動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)基本概念克?。嚎寺∈怯⑽摹癱lone”或“cloning”的音譯，而英文“clone”則起源于希臘文“Klone”，原意是指幼苗或嫩枝，以無性繁殖或營養(yǎng)繁殖的方式培育植物，如扦插和嫁接。在大陸譯為“無性繁殖”在臺灣與港澳一般意譯為復(fù)制或轉(zhuǎn)殖或群殖。個體克隆是指生物體通過體細(xì)胞進行的無性繁殖，以及由無性繁殖形成的基因型完全相同的后代個體組成的種群。通常是利用生物技術(shù)由無性生殖產(chǎn)生與原個體有完全相同基因組織后代的過程。細(xì)胞克?。焊杉?xì)胞分子克隆：PCR質(zhì)粒擴增

動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)動物克隆的一般技術(shù)流程動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)轉(zhuǎn)基因克隆動物的基本流程細(xì)胞篩選基因整合MSTN基因基因轉(zhuǎn)移同源重組核供體豬體細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)卵供體豬未受精卵除去卵核細(xì)胞融合克隆胚胎胚胎移植無核卵子代孕母親基因組經(jīng)過同源重組修飾的轉(zhuǎn)基因克隆豬同源重組細(xì)胞擴增動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)克隆發(fā)展的簡單歷史1938年德國漢斯·施佩曼提出采用細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動物的設(shè)想；

1952年起，科學(xué)家們首先采用青蛙開展細(xì)胞核移植克隆實驗，先后獲得了蝌蚪和成體蛙；1963年，中國童第周教授獲得胚胎細(xì)胞核移植魚；1964年，格登（J.Gurdon)獲得體細(xì)胞核移植非洲爪蟾；1981年，卡爾·伊爾門澤和彼得·霍佩用鼠胚胎細(xì)胞培育出發(fā)育正常的小鼠。1984年，施特恩·維拉德森獲得胚胎細(xì)胞克隆羊；1989年，維拉德森獲得連續(xù)移核二代的克隆牛；1997年2月，英國羅斯林研究所wilmut博士科研組公布體細(xì)胞克隆羊“多利”培育成功；1998年7月，美國夏威夷大學(xué)Wakayama等報道，由小鼠卵丘細(xì)胞克隆了27只成活小鼠，其中7只是由克隆小鼠再次克隆的后代，這是繼“多利”以后的第二批哺乳動物體細(xì)胞核移植后代。“檀香山技術(shù)”；2001年，克隆歐洲盤羊，但盤羊克隆成功后僅活了7個月。

動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)1998年日本克隆牛1997年英國克隆羊1998年新西蘭的克隆奶牛1998年美國克隆小鼠動物克隆回顧1998轉(zhuǎn)基因克隆山羊米拉1999年楊向中美國1998年日本轉(zhuǎn)基因克隆奶牛動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)2002年美國克隆貓科比2000年美國克隆豬2000年，獼猴特拉2000年英國基因打靶polly2002年法國克隆兔2001年意大利歐洲盤羊155d異種克隆2001年，亞洲野牛諾亞2002法中克隆大鼠15次入宮動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)2002年法國克隆兔2003年美國克隆騾2003年意大利克隆馬2003南韓克隆狗2002年英美雙敲除基因打靶豬2003美野貓2003美克隆鹿2004年克隆水貂動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)2005年韓國克隆狼2005年10月1日出生的廣西大學(xué)體細(xì)胞克隆水牛將來某一天動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)克隆技術(shù)的問題流產(chǎn)率高，胎兒畸形，出生率低5%，出生體重過大！重編程（epigeneticreprograming）不完全是關(guān)鍵！OverallGrowthPlacentalInsufficienciesCerebralEffects動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)早期胚胎發(fā)育的假象？？？動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)M隨GV增大而增主動去M被動去M被動去甲基化依賴于DNA復(fù)制動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)DNAmethlationandspermremodeling精子的去甲基化重編程動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)Passivedemethylationoccursasaconsequenceofreplicationproceedingintheabsenceofmaintenancemethylation(providedbyDnmt1).Contrarytopassivedemethylation,activedemethylationisreplicationindependentandrequiresanenzymaticactivity,甲基化與去甲基化動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)Followingthepre-implantationgenomewidedemethylationthesomaticlineagestogetherwiththefounderpopulationofPGCsundergoawaveofpostimplantationdenovomethylation.ThemethylationiserasedinthedifferentiatingPGCsaftertheirentryintothegonadsbyagermlinespecificmechanism.Thenewmethylationimprintsareestablishedsubsequentlyintheprocessofgametematuration.動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)父源失活TE隨機失活，傾向已失活X動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)供體細(xì)胞融合入去核MII卵母細(xì)胞NEBDPCC假原核形成并快速膨大染色體全基因組水平去甲基化胚胎早期發(fā)育基因的激活動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)發(fā)生充分的NEBD和PCC的靈長類SCNT胚胎高達20%能發(fā)育至囊胚(Mitalipov,Zhouetal.2007)。Sung的研究結(jié)果卻表明PCC不是牛體細(xì)胞重編程的必需條件(Sung,Shenetal.2007)

動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)在NT牛胚胎1、2、4細(xì)胞檢測到的hnRNA明顯高于IVF胚胎，NT胚胎的基因轉(zhuǎn)錄在1細(xì)胞階段發(fā)生，此亦反應(yīng)出供體細(xì)胞的基因表達并沒有完全被終止。在正常的受精卵發(fā)育中，牛、豬、小鼠、大鼠和人類受精后父源DNA發(fā)生快速的主動去甲基化，同時母源DNA隨著復(fù)制發(fā)生被動去甲基化(Xuetal.2005)。動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)牛的父源染色體去甲基化后，很快開始從頭甲基化（denovo），在2細(xì)胞期前甲基化水平恢復(fù)至和母源DNA相同的甲基化水平(Park,Jeongetal.2007)。牛在8-16細(xì)胞期，在DNMT3A和DNMT3B酶的作用下，染色體重新從頭甲基化，胚胎建立起新的甲基化模式(Deanetal.2001)。隨后胚胎染色體的甲基化模式由DNMT1維持，它決定著早期胚胎基因表達的程序性啟動。動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)Dnmt161790bpDNA40個外顯子mRNAjoin(1..316,13059..13095,14251..14358,14567..14786,17769..17844,19518..19596,21231..21265,21962..22046,26772..26806,28451..28538,31776..31810,32388..32469,34718..34752,35073..35118,35214..35294,35369..35478,38627..38745,39191..39283,40080..40231,40363..40550,40657..40843,43289..43386,43591..43738,45168..45283,45479..45683,46119..46252,48612..48785,51149..51370,52916..53108,53947..54031,54227..54355,54808..55090,55319..55460,56531..56697,57127..57304,57856..58051,58849..59015,59284..59400,60829..60919,61435..61790)

動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)鼠基因組中與甲基化直接相關(guān)的基因15動物克隆與轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)推測