第三章基因工程13.2基因工程的基本操作程序第四步

目的基因的檢測(cè)與鑒定2基因表達(dá)載體的構(gòu)建3將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4目的基因的檢測(cè)與鑒定1目的基因的篩選與獲取基因工程培育抗蟲棉的思路：蘇云金桿菌提取Bt抗蟲蛋白基因?qū)朊藁?xì)胞抗蟲棉Bt基因表達(dá)23①目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞？②受體細(xì)胞的染色體DNA中是否插入了目的基因(DNA)？③目的基因是否轉(zhuǎn)錄（mRNA）？④是否有翻譯產(chǎn)物（蛋白質(zhì)）？⑤是否賦予了生物個(gè)體新性狀？篩選含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞檢測(cè)與鑒定分子水平個(gè)體水平第四步：檢測(cè)和鑒定目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性。4①目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞？篩選含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞插入目的基因自身環(huán)化a.重組質(zhì)粒b.空質(zhì)粒酶連接注：僅有少數(shù)質(zhì)粒能進(jìn)入受體細(xì)胞，使細(xì)胞轉(zhuǎn)化A.導(dǎo)入重組質(zhì)粒C.未導(dǎo)入質(zhì)粒B.導(dǎo)入空質(zhì)粒青霉素X-galA含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌落B含有空質(zhì)粒的大腸桿菌菌落C不含質(zhì)粒的大腸桿菌菌落生長(zhǎng)生長(zhǎng)不生長(zhǎng)白色藍(lán)色AmpR：檢測(cè)質(zhì)粒是否進(jìn)入大腸桿菌LacZ：區(qū)分空質(zhì)粒（藍(lán)色）和重組質(zhì)粒（白色）【實(shí)例】藍(lán)白斑篩選5②受體細(xì)胞的染色體DNA中是否插入了目的基因(DNA)？檢測(cè)與鑒定PCR等技術(shù)方法：過(guò)程：1）設(shè)計(jì)引物2）模板DNA的制備提取植物基因組DNA或總DNA;檢測(cè)時(shí)要有陽(yáng)性和陰性對(duì)照,

陽(yáng)性對(duì)照可用質(zhì)粒DNA，

陰性對(duì)照可從未轉(zhuǎn)基因的植株中提取。3）PCR反應(yīng)4）電泳結(jié)果分析6②受體細(xì)胞的染色體DNA中是否插入了目的基因(DNA)？檢測(cè)與鑒定PCR等技術(shù)方法：過(guò)程：結(jié)果示例：7【練一練】B②受體細(xì)胞的染色體DNA中是否插入了目的基因(DNA)？檢測(cè)與鑒定(2019·江蘇高考真題）為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR鑒定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置，PCR鑒定時(shí)應(yīng)選擇的一對(duì)引物是__________________________8【練一練】乙丙②受體細(xì)胞的染色體DNA中是否插入了目的基因(DNA)？檢測(cè)與鑒定9③目的基因是否轉(zhuǎn)錄（mRNA）？檢測(cè)與鑒定PCR等技術(shù)方法：過(guò)程：RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄PCR）以植物總RNA或mRNA為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，然后再經(jīng)PCR擴(kuò)增。如果從細(xì)胞總RNA提取物中得到特異的cDNA擴(kuò)增條帶，則表明外源基因?qū)崿F(xiàn)了轉(zhuǎn)錄。10④是否有翻譯產(chǎn)物（蛋白質(zhì)）？檢測(cè)與鑒定抗原-抗體雜交技術(shù)方法：過(guò)程：②Western雜交從轉(zhuǎn)基因生物中提取出蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原－抗體雜交，若出現(xiàn)雜交帶，則表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品。①酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）11⑤是否賦予了生物個(gè)體新性狀？檢測(cè)與鑒定觀察是否賦予個(gè)體生物新的特性或抗性方法：轉(zhuǎn)基因生物鑒定方法成功標(biāo)志抗蟲植物抗病毒（菌）植物抗鹽植物抗除草劑植物獲取目的基因產(chǎn)物的轉(zhuǎn)基因生物飼喂害蟲（抗蟲