受理號：CSZ2000124體外診斷試劑產(chǎn)品注冊技術(shù)審評報告產(chǎn)品中文名稱：染色體拷貝數(shù)變異檢測試劑盒（可逆末端終止測序法）產(chǎn)品管理類別：第三類申請人名稱：杭州貝瑞和康基因診斷技術(shù)有限公司國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心-1-目錄基本信息.........................................................................................................3一、申請人名稱.............................................................................................3二、申請人住所.............................................................................................3三、生產(chǎn)地址.................................................................................................3技術(shù)審評概述.................................................................................................4一、產(chǎn)品概述.................................................................................................4二、臨床前研究概述...................................................................................7三、臨床評價概述.......................................................................................11四、產(chǎn)品受益風(fēng)險判定...............................................................................12綜合評價意見...............................................................................................14-2-基本信息一、申請人名稱杭州貝瑞和康基因診斷技術(shù)有限公司二、申請人住所浙江省杭州經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)白楊街道6號大街號9幢，16幢一層、二層三、生產(chǎn)地址杭州經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)白楊街道6號大街260號9幢，16幢一層、二層，幢二層-3-技術(shù)審評概述一、產(chǎn)品概述（一）產(chǎn)品主要組成成分試劑盒的主要組成成分見下表：組分名稱主要成分96人份/盒反應(yīng)酶f雙鏈片段化酶（dsDNAFragmentase）115μL/管管緩沖液f10XFragmentaseReactionBufferv2115μL/管管反應(yīng)酶1反應(yīng)酶1240μL/管管緩沖液1緩沖液1770μL/管管反應(yīng)酶2反應(yīng)酶2110μL/管管緩沖液2緩沖液21350μL/管管陽性質(zhì)控1T21陽性人類基因組5ng/μL26μL/管管陽性質(zhì)控27q11.23微缺失陽性人類基因組5ng/μL26μL/管管陽性質(zhì)控345,X陽性人類基因組DNA5ng/μL26μL/管管陰性質(zhì)控核型正常人類基因組5ng/μL26μL/管管接頭V01～V96接頭1.5μM6μL/管×96管注：同一組分不同批號不能混用。（二）產(chǎn)品預(yù)期用途本試劑盒用于體外定性檢測高危孕婦羊水樣本中人基因組13/18/21/X/Y號染色體的7種非整倍體（包括三體、三體、三體、、、XXY、），以及染色體、區(qū)域的微缺失情況。用于產(chǎn)前篩查高風(fēng)險孕婦、高齡孕婦、超聲檢查發(fā)現(xiàn)胎兒結(jié)構(gòu)異常且懷疑存在1821Y等染色體數(shù)目異?；虼嬖谙嚓P(guān)染色體微13-三體綜合-4-征、18-三體綜合征、21-三體綜合征、特納綜合征、Klinefelter綜合征、超雌綜合征、超雄綜合征和綜合征/Angelman綜合征、綜合征產(chǎn)前輔助診斷。我國出生缺陷的發(fā)病率約為傳學(xué)病因的以上。常見的染色體畸變包括染色體數(shù)目異常（非整倍體）和染色體結(jié)構(gòu)異常（異位、缺失、重復(fù)、倒位等）。染色體非整倍體是指細(xì)胞的染色體數(shù)目增加或減少一條或多條，臨床表現(xiàn)為先天性智力低下或性發(fā)育不全、發(fā)育滯后及多發(fā)畸形等癥狀，臨床上染色體非整倍體異常以211813最為常見。染色體微缺失/微重復(fù)綜合征是由一段染色體的缺失或重復(fù)所造微重復(fù)綜合征已達(dá)到300近1/600。由于缺失片段較為微小，染色體微缺失通常被產(chǎn)前診斷漏檢?；純憾鄶?shù)能正常存活，出生后表現(xiàn)為不同程度的軀體或發(fā)育異常。威廉姆斯綜合征（syndrome，），是一種由于區(qū)域1.5-1.8Mb基因雜合微缺失所致的多系統(tǒng)異常綜合征。臨床以心血染色體區(qū)域長約6Mb，天使綜合征（Angelmansyndrome，AS）和普拉德-威利綜合征（syndrome，PWS）的印記區(qū)均位于其中。普拉德威利綜合征為父源染色體區(qū)域印記基因染色體區(qū)域的UBE3A-5-體疾病本身無法根治，因此會給患兒的家庭和社會造成沉重的經(jīng)濟壓力和社會負(fù)擔(dān)。不適用于有染色體異常家族史或有既往不良孕產(chǎn)史或超聲篩查胎兒結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)明顯異常的孕婦，不得用于非醫(yī)學(xué)指征相關(guān)的性別鑒定。在進對孕婦及家屬進行相關(guān)的產(chǎn)前遺傳咨詢。相關(guān)檢測的開展應(yīng)符合原衛(wèi)生部發(fā)布的《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》的相關(guān)規(guī)定。在進行該檢測前，必須與孕婦有充分的知情談話，需說明該技術(shù)檢測的內(nèi)容、風(fēng)險和技術(shù)局限性，并簽署相關(guān)的知情同意書。本試劑盒檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為產(chǎn)前診斷的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合核型分析、超聲檢查等檢測結(jié)果進行綜合判斷。陰性結(jié)果不能排除其他染色體三體，其結(jié)果的確認(rèn)應(yīng)結(jié)合臨床進行綜合判斷。本試劑盒的檢測項目應(yīng)在有產(chǎn)前診斷資質(zhì)的醫(yī)療機構(gòu)中開展。項目申請的要求參照我國相關(guān)的衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。申請檢測的醫(yī)師應(yīng)是經(jīng)過產(chǎn)前診斷專業(yè)培訓(xùn)的、有資質(zhì)的醫(yī)師。檢測應(yīng)在獲得體外基因擴增檢測資質(zhì)的PCRPCR擴增儀等相應(yīng)的實驗設(shè)備，并建有實驗操作技術(shù)文件；實驗室操作人員應(yīng)經(jīng)過體外基因擴增檢驗實驗室技術(shù)的專業(yè)培訓(xùn)并獲得許可資質(zhì)；出具診斷報告的人員應(yīng)是具備產(chǎn)前診斷資質(zhì)的醫(yī)師，并經(jīng)過相關(guān)技術(shù)的培訓(xùn)。