第一章發(fā)酵工程第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用（第一課時(shí)）目錄/CONTENTS01微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)02無(wú)菌技術(shù)03微生物的純培養(yǎng)04習(xí)題檢測(cè)學(xué)習(xí)目標(biāo)：1.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提。2.闡明無(wú)菌技術(shù)是在操作過(guò)程中，保持無(wú)菌物品與無(wú)菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)。3.根據(jù)微生物的代謝類型，分析培養(yǎng)基的組成。新課導(dǎo)入應(yīng)該先對(duì)制作用具和原料進(jìn)行滅菌處理，再接種純的菌種，并控制發(fā)酵條件，避免雜菌進(jìn)入。雜菌污染這需要應(yīng)用無(wú)菌技術(shù)和微生物的培養(yǎng)技術(shù)思考：怎樣才能保證無(wú)處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢？目錄01一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.微生物（1）概念：個(gè)體無(wú)法用肉眼觀察的微小生物。一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.微生物（2）類群：無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞真核細(xì)胞真菌：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履蟲(chóng)、變形蟲(chóng)、硅藻等微生物的類群病毒：SARS病毒、新冠病毒等RNA病毒；噬菌體等DNA病毒細(xì)菌：藍(lán)細(xì)菌、大腸桿菌、乳酸菌、醋酸菌等；放線菌:鏈霉菌等一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)微生物結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、形體微小，眼睛看不到，若想得到純凈的微生物，就必須對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)和分離。①要為人們需要的微生物提供合適的______________條件。②要確保

，并將需要的微生物分離出來(lái)。營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境其他微生物無(wú)法混入實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的條件——培養(yǎng)基——無(wú)菌技術(shù)一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2.培養(yǎng)基（1）概念：人們按照微生物對(duì)

的不同需求，配制出供其

的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生長(zhǎng)繁殖（2）作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或

。積累其代謝物注意:病毒只能在活細(xì)胞中營(yíng)寄生生活，目前不能使用人工培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)。一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2.培養(yǎng)基（3）種類：①物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基（加凝固劑，如

)瓊脂擴(kuò)大微生物種群數(shù)量微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)和菌種保存等液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基注意：①加入培養(yǎng)基中的凝固劑（如瓊脂），不能為微生物提供能量和碳源。②微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。菌落：一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體不含凝固劑、呈液體狀態(tài)的培養(yǎng)基含有凝固劑、呈固體狀態(tài)的培養(yǎng)基瓊脂在98℃以上熔化，在44℃以下凝固一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2.培養(yǎng)基②功能選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求配置。將某種類微生物從混雜的微生物群體中分離出來(lái)。加入能與目的菌的代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑。用于鑒別不同類型的微生物?；A(chǔ)培養(yǎng)基含一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需要的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2.培養(yǎng)基③成分合成培養(yǎng)基用已知的化學(xué)物質(zhì)配制天然培養(yǎng)基含有化學(xué)成分還不清楚或化學(xué)成分不明確的天然有機(jī)物。工業(yè)生產(chǎn)分類鑒定一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2.培養(yǎng)基具體處理原理目的選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基

分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養(yǎng)微生物鑒別分解尿素的細(xì)菌鑒別纖維素分解菌加入青霉素不加氮源不加有機(jī)碳源加入酚紅培養(yǎng)基加入剛果紅青霉素能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，對(duì)真菌無(wú)作用固氮微生物能利用空氣中的氮?dú)庾责B(yǎng)型微生物能利用無(wú)機(jī)碳源尿素被分解產(chǎn)生氨，培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑變紅。剛果紅與纖維素能形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈。加入伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌菌落呈現(xiàn)深紫色一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2.培養(yǎng)基（4）營(yíng)養(yǎng)組成：（1）基本成分：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等（一般都有）合成各種有機(jī)物合成蛋白質(zhì)、核酸①碳源無(wú)機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-。糖類、脂肪酸、花生餅粉、石油等。自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物功能：①主要用于合成微生物體內(nèi)各種有機(jī)物

②對(duì)于異養(yǎng)微生物有機(jī)碳既是碳源又是能源注意：自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中

