ICS11.100.10

CCSC30

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

`

精液基礎(chǔ)檢驗(yàn)要求和試驗(yàn)方法

Basicsemenexamination—Specificationandtestmethods

(ISO23162:2021)

（征求意見(jiàn)稿）

在提交反饋意見(jiàn)時(shí)，請(qǐng)將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

目次

前言III

........................................................................................................................................................

1范圍4

.....................................................................................................................................................

2規(guī)范性引用文件4

..................................................................................................................................

3術(shù)語(yǔ)和定義4

..........................................................................................................................................

4檢驗(yàn)人員培訓(xùn)和能力6

...........................................................................................................................

4.1通用部分6

.......................................................................................................................................

4.2培訓(xùn)6

..............................................................................................................................................

4.3能力驗(yàn)證7

.......................................................................................................................................

5精液特征、取樣及檢驗(yàn)前處理7

............................................................................................................

5.1一般特征7

.......................................................................................................................................

5.2理化特征7

.......................................................................................................................................

5.3樣本采集和初步處理7

....................................................................................................................

5.4受檢者的信息和資料收集7

.............................................................................................................

5.4.1向受檢者提供的信息7

..............................................................................................................

5.4.2受檢者的資料收集8

..................................................................................................................

5.5原始樣本處理8

................................................................................................................................

5.6精子毒性試驗(yàn)9

................................................................................................................................

6檢查9

.....................................................................................................................................................

6.1所需設(shè)備9

.......................................................................................................................................

6.2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配制試劑9

........................................................................................................................

6.3評(píng)估10

............................................................................................................................................

6.3.1初評(píng)估10

..................................................................................................................................

6.3.2肉眼觀察10

...............................................................................................................................

6.3.3濕片顯微鏡檢查10

....................................................................................................................

6.3.4精子活力評(píng)估10

.......................................................................................................................

6.3.5精子濃度評(píng)估11

.......................................................................................................................

6.3.6無(wú)精子癥評(píng)估11

.......................................................................................................................

6.3.7精子存活率評(píng)估11

....................................................................................................................

6.3.8精子形態(tài)評(píng)估12

.......................................................................................................................

7檢驗(yàn)后處理及報(bào)告12

.............................................................................................................................

7.1總則12

............................................................................................................................................

7.2結(jié)果計(jì)算和報(bào)告12

..........................................................................................................................

7.2.1精子總數(shù)12

...............................................................................................................................

7.2.2其他計(jì)算12

...............................................................................................................................

7.3結(jié)果的報(bào)告13

.................................................................................................................................

7.3.1總則13

......................................................................................................................................

7.3.2精液檢查報(bào)告內(nèi)容13

................................................................................................................

7.4質(zhì)量保證實(shí)踐13

..............................................................................................................................

7.4.1內(nèi)部質(zhì)量控制13

.......................................................................................................................

I

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

7.4.2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)比對(duì)14

.......................................................................................................................

7.4.3實(shí)驗(yàn)室間評(píng)價(jià)14

.......................................................................................................................

附錄A（資料性）確定精子的統(tǒng)計(jì)學(xué)基礎(chǔ)15

..........................................................................................

附錄B（資料性）高倍視野16

................................................................................................................

附錄C（資料性）活力評(píng)估培訓(xùn)17

.........................................................................................................

C.1培訓(xùn)材料17

.....................................................................................................................................

C.2培訓(xùn)過(guò)程18

.....................................................................................................................................

C.3再培訓(xùn)19

........................................................................................................................................

附錄D（資料性）精子濃度評(píng)估用稀釋液20

..........................................................................................

附錄E（資料性）精子濃度測(cè)定中適宜稀釋度的估算21

........................................................................

附錄F（資料性）百分率結(jié)果的兩次重復(fù)評(píng)估之間一致性的比較22

......................................................

附錄G（資料性）精子濃度兩次重復(fù)計(jì)數(shù)之間一致性的比較23

.............................................................

附錄H（資料性）精子存活率評(píng)估25

.....................................................................................................

附錄I（資料性）精子形態(tài)學(xué)分析26

......................................................................................................

參考文獻(xiàn)28

.................................................................................................................................................

II

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

精液基礎(chǔ)檢驗(yàn)要求和試驗(yàn)方法

1范圍

本文件規(guī)定了對(duì)通過(guò)射精收集的人類精液進(jìn)行基本檢查的實(shí)驗(yàn)室最佳實(shí)踐試驗(yàn)方法的設(shè)備和關(guān)鍵

方面的最低要求。

本文件適用于基本人工精液檢查的全過(guò)程，也適用于計(jì)算機(jī)輔助精子分析（CASA）的樣品制備。

本文件不適用于輸精管結(jié)扎術(shù)后精液的評(píng)估。

注：考慮到輸精管結(jié)扎術(shù)后精液評(píng)估的醫(yī)療法律后果，本文件中的方法不能明確判定精液中完全沒(méi)有精子。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力要求

ISO/TS20914醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室測(cè)量不確定度評(píng)定指南

