盒的檢出限為500份/ml，有的檢出限為200份/ml，檢出限過低，可能會(huì)影響最終的擴(kuò)增效果，導(dǎo)致錯(cuò)誤的陰性結(jié)果。此外，影響核酸檢測分析的因素還有很多，如采樣周期、樣品的正確儲(chǔ)存和運(yùn)輸、實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范、結(jié)果的正確判斷和解釋等。問題可能導(dǎo)致不可靠的結(jié)果。參考文獻(xiàn)[1]余娟平,李志強(qiáng),李龍,魏琦,都偉杰,畢真,李芳云,方瓊,陳浩,陳良軍,康衛(wèi)靈,王智慧,蔡維文,殷梅梅,方婷,王倩倩,梅圣學(xué),李強(qiáng),常中寶,申夢來,程雅婷,李曉華.對(duì)新型冠狀病毒核酸檢測低基因擴(kuò)增信號(hào)樣本的再分析[J].中華臨床實(shí)驗(yàn)室管理電子雜志,2021,9(04):231-236.[2]羅利清,熊丹,陳大洋,紀(jì)翔,豆小文,闞麗娟,歐銅,張秀明.區(qū)域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心在新型冠狀病毒肺炎防控中的應(yīng)對(duì)措施[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2021,39(11):871-873+876.[3]中國醫(yī)學(xué)裝備協(xié)會(huì)基因檢測分會(huì),中