（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格規(guī)格：96人份/盒。（四）產(chǎn)品檢驗原理-6-本試劑盒是基于高通量測序平臺，利用核酸內(nèi)切酶將基因組隨機打斷，將片段化的末端補平，增加一個腺嘌呤脫氧核苷酸后，與測序通用接頭連接，利用基因測序儀讀取片段的序列數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)通過生物信息軟件分析，獲得染色體拷貝數(shù)異常情況評價結(jié)果。二、臨床前研究概述（一）主要原材料1.主要原材料的選擇本產(chǎn)品的主要原材料包括雙鏈片段化酶、反應(yīng)酶、接頭等。以上原材料均為外購。申請人對主要原材料進行了供應(yīng)商的選擇，制定了各主要原材料的質(zhì)量要求并經(jīng)檢驗合格。2.企業(yè)參考品和對照品的設(shè)置情況企業(yè)參考品包括：企業(yè)陽性參考品、企業(yè)陰性參考品、企業(yè)檢測限參考品和企業(yè)重復(fù)性參考品。其中企業(yè)陽性參考品共26樣本和臨床樣本組成，涵蓋該產(chǎn)品可檢測出的所有變異類型；企業(yè)陰性參考品共87份，包括正常核型人類基因組樣本、檢測范圍外的變異類型基因組102118三體、13三體、、XXX、、XYY，以及區(qū)域的微缺失樣本設(shè)置嵌合比例為30%4樣本，涵蓋該產(chǎn)品檢測范圍內(nèi)代表性陽性變異類型和檢測范圍外的染-7-色體微缺失樣本。試劑盒包含3份陽性質(zhì)控品和1份陰性質(zhì)控品，用于檢測過程的質(zhì)量控制。陰陽性質(zhì)控品均為人類基因組樣本，陽性質(zhì)控品涵蓋該產(chǎn)品可檢出的3種代表性變異類型，陰性質(zhì)控品為正常核型。（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究f、緩沖液f、反應(yīng)酶1、緩沖液1、反應(yīng)酶2、緩沖液2、陽性質(zhì)控1、陽性質(zhì)控23V01～V96組裝工序等。等進行研究。（三）分析性能評估本產(chǎn)品分析性能包括準(zhǔn)確度、精密度、檢測限、特異性等。在準(zhǔn)確度性能評估中，申請人對企業(yè)陽性參考品和企業(yè)陰性參考2118三體、13三體、XO、、XXY、，染色體、區(qū)域的微缺失基因組樣本及臨床樣本；企業(yè)陰性參考品包括陰性基因組樣本，以及試劑盒檢測范圍外其他染色體非整倍體（T2、T3、T4T5T9、T19、T20、T22），以及同一染色體，但微缺失范圍外區(qū)域缺失樣本（7號染色體其它位置微缺失、號染色體其它位置微缺失），以及可能影響疾病診斷的微重復(fù)變異樣本（7號染色體微重復(fù)、15號染色-8-體微重復(fù)），以及部分其他染色體微缺失微重復(fù)樣本（4號染色體微重復(fù)、4號染色體微缺失、5號染色體微缺失、號染色體微缺失、21號染色體微重復(fù)、22號染色體微重復(fù)、號染色體微缺失）的基因組100%性參考品符合率為100%，符合試劑盒準(zhǔn)確度要求。847212/不同實驗室間精密度進行評價，結(jié)果表明試劑盒精密度性能良好。77劑盒檢測范圍外其他染色體非整倍體（T2、T3、T4、T5、T6、T7、T8T16T20以及同一染色體，但微缺失范圍外區(qū)域缺失樣本（7號染色體其它位15微重復(fù)變異樣本（7號染色體微重復(fù)、15號染色體微重復(fù)），以及部4號染色體微重復(fù)、4號染色體微缺5172122行評估，檢測結(jié)果均未檢出試劑盒檢測范圍內(nèi)的染色體拷貝數(shù)變異，表明該試劑盒與上述變異類型不產(chǎn)生交叉反應(yīng)。在干擾試驗中，申請人使用21三體、13三體、、XYY-9-及陰性臨床樣本進行干擾評估，通過對樣本添加干擾物質(zhì)（濃度采用可能的最差條件）并進行檢測，結(jié)果表明膽紅素（5.00μg/mL）、甘油三酯（4%）、尿素（2.15mg/mL）、尿酸（0.46mg/mL）、甲胎蛋0.0541.01mg/mL當(dāng)母血細(xì)胞污染＞10%在最低檢出限性能評估中，申請人使用21三體、18三體、13三體、、XXY、，以及染色體、區(qū)域的微缺失的臨床樣本進行檢測限研究，研究包括上樣量研究微缺失的樣本，總量在10ng條件下，不高于30%嵌合比例的樣本均能檢出對應(yīng)的染色體拷貝數(shù)變異；對于區(qū)域的微缺失的樣本，總量在10ng條件下，可檢出對應(yīng)的染色體拷貝數(shù)變異。在核酸提取純化性能評估中，申請人通過對核酸提取試劑的提取效率、篩選出了試劑盒配套使用的核酸提取試劑。（四）陽性判斷值參考區(qū)間研究申請人基于基因組上某個區(qū)域內(nèi)的有效數(shù)據(jù)量與該區(qū)域在基因組上的長度占比呈正相關(guān)，并符合泊松分布的理論模型，進行大規(guī)模模擬實驗，通過對檢測值理論分布進行推算，依據(jù)99%的顯著性水平得到不同拷貝數(shù)狀態(tài)相應(yīng)檢測值的理論參考區(qū)間。申請人選取了臨床上診斷明確的1361例樣本進行參考區(qū)間的驗證，檢測值均落在相應(yīng)拷貝數(shù)狀態(tài)的參考區(qū)間內(nèi)，依據(jù)參考區(qū)間判定--的檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果的一致率為100%確判斷試劑盒檢測范圍內(nèi)的所有變異類型。（五）穩(wěn)定性研究申請人進行的穩(wěn)定性研究，包括實時穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性等。研℃±12融次數(shù)不大于9℃±℃保存2個月。申請人對樣本穩(wěn)定性進行研究，最終確定羊水樣本應(yīng)于2℃℃保存及運輸，并在取樣后48小時內(nèi)進行處理。提取的樣本可于℃±55次。三、臨床評價概述申請人在四川大學(xué)華西第二醫(yī)院、湖南省婦幼保健院、鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院三家臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗，采用試驗體外診斷試CytoScan750KArrays較研究，確認(rèn)本產(chǎn)品的臨床性能。入組病例為35歲以上的高齡孕婦，產(chǎn)前篩查出來的胎兒染色體異常高風(fēng)險的孕婦，曾生育過染色體病患B超檢查懷疑胎兒可能有染色體異常的孕婦，夫婦一方為染色體異?；颊呋驍y帶者。樣本類型為羊水樣本。與對比方法對比，臨床試驗共納入有效病例例，其中號染色體三體陽性病例107例，18號染色體三體例，13號染色體三體12例，性染色體非整倍體89例，15號染色體區(qū)域缺失--（CNVs3例號染色體區(qū)域微缺失4檢測21號染色體三體、13號染色體三體、18號染色體三體、性染色非整倍體和15號染色體區(qū)域缺失、7號染色體微缺失陽性符合率均為100%，陰性符合率100%。綜上，臨床試驗結(jié)果顯示試驗體外診斷試劑具有較好的臨床靈敏度和特異度，滿足臨床使用需求。四、產(chǎn)品受益風(fēng)險判定本產(chǎn)品根據(jù)YY/T0316-2016醫(yī)療器械風(fēng)險管理對本產(chǎn)品的安全風(fēng)險分析方式，對本產(chǎn)品進行風(fēng)險分析。（一）受益評估本試劑盒用于體外定性檢測高危孕婦羊水樣本中人基因組13/18/21/X/Y號染色體的7種非整倍體（包括三體、18三體、13XXY區(qū)域的微缺失情況。用于產(chǎn)前篩查高風(fēng)險孕婦、高齡孕婦、超聲檢查發(fā)現(xiàn)胎兒結(jié)構(gòu)異常且懷疑存在1321Y等染色體數(shù)目異?；虼嬖谙嚓P(guān)染色體微缺失的孕婦，以及其他具有相關(guān)醫(yī)學(xué)指征的孕婦，進行胎兒13-三體綜合征、18-三體綜合征、21-Klinefelter綜合征/Angelman綜合征、綜合征產(chǎn)前輔助診斷。本產(chǎn)品臨床應(yīng)用的主要受益在于：產(chǎn)品通過識別高危孕婦羊水樣本中染色體數(shù)目異常和基因微缺失/--床診斷參考，減少遺傳缺陷患兒出生，降低我國出生缺陷的發(fā)病率。