有機(jī)碳源，因其可利用CO2等無(wú)機(jī)碳源?？刹惶砑右?、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2.培養(yǎng)基（4）營(yíng)養(yǎng)組成：氮源N2、NH4＋、NO3-、NH3、硝酸鹽、銨鹽等。尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等。無(wú)機(jī)氮源：有機(jī)氮源：功能：主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物牛肉膏、蛋白胨來(lái)源于動(dòng)物，含有糖、維生素、有機(jī)氮等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。固氮微生物（根瘤菌）可以利用N2作為氮源，培養(yǎng)基中無(wú)需加入氮源。氨是硝化細(xì)菌的氮源，NH3的氧化過(guò)程也為硝化細(xì)菌提供能源。對(duì)于異養(yǎng)生物，含C、H、O、N的有機(jī)化合物（尿素除外）是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源。注意：主要提供碳源的是牛肉膏，主要提供氮源的是蛋白胨。一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2.培養(yǎng)基（4）營(yíng)養(yǎng)組成：無(wú)機(jī)鹽大量元素：Ca、K、Mg等微量元素：Zn、Cu、Mn、Co、Mo等作用：①提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)；②調(diào)節(jié)pH；③維持滲透壓培養(yǎng)基經(jīng)常使用有：K2HPO4MgSO4NaClCa(NO3)2FeSO4水①良好的溶劑；②維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定注意：有些無(wú)機(jī)鹽離子可以作為化能合成菌的能源（如鐵細(xì)菌）。一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2.培養(yǎng)基（4）營(yíng)養(yǎng)組成：⑤特殊需求：滿足微生物對(duì)

_____________________________的需求pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、氧氣（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨、動(dòng)植物組織提取液中含有維生素）培養(yǎng)的微生物需要滿足的其他要求乳酸桿菌培養(yǎng)基中添加___________霉菌將pH調(diào)至______細(xì)菌將pH調(diào)至__________________厭氧微生物需要提供_______條件維生素酸性中性或微堿性無(wú)氧維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等pH：pH：酵母菌：放線菌：先定容再調(diào)PH習(xí)題檢測(cè)1.用于發(fā)酵的微生物主要指細(xì)菌和真菌()2.培養(yǎng)基中加入瓊脂的目的是提供碳源()3.所有微生物在培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中都需加入氮源()4.培養(yǎng)不同微生物的培養(yǎng)基成分完全一樣()√×××習(xí)題檢測(cè)甲、乙、丙是三種微生物，下表I、Ⅱ、Ⅲ是用來(lái)培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生長(zhǎng)繁殖；甲能在I中正常生長(zhǎng)繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長(zhǎng)繁殖，甲、丙都不能。下列說(shuō)法正確的是（

）A．甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物B．甲、乙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物C．甲是異養(yǎng)微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)微生物D．甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物粉狀硫10gK2HPO44gFeSO40.5g蔗糖10g（NH4）2SO40.4gH2O100mlMgSO49.25gCaCl20.5gⅠ++++-+++Ⅱ+++-++++Ⅲ++++++++一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2.培養(yǎng)基（4）營(yíng)養(yǎng)組成：無(wú)機(jī)鹽大量元素：Ca、K、Mg等微量元素：Zn、Cu、Mn、Co、Mo等作用：①提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)；②調(diào)節(jié)pH；③維持滲透壓培養(yǎng)基經(jīng)常使用有：K2HPO4MgSO4NaClCa(NO3)2FeSO4水①良好的溶劑；②維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定注意：有些無(wú)機(jī)鹽離子可以作為化能合成菌的能源（如鐵細(xì)菌）。一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2.培養(yǎng)基（4）營(yíng)養(yǎng)組成：⑤特殊需求：滿足微生物對(duì)