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

ISO和IEC維護(hù)的用于標(biāo)準(zhǔn)化的術(shù)語(yǔ)數(shù)據(jù)庫(kù)，地址如下：

-ISO在線瀏覽平臺(tái)：http://www.ISO.org/obp。

-IEC電子百科：http://www.E/。

3.1空氣置換式移液器airdisplacementpipette

帶一次性吸頭的普通實(shí)驗(yàn)室移液器，吸液量由吸液管手柄內(nèi)封閉室中等量空氣來(lái)控制。

注：空氣置換式移液器只能對(duì)于黏度接近水的液體給出準(zhǔn)確體積。

3.2無(wú)精子癥azoospermia

射出精液中未發(fā)現(xiàn)精子

注：術(shù)語(yǔ)無(wú)精子癥不是臨床診斷，而是對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的描述。完全沒(méi)有精子是很難確定的。由于只能檢查精液

（3.4）的一部分，現(xiàn)代定義是基于概率計(jì)算得出的，該概率計(jì)算是從精液（3.4）的隨機(jī)等分樣本評(píng)估中獲得

的數(shù)據(jù)（見(jiàn)附件A）。

3.3計(jì)算機(jī)輔助精子分析computer-aidedspermanalysis；CASA

利用成像技術(shù)設(shè)備對(duì)精子（3.4）進(jìn)行自動(dòng)檢查。

注1：基于視頻序列的圖像分析進(jìn)行檢查，以獲得精子濃度（3.18）和活力的信息，較少用于精子形態(tài)學(xué)分析。

注2：有商品化的CASA系統(tǒng)，盡管檢驗(yàn)前對(duì)CASA設(shè)備的研發(fā)者、制造商和使用者也很有用的，但沒(méi)有用于驗(yàn)

證、評(píng)估、分析可靠性或報(bào)告內(nèi)容的通用標(biāo)準(zhǔn)。本文件范圍不是為CASA提供標(biāo)準(zhǔn)。

4

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

3.4精液ejaculate

通過(guò)手淫、性交、振動(dòng)刺激或電刺激獲得的精液或精液樣本。

注：精液是精子和分泌物的混合物，主要來(lái)自精囊、前列腺和附睪。

3.5精液黏稠度ejaculateviscosity

精液（3.4）的特征描述，其液化后的流動(dòng)阻力像水一樣（3.10）。

注：由于精液中含有膠凍狀顆粒，未完全液化的精液呈現(xiàn)非均質(zhì)。

3.6高倍視野highpowerfield

高倍鏡下可見(jiàn)的載玻片上的視野范圍（×400）。

注：這不是標(biāo)準(zhǔn)視野區(qū)域，視野區(qū)域尺寸因所用目鏡的類型而異（例如標(biāo)準(zhǔn)或?qū)捯曇埃ㄒ?jiàn)附件B）。

3.7不活動(dòng)的精子immotile

注：尾部完全缺乏主動(dòng)運(yùn)動(dòng)。

3.8實(shí)驗(yàn)室間評(píng)價(jià)interlaboratorycomparison

組織、實(shí)施和評(píng)價(jià)兩個(gè)或兩個(gè)以上實(shí)驗(yàn)室按照預(yù)設(shè)條件對(duì)相同或類似項(xiàng)目進(jìn)行檢驗(yàn)。

3.9理想精子idealspermatozoon

能夠穿透宮頸黏液并在黏液中泳動(dòng)，到達(dá)受精部位的精子。

[來(lái)源：Mennight等，1991年[9]Mennight和Kruger，1995年[10]]

3.10液化liquefaction

精液（3.4）從凝膠狀或凝固狀變?yōu)橐合嗟酿こ矶茸兓^(guò)程。

注：液化是由于酶作用于大分子，導(dǎo)致精液中凝膠狀或凝固狀物質(zhì)降解的過(guò)程。

3.11精子非前向運(yùn)動(dòng)non-progressivespermmotility

尾巴自主運(yùn)動(dòng)，精子運(yùn)動(dòng)速度小于5μm/s。

注：精子頭部正常長(zhǎng)度約為5μm。

3.12正向置換型移液器positivedisplacementpipette

普通的實(shí)驗(yàn)室移液器，通過(guò)毛細(xì)管內(nèi)活塞驅(qū)動(dòng)的置換原理工作，而不是密閉腔體中的空氣置換。

注1：移液器尖端的活塞與液體樣本直接接觸。

注2：用于避免吸取精液等粘稠液體時(shí)出現(xiàn)較大的體積誤差。

3.13精子前向運(yùn)動(dòng)progressivespermmotility

精子前向運(yùn)動(dòng)速度至少為5μm/s。

注1：另見(jiàn)精子慢速前向運(yùn)動(dòng)（3.16）和精子快速前向運(yùn)動(dòng)（3.14）。

注2：精子在圓形路徑上運(yùn)動(dòng)被認(rèn)為是基于空間增益的前向運(yùn)動(dòng)。

3.14精子快速前向運(yùn)動(dòng)rapidprogressivespermmotility

精子的前向運(yùn)動(dòng)速度至少為25μm/s。

5

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

3.15禁欲時(shí)間sexualabstinence

采集精液（3.4）進(jìn)行分析的時(shí)間與最近一次射精之間的間隔時(shí)間。。

注：根據(jù)預(yù)期用途，以天或小時(shí)表示。

3.16精子慢速前向運(yùn)動(dòng)slowprogressivespermmotility

精子前向運(yùn)動(dòng)速度至少為5μm/s，但小于24μm/s。

3.17樣本收集容器specimencollectioncontainer

用于收集原始樣本的容器。

注3：樣本采集容器應(yīng)對(duì)精子無(wú)毒。

注4：可使用無(wú)毒的避孕套。實(shí)驗(yàn)室接收精液（3.4）后，應(yīng)將其轉(zhuǎn)移到精液樣本容器中；這一點(diǎn)應(yīng)在報(bào)告表中注明。