（二）風(fēng)險評估陰性結(jié)果不能排除檢測范圍外的染色體異常，其結(jié)果的確認(rèn)應(yīng)結(jié)合臨床進行綜合判斷，但為保證用械安全，基于對主要剩余風(fēng)險的規(guī)避，需要在說明書中提示以下信息：1.預(yù)期用途：本試劑盒用于體外定性檢測高危孕婦羊水樣本中人基因組13/18/21/X/Y號染色體的7種非整倍體（包括三體、三體、三體、XO、、XXY、），以及染色體、區(qū)域的微缺失情況。用于產(chǎn)前篩查高風(fēng)險孕婦、高齡孕婦、超聲檢查發(fā)現(xiàn)胎兒結(jié)構(gòu)異常且懷疑存在1321Y等染色體數(shù)目異常或存在相關(guān)染色體微缺失的孕婦，以及其他具有相關(guān)醫(yī)學(xué)指征的孕婦，進行胎兒13-三體綜合征、18-三體綜合征、21-Klinefelter綜合征/Angelman綜合征、綜合征產(chǎn)前輔助診斷。該檢測結(jié)果僅供參考，不單獨作為確診或排除病例的依據(jù)。陰性結(jié)果不能排除檢測范圍外的染色體異常，其結(jié)果的確認(rèn)應(yīng)結(jié)合臨床進行綜合判斷。2.警示及注意事項：該試劑盒說明書中明確了該試劑盒檢測方法的局限性及使用中的注意事項。--綜合評價意見依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》（國務(wù)院令第號）、《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）等相關(guān)醫(yī)療器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)對申請人提交的注冊申報資料進行系統(tǒng)評價,申報產(chǎn)品符合安全性、有效性的要求，符合現(xiàn)有認(rèn)知水綜合征綜合征、綜合征輔助診斷，上述疾病為列入罕見病目錄的疾病，按照《用于罕見病防治醫(yī)療器械注冊審查指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求，請申請人于上市后收集臨床應(yīng)用數(shù)據(jù)，將本產(chǎn)品檢測結(jié)果與10例確診病例，評價本產(chǎn)品臨床性能。相關(guān)資料應(yīng)由臨床機構(gòu)簽章，于產(chǎn)品延續(xù)注冊時提交。2024年3月14日附件：產(chǎn)品說明書--【產(chǎn)品名稱】果不能排除其他染色體三體，其結(jié)果的確認(rèn)應(yīng)結(jié)合臨床進行綜合判斷。通用名稱：染色體拷貝數(shù)變異檢測試劑盒（可逆末端終止測序法）本試劑盒的檢測項目應(yīng)在有產(chǎn)前診斷資質(zhì)的醫(yī)療機構(gòu)中開展。項目【包裝規(guī)格】申請的要求參照我國相關(guān)的衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。申請檢測的醫(yī)師應(yīng)是經(jīng)過產(chǎn)規(guī)格：人份/盒，產(chǎn)品編號：R2000前診斷專業(yè)培訓(xùn)的、有資質(zhì)的醫(yī)師。檢測應(yīng)在獲得體外基因擴增檢測資【預(yù)期用途】質(zhì)的擴增儀等相本試劑盒用于體外定性檢測高危孕婦羊水樣本中人基因組應(yīng)的實驗設(shè)備，并建有實驗操作技術(shù)文件；實驗室操作人員應(yīng)經(jīng)過體外13/18/21/X/Y號染色體的7種非整倍體（包括三體、三體、三基因擴增檢驗實驗室技術(shù)的專業(yè)培訓(xùn)并獲得許可資質(zhì)；出具診斷報告的體、XO、XXX、XXY、XYY），以及染色體、區(qū)人員應(yīng)是具備產(chǎn)前診斷資質(zhì)的醫(yī)師，并經(jīng)過相關(guān)技術(shù)的培訓(xùn)。域的微缺失情況?！緳z驗原理】用于產(chǎn)前篩查高風(fēng)險孕婦、高齡孕婦、超聲檢查發(fā)現(xiàn)胎兒結(jié)構(gòu)異常本試劑盒是基于高通量測序平臺，利用核酸內(nèi)切酶將基因組隨機打且懷疑存在13Y等染色體數(shù)目異常或存在相關(guān)染色體微斷，將片段化的DNA末端補平，增加一個腺嘌呤脫氧核苷酸后，與測缺失的孕婦，以及其他具有相關(guān)醫(yī)學(xué)指征的孕婦，進行胎兒13-三體綜序通用接頭連接，利用基因測序儀讀取DNA片段的序列數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)通合征、18-三體綜合征、21-Klinefelter綜合征、過生物信息軟件分析，獲得染色體拷貝數(shù)異常情況評價結(jié)果。超雌綜合征、超雄綜合征和綜合征/Angelman綜合征、Williams-Beuren綜合征產(chǎn)前輔助診斷。我國出生缺陷的發(fā)病率約為5.6%[1]，其中染色體畸變約占出生缺陷遺傳學(xué)病因的80%以上[2]。常見的染色體畸變包括染色體數(shù)目異常（非整倍體）和染色體結(jié)構(gòu)異常（異位、缺失、重復(fù)、倒位等）。染色體非整倍體是指細(xì)胞的染色體數(shù)目增加或減少一條或多條，臨床表現(xiàn)為先天性智力低下或性發(fā)育不全、發(fā)育滯后及多發(fā)畸形等癥狀，臨床上染色體非整倍體異常以三體、三體、三體、XO、XXX、XXY、XYY微重復(fù)綜合征是由一段染色體的缺失或重復(fù)所/微重復(fù)綜合征已達(dá)到率近1/600。由于缺失片段較為微小，染色體微缺失通常被產(chǎn)前診斷檢驗原理流程圖syndromeWBS【主要組成成分】區(qū)域1.5-1.8Mb基因雜合微缺失所致的多系統(tǒng)異常綜合征。臨床以心血組分名稱縮寫主要成分96人份/盒管疾病、特殊面容、智力低下、生長發(fā)育障礙以及內(nèi)分泌異常等為特點[5]區(qū)域長約6MbAngelmansyndrome，AS）和普拉德威利綜合征（syndrome，PWS）的印記區(qū)均位于其中。普拉德威利綜合征為父源染色體15q11.2-q13區(qū)域印記基因染色體區(qū)域的UBE3A基因表達(dá)異?；蚬δ苋毕菀l(fā)的神經(jīng)發(fā)育障礙性疾病[5]色體疾病本身無法根治，因此會給患兒的家庭和社會造成沉重的經(jīng)濟壓DNA雙鏈片段化酶（dsDNAFragmentase）反應(yīng)酶fENZf緩沖液fBUFf10XFragmentaseReactionBuffer反應(yīng)酶1ENZ1KNA反應(yīng)酶1緩沖液1BUF1KNA緩沖液1反應(yīng)酶2ENZ2KNA反應(yīng)酶2緩沖液2BUF2KNA緩沖液2115μL/管管115μL/管管240μL/管管770μL/管管110μL/管管1350μL/管管力和社會負(fù)擔(dān)。不適用于有染色體異常家族史或有既往不良孕產(chǎn)史或超聲篩查胎兒結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)明顯異常的孕婦，不得用于非醫(yī)學(xué)指征相關(guān)的性別鑒定。在進陽性質(zhì)控1PC1T21陽性人類基因組DNA5ng/μL陽性質(zhì)控2PC27q11.23微缺失陽性人類基因組DNA5ng/μL陽性質(zhì)控3PC345,X陽性人類基因組DNA5ng/μL陰性質(zhì)控NC核型正常人類基因組DNA5ng/μL26μL/管管26μL/管管26μL/管管26μL/管管對孕婦及家屬進行相關(guān)的產(chǎn)前遺傳咨詢。相關(guān)檢測的開展應(yīng)符合原衛(wèi)生部發(fā)布的《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》的相關(guān)規(guī)定。在進行該檢測前，必接頭V01～V96V01～V96接頭DNA1.5μM6μL/管管注意：不同批號試劑盒的以上組分不可以互換使用。須與孕婦有充分的知情談話，需說明該技術(shù)檢測的內(nèi)容、風(fēng)險和技術(shù)局【自備試劑、耗材和儀器】限性，并簽署相關(guān)的知情同意書。本試劑盒不包含，但需要配套使用的試劑、耗材和儀器等，如下：