_____________________________的需求pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、氧氣（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨、動(dòng)植物組織提取液中含有維生素）培養(yǎng)的微生物需要滿足的其他要求乳酸桿菌培養(yǎng)基中添加___________霉菌將pH調(diào)至______細(xì)菌將pH調(diào)至__________________厭氧微生物需要提供_______條件維生素酸性中性或微堿性無(wú)氧生長(zhǎng)因子：維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等pH：pH：酵母菌：放線菌：目錄02二、無(wú)菌技術(shù)二、無(wú)菌技術(shù)1.目的（1）防止培養(yǎng)物被污染（獲得純凈培養(yǎng)物）獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。（2）防止感染實(shí)驗(yàn)操作者2.關(guān)鍵3.內(nèi)容①.消毒：無(wú)菌技術(shù)應(yīng)圍繞著如何避免雜菌的污染展開(kāi)，主要包括消毒和滅菌。是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。②.滅菌：是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。二、無(wú)菌技術(shù)1.消毒：是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。2.滅菌：是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。芽孢和孢子的區(qū)別：芽孢是某些細(xì)菌在營(yíng)養(yǎng)條件缺乏時(shí)，在菌體內(nèi)形成的抗逆性強(qiáng)的休眠構(gòu)造。芽孢萌發(fā)可形成細(xì)菌體。孢子是脫離親本后能直接或間接發(fā)育成新個(gè)體的生殖細(xì)胞，它是有絲分裂或減數(shù)分裂的產(chǎn)物芽孢是抗逆性強(qiáng)的休眠體。孢子是繁殖體（生殖細(xì)胞）。蘑菇孢子芽孢的形成二、無(wú)菌技術(shù)1.消毒：是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。2.滅菌：是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。（1）對(duì)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒。（2）將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。二、無(wú)菌技術(shù)1.消毒：是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。不包括全部的芽孢和孢子。①物理方法：煮沸消毒：在100℃煮沸5?6min，可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢。（日常生活用品餐具等）巴氏消毒：對(duì)于一些不耐高溫的液體，如牛奶，則可使用巴氏消毒法，即在62?65℃消毒30min或80?90℃處理30s?1min，可以殺死牛奶中的絕大多數(shù)微生物，并且基本不會(huì)破壞牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分。（啤酒啤酒、人乳及嬰兒合成食物等）紫外線消毒：接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)在使用前，可以用紫外線照射30min，以殺死物體表面或空氣中的微生物。二、無(wú)菌技術(shù)①物理方法：②化學(xué)方法：如采用碘酒、體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精等化學(xué)藥劑，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的空間、操作臺(tái)表面、實(shí)驗(yàn)人員的工作服與手等進(jìn)行消毒；氯氣消毒水源等。③生物方法：生物消毒法是指利用生物或其代謝物除去環(huán)境中的部分微生物的方法。例如，有的微生物能夠寄生于多種細(xì)菌體內(nèi)，使細(xì)菌裂解，因此可以用它們來(lái)凈化污水、污泥。1.消毒：是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。不包括全部的芽孢和孢子。二、無(wú)菌技術(shù)2.滅菌：是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。①濕熱滅菌：利用沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。高壓蒸汽滅菌：（效果最好）實(shí)驗(yàn)室常用高壓蒸汽滅菌鍋，在壓力100kPa、溫度121℃條件下，維持15-30min原理：對(duì)象：優(yōu)點(diǎn)：高溫蒸汽破壞蛋白質(zhì)、核酸等結(jié)構(gòu)使其變性操作簡(jiǎn)便，效果可靠，可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體?；颈３峙囵B(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。培養(yǎng)基、部分塑料制品（槍頭等）二、無(wú)菌技術(shù)2.滅菌：是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。①濕熱滅菌：②干熱滅菌：干熱滅菌箱內(nèi)，在160-170℃的熱空氣中維持下2-3h達(dá)到滅菌目的原理：使微生物細(xì)胞膜破壞、蛋白質(zhì)變性和原生質(zhì)干燥等對(duì)象：耐高溫，需保持干燥的物品玻璃器皿（如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器）金屬器具（如針頭、鑷子、剪刀等）二、無(wú)菌技術(shù)2.滅菌：是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。①濕熱滅菌：②干熱滅菌：③灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如涂布器、接種環(huán)、接種針或其他金屬用具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇ㄒ?jiàn)下圖）。外焰二、無(wú)菌技術(shù)2.滅菌：是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。①濕熱滅菌：②干熱滅菌：③灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如涂布器、接種環(huán)、接種針或其他金屬用具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇ㄒ?jiàn)下圖）。此外，在接種過(guò)程中，試管口、瓶口等容易被污染的部位，也可以通過(guò)火焰灼燒來(lái)滅菌。二、無(wú)菌技術(shù)做好消毒和滅菌工作后，要注意避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染，接下來(lái)的許多操作都應(yīng)在超凈工作臺(tái)上并在酒精燈火焰附近進(jìn)行。二、無(wú)菌技術(shù)(1)酒精消毒液中酒精濃度對(duì)效果的影響：75%的酒精殺菌效果最好。原因是濃度過(guò)高，菌體表面蛋白質(zhì)變性過(guò)快而凝固成一層保護(hù)膜，酒精不能滲入其中；濃度過(guò)低，殺菌能力減弱。(2)無(wú)菌技術(shù)措施的選擇原則。①考慮效果：滅菌的效果比消毒要好。②考慮操作對(duì)象的承受能力：活體生物材料、操作者的手等只能采用消毒的方法，而不能采用滅菌的方法。培養(yǎng)基滅菌：高壓蒸汽滅菌——121℃，氣壓100kPa，15-30min培養(yǎng)皿滅菌：干熱滅菌——160-170℃