3.18精子濃度spermconcentration

單位體積精子數(shù)

注1：精子濃度以百萬(wàn)或千/毫升表示。

注2：不得與精子密度（質(zhì)量/體積）混淆。

3.19精子活動(dòng)率spermvitality

活精子的百分率，與其活動(dòng)能力無(wú)關(guān)。

3.20精子總數(shù)totalspermnumber

計(jì)算精液中（3.4）精子總數(shù)。

注1：精子總數(shù)=精子濃度（3.18）×精液體積（3.4）。

注2：精子總數(shù)不同于精子濃度（3.18）。

3.21Tygerberg嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)Tygerbergstrictcriteria

基于能夠穿透并在宮頸黏液中運(yùn)動(dòng)的精子形成的形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。

3.22畸形精子指數(shù)（TZI）TeratozoospermiaIndex

異常精子中缺陷區(qū)域（頭部、頸部/中段、尾部和/或過(guò)量殘留胞質(zhì)）的平均數(shù)量。

注：根據(jù)定義，該指數(shù)從不會(huì)超出[1.00,4.00]的區(qū)間。

4檢驗(yàn)人員培訓(xùn)和能力

4.1通用部分

ISO15189涵蓋了檢驗(yàn)人員培訓(xùn)和能力的一般要求。本文介紹了如何將這些要求應(yīng)用于人類精液分

析。

4.2培訓(xùn)

4.2.1整體要求

精液檢查涉及許多分析步驟，需要對(duì)檢驗(yàn)人員進(jìn)行培訓(xùn)，以最大限度地減少主觀性，從而提供準(zhǔn)確

可靠的結(jié)果[7][12][1]。

4.2.2定量評(píng)估培訓(xùn)

6

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

所有對(duì)精子活力、精子濃度、精子存活率和/或精子形態(tài)進(jìn)行評(píng)估的檢驗(yàn)人員應(yīng)接受培訓(xùn)，使用商

品化的、實(shí)驗(yàn)室自制的或EQA來(lái)源的經(jīng)驗(yàn)證的質(zhì)控品，以確保其結(jié)果符合實(shí)驗(yàn)室預(yù)先確定的測(cè)量誤差限

值。未經(jīng)培訓(xùn)的檢驗(yàn)人員無(wú)法為這些評(píng)估提供準(zhǔn)確、可靠的結(jié)果，參與EQA計(jì)劃也毫無(wú)意義。

注：針對(duì)這些評(píng)估的有效目標(biāo)導(dǎo)向的重復(fù)培訓(xùn)程序已經(jīng)發(fā)布[12][14]；在完成培訓(xùn)后，新檢驗(yàn)人員和經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)人

員之間的測(cè)量誤差范圍預(yù)計(jì)為±10%（見(jiàn)附錄C）。

4.2.3定性評(píng)估培訓(xùn)

針對(duì)精液黏稠度和圓細(xì)胞等定性評(píng)估的能力進(jìn)行培訓(xùn)時(shí)，接受培訓(xùn)的檢驗(yàn)人員和專家之間評(píng)估結(jié)果

一致性至少達(dá)到90%以上。

4.2.4pH值評(píng)估培訓(xùn)

應(yīng)驗(yàn)證檢驗(yàn)人員根據(jù)對(duì)比色卡讀取測(cè)試條的能力。

4.3能力驗(yàn)證

所有人員應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量框架的規(guī)定，定期進(jìn)行上述評(píng)估，以持續(xù)驗(yàn)證其能力。

注：根據(jù)第4.2款，所有接受過(guò)培訓(xùn)的人員執(zhí)行這些評(píng)估，對(duì)能力進(jìn)行持續(xù)驗(yàn)證時(shí)，預(yù)計(jì)測(cè)量誤差在±10%范圍內(nèi)。

5精液特征、取樣及檢驗(yàn)前處理

5.1一般特征

精液檢查在某些重要方面不同于其他人體體液的檢查。要求采集完整的精液。結(jié)果取決于采集前的

射精次數(shù)，以及檢驗(yàn)前的時(shí)間和溫度。在進(jìn)行不孕不育診斷時(shí)，由于預(yù)期結(jié)果取決于每對(duì)備孕夫婦的特

定臨床情況，因此缺乏明確的參考值范圍。

5.2理化特征

實(shí)驗(yàn)室收集精液的分析容器，無(wú)法維持精液內(nèi)部環(huán)境的穩(wěn)定。最初，全部精液包裹成一個(gè)凝膠狀團(tuán)