本試劑盒檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為產(chǎn)前診斷的唯一依據(jù)，用途試劑/儀器名稱貨號注冊/備案證號臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合核型分析、超聲檢查等檢測結(jié)果進行綜合判斷。陰性結(jié)-15-（1mL羊水樣本于4℃條件下3500分鐘，基因組DNA提取AxyPrep?MagTissue-BloodgenomicDNA(gDNA)KitAXYGEN公司生產(chǎn)）MAG-T-GDN離心后小心棄上清約900μL，避免吸到細(xì)胞；沿側(cè)壁緩慢加入900μLDPBS4℃條件下40001核酸定量文庫定量QubitdsDNAHSKits（ThermoFisherScientific公司生產(chǎn)）試劑：KAPAQuantificationKit（KapaBiosystems公司生產(chǎn)）Q32854KK4824心棄上清約900μL，避免吸到細(xì)胞；最后加入150μLDPBS重懸羊水細(xì)胞。如不能立即進行下一步實驗，預(yù)處理后的羊水細(xì)胞可于-205存，保存時間不超過2高通量測序文庫構(gòu)建DNA純化試劑（2DNAAxyPrepTMMaggenomic浙杭械備文庫純化R0049DNA(gDNA)Kit進行羊水細(xì)胞基因組DNA的提取，應(yīng)嚴(yán)格按照產(chǎn)品說