，滅菌2h二、無(wú)菌技術(shù)類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化方法，殺死部分微生物（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5-6min巴氏消毒法不耐高溫的液體62-65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化學(xué)藥劑生物活體、水源等擦拭等,如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時(shí)用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱,160-170℃加熱2-3h濕熱滅菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿等,生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室常用高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),100kPa,溫度121℃,15-30min接種室、接種箱，超凈工作臺(tái)習(xí)題檢測(cè)1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵是防止雜菌污染

()2.滅菌比消毒對(duì)微生物的殺滅更徹底()3.無(wú)菌操作的對(duì)象只要是沒(méi)有生物活性的材料（如培養(yǎng)基、接種環(huán)等）都采用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌()√√×習(xí)題檢測(cè)判斷一下物品所采用的滅菌或消毒方法依次是

培養(yǎng)基

培養(yǎng)皿

接種環(huán)

實(shí)驗(yàn)操作者的雙手

實(shí)驗(yàn)室

牛奶

濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）干熱滅菌灼燒滅菌化學(xué)藥劑消毒（酒精）紫外線消毒巴氏消毒法習(xí)題檢測(cè)微生物培養(yǎng)過(guò)程中，要十分重視無(wú)菌操作，現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的許多方面也要進(jìn)行無(wú)菌操作，防止雜菌污染。請(qǐng)分析下列操作中錯(cuò)誤的是（）①煮沸消毒可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和部分芽孢②接種操作要在酒精燈火焰附近進(jìn)行③家庭制作葡萄酒時(shí)要將容器和葡萄進(jìn)行滅菌④培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌⑤加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料不需要滅菌A.①③B.②④C.③⑤D.④⑥C習(xí)題檢測(cè)下列對(duì)滅菌和消毒的理解不正確的是（）A．滅菌是指殺滅環(huán)境中一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子B．消毒是指殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物C．消毒和滅菌都是采用物理方法殺滅微生物D．常用滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌等C習(xí)題檢測(cè)如圖顯示的是微生物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的一個(gè)操作，則在此操作中（）A．酒精燈用于熔化培養(yǎng)基B．培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后需再滅菌C．培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基均已滅菌D．培養(yǎng)皿和三角燒瓶無(wú)需與酒精燈火焰有接觸C目錄03三、微生物的純培養(yǎng)三、微生物的純培養(yǎng)1.培養(yǎng)物：在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體。2.純培養(yǎng)物：由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物菌落3.純培養(yǎng)：獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程就是純培養(yǎng)微生物群分散或稀釋單個(gè)細(xì)胞單個(gè)菌落繁殖4.具體步驟：配制培養(yǎng)基→滅菌→接種→分離→培養(yǎng)三、微生物的純培養(yǎng)酵母菌的純培養(yǎng)三、微生物的純培養(yǎng)酵母菌的純培養(yǎng)(1)實(shí)驗(yàn)原理：①分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。②采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。(2)材料用具：酵母菌培養(yǎng)液、馬鈴薯、葡萄糖（或蔗糖）、瓊脂、蒸餾水、天平、小刀、紗布、燒杯、錐形瓶、棉塞、牛皮紙（或報(bào)紙）、皮筋、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、酒精燈、超凈工作臺(tái)、高壓蒸汽滅菌鍋、干熱滅菌箱和恒溫培養(yǎng)箱等。三、微生物的純培養(yǎng)拓展—菌落①概念:分散的微生物(單一個(gè)體)在適宜的________________表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的_____________。

固體培養(yǎng)基子細(xì)胞群體形狀、大小、光澤度、顏色、透明度等?！氰b定菌種的重要依據(jù)②特征:③純培養(yǎng)方法:

和

.平板劃線法稀釋涂布平板法三、微生物的純培養(yǎng)(3)方法步驟：酵母菌的純培養(yǎng)①配制培養(yǎng)基稱取去皮的馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過(guò)濾。向?yàn)V液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15?20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000mL。調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH：應(yīng)該在定容完成后，滅菌之前進(jìn)行操作。三、微生物的純培養(yǎng)②滅菌將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15?30min。將5?8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160?170℃滅菌2h。(3)方法步驟：酵母菌的純培養(yǎng)①能避免因水蒸氣凝結(jié)而浸濕棉塞；②隔絕空氣中雜菌的作用。1)滅菌鍋內(nèi)的冷空氣必須排盡;2)滅菌完畢,應(yīng)緩慢減壓;三、微生物的純培養(yǎng)③倒平板(3)方法步驟：酵母菌的純培養(yǎng)待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板。具體操作步驟如下。1.拔出錐形瓶的棉塞。2.將瓶口迅速通過(guò)火焰。3.用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基（10?20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋。4.等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過(guò)來(lái)放置。技巧：用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)溫度下降到剛剛不燙手即可。平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高；將平板倒置，①.避免培養(yǎng)基表面的水分更快地?fù)]發(fā)。②.防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。不要完全打開(kāi)，以免雜菌污染培養(yǎng)基瓊脂在98℃以上熔化，在44℃以下凝固翻轉(zhuǎn)三、微生物的純培養(yǎng)③倒平板(3)方法步驟：酵母菌的純培養(yǎng)1.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？不能，防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。2.怎么確定所倒平板未被雜菌污染或滅菌徹底？思考：習(xí)題檢測(cè)根據(jù)倒平板的方法及注意事項(xiàng)回答下列問(wèn)題：（1）培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到________左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。（2）請(qǐng)用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：_______________________。（3）甲、乙、丙中的滅菌方法是_________________。（4）丁中的操作需要等待_______________才能進(jìn)行。為什么要將平板倒置？（5）整個(gè)過(guò)程為何要在酒精燈旁進(jìn)行？（6）如何檢測(cè)培養(yǎng)基制備是否成功？50℃丙→乙→甲→丁灼燒滅菌

平板冷卻凝固

37℃倒置培養(yǎng)24～48h，觀察是否有微生物生長(zhǎng)防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染，避免培養(yǎng)基表面的水分更快地?fù)]發(fā)。酒精燈旁空氣中雜菌少三、微生物的純培養(yǎng)④接種和分離酵母菌(3)方法步驟：酵母菌的純培養(yǎng)通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。平板劃線的具體操作如圖的流程圖。玻璃涂布器（涂布平板用）接種針（穿刺接種用）接種環(huán)（劃線接種用）微生物群分散或稀釋單個(gè)細(xì)菌單個(gè)菌落連續(xù)劃線生長(zhǎng)繁殖三、微生物的純培養(yǎng)④接種和分離酵母菌①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞③試管口通過(guò)火焰④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液⑤試管口通過(guò)火焰，并塞上棉塞⑥將皿蓋打開(kāi)一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開(kāi)始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線操作要在

進(jìn)行酒精燈火焰附近三、微生物的純培養(yǎng)④接種和分離酵母菌(3)方法步驟：酵母菌的純培養(yǎng)平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)過(guò)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法三、微生物的純培養(yǎng)④接種和分離酵母菌(3)方法步驟：酵母菌的純培養(yǎng)平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)過(guò)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法12345三、微生物的純培養(yǎng)(3)方法步驟：平板劃線法：分區(qū)劃線法12345第1次劃線灼燒接種環(huán)滅菌第2次劃線灼燒接種環(huán)滅菌第3次劃線灼燒接種環(huán)滅菌灼燒接種環(huán)滅菌①接種環(huán)只蘸一次菌液，但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次；②劃線首尾不能相接；③每次劃線前灼燒接種環(huán)進(jìn)行滅菌；④劃線操作結(jié)束后，仍需灼燒接種環(huán)，培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)?！酒桨鍎澗€法注意事項(xiàng)】問(wèn)：接種環(huán)共需灼燒幾次？6次三、微生物的純培養(yǎng)1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，

仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？灼燒時(shí)期目的取菌種前每次劃線前接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上原有微生物。殺死上次劃線時(shí)殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來(lái)源上次劃線的末端殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線的原因？3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線的原因？