塊，凝塊逐漸降解（液化）成仍然粘稠但更像水樣的液體。在這一過(guò)程中，CO2蒸發(fā)導(dǎo)致pH的變化。凝

膠成分的酶降解導(dǎo)致精子周圍的液體滲透壓顯著增加，進(jìn)而影響精子功能。

5.3樣本采集和初步處理

精液標(biāo)本采集應(yīng)該始終由受檢者自己完成，但某些身體殘疾（如肢體殘疾、脊髓損傷或截癱等）的

男性除外。必要時(shí)，受檢者的伴侶可以協(xié)助采集樣本。對(duì)于因倫理或宗教原因不能手淫的受檢者，可使

用非殺精的硅膠避孕套在性交中收集精液。這種采集方法需從避孕套中回收精液，會(huì)導(dǎo)致部分精液丟失。

因富含精子的初始精液往往丟失，故不推薦通過(guò)性交中斷法采集精液。一些受檢者采集精液時(shí)可能需要

使用潤(rùn)滑劑，這類產(chǎn)品必須經(jīng)過(guò)驗(yàn)證對(duì)精子無(wú)毒性[13]。

射精后，樣本溫度應(yīng)盡可能保持在37℃左右，不能超過(guò)37℃，溫度過(guò)高或過(guò)低會(huì)導(dǎo)致精子檢驗(yàn)結(jié)果

失去真實(shí)性。由于所有的變化都發(fā)生在射精后，因此在精液液化后應(yīng)盡快開(kāi)始檢驗(yàn)，精液通常會(huì)在射精

后30分鐘內(nèi)液化，射精后60分鐘精液未完成液化表明有異常。如果在實(shí)驗(yàn)室附近采集精液，在液化完成

后開(kāi)始評(píng)估效果最佳。由于受檢者所經(jīng)歷的性喚起持續(xù)時(shí)間和程度會(huì)影響射精，如果出現(xiàn)取精困難，最

好讓受檢者選擇一個(gè)臨近的地方進(jìn)行標(biāo)本采集。盡管如此，仍需注意標(biāo)本溫度和檢驗(yàn)時(shí)間，以確保檢驗(yàn)

的準(zhǔn)確性和可靠性。

5.4受檢者的信息和資料收集

5.4.1向受檢者提供的信息

7

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

應(yīng)以受檢者理解的語(yǔ)言以書(shū)面形式提供以下信息，應(yīng)包括以下內(nèi)容：

a)一般信息：

——實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系方式；

——申請(qǐng)者提供檢驗(yàn)理由；

——檢測(cè)內(nèi)容概要；

——如何將實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果提供給受檢者。

b)精液采集、處理和運(yùn)輸：

——如何采集精液標(biāo)本；

——標(biāo)本采集和評(píng)估開(kāi)始之間的延時(shí)影響；

——避免精液樣本溫度過(guò)高或過(guò)低的重要性；

——告知正確禁欲時(shí)間的重要性；

——報(bào)告標(biāo)本采集不完整的重要性。

5.4.2受檢者的資料收集

a)所需信息

應(yīng)要求每個(gè)受檢者提供以下信息，由實(shí)驗(yàn)室記錄：

——可靠的個(gè)人身份證明（至少有兩個(gè)可歸屬于患者并由組織指定的唯一標(biāo)識(shí)符）；

——禁欲時(shí)間；

——樣本采集時(shí)間；

——應(yīng)避免運(yùn)輸精液，但如果不是在實(shí)驗(yàn)室收集：確認(rèn)在運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室的過(guò)程中，樣本受到了保

護(hù)，免受極端溫度的影響；

——樣本采集的完整性，如果采集不完整，應(yīng)提供精液遺漏部分的相關(guān)信息。

b)其他信息

當(dāng)受檢者到實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)時(shí)，獲取以下信息具有實(shí)用價(jià)值，對(duì)臨床診斷非常重要，但收集這些信息并

不是實(shí)驗(yàn)室工作的一部分。

——病史，可能包括：

1)過(guò)去三個(gè)月內(nèi)發(fā)生的任何嚴(yán)重炎癥過(guò)程；

2)任何先前的手術(shù)（腹股溝疝、精索靜脈曲張、附睪或其他與泌尿生殖系統(tǒng)有關(guān)的問(wèn)題）或

用化療、細(xì)胞抑制劑或放射治療泌尿生殖器官；

3)除短期使用非處方藥（如止痛藥和抗過(guò)敏藥）外的任何藥物使用；

4)任何娛樂(lè)性藥物、合成代謝類固醇或其他提高性功能的飲食添加劑（如蛋白粉）的使用。

5.5原始樣本處理

——每一份精液都應(yīng)視為具有潛在的傳染性，并進(jìn)行相應(yīng)處理（見(jiàn)ISO15190:2020，附錄B）。

——應(yīng)記錄受檢者提供的信息。

——標(biāo)本采集容器應(yīng)清潔、無(wú)毒、一次性使用。

——標(biāo)本采集容器最好在標(biāo)本采集前稱重，并用兩位小數(shù)記錄其重量。

——精液體積最好通過(guò)稱重法來(lái)確定。即分別在精液采集前、后對(duì)標(biāo)本采集容器進(jìn)行稱重（以克

為單位，報(bào)告到小數(shù)點(diǎn)后兩位），同時(shí)使用重量差計(jì)算精液體積，假設(shè)1.0克的精液等于1.0

毫升的精液[3]。如果使用校準(zhǔn)的血清移液管來(lái)測(cè)量精液體積，那么在測(cè)量后，會(huì)有部分精液殘

留在標(biāo)本采集容器和移液管內(nèi)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)意識(shí)到這兩種方法的差異，精液體積應(yīng)以毫升為單