20140168號斷技術(shù)有限公司生產(chǎn)）明書操作，提取的DNA樣本可于±℃保存，保存時間不超過個月，反復(fù)凍融次數(shù)不超過5浙杭械備DNA提取過程質(zhì)控：測序（杭州貝瑞和康基因診斷技術(shù)有限R007520150116號使用實驗室自備的EB或DPBS或生理鹽水作為空白質(zhì)控品公司生產(chǎn)）參與樣本DNADNA濃度應(yīng)小于0.01ng/μ。數(shù)據(jù)分析布版本號：V3，杭州貝瑞和康基因DNA上樣量：最佳檢測范圍為10ng-260ng。診斷技術(shù)有限公司生產(chǎn)）【檢驗方法】實時熒光定量PCR儀：OnePlus操作注意事項：（AppliedBiosystems公司生產(chǎn)）1.試劑于±℃保存，使用前于冰上解凍，并充分混勻。DNA定量分析儀：Qubit?熒光定量2.操作過程中所有反應(yīng)組分應(yīng)放置于冰盒內(nèi)。其他儀器儀（Invitrogen公司生產(chǎn)）3.每次反應(yīng)體系都要充分混勻，并快速離心3秒，使液體全部離心至管底。操作步驟：架、PCR儀1.文庫構(gòu)建：BufferEB（QIAGEN公司生產(chǎn)）19086空白對照1.1片段化（三選DPBS（不含鈣、鎂和酚紅）設(shè)置儀程序：預(yù)先設(shè)置程序℃10min℃，運一）生理鹽水（鹽水液體敷料，0.9%）

