乙型肝炎病毒表面抗原檢測(cè)（ELISA）1原理：在微孔板上預(yù)包被被純化的乙肝表面抗體（HBsAb），配以酶標(biāo)記抗體（HbsAb-HRP）及TMB等其它試劑，采用夾心法原理檢測(cè)人血清（或血漿）中乙肝表面抗原（HBsAg）。2試劑：2.1試劑名稱：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）2.2試劑生產(chǎn)廠家：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司2.3包裝規(guī)格：96Test/Kit2.4試劑盒組成：HbsAb預(yù)包被微孔板（包被HbsAb），HbsAg酶標(biāo)抗體（含HRP標(biāo)記HbsAb）,HbsAg陽(yáng)性對(duì)照（含基因工程HbsAg），HbsAg陰性對(duì)照（正常人血清），HbsAg樣品稀釋液（含BSA緩沖液），濃縮洗滌液（PBS-T緩沖液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），終止液（含H2SO4），封板膜，自封袋，說(shuō)明書。2.5試劑儲(chǔ)存條件及有效期：2~8℃避光保存，有效12個(gè)月。3樣本采集：取靜脈血3-4ml于干凈容器中分離出血清或血漿標(biāo)本，如不及時(shí)測(cè)定可置于4℃冰箱保存，如長(zhǎng)期保存需置于-15至-20℃凍存，并避免樣本反復(fù)凍融。高脂血、高膽紅素及溶血樣本可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，建議不使用。4所需儀器4.1全自動(dòng)酶免分析儀4.2新鮮蒸餾水或去離子水4.3酶標(biāo)儀（單波長(zhǎng)450nm或雙波長(zhǎng)450nm/630nm）4.4微量移液器4.537℃恒溫箱或水浴箱4.6洗板機(jī)或洗瓶5檢驗(yàn)方法5.1平衡：將試劑盒各組分從盒中取出，平衡至室溫（18~25℃），微孔板板開(kāi)封后，余者即時(shí)以自封袋封存。5.2配液：濃縮洗滌液配置前充分搖勻（如有晶體應(yīng)充分溶解），濃縮洗滌液和蒸餾水去離子水按1：19稀釋后使用。5.3編號(hào)：取所需數(shù)量微孔條固定于支架，按序編號(hào)。5.4稀釋：每孔加入20ul樣品稀釋液。5.5加樣：分別在相應(yīng)孔中加入100ul陰、陽(yáng)性對(duì)照血清或待測(cè)樣本。5.6溫育：置37℃溫育60min。5.7加酶：分別在每孔中加入酶標(biāo)記抗體50ul。5.8溫育：置37℃溫育30min。5.9洗滌：用洗滌液充分洗滌5次、洗滌后扣干（每次應(yīng)保持30~60s的浸泡時(shí)間）。5.10顯色：每孔加入底物A、B各50ul，輕拍混勻，37℃暗置30min。5.11終止：每孔加入終止液50ul，混勻。5.12測(cè)定：用酶標(biāo)儀單波長(zhǎng)450nm或雙波長(zhǎng)450nm/630nm測(cè)定各孔OD值（用單波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)，需用空白對(duì)照調(diào)零），并記錄結(jié)果。6結(jié)果判定與分析臨界值（C.O.）的計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔OD平均值*2.1；陰性對(duì)照OD均值小于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。結(jié)果判定：樣本OD值S/C.O.>=1者為HbsAg陽(yáng)性樣本OD值S/C.O.<1者為HbsAg陰性陰性對(duì)照均值>0.1或陽(yáng)性對(duì)照均值<0.4時(shí)，實(shí)驗(yàn)無(wú)效，應(yīng)重新試驗(yàn)。7質(zhì)量控制每次試驗(yàn)用HBsAg的質(zhì)控血清同步檢測(cè)，S/CO值應(yīng)在控制范圍內(nèi)；如失控，檢查試劑校期、儲(chǔ)藏溫度、試驗(yàn)溫度是否正常、操作步驟是否正確，直至從新試驗(yàn)使其在控。8參考范圍陰性9臨床意義在血清或血漿中HbsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或?yàn)闊o(wú)癥狀攜帶者。10操作性能靈敏度為ng/ml，特異性高11方法的局限性11.1此方法僅適用于個(gè)體的血清或血漿樣本的檢測(cè)，不適合與混合血清或血漿樣本及其他體液樣本。