位（報(bào)告到小數(shù)點(diǎn)后一位）。

——所有文件和標(biāo)本采集裝置應(yīng)至少貼上兩個(gè)唯一標(biāo)識(shí)符。

8

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

——標(biāo)本采集完成后，應(yīng)盡快將標(biāo)本采集容器放置在35℃至37℃的環(huán)境中，以促進(jìn)液化，并在標(biāo)

準(zhǔn)溫度下準(zhǔn)備活力評(píng)估。推薦使用水平搖床，以增強(qiáng)液化過(guò)程中混勻（當(dāng)沒(méi)有搖床時(shí)，需要

頻繁手動(dòng)搖晃）。

即使精子是運(yùn)動(dòng)的，也會(huì)受到地球重力的影響，沉積到任何容器的底部（“趨地性”現(xiàn)象）。因此，

在對(duì)精液進(jìn)行取樣時(shí)，應(yīng)將其充分混勻，以確保精子及其他精液成分均勻分布。即使精液樣本只是短暫

放置，也會(huì)導(dǎo)致精液中的細(xì)胞成分分布不均勻。因此，在任何等分取樣檢驗(yàn)之前，輕柔地充分混勻是很

重要的，注意不要使用渦流混勻器。

5.6精子毒性試驗(yàn)

為確保與精液接觸的材料（采集容器、移液吸頭等）對(duì)精子無(wú)毒，應(yīng)對(duì)每一批新材料進(jìn)行基本毒性

測(cè)試。該原則基于將精子暴露于現(xiàn)有材料和新材料下精子活力的比較[6]。進(jìn)行毒性測(cè)試時(shí)，精子的暴露

時(shí)間應(yīng)至少是精子暴露在該材料下的預(yù)期時(shí)間的兩倍——對(duì)于移液吸頭，精子暴露時(shí)間應(yīng)該在幾秒鐘左

右，而對(duì)于采集容器，精子暴露時(shí)間應(yīng)在30分鐘至60分鐘。

6檢查

6.1所需設(shè)備

精子活力，特別是速度，在很大程度上受外部環(huán)境溫度的影響。溫控設(shè)備的使用能夠減少室溫變化

對(duì)精子活力的影響。

需要以下設(shè)備：

——實(shí)驗(yàn)室天平，量程0.00g至50.00g（讀數(shù)至小數(shù)點(diǎn)后兩位）；

——可以將精液保持在人體溫度的培養(yǎng)箱或溫板，最好包含一個(gè)水平搖床（軌道混勻器）；

——相差顯微鏡（推薦使用10×、20×和40×物鏡）、普通光學(xué)顯微鏡（100×油鏡，高倍物鏡），

以及10×目鏡和目鏡測(cè)微尺（帶有十字網(wǎng)格的目鏡），以及37°C濕盒；

——用于評(píng)估精子濃度的正向置換型移液器，量程為0μL至50μL或0μL至100μL；

——用于制備濃度稀釋樣本、濕片及其他試劑的空氣置換型移液器（量程為1μL至20μL、20μL

至200μL和200μL至1000μL）；

——用于染色、計(jì)數(shù)形態(tài)和存活率載玻片的設(shè)備（載玻片架、染色缸、用于吸取封固劑一次性移

液管）；

——離心機(jī)（例如配備15mL錐形離心管的離心機(jī)）—推薦使用擺臂離心機(jī)以產(chǎn)生更明顯的沉淀，

并且使用密封離心管或密封轉(zhuǎn)子，以保護(hù)操作員在離心管離心破裂時(shí)免受可能的氣溶膠污染；

——改良Neubauer計(jì)數(shù)板（100μm深）

注1：大多數(shù)國(guó)際專家建議使用具有改良Neubauer規(guī)則[12][14][16]的計(jì)數(shù)板。只要使用正確的計(jì)算因子，就可以使用

其他模式的計(jì)數(shù)板。

注2：需要定期檢查非一次性計(jì)數(shù)板，以確保磨損不會(huì)改變計(jì)數(shù)池的深度，并且只要經(jīng)過(guò)適當(dāng)驗(yàn)證和評(píng)估，就

可以使用一次性計(jì)數(shù)板[5]。

注3：Makler計(jì)數(shù)板的準(zhǔn)確性低于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板[17]。

注4：一些用于尿液分析的一次性計(jì)數(shù)室的準(zhǔn)確性不足[17]。

注5：使用毛細(xì)管作用的固定深度腔室會(huì)受到塞格雷-西爾伯貝格效應(yīng)的影響，因此會(huì)產(chǎn)生可變誤差[4]。

——用于在計(jì)數(shù)板中沉淀精子的濕室

——渦漩混勻器（用于混勻固定精子懸浮液以評(píng)估濃度）

6.2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配制試劑

9

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

必備的用于精子濃度評(píng)估的稀釋液，可以在實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)自行配制（附錄D）。目的是制動(dòng)（殺死）