行儀至設(shè)定溫度后暫停。其他試劑無水乙醇（分析純）配制反應(yīng)體系：待檢樣本數(shù)為N，?。∟+5PCR管做好標(biāo)記，3離心管控及N個待檢樣本DNA各吸取8μL分別置于相應(yīng)已標(biāo)記其他耗材無核酸酶PCR管待檢樣本DNA濃度過高建議稀釋到合適濃度后再加樣，保證上樣量在無核酸酶吸頭最佳檢測范圍內(nèi)），按照下表依次加入各組分（建議根據(jù)建庫數(shù)量計算【儲存條件及有效期】ENZf和BUFf1試劑盒所有組分應(yīng)于-20±5不可長期存放）。凍融次數(shù)：不大于9次。試劑盒開啟后所有組分可放置在-20±5℃保組分反應(yīng)加樣量存2個月。生產(chǎn)日期、使用期限見試劑盒標(biāo)簽。待檢樣本DNA8ulBUFf1μLENZf1μL總體積10μL【適用儀器】管放入基因測序儀（型號：NextSeqCN500，醫(yī)療器械注冊證號：國械注準(zhǔn)20153220460，杭州貝瑞和康基因診斷技術(shù)有限公司）反應(yīng)液混合均勻后立即放入已預(yù)熱的PCR儀，避免操作時間過長影響【樣本要求】

