G中華人民共和國國家標準GB

—2013食品安全國家標準水產品中紅霉素殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法

of

aquatic

by

Liquid

Mass

Spectrometric

2013-09-16

發(fā)布 2014-01-01

實施中華人民共和國農業(yè)部

發(fā)布中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會目 次目 次

.........................................................................

I前 言

........................................................................

II水產品中紅霉素殘留量的測定

液相色譜-串聯(lián)質譜法.................................

１1

范圍

........................................................................

１2

規(guī)范性引用文件

..............................................................

１3

原理

........................................................................

１4

試劑和材料

..................................................................

１5

儀器和設備

..................................................................

２6

試料的制備與保存

............................................................

２6.1

試料的制備.................................................................

２6.2

試料的保存

.................................................................

３7 測定步驟

...................................................................

３7.1

.......................................................................

３7.2

.......................................................................

３7.3

標準曲線的制備.............................................................

３7.4

.......................................................................

３7.5

空白試驗...................................................................

４8

結果計算和表述

..............................................................

５9

檢測方法靈敏度、準確度、精密度

..............................................

５9.1

靈敏度.....................................................................

５9.2

準確度.....................................................................

５9.3

精密度.....................................................................

５附錄

A

........................................................................

６前言本標準的附錄

A

為資料性附錄。本標準系國內首次發(fā)布的國家標準。II水產品中紅霉素殘留量的測定液相色譜-1

范圍本標準規(guī)定了水產品中紅霉素殘留量檢測的制樣和液相色譜-串聯(lián)質譜測定方法。本標準適用于水產品可食性組織中紅霉素殘留量的檢測。2

規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T1.1-2000

標準化工作導則

第

1

部分：標準的結構和編寫規(guī)則GB/T6682

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法SC/T

3016 水產品抽樣方法。3

原理試料中殘留的紅霉素，用乙腈提取，正己烷除脂，

柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質譜測定，內標法定量。4

試劑和材料以下所用試劑，除特別注明外均為分析純試劑；水為符合GB/T

6682規(guī)定的一級水。4.1

97%。4.2

紅霉素同位素內標物標準品：紅霉素同位素（

A，N，N-Dimethyl-

C。4.3

乙腈：色譜純。4.4

正己烷：色譜純。4.5