精子，使計(jì)數(shù)更可靠。如果可以防止微生物生長(zhǎng)，對(duì)于評(píng)估的方便性和可靠性是有益的。

6.3評(píng)估

6.3.1初評(píng)估

為可靠評(píng)估精液特征，精液應(yīng)完成液化。對(duì)于大多數(shù)精液樣本來(lái)說(shuō)，如果采集后保持在37°C的溫

度下，這可以在30分鐘內(nèi)完成。如果未完成液化，可將樣本繼續(xù)放置培養(yǎng)箱中一段時(shí)間（最長(zhǎng)30分鐘，

以便在采集后60分鐘內(nèi)完成活力評(píng)估），然后進(jìn)行評(píng)估。在評(píng)估開(kāi)始時(shí)的未完全液化的情況應(yīng)在報(bào)告中

注明，并記錄從樣本收集到開(kāi)始濕片制備的時(shí)間。

6.3.2肉眼觀察

如果沒(méi)有人類精液物理特性計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)的情況下，就不可能實(shí)現(xiàn)方法的適當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)化或確定測(cè)量的不確

定度。然而，一些關(guān)于顏色和氣味的觀察結(jié)果可能與標(biāo)本來(lái)源及被檢者的身體狀況相關(guān)。因此，報(bào)告中

的任何此類評(píng)估都被視為異常報(bào)告，即對(duì)超出預(yù)期的特征觀察結(jié)果的描述。

a)外觀：

——顏色（正常：乳白色，灰白色，有時(shí)略帶黃色或甚至亮黃色。異常：褐色或紅色，透明；深

黃色）；

——液化（正常：應(yīng)在37℃射精后30分鐘內(nèi)完成；異常：呈凝膠團(tuán)狀）。

b)其他物理特性：

——黏度-通過(guò)讓精液在重力作用下從大口徑移液管（例如5mL血清學(xué)移液管、無(wú)毒玻璃或塑料

Pasteur移液管）緩慢下降來(lái)測(cè)量。正常：“拉絲”長(zhǎng)度小于2厘米的液滴；

——?dú)馕叮ň簺](méi)有“正?！钡臍馕?，其氣味是高度主觀的。然而，強(qiáng)烈的腐臭味往往表明感染活

躍；輕微的腐臭味可能表明禁欲時(shí)間延長(zhǎng)，或強(qiáng)烈的尿液味可能表明精液被尿液污染）；

——精液pH值-在收集精液的30分鐘內(nèi)，將一定量的液化精液放在經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的pH試紙上進(jìn)行測(cè)

量，避免在沒(méi)有精子或精液量較少的情況下進(jìn)行測(cè)量。

6.3.3濕片顯微鏡檢查

濕片制備方法是將一份10μL充分混勻的精液放在有標(biāo)記的預(yù)熱顯微鏡載玻片上，并用一個(gè)預(yù)熱的

22mm×22mm蓋玻片（厚度為1/2或2，以允許液滴完全擴(kuò)散），以獲得大約20μm深的濕片（對(duì)

于18mm×18mm蓋玻片，相同深度僅需要6.5μL）。

——觀察精子、其他細(xì)胞、碎片、晶體的存在；

——觀察精子凝集和聚集的情況；

——評(píng)估精子濃度的適當(dāng)稀釋比例（見(jiàn)附錄E）。

對(duì)人類精液中可能存在的其他細(xì)胞和非細(xì)胞元素的觀察都缺乏計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)，即使使用定性描述也無(wú)法

客觀評(píng)估。然而，一些觀察結(jié)果可能與受試者的醫(yī)療狀況有關(guān)。因此，報(bào)告中的任何此類評(píng)估被視為例

外報(bào)告，即試圖描述超出預(yù)期的觀察結(jié)果。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確保他們能夠證明實(shí)驗(yàn)者之間的主觀性差異最小。

6.3.4精子活力評(píng)估

——應(yīng)在37°C下對(duì)充分混勻的樣本進(jìn)行兩次獨(dú)立的濕片制備；

——每份重復(fù)樣本應(yīng)至少評(píng)估四個(gè)不同的區(qū)域；

——每份重復(fù)樣本應(yīng)至少分類出200個(gè)精子。

精子活力級(jí)別分為快速前向運(yùn)動(dòng)、慢速前向運(yùn)動(dòng)、非前向運(yùn)動(dòng)或不運(yùn)動(dòng)（見(jiàn)表1）。

