五味子炮制前后總木脂素的含量變化【摘要】目的：分析五味子炮制前后總木脂素的含量變化。方法：采取超聲提取法，以總木脂素含量為指標(biāo)，對(duì)超聲功率、超聲時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)3個(gè)因素進(jìn)行單因素分析并結(jié)合響應(yīng)面優(yōu)化得到最佳提取工藝，通過(guò)紫外分光光度法測(cè)定五味子及醋五味子總木脂素含量。結(jié)果：最佳提取工藝為乙醇體積分?jǐn)?shù)64%，超聲時(shí)間46min，超聲功率400W，在此條件下五味子及醋五味子總木脂素含量分別為34.14mg/g、53.67mg/g。結(jié)論：五味子經(jīng)醋制后總木脂素含量升高。【關(guān)鍵詞】五味子；醋五味子；響應(yīng)面法；含量變化

ChangesofTotalLignansinSchisandraChinensisbeforeandafterProcessing[Abstract]Objective:ToanalyzethecontentchangesoftotallignansinSchisandrachinensisbeforeandafterprocessing.Methods:Theultrasonicextractionmethodwasadopted,andthetotallignancontentwasusedastheindex.Thesinglefactoranalysistestwascarriedoutonthethreefactorsofultrasonicpower,ultrasonictimeandethanolvolumefraction,andtheoptimalextractionprocesswasobtainedbyresponsesurfaceoptimization.ThetotallignancontentofSchisandrachinensisandvinegarSchisandrachinensiswasdeterminedbyultravioletspectrophotometry.Results:Theoptimumextractionprocesswasasfollows:ethanolvolumefraction64%,ultrasonictime46min,ultrasonicpower400W.Undertheseconditions,thetotallignancontentofSchisandrachinensisandvinegarSchisandrachinensiswas34.14mg/gand53.67mg/g,respectively.Conclusion:Thecontentoftotallignansincreasedaftervinegarprocessing.[Keywords]SchisandraVinegarSchisandraResponsesurfacemethodContentchanges

目錄1前言 [13]等考察超聲提取法、超臨界CO2流體萃取法和大孔吸附樹(shù)脂法三種方法對(duì)提取五味子木脂素的效果，其中前兩者提取率相差不大，皆高于大孔吸附樹(shù)脂法，使用超臨界CO2流體萃取法試驗(yàn)成本高，故選定超聲提取法。它利用超聲波使得細(xì)胞破裂擴(kuò)大溶劑與藥材接觸面積，增強(qiáng)提取效果，且所需溫度低有效避免提取成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)被高溫破壞，操作簡(jiǎn)便易行，廣泛應(yīng)用于制藥行業(yè)。本課題從超聲時(shí)間、超聲功率、乙醇體積分?jǐn)?shù)考察提取條件的最優(yōu)水平。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前對(duì)超聲清洗器進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)即便對(duì)超聲波清洗器設(shè)置固定溫度，在使用過(guò)程中隨時(shí)間增加溫度仍升高，超聲40min后溫度出現(xiàn)5℃是儀器運(yùn)作時(shí)間長(zhǎng)導(dǎo)致升溫，因不具固定性難以控制條件故不對(duì)超聲溫度展開(kāi)試驗(yàn)。試驗(yàn)中為保證重復(fù)性良好需控制超聲初始溫度條件一致，措施具體為固定超聲水位線，設(shè)置超聲初始溫度偏低以免破壞木脂素成分結(jié)構(gòu)。對(duì)于制備供試品溶液過(guò)程中是否需要操作補(bǔ)足失重步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，一組超聲冷卻后補(bǔ)足失重，一組不進(jìn)行補(bǔ)足失重操作。