片段化效果。樣本類型：羊水。1.2酶滅活2~8℃保存及運輸，

步驟1.1反應(yīng)結(jié)束后，立即將反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至冰上，迅速加入7μL切記羊水樣本不可冷凍，應(yīng)在取樣后小時內(nèi)進行樣本處理。

BUF1，充分混勻后，立即將管放入儀運行程序。提前設(shè)置樣本處理：PCR儀程序6510min，熱蓋溫度℃。-16-5.生物信息分析：1.3末端修復(fù)使用杭州貝瑞和康基因診斷技術(shù)有限公司染色體拷貝數(shù)變異數(shù)據(jù)分步驟1.2反應(yīng)結(jié)束后，立即將反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至冰上，按照下表依次V3沿管內(nèi)壁加入各組分：染色體拷貝數(shù)檢測結(jié)果。組分反應(yīng)加樣量1.2中反應(yīng)終體系17μLBufferEB30.5μLENZ11.5μL總體積49μL【陽性判斷值】SCN為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域拷貝數(shù)的檢測值。SCN0.84判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域拷貝數(shù)小于；0.84≤SCN1.16判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域單拷貝；反應(yīng)組分充分混勻，瞬時離心5秒鐘，輕彈管壁去除氣泡，放置于1.16＜SCN1.78判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域單拷貝與二拷貝嵌

PCR儀中，設(shè)置熱蓋溫度105℃，按如下程序進行反應(yīng)：溫度時間37℃20min72℃20min4℃5min合；1.78≤SCN2.24判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域二拷貝；2.24＜SCN2.72判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域二拷貝與三拷貝嵌1.4接頭連接合；步驟1.3反應(yīng)結(jié)束后，立即將反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至冰盒上，按照下表依

2.72≤SCN3.28判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域三拷貝；次沿管內(nèi)壁加入各組分（建議根據(jù)建庫數(shù)量計算ENZ2和BUF2

SCN3.28判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域拷貝數(shù)大于。參考值的確定方法：組分反應(yīng)加樣量1.3中反應(yīng)終體系49μLBUF225μLENZ21μLAdapter4μL反應(yīng)終體積79μL數(shù)據(jù)分析過程中將基因組上每條染色體劃分為連續(xù)的測序窗口，統(tǒng)計待測樣品每個窗口中唯一比對序列數(shù)目與正常對照相對應(yīng)窗口中唯一比對序列數(shù)目的比值，計算出待測樣品在該窗口位置的拷貝數(shù)檢測值，連接拷貝數(shù)檢測值相近的連續(xù)測序窗口作為同一檢測片斷，計算該檢測待全部組分加完后瞬時離心5秒鐘，然后快速混勻，瞬時離心5秒片斷內(nèi)的拷貝數(shù)檢測值(SCN)。鐘并輕彈去除氣泡，再瞬時離心5秒鐘，置于儀中，設(shè)置熱蓋溫為確定檢測值(SCN)的參考區(qū)間，我們對SCN的理論分布進行了推度105℃，按下列程序進行反應(yīng)：算。已有大量研究發(fā)現(xiàn)將高通量測序數(shù)據(jù)與人的參考基因組進行比對，溫度時間20℃15min65℃10min4℃5min基因組上某個區(qū)域內(nèi)的有效數(shù)據(jù)量(ER)與該區(qū)域在基因組上的長度占比呈正相關(guān)，符合泊松分布[6-9]。基于以上理論模型進行大規(guī)模模擬實驗，設(shè)定有效數(shù)據(jù)量(N)為2.5M、檢測區(qū)域大小(W)為500Kb時，根據(jù)檢測2.文庫純化：值(SCN)公式計算每個模擬樣本在檢測區(qū)域的檢測值，從而得到不同拷以上反應(yīng)完成后應(yīng)立即純化處理，使用另購的DNA純化試劑盒[商

貝數(shù)狀態(tài)檢測區(qū)域的檢測值的理論分布，依據(jù)99%的顯著性水平得到不品名：高通量測序文庫構(gòu)建DNA純化試劑盒(磁珠法)，杭州貝瑞和康同拷貝數(shù)狀態(tài)相應(yīng)檢測值的理論參考范圍，并通過一定規(guī)模的臨床樣本20140168號，

驗證，最終確定本試劑盒的參考區(qū)間為：SCN0.84判定為對應(yīng)染色體嚴(yán)格按照說明書進行操作。檢測區(qū)域拷貝數(shù)小于10.84≤SCN1.16判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域單3.文庫質(zhì)控：拷貝；1.16＜SCN＜1.78判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域單拷貝嵌合；1.78純化后的文庫實時熒光定量檢測，空白質(zhì)控文庫濃度應(yīng)小于