10

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

表1精子運(yùn)動(dòng)分類的定義

等級(jí)運(yùn)動(dòng)類型

精子運(yùn)動(dòng)活躍。呈直線或沿一大圓周運(yùn)動(dòng)，在1秒鐘內(nèi)從始點(diǎn)至

快速前向運(yùn)動(dòng)（a）

終點(diǎn)的軌跡至少為25μm（或?yàn)?/2尾長(zhǎng)）

精子運(yùn)動(dòng)活躍，呈直線或沿一大圓周運(yùn)動(dòng)，在1秒鐘內(nèi)從始點(diǎn)至

慢速前向運(yùn)動(dòng)（b）終點(diǎn)的軌跡為從5μm/s到24μm/s（或至少為1個(gè)頭長(zhǎng)、但小

于1/2尾長(zhǎng)）

，速度從至

非前向運(yùn)動(dòng)（c）缺乏前向性尾部運(yùn)動(dòng)的其它所有運(yùn)動(dòng)形式0μm/s

4μm/s

不運(yùn)動(dòng)（d）尾部沒(méi)有主動(dòng)運(yùn)動(dòng)

注1：在每個(gè)區(qū)域中，首先計(jì)數(shù)快速和慢速前向運(yùn)動(dòng)的精子。然后計(jì)數(shù)同一區(qū)域內(nèi)非前向運(yùn)動(dòng)和不運(yùn)動(dòng)的精子。

如果精子的濃度很高，建議只計(jì)數(shù)在較小視野區(qū)域內(nèi)看到的精子，例如目鏡網(wǎng)格的中心四個(gè)正方形或十

字線分區(qū)。

注2：以凝集物或聚集體結(jié)合的活動(dòng)精子和不活動(dòng)精子不包括在活動(dòng)性評(píng)估中。如果估計(jì)有超過(guò)20%至25%的

精子被困在這樣的團(tuán)塊中，因此不包括在運(yùn)動(dòng)性評(píng)估中，則報(bào)告中會(huì)注意到這一點(diǎn)。

——為了計(jì)算出符合預(yù)期準(zhǔn)確度和測(cè)量不確定度的結(jié)果，需要評(píng)估兩次重復(fù)的一致性（見(jiàn)附錄F）。

6.3.5精子濃度評(píng)估

——應(yīng)分別取兩份充分混勻的精液樣本，并單獨(dú)稀釋。50μL或100μL的體積（移液器的精確體積），

取決于估計(jì)的濃度（見(jiàn)附錄E）。

——稀釋后的樣本（見(jiàn)附錄E，具體體積取決于濕片觀察的結(jié)果），以制動(dòng)精子，并獲得在血球計(jì)

數(shù)板準(zhǔn)確計(jì)數(shù)的濃度。

——將精子懸浮液加入計(jì)數(shù)室后，水平放置在濕盒內(nèi)至少10分鐘，以使精子沉積到計(jì)數(shù)網(wǎng)格上。

如果超過(guò)20分鐘，應(yīng)檢查實(shí)驗(yàn)室的濕度。

重復(fù)評(píng)估時(shí)，每個(gè)重復(fù)樣本應(yīng)至少比較200個(gè)精子，除非計(jì)數(shù)不夠，如精子的濃度低于每毫升100

萬(wàn)個(gè)。

建議每個(gè)重復(fù)樣本至少評(píng)估200個(gè)精子，為了將統(tǒng)計(jì)誤差（95%可信區(qū)間）降低到≤±10%。如果重

復(fù)樣本至少評(píng)估100個(gè)精子，則相應(yīng)的誤差為≤±14%。任何基于少于200個(gè)精子的樣本的觀察結(jié)果都應(yīng)

在最終報(bào)告中進(jìn)行記錄。

為了計(jì)算出符合預(yù)期準(zhǔn)確度和測(cè)量不確定度的結(jié)果，需要評(píng)估兩次重復(fù)的一致性（見(jiàn)附錄G）。

6.3.6無(wú)精子癥評(píng)估

評(píng)估的第一步是對(duì)兩份獨(dú)立的10μL精液樣本進(jìn)行全面、有規(guī)律地觀察[（200×至400×放大倍數(shù)；

22mm×22mm蓋玻片整個(gè)區(qū)域）]，但未發(fā)現(xiàn)精子。評(píng)估的第二步是取10μL整份精液的離心沉淀（1000

×g，15分鐘），觀察在22mm×22mm的蓋玻片整個(gè)區(qū)域。如果在這些目測(cè)檢查中均未檢測(cè)到精子，則

臨床實(shí)驗(yàn)室完全可以說(shuō)明精液中可能不含有精子，盡管不能排除偶爾有精子存在（見(jiàn)附錄A）。

6.3.7精子存活率評(píng)估

精子存活率通常不進(jìn)行常規(guī)評(píng)估，只有在濕片觀察中活動(dòng)精子百分率低（總活力<40%）時(shí)才進(jìn)行

評(píng)估。

使用經(jīng)評(píng)估和驗(yàn)證的方法來(lái)區(qū)分活精子和死精子，例如，混勻的精液中加入帶有背景的活體染色.