超聲冷卻后稱重時(shí)可知溶液重量減少0.1g，即乙醇揮發(fā)，測(cè)定吸光度后發(fā)現(xiàn)兩者相比吸光度相差0.02左右，故補(bǔ)足失重是必要的。為保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度避免不必要的人為誤差，超聲提取時(shí)固定同一儀器、同一水位、同一溫度、加蓋超聲。4.3響應(yīng)面交互作用分析響應(yīng)面法廣泛運(yùn)用在中藥提取及炮制等工藝中，通過(guò)擬合二次多項(xiàng)回歸方程解決多變量問(wèn)題，便于科學(xué)安排實(shí)驗(yàn)，減少人力物力，提高實(shí)驗(yàn)效率，精度高于正交設(shè)計(jì)及均勻設(shè)計(jì)，且對(duì)比正交設(shè)計(jì)具可直觀得出各因素對(duì)因變量影響的優(yōu)點(diǎn)。除了對(duì)Design-Expert13軟件所作出結(jié)果的方差分析外，亦可從預(yù)測(cè)值與實(shí)際值分布圖及殘差的正態(tài)分布圖中判斷所擬合模型的適應(yīng)性，若兩個(gè)圖中數(shù)據(jù)大致分布在直線上則說(shuō)明存在良好的適應(yīng)性。響應(yīng)面得出的響應(yīng)面圖及等高線圖，響應(yīng)面交互作用模型能很好地描述和擬合實(shí)際數(shù)據(jù)，可以在實(shí)際應(yīng)用中幫助分析人員進(jìn)行有效的決策。響應(yīng)面圖的陡峭程度直觀反映各因素對(duì)五味子總木脂素含量的影響，交互作用是否顯著可由曲面的傾斜程度判斷，亦可從響應(yīng)曲面的開(kāi)口朝向判斷是否存在最大最小值及顏色判斷總木脂素含量的多少。等高線圖則考察超聲時(shí)間、超聲功率、乙醇體積分?jǐn)?shù)兩兩間的交互作用對(duì)五味子總木脂素含量的影響，橢圓形則交互作用對(duì)響應(yīng)值影響顯著，不顯著時(shí)則說(shuō)明需改進(jìn)。在根據(jù)得出的最優(yōu)提取條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，卻得不到與預(yù)測(cè)結(jié)果相接近的結(jié)果時(shí)，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)選擇的因素與水平不恰當(dāng)，需重新選擇。在進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化的17組實(shí)驗(yàn)中，第一次方差分析中三因素及交互項(xiàng)僅少數(shù)呈現(xiàn)顯著性，檢查發(fā)現(xiàn)5個(gè)重復(fù)組數(shù)據(jù)RSD大于3%且?guī)捉M數(shù)據(jù)大于因素最優(yōu)水平組，是人為操作失誤所致。根據(jù)Design-Expert13軟件的數(shù)據(jù)分析對(duì)數(shù)據(jù)不良的幾組試驗(yàn)重新進(jìn)行操作測(cè)定，重復(fù)試驗(yàn)直至得出可靠的模型。響應(yīng)面試驗(yàn)講究試驗(yàn)組順序隨機(jī)化，為方便將存在同條件的試驗(yàn)組一起超聲提取是不可取的，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可靠。4.4含量測(cè)定方法的選擇常用高效液相色譜法測(cè)定木脂素類單體成分含量，紫外分光光度法測(cè)定總木脂素含量。五味子木脂素含共軛雙鍵，在紫外區(qū)特征吸收，又具靈敏性高、精密度好、操作簡(jiǎn)便易行及分析成本低等優(yōu)點(diǎn)，本課題選用紫外分光光度法進(jìn)行五味子總木脂素含量測(cè)定。根據(jù)比爾定律吸光度與濃度成正比，在不同吸光度范圍內(nèi)測(cè)量會(huì)引起不同的誤差，使用該方法時(shí)應(yīng)控制供試液的吸光度讀數(shù)在0.2-0.8之間，此范圍內(nèi)相對(duì)誤差較小，可滿足定量分析要求。實(shí)驗(yàn)中波長(zhǎng)掃描得到的波峰是249nm，與參考文獻(xiàn)相同，在215nm附近出現(xiàn)吸光度大于1的溶劑吸收峰。在測(cè)定過(guò)程中，前兩次的波長(zhǎng)掃描并未出現(xiàn)波峰，是因溶液濃度較高需再進(jìn)行稀釋，稀釋后出現(xiàn)明顯的波峰。在考察線性關(guān)系時(shí)，相同濃度的對(duì)照品溶液出現(xiàn)吸光度相差數(shù)值極大的情況，分析原因可能是在制備溶液時(shí)有一些五味子甲素對(duì)照品不溶于乙醇，經(jīng)微長(zhǎng)時(shí)間的超聲操作且定容后未充分搖勻。