≤SCN2.24判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域二拷貝；2.24＜SCN2.72判1.0pMDNA濃度應(yīng)不低于10pM的上機測序（空白質(zhì)控?zé)o需上機）。如不能立即上機測序檢測，可將純定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域三拷貝嵌合；2.72≤SCN3.28判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域三拷貝；SCN3.28判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域拷貝數(shù)大化后文庫溶液置于-20±56于3。融不超過3次。4.上機測序：4.1NextSeqCN500作規(guī)程進行檢測；4.2測序試劑選用測序反應(yīng)通用試劑盒（測序法）（R0075循環(huán)/測試）；4.3文庫上機終濃度推薦為3.5pM；4.4測序模式為Single-End，測序讀長36bp；4.5單個樣本測序數(shù)據(jù)量為5Mreads。-17-【檢驗方法的局限性】1.不能夠檢測染色體整倍體疾病，例如三倍體、四倍體等。2.不能夠檢測染色體平衡易位、倒位、環(huán)狀等染色體平衡性結(jié)構(gòu)重排，也無法區(qū)分游離性三體（例如47，，+21）和異位型三體（例如46，XX，der1421）。3.對于由47，XXX與，X兩種性染色體非整倍體構(gòu)成的嵌合體，若其細(xì)胞比例各占50%，檢測結(jié)果會將其判斷為X染色體拷貝數(shù)無異常。4.無法對包括單親二倍體（uniparentaldisomy，UPD）在內(nèi)的雜合性缺失（heterozygosity，LOH）進行檢測?！井a(chǎn)品性能指標(biāo)】不同拷貝數(shù)狀態(tài)理論參考范圍示意圖本產(chǎn)品性能評估采用了臨床樣本和企業(yè)參考品。用于本試劑盒的企【檢驗結(jié)果的解釋】業(yè)參考品包括：陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和重復(fù)性參考1.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品。研究結(jié)果表明產(chǎn)品具備如下性能。陰性質(zhì)控：數(shù)據(jù)分析結(jié)果判斷為陰性；1.準(zhǔn)確度陽性質(zhì)控：數(shù)據(jù)分析結(jié)果判斷為號染色體三體；1.1陽性參考品符合率陽性質(zhì)控：數(shù)據(jù)分析結(jié)果判斷為區(qū)域缺失；采用三批成品試劑盒檢測企業(yè)陽性參考品P01~P26（參考品信息見陽性質(zhì)控：數(shù)據(jù)分析結(jié)果判斷為X染色體單體；附件），結(jié)果均檢出標(biāo)注的染色體拷貝數(shù)變異。以上要求需在一次實驗中同時滿足，否則，本次實驗結(jié)果無效。1.2陰性參考品符合率2.結(jié)果判斷采用三批成品試劑盒檢測企業(yè)陰性參考品（參考品信息見對于常染色體：附件），結(jié)果均未檢出試劑盒檢測范圍內(nèi)的染色體拷貝數(shù)變異。1.78≤SCN2.24判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域正常二拷貝；2.精密度SCN2.72判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域重復(fù)；2.1重復(fù)性SCN1.16判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域缺失。1.16＜SCN1.78判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域單拷貝與二拷貝嵌陽性樣本（三體、18三體、三體、XO、XXX、XXY、XYY合。色體10ng上樣量的檢出限2.24＜SCN2.72判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域為二拷貝與三拷貝嵌樣本（三體、18三體、三體、XO、XXX、XXY、XYY，染色體合。對于性染色體：當(dāng)未檢測到Y(jié)染色體存在時：測范圍內(nèi)的染色體拷貝數(shù)變異，陽性樣本及檢出限樣本均檢出對應(yīng)的染X染色體判斷標(biāo)準(zhǔn)同常染色體。色體拷貝數(shù)變異。當(dāng)檢測到Y(jié)染色體存在時：2.2中間精密度0.84≤SCN1.16判定為對應(yīng)性染色體檢測區(qū)域正常單拷貝；使用三批成品試劑盒評估不同操作者、不同設(shè)備、不同時間檢測結(jié)SCN1.78判定為對應(yīng)性染色體檢測區(qū)域重復(fù)。果的中間精密度。選擇3個批次試劑盒、2臺儀器和2名實驗員，分別SCN<0.84判定為對應(yīng)性染色體檢測區(qū)域缺失。在第1周2周346,XN1.16＜SCN1.78判定為對應(yīng)染色體檢測區(qū)域單拷貝與二拷貝嵌陽性樣本（三體、18三體、三體、XO、XXX、XXY、XYY合。色體10ng上樣量的檢出限3.結(jié)果解讀樣本（三體、18三體、三體、XO、XXX、XXY、XYY，染色體對于非整倍體：針對檢出的整條染色體拷貝數(shù)變異情況進行報告，建議后續(xù)結(jié)合臨盒檢測范圍內(nèi)的染色體拷貝數(shù)變異，陽性樣本及檢出限樣本均檢出對應(yīng)床相關(guān)性分析及遺傳咨詢結(jié)果進行綜合判斷。的染色體拷貝數(shù)變異。對于微缺失綜合征：2.3再現(xiàn)性針對檢測范圍內(nèi)微缺失綜合征對應(yīng)染色體區(qū)域的拷貝數(shù)變異，參考使用三批成品試劑盒評估不同操作者、不同設(shè)備、不同時間、不同美國ClingenCNV分類指南，根據(jù)關(guān)鍵基因及其他因素進行綜合考慮并46,XN報告，建議后續(xù)結(jié)合臨床相關(guān)性分析及遺傳咨詢結(jié)果進行綜合判斷。陽性樣本（三體、18三體、三體、XO、XXX、XXY、XYY-18-色體10ng上樣量的檢出限3.4為了避免潛在污染，陽性質(zhì)控品應(yīng)最后加樣，未使用完的試劑不得樣本（三體、18三體、三體、XO、XXX、XXY、XYY，染色體重新移回原管；3.5在同一張測序芯片（）中上機測序的樣本不可使用相同編盒檢測范圍內(nèi)的染色體拷貝數(shù)變異，陽性樣本及檢出限樣本均檢出對應(yīng)號的接頭；的染色體拷貝數(shù)變異。3.6試劑盒提供試劑使用完畢，需及時蓋緊試管蓋，按實驗室生物廢3.檢測限料處理。使用臨床陽性樣本進行最低檢測限上樣量的研究，確定最低上樣量4.安全注意事項：為10ng4.1合比例為30%。使用三批成品試劑盒對臨床樣本和嵌合樣本對最低檢測作服、并佩戴一次性手套等防護性措施。產(chǎn)品在正確使用過程中不慎濺限進行驗證，對于非整倍體（三體、三體、三體、XO、、入眼內(nèi)應(yīng)立即用沖眼器或大量清水沖洗眼睛并咨詢醫(yī)生；XXY、XYY）和區(qū)域的微缺失的樣本，DNA總量在10ng4.2條件下，不高于30%嵌合比例的樣本均檢出對應(yīng)的染色體拷貝數(shù)變異；的陰/陽性質(zhì)控品與所有檢測樣本一同視為具有潛在傳染性物質(zhì)進行處對于區(qū)域的微缺失的樣本，DNA總量在10ng條件下，均檢出理；操作和廢棄物處理均需符合相關(guān)法規(guī)要求：衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)對應(yīng)的染色體拷貝數(shù)變異。學(xué)實驗室生物安全通用準(zhǔn)則》和《醫(yī)療廢物管理條例》。4.特異性【參考文獻】4.1干擾物質(zhì)研究1.中華人民共和國衛(wèi)生部，中國出生缺陷防治報告[S].2012.Ministry通過對陰性樣本（46,XN21Health，PeRepublicChina.ReportPrevention三體、三體、三體、XO、XXX、XXY、XYY，染色體、BirthDefects[S].2012.2.MIRJBerkowitzNoninvasiveprenatalscreening使用三批成品試劑盒進行檢測，結(jié)果表明本試劑盒在檢測時不受膽紅素advanceddiagnostictesting:emptor[J].AmJObstetGynecol，（5.00μg/mL4%2.15mg/mL0.46mg/mL2016,2153298-305.：10.1016/j.ajog.2016.04.029.甲胎蛋白（0.054mg/mL1.01mg/mL）的干擾；當(dāng)母血細(xì)胞3.NevadoJMergenerRPalomares-BraloMal.Newmicrodeletionand污染＞10%時，對本試劑盒檢測結(jié)果判讀可能會造成影響。microduplicationsyndromes：Acomprehensivereview[J].GenetMolBiol，4.2交叉反應(yīng)研究2014,37（ISuppl）：210-219.采用三批成品試劑盒檢測企業(yè)陰性參考品（參考品信息見AMrasekK，E，al.MicrodeletionandMicroduplication附件），結(jié)果均未檢出試劑盒檢測范圍內(nèi)的染色體拷貝數(shù)變異。syndromes[J].JHistochemCytochem2012,60:346-358.：5.臨床性能10.1369/0022155412440001.本產(chǎn)品在臨床試驗機構(gòu)一共完成5.罕見病診療指南（2019年版），國家衛(wèi)生健康委發(fā)布診斷試劑檢測號染色體三體、號染色體三體、號染色體三體、6.D.R.,etal.,Accuratehumangenomesequencingusing性染色非整倍體和號染色體區(qū)域缺失、區(qū)域微缺失reversibleterminatorNature,2008.456(7218):p.53-9.陽性符合率均為100%，陰性符合率均為100%。7.etal.,Low-passwhole-genomesequencinginclinical【注意事項】cytogenetics:avalidatedapproach.GeneticsMedicine,2016.18(9):1.940-948.2.使用時注意：8.E.S.M.S.Genomicmappingbyfingerprinting2.1不要使用超過有效期的試劑；randomclones:amathematicalanalysis.Genomics,1988.2(3):p.231-239.2.2不要混用不同批號和試劑盒之間的其它試劑；9.Xie,C.andanewmethodtodetectcopynumber2.3避免反復(fù)凍融試劑。variationusinghigh-throughputsequencing.BmcBioinformatics,2009.3.操作時注意：10(1):1-9.3.1【基本信息】要時需對操作人員進行培訓(xùn)；3.2使用前將試劑盒及盒內(nèi)所有組分應(yīng)充分解凍，用過的凍存管必須仔細(xì)蓋緊后保存；3.3PCR吸頭等）均應(yīng)采用無核酸酶的材料；注冊人生產(chǎn)企業(yè)名稱：杭州貝瑞和康基因診斷技術(shù)有限公司住所：浙江省杭州經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)白楊街道6260號9幢，幢一層、二層聯(lián)系方式：售后服務(wù)單位名稱：聯(lián)系方式：-19-生產(chǎn)地址：杭州經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)白楊街道6號大街號9層、二層，幢二層生產(chǎn)許可證編號：【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】【說明書核準(zhǔn)日期及修改日期】核準(zhǔn)日期：修改日期：-20-附件1參考品信息參考品類型參考品編號突變類型參考品類型參考品編號突變類型陰性參考品N52T6參考品類型參考品編號突變類型陰性參考品N13T4陰性參考品N53T6陽性參考品P01T13

陰性參考品N14T5陰性參考品N54T7陽性參考品P02T18

陰性參考品N15T6陰性參考品N55T7陽性參考品P03T21

陰性參考品N16