例如伊紅Y和苯胺黑[2]（見(jiàn)附錄H）。

注：僅用伊紅進(jìn)行的存活率測(cè)試僅在相差顯微鏡下進(jìn)行了驗(yàn)證。

11

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

6.3.8精子形態(tài)評(píng)估

由于精液滲透壓的持續(xù)增加，長(zhǎng)時(shí)間處于液化狀態(tài)下的精子可能會(huì)增加卷尾的發(fā)生。形態(tài)學(xué)涂片最

好在射精后60分鐘內(nèi)完成（見(jiàn)附錄I）。

每個(gè)精子應(yīng)評(píng)估頭部、頸部和中段、尾部的異常情況，以及是否存在過(guò)量殘留胞質(zhì)進(jìn)行評(píng)估（見(jiàn)附

錄I）。只評(píng)估完整的精子（有頭和尾）。如果每100個(gè)完整精子中有超過(guò)20個(gè)脫落精子頭，其數(shù)量應(yīng)

標(biāo)注為：“每100個(gè)完整精子中的脫落精子頭”，需進(jìn)行單獨(dú)列項(xiàng)報(bào)告。

為了進(jìn)行可靠的人類精子形態(tài)評(píng)估，需要對(duì)檢驗(yàn)人員評(píng)估經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的參考品（巴氏染色或其它染色

方法的涂片，有經(jīng)驗(yàn)證的的參考值）進(jìn)行廣泛的培訓(xùn)。如果沒(méi)有這種培訓(xùn)，以及持續(xù)的能力驗(yàn)證，結(jié)果

沒(méi)有科學(xué)或臨床價(jià)值。

7檢驗(yàn)后處理及報(bào)告

7.1總則

檢驗(yàn)后要求包括結(jié)果計(jì)算和結(jié)果報(bào)告。

各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)ISO/TS20914確定測(cè)量不確定度。

7.2結(jié)果計(jì)算和報(bào)告

7.2.1精子總數(shù)

很難正確解釋精液中精子的濃度，因?yàn)樽罱K的精液體積取決于幾個(gè)不同的附屬腺體的貢獻(xiàn)，在不同

個(gè)體中這些腺體可能隨時(shí)變化、精液量也不同，也可能在不同的人之間變化。所以，計(jì)算每次射精的精

子總數(shù)也非常重要。

——精子總數(shù)=精液體積×精子濃度

7.2.2其他計(jì)算

a)精子活動(dòng)率

應(yīng)根據(jù)兩次可接受的重復(fù)評(píng)估的平均值計(jì)算運(yùn)動(dòng)精子百分率，根據(jù)各活力級(jí)別的精子占比情況，并

以百分率表示（基于計(jì)數(shù)的精子數(shù)量，僅使用整數(shù)值，即無(wú)小數(shù)點(diǎn)）。

——快速前向運(yùn)動(dòng)；

——慢速前向運(yùn)動(dòng)；

——非前向運(yùn)動(dòng)；

——不運(yùn)動(dòng)。

除了記錄的百分率外，還可以根據(jù)記錄的結(jié)果計(jì)算以下內(nèi)容，并以不帶小數(shù)點(diǎn)的整數(shù)百分比表示：

——前向運(yùn)動(dòng)精子百分率（快速前向運(yùn)動(dòng)+慢速前向運(yùn)動(dòng)）；

——運(yùn)動(dòng)精子百分率（快速前向運(yùn)動(dòng)+慢速前向運(yùn)動(dòng)+非前向運(yùn)動(dòng)）。

注：精子四個(gè)活力級(jí)別的評(píng)估，包括快速和慢速精子的區(qū)分，為臨床決策提供了重要信息[1]。

b)形態(tài)學(xué)

根據(jù)所計(jì)數(shù)的精子數(shù)量，在進(jìn)行形態(tài)學(xué)評(píng)估時(shí)，一般使用整數(shù)值，不含小數(shù)點(diǎn)，只有記錄畸形精子

指數(shù)（TZI）時(shí)，應(yīng)保留兩位小數(shù)點(diǎn)。

[15]

——“典型”精子百分率（Mortimer和Menkveld，2001）；

——異常精子百分率為異常精子（頭部、中段和尾部、以及過(guò)量殘留胞質(zhì)）在所有被評(píng)估精子（不

僅是異常精子）中的比例；

12

GB/TXXXXX—XXXX/ISO23162:2021

——當(dāng)每100個(gè)精子中，存在超過(guò)20個(gè)特殊異常精子（如圓頭精子即圓頭精子癥、梨狀精子、無(wú)

尾精子頭）時(shí)，應(yīng)單獨(dú)報(bào)告；

——畸形精子指數(shù)（TZI）–是可選指標(biāo)，其計(jì)算方法是：異常精子中缺陷區(qū)域總數(shù)（頭部、中段、

尾部和過(guò)量殘留胞質(zhì)，每個(gè)異常精子缺陷區(qū)域總數(shù)最大值為4）除以異常精子數(shù)（結(jié)果一般保

留兩位小數(shù)）。

7.3結(jié)果的報(bào)告

7.3.1總則

——形態(tài)結(jié)果一般以百分比、整數(shù)（不含小數(shù)點(diǎn)）的形式給出。

——如報(bào)告畸形精子指數(shù)（TZI）：TZI一般以兩位小數(shù)形式表示。

——精子濃度和總數(shù)：大于等于1千萬(wàn)的結(jié)果以整數(shù)值（不含小數(shù)點(diǎn)）表示；0.05-9.95百萬(wàn)之間

的數(shù)值，為了清晰可見(jiàn)，保留一位小數(shù)點(diǎn)能被合理解釋。對(duì)