離體蛙心灌注及藥物的影響[教學要求]掌握離體蛙心的制備方法和實驗方法。掌握多種因素對離體蛙心的影響和原理。熟悉MedLab系統(tǒng)的實驗記錄和實驗結(jié)果處理方法。

[實驗相關(guān)知識]1.維持心臟正常收縮的條件多種因素對蛙心活動的影響

2.離體蛙心的特性

正常蛙心舒縮正常結(jié)構(gòu)與功能適宜

的體液環(huán)境適當?shù)呢摵烧５纳窠?jīng)支配Na+K+H+Ca2+

溫度PH？去甲腎上腺素（NA)乙酰膽堿(Ach)阿托品毒毛旋花子甙K離體林格液改變離體蛙心的制備儀器連接MedLab參數(shù)設(shè)置（表6-3）實驗觀察,處理和記錄[實驗步驟]離體蛙心的制備蛙心暴露結(jié)構(gòu)辨認穿線結(jié)扎和備用插管和游離蛙心腹面心室左心房右心房動脈圓錐左主動脈弓右主動脈弓背面靜脈竇后腔靜脈左前腔靜脈右前腔靜脈蛙心的正常解剖結(jié)構(gòu)

心臟背面觀心臟腹面觀動作要輕柔，不要傷及靜脈竇和傳導組織。切口位置要適當。插管成功標志。[插管注意事項]儀器連接注意事項：換能器插管液面高度燒杯調(diào)零實驗觀察、處理和記錄1）觀察和記錄正常蛙心收縮曲線

(幅度，疏密度，規(guī)律性，基線)[實驗步驟]2）觀察無機離子的影響①等量0.65％NaCl

②1～2滴2%CaCl2

③1～2滴1%KCl3）觀察受體激動劑和拮抗劑的影響②1滴1:100,000乙酰膽堿③1滴1:2,000阿托品,觀察曲線變化，再滴入1滴Ach①1～2滴1:10,000去甲腎上腺素5）觀察溫度的影響6）觀察酸堿的影響換入等量4℃的冷林格液①1～2滴

2.5%NaHCO3②1～2滴

3%乳酸，出現(xiàn)變化后，再加1-2滴

2.5%NaHCO34）觀察強心苷類藥物的影響1滴0.025%毒毛幻花苷K溶液圖12.5%NaHCO3對蛙心收縮活動的影響圖2先加3%乳酸再加2.5%NaHCO3對蛙心收縮活動的影響[注意事項]

換液時蛙心插管內(nèi)的液面應(yīng)保持大致相同的高度。林格液和藥物交換時,所用吸管要用嚴格區(qū)分。加藥時先加1滴并注意觀察,作用不明顯時再補加,

作用一旦出現(xiàn)應(yīng)立即換回新鮮的林格液。施加處理因素前應(yīng)先記錄正常曲線，及時打標記。[結(jié)果處理]截取各種處理因素下有代表性的蛙心收縮曲線，用“畫圖”制成單頁圖打印出來。1.等量

0.65%NaCl

2.1～2滴

2%CaCl23.1～2滴

1%KCl收縮力下降收縮力下降4.1～2滴

去甲腎上腺素(NE)5.1滴

乙酰膽堿（Ach）總結(jié)收縮力增強收縮力加強，HR加快HR減慢，收縮力下降6.1滴1:2,000阿托品,觀察曲線變化，再滴入Ach7.1滴0.025%毒毛花苷K溶液

8.換入等量4℃的冷林格液9.1～2滴

2.5%NaHCO3總結(jié)HR加快收縮力加強收縮力減弱，HR減慢收縮減弱10.1～2滴

3%乳酸，出現(xiàn)變化后，再加1-2滴2.5%NaHCO3總結(jié)收縮力減弱[實驗報告]討論:

分析各處理因素影響蛙心收縮的原理。結(jié)論:各處理因素對蛙心活動是何影響。[預(yù)習]

半數(shù)致死量的測定生理科學實驗的實驗設(shè)計林格液的成分（P15）NaClKClCaCl2NaHCO3圖30.65%NaCl對蛙心收縮活動的影響圖42%CaCl2對蛙心收縮活動的影響圖51%KCl對蛙心收縮活動的影響圖6

NA對蛙心收縮活動的影響

圖7Ach對蛙心收縮活動的影響圖8先加阿托品再加Ach對蛙心收縮活動的影響圖9強心甙對蛙心收縮活動的影響圖104℃冷林格液對蛙心收縮活動的影響[實驗相關(guān)知識]1.維持心臟正常收縮的條件多種因素對蛙心活動的影響