4.5實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)課題考察重復(fù)性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD為2.53%，操作多次重復(fù)性試驗(yàn)后RSD數(shù)值均較高，分析原因，需注意以下幾點(diǎn)：1）藥材粉末細(xì)度不一，粉末需均勻攪拌。2）超聲提取條件如水位、溫度不一致，本次實(shí)驗(yàn)使用的超聲清洗器超聲溫度上升，故需控制超聲初始溫度條件一致，固定超聲水位線避免誤差。3）制備供試品溶液時(shí)進(jìn)行補(bǔ)足失重及定容操作需一致。4）測(cè)定吸光度存在儀器系統(tǒng)誤差、儀器自檢時(shí)波長(zhǎng)校正失敗及吸光度測(cè)定值相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差大等問(wèn)題。紫外分光光度計(jì)應(yīng)定期校準(zhǔn)，波長(zhǎng)校正失敗可通過(guò)檢查信號(hào)線和電源電壓、清洗絲桿、執(zhí)行系統(tǒng)應(yīng)用主菜單的波長(zhǎng)校正及重新自檢等方法解決。吸光度測(cè)定值相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差大可通過(guò)分析制備供試品溶液步驟是否操作一致、檢查是否進(jìn)行空白對(duì)照及石英比色皿是否徹底潤(rùn)洗干凈等措施克服，在考察乙醇體積分?jǐn)?shù)的單因素試驗(yàn)中，注意使用相應(yīng)配制供試品溶液的溶劑作為空白對(duì)照，以更加準(zhǔn)確地測(cè)量樣品。加樣回收率反映操作人員的技術(shù)水平及該實(shí)驗(yàn)方案的可靠性及準(zhǔn)確性。試驗(yàn)中以1:1的比例加入對(duì)照品，出現(xiàn)多次加樣回收率不在95%-105%范圍內(nèi)的情況導(dǎo)致平均回收率不達(dá)標(biāo)，甚至出現(xiàn)計(jì)算超過(guò)105%的數(shù)據(jù)。查閱報(bào)道文獻(xiàn)原因可能是系統(tǒng)誤差如加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后引起檢測(cè)系統(tǒng)存在正干擾，或人為誤差如稱取對(duì)照品時(shí)讀數(shù)加標(biāo)量過(guò)多導(dǎo)致待測(cè)物濃度不在精密度相當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)、樣品提取及測(cè)定過(guò)程中未嚴(yán)格進(jìn)行一致的操作步驟等。進(jìn)行加樣回收試驗(yàn)時(shí)需注意以上幾點(diǎn)。

5結(jié)論五味子作為我國(guó)藥理作用廣泛的上品中藥，隨現(xiàn)代科學(xué)發(fā)展五味子的藥用價(jià)值相繼被發(fā)掘，在制藥市場(chǎng)極具發(fā)展?jié)摿Α１緦?shí)驗(yàn)對(duì)五味子炮制前后總木脂素含量變化展開(kāi)分析，首先確定檢測(cè)波長(zhǎng)為249nm，考察線性關(guān)系得到方程為y=31.955x-0.0037，R2為0.9999，并考察方法的可行性，平均回收率為97.76%，RSD為1.40%，可見(jiàn)此實(shí)驗(yàn)方法的可行性。通過(guò)單因素分析可知五味子總木脂素含量最高的條件為超聲時(shí)間40min、超聲功率400W、乙醇體積分?jǐn)?shù)60%；開(kāi)展響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)獲得最佳提取工藝并對(duì)因素相互作用進(jìn)行分析，修正后條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)64%，超聲時(shí)間46min，超聲功率為400W。該工藝下五味子及醋五味子總木脂素平均含量分別為34.14mg/g、53.67mg/g，醋制后含量升高57%。本實(shí)驗(yàn)響應(yīng)面所得模型及提取工藝參數(shù)可靠，可應(yīng)用提取五味子總木脂素；本實(shí)驗(yàn)對(duì)五味子炮制前后總木脂素含量測(cè)定，可為生產(chǎn)中的五味子炮制品質(zhì)量評(píng)價(jià)及探討炮制機(jī)制的研究提供參考。

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