使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，以便獲得單個(gè)菌落。以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。三、微生物的純培養(yǎng)不能。最后一次劃線通常已經(jīng)將微生物稀釋成單個(gè)的細(xì)胞，如果與第一次劃線相連則增加了微生物的數(shù)目，得不到純化的效果。4.最后一次劃線與第一次劃線能否相連？為什么？注意：劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基表面，否則會(huì)影響培養(yǎng)、分離的效果，難以達(dá)到分離單菌落的目的。三、微生物的純培養(yǎng)⑤培養(yǎng)酵母菌(3)方法步驟：酵母菌的純培養(yǎng)完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置，放入28℃左右(培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異)的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24?48h。未接種的平板作為對(duì)照組，若有其上菌落生長(zhǎng)，則說(shuō)明培養(yǎng)基被污染或者滅菌不徹底。劃3個(gè)平板（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）1個(gè)不劃線（空白對(duì)照）三、微生物的純培養(yǎng)【歸納總結(jié)】平板劃線法接種菌種時(shí)，可防止雜菌污染的操作①接種前將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒。②劃線操作在酒精燈火焰旁進(jìn)行。③接種環(huán)蘸取菌液前后，要將試管口通過(guò)火焰。④劃線時(shí)將培養(yǎng)皿的皿蓋打開(kāi)一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃線，劃線后及時(shí)蓋上皿蓋。三、微生物的純培養(yǎng)①在未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng)？如果有，說(shuō)明了什么？在未接種的培養(yǎng)基表面應(yīng)該沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，如果有，說(shuō)明培養(yǎng)基被雜菌污染或滅菌不徹底②在接種酵母菌的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了單菌落？這些菌落的顏色、形狀和大小是否一致？如果你觀察到了不同形態(tài)的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？在接種酵母菌的培養(yǎng)基上可觀察到單菌落。如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明純化酵母菌的操作成功。如果觀察到了不同形態(tài)的菌落，可能是接種的菌種不純或者無(wú)菌操作不規(guī)范等原因引起的。三、微生物的純培養(yǎng)③你是如何記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的？可以在培養(yǎng)12h和24h后，觀察菌落的大小、形狀、顏色。培養(yǎng)24h后，菌落的大小、形狀是否發(fā)生變化，菌落顏色是否加深，光澤度是否增加，等等【歸納總結(jié)】平板劃線法接種菌種時(shí)，可防止雜菌污染的操作①接種前將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒。②劃線操作在酒精燈火焰旁進(jìn)行。③接種環(huán)蘸取菌液前后，要將試管口通過(guò)火焰。④劃線時(shí)將培養(yǎng)皿的皿蓋打開(kāi)一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃線，劃線后及時(shí)蓋上皿蓋。三、微生物的純培養(yǎng)評(píng)估論點(diǎn)的可信程度所謂“酵素”，就是“酶”的另一種說(shuō)法?！敖退亍敝谱骶褪抢梦⑸镞M(jìn)行無(wú)氧呼吸的原理，進(jìn)行像制作泡菜一樣的發(fā)酵。這樣制作的“酵素”中可能有糖類(包括一些簡(jiǎn)單的糖和膳食纖維等)、蛋白質(zhì)(包括多種酶)、有機(jī)酸等成分，不存在它獨(dú)有的、特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中甚至可能含有微生物發(fā)酵產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，食用后可能會(huì)危害人體健康。因此，“吃水果酵素可以美容、減肥、促進(jìn)消化和提高免疫力”的論點(diǎn)值得懷疑。習(xí)題檢測(cè)1.倒平板后，待平板冷凝之后需將其倒置()2.若皿蓋和皿底之間濺上培養(yǎng)基，這個(gè)培養(yǎng)基不可再用()3.培養(yǎng)微生物的溫度因菌種不同而稍有差異()√√√習(xí)題檢測(cè)一、概念檢測(cè)1.微生物的純培養(yǎng)既需要適宜的培養(yǎng)基，又要防止雜菌污染。判斷下列相關(guān)表述是否正確。(1)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對(duì)微生物的生長(zhǎng)越有利。()(2)消毒和滅菌的殺菌程度存在差異。()(3)微生物的純培養(yǎng)物就是不含有代謝廢物的微生物培養(yǎng)物。()××√2.日常生活中保存食品的方法有哪些？這些方法是如何阻止或抑制微生物生長(zhǎng)的？日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低溫儲(chǔ)存等。干制可以降低食品的水分含量；腌制可以通過(guò)食鹽、糖等制造高滲環(huán)境，從而抑制微生物的生長(zhǎng)和繁殖；低溫則是通過(guò)降低微生物的代謝速率來(lái)抑制微生物的生長(zhǎng)和繁殖。習(xí)題檢測(cè)1.某同學(xué)將5個(gè)手指尖在貼有“洗手前”標(biāo)簽的培養(yǎng)基上輕輕按一下。然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個(gè)指尖在貼有