11.2該方法僅作為定性檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原。11.3試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照不能作為靈敏度的考核指標(biāo)，陽(yáng)性對(duì)照僅用于按照說(shuō)明書步驟操作時(shí)，驗(yàn)證試劑盒中的組分是否有效。11.4由于方法學(xué)的局限性，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅作為判斷疾病的一項(xiàng)依據(jù)，如需對(duì)患者進(jìn)行確診，建議施于其它檢驗(yàn)手段予以確認(rèn)。12注意事項(xiàng)12.1試驗(yàn)前請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀試劑說(shuō)明書，任何違反試劑說(shuō)明書的使用或操作行為，都可能得到不準(zhǔn)確的結(jié)果。12.2所有樣本、試劑和各種廢棄物應(yīng)按傳染物處理，嚴(yán)格防止交叉感染，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。對(duì)于含有傳染病和懷疑含有傳染源的物質(zhì)，應(yīng)有合適的生物安全保證制度，下列為有關(guān)注意事項(xiàng)，但不僅限于此：1）戴手套處理樣本和試劑；2）不要用嘴吸樣；3）不可在處理這些物品時(shí)吸煙、進(jìn)食、喝飲料、美容和處理隱形眼鏡等；4）用消毒劑對(duì)濺出的樣本和試劑進(jìn)行消毒；5）按科室有關(guān)條列來(lái)消毒和處理所有樣本、試劑和潛在的污染物。12.3加試劑前應(yīng)先將試劑瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻。建議使用加液器進(jìn)行加液，并經(jīng)常對(duì)加液器進(jìn)行校準(zhǔn)。加液時(shí)注意勿使加液槍頭接觸孔內(nèi)液體，避免液體間相互污染。仔細(xì)操作，避免加樣時(shí)在孔中產(chǎn)生氣泡。12.4每板設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各兩孔，設(shè)空白對(duì)照1孔，空白對(duì)照不加樣本和酶標(biāo)抗體、其余各步相同。12.5避免在孵育和保存過(guò)程中試劑被陽(yáng)光暴曬和接觸次氯酸等強(qiáng)氧化性物質(zhì)。12.6孵育溫度要保持在37℃+-1℃，溫度過(guò)高或者過(guò)低可能會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。12.7封模板為一次性使用，重復(fù)使用可能導(dǎo)致污染。12.8洗板機(jī)在使用結(jié)束后要使用新鮮蒸餾水或高品質(zhì)去離子水沖洗干凈，以防止管路堵塞和腐蝕。洗滌時(shí)各孔軍需加滿但不溢出，防止孔內(nèi)有殘留物未能洗凈。12.9每次洗滌結(jié)束請(qǐng)盡早進(jìn)行后續(xù)加液操作，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露而引起錯(cuò)誤結(jié)果。12.10使用全自動(dòng)生化儀器時(shí)，封板和洗版后扣干步驟可以省略。但需要注意保證洗滌液的加液量，保證洗滌后將微孔板孔中的洗液充分吸干，以免對(duì)實(shí)驗(yàn)造成錯(cuò)誤的結(jié)果。12.11確保反應(yīng)孔板的底清潔干燥，在讀板前要確?？字幸后w沒(méi)有氣泡。12.12終止后盡早用酶標(biāo)儀進(jìn)行讀數(shù)測(cè)量（建議在10min內(nèi)完成讀值），避免放置過(guò)長(zhǎng)時(shí)間而引起的錯(cuò)誤結(jié)果。12.13檢測(cè)結(jié)果用酶標(biāo)儀進(jìn)行讀數(shù)測(cè)量。樣本的檢測(cè)讀數(shù)與樣本中抗原的濃度不一定呈正相關(guān)。12.14檢測(cè)結(jié)果呈陰性的樣本，不能絕對(duì)保證樣本中沒(méi)有低濃度抗原的存在，不能完全排除HBV感染的可能。12.15該免疫測(cè)試不能絕對(duì)排除非特異性反應(yīng)的存在，如對(duì)檢測(cè)結(jié)果有疑問(wèn)，用相應(yīng)的確認(rèn)試劑或方法對(duì)檢測(cè)樣本進(jìn)行結(jié)果確認(rèn)。12.16試劑盒各組分在正確處理和保存的