2.離體蛙心的特性

各處理因素對蛙心的作用及原理影響無機離子：0.65％NaCl；2％CaCl2；1％KCl藥物：NA；Ach；阿托品；毒毛旋花子甙K溫度：低溫林格液酸、堿：NaHCO3；乳酸【實驗步驟】離體蛙心的制備儀器連接實驗計算機設(shè)置實驗觀察、處理和記錄【注意事項】

勿傷靜脈竇，插管時注意方向和手法保持心臟濕潤保持液面高度一致滴管勿混用，勿碰蛙心插管，加藥勿過量做好標記，出現(xiàn)作用立即換新鮮林格液右主動脈弓蛙心結(jié)構(gòu)圖腹面左主動脈弓左心房右心房動脈圓錐心室背面心室左心房房室溝竇房溝靜脈竇連接處后腔靜脈右心房蛙心結(jié)構(gòu)圖1243穿線、插管離體蛙心實驗裝置2.MedLab實驗參數(shù)設(shè)置見P84表6-3實驗步驟*實驗時請調(diào)用“蛙心灌流”定制實驗*信號輸入前先“調(diào)零”離體蛙心實驗裝置3.連接實驗裝置實驗步驟儀器連接注意事項：換能器插管液面高度燒杯調(diào)零4.實驗觀察、處理和記錄1）觀察和記錄正常蛙心收縮曲線

(幅度，疏密度，規(guī)律性，基線)2)改變無機離子濃度①等量換入0.65%Nacl②2%Cacl2（1~2滴）③1%Kcl（1滴）3)應(yīng)用受體激動劑和拮抗劑1:10000NA（1~2滴）1:100000Ach（1滴）1:2000阿托品（1滴）

+1:100000Ach（1滴）實驗步驟4)應(yīng)用強心甙類藥0.025%毒毛幻花苷K溶液（1~2滴）實驗步驟5）觀察溫度的影響換入等量4℃的冷林格液6）觀察酸堿的影響①1～2滴2.5%NaHCO3②1～2滴3%乳酸，出現(xiàn)變化后，再加1-2滴2.5%NaHCO35.實驗后處理2)分析各處理因素對蛙心收縮曲線影響及其原理，寫出實驗報告。1)截取各種處理因素具有代表性的蛙心收縮曲線，制成單頁圖打印出來。實驗步驟附圖離體蛙心灌注及藥物的影響實驗結(jié)果1.等量0.65%NaCl,收縮力減弱，心率加快等滲溶液，其內(nèi)環(huán)境僅有[Na+],[Cl-]，缺乏心肌收縮所必需的Ca2+,K+,尤其是Ca2+的缺乏，Ca2+內(nèi)流減少，導致心肌收縮力降低。

2%CaCl2，收縮力增加，心率減慢

3.1%KCl，收縮力減弱，心率減慢4.NA，收縮力增加，心率加快5.Ach，收縮力減弱，心率減慢結(jié)果分析

胞外K+濃度升高，Ca2+內(nèi)流減少（競爭）胞外K+濃度升高，靜息電位絕對值減少，低于-55~-60mV時，快Na＋通透失活，興奮性下降，心率減慢，甚至停止在舒張期NA與心肌β受體結(jié)合后，激活A(yù)C，Ca2+通道開放增加，正性變力、變時、變傳導Ach與心肌細胞膜上M-R結(jié)合，抑制鈣通道，同時激活GK蛋白，K+外流增加，負性變力、變時、變傳導6.阿托品+Ach，無明顯變化阿托品為M膽堿受體拮抗劑，但離體蛙心無神經(jīng)支配，無ACh釋放，加入阿托品后無明顯作用；再加入Ach，由于阿托品已將M膽堿受體阻斷，故Ach無作用。7.毒K，收縮力增加抑制Na+-K+－ATP酶使細胞內(nèi)Na+量升高，K+下降，胞內(nèi)Na+升高，可促進細胞內(nèi)外Na+-Ca2+交換,使細胞內(nèi)Ca2+增多，從而加強心肌細胞收縮力。（毒K的作用有賴于胞外Ca2+的存在）8.4℃冷林格液，收縮力減弱，心率減慢溫度過低時，肌凝蛋白頭部ATP酶活性降低酶活性降低，代謝水平降低，各離子通道蛋白活性降低，心臟收縮活動減弱，心率減慢。圖30.65%NaCl對蛙心收縮活動的影響圖42%CaCl2對蛙心收縮活動的影響圖51%KCl對蛙心收縮活動的影響圖6

NA對蛙心收縮活動的影響

圖7Ach對蛙心收縮活動的影