甲醇：色譜純。4.6

4.7

氯化鈉4.8

十二水磷酸氫二鈉4.9

4.10

HLB固相萃取柱：

mL，或相當者。4.11

磷酸鹽緩沖溶液：取十二水磷酸氫二鈉

17.92

g，用水溶解并稀釋至

，用磷酸調pH

值至

8.04.12

40

%甲醇溶液

mL，用水溶解并稀釋至

100

mL。4.13

30

%甲醇溶液

mL，用水溶解并稀釋至

100

mL。4.14

0.01

‰乙酸水溶液：取乙酸

10

μL，用水溶解并稀釋至

1

mL。4.15

100

μg/mL

紅霉素標準貯備液：精密稱取紅霉素標準品

，于

mL

量瓶中，用甲醇溶解

μg/mL

的紅霉素標準貯備液。

6

4.16 5

μg/mL

紅霉素標準工作液：精密量取

μg/m

紅霉素標準貯備液

μL，于

10

mL

量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為

5

μg/mL

的紅霉素標準工作液。

℃以下避光保存，有效期

3

個月。4.17

μg/mL

紅霉素同位素內標物標準貯備液

10

mL

量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為

100

μg/mL

紅霉素同位素內標物標準貯備液。

℃以下避光保存，有效期

6

個月。4.18

ng/mL

紅霉素同位素內標物標準工作液：精密量取

μg/mL

紅霉素同位素內標物標準貯備液

200

μL，于

100

量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為

200

的紅霉素同位素內標物標準工作液。

℃以下避光保存，有效期

3

個月。5

儀器和設備5.1

液相色譜-串聯(lián)質譜儀：配電噴霧離子源。5.2

分析天平

0.000

01

g

。5.3

天平

0.01

g。5.4

振蕩器5.5

均質機5.6

離心機5.7

酸度計5.8

旋轉蒸發(fā)儀5.9

茄形瓶：

mL。5.10

離心管：

mL。5.11

濾膜：

μm。6

試料的制備與保存6.1

試料的制備取水產品空白或供試可食性組織，絞碎，并使均質。——取均質后的供試樣品，作為供試試料。——取均質后的空白樣品，作為空白試料?！【|后的空白樣品

，添加適宜濃度的標準工作液，作為空白添加試料。6.2

試料的保存℃以下保存，保存期3個月。7 測定步驟7.1

稱取試料（5±0.05）g，于50

mL離心管中，加

紅霉素同位素內標物標準工作液50

μL，加乙腈15

5

5

，4000

離心10

離心管中，殘渣中加乙腈5

mL，重復提取一次，合并兩次上清液，加氯化鈉2

g和正己烷15

mL，振蕩5

，4

離心10

，棄上層正己烷液，取下層液，于100

mL茄形瓶中，于40℃旋轉蒸發(fā)至5

5

mL1

6

離心5

，棄正己烷層，再加正己烷5

，重復操作一次，取下層溶液，備用。7.2

柱依次用甲醇5

mL、水5

和磷酸鹽緩沖溶液5

mL活化，取備用液過柱，用磷酸鹽緩沖液5mL洗滌離心管，洗滌液過柱，流干，依次用水5

和40

%甲醇溶液5

淋洗，抽干，用甲醇8

洗30

%甲醇溶液1.0

供液相色譜-串聯(lián)質譜測定。7.3

標準曲線的制備精密量取

5

μg/mL

紅霉素標準工作液和

ng/mL

紅霉素同位素內標物標準工作液適量，用

30%

10

以及紅霉素濃度為

1、5、10、、50、100

和

500 ng/mL

的系列標準溶液，供液相色譜-串聯(lián)質譜測定。以特征離子質量色譜峰面積為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。求回歸方程和相關系數(shù)。7.4

7.4.1

液相色譜條件色譜柱：C

（150

mm，粒徑5

μm），或相當者；流動相：A：甲醇，B：

‰乙酸水溶液

；梯度洗脫：0.0～1.0

，30％A；1.01～7

，95％A；～

；30％A；流速：0.3

；目標化合物定性離子對m/z定量離子對m/z碰撞能量eV紅霉素734.4>157.9734.4>576.0734.4>157.92720紅霉素同位素內標物736.5>159.9736.5>159.930柱溫：25

℃；進樣量：25

μL。7.4.2

質譜條件離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應監(jiān)測；噴霧電壓：4

V；離子傳輸毛細管溫度：

℃；源內碰撞誘導解離電壓：8

V；霧化氣流速：

；輔助氣流速：

；定性、定量離子對和碰撞能量見表1。表1

定性、定量離子對和碰撞能量表1

定性、定量離子對和碰撞能量7.4.3.1

定性測定通過試樣色譜圖的保留時間與相應標準品的保留時間、色譜峰的特征離子與相應濃度標準溶液色5與濃度相當標準溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過±20

%，則可判斷試樣中存在相應的被測物。7.4.3.2

定量測定取試樣溶液和標準溶液，按外標法，以峰面積定量，標準溶液及試樣溶液中的紅霉素響應值均應-質量色譜圖見附錄A。7.5

空白試驗除不加試料外，采用完全相同的步驟進行平行操作。8

結果計算和表述試料中對紅霉素的殘留量（μ）：按下式計算X

CVm式中:X

供試試料中紅霉素的殘留量，μg/kg；C

試樣溶液中紅霉素的濃度，；V溶解殘余物所用體積，mL；m

供試試料質量，g。注：計算結果需扣除空白值。測定結果用兩次平行測定的算術平均值表示，保留三位有效數(shù)字。9

檢測方法靈敏度、準確度、精密度9.1

靈敏度本方法的檢測限為

μg/kg，定量限為1

μg/kg。9.2

準確度本方法在1～400

μ添加濃度水平上的回