1有助于維持尿酸健康水平功能性食品功效評價方法本文件規(guī)定了有助于維持尿酸健康水平功能性食品功效評價的試驗分類、動物實驗、人體試食試4.1有助于維持尿酸健康水平功效試驗分為b)藥物誘導(dǎo)高尿酸小鼠模型。以受試樣品給予自發(fā)高尿酸小鼠動物模型或通過實驗方法造成的高尿酸動物模型，觀察受試樣品對高尿酸動物模型的血清尿酸、尿尿酸等指標的影響，評價受試樣品對尿酸的調(diào)節(jié)作用。5.1UOX基因敲除自發(fā)高尿酸小鼠模型5.1.1原理鼠、兔等常用作動物模型的哺乳動物體內(nèi)存在尿酸氧化酶（UOX），UOX可催化體內(nèi)尿酸氧化成尿囊素或其他物質(zhì)。UOX基因敲除小鼠可以大幅提高血尿酸水平，尿酸水平穩(wěn)定，能較好的模擬人類高尿自發(fā)高尿酸小鼠（Uoxem1Cli），Uoxem1Cli宜選用8-12周齡，體重20±2g，雌雄可以兼用，每組實驗設(shè)三個劑量組、一個模型對照組和空白對照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個劑組，另設(shè)二個劑量組，高劑量一般不超過30倍。同時設(shè)給予受試樣品高劑量的正常動物組。受試樣品給予時25.1.5.1正常動物降尿酸實驗選健康成年動物按血尿酸水平分組，隨機選1個對照組和1個劑量組。對照組給予溶劑，劑量組給5.1.5.2高尿酸模型動物降尿酸實驗選高尿酸模型動物按血尿酸水平隨機分組，設(shè)1個模型對照組和3個劑量組（組間血尿酸差不大于30μmol/L），每組8只。劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予溶劑，連續(xù)30天，測血尿酸，5.1.6觀察指標血尿酸：實驗前后，測血尿酸，比較各組動物血尿酸值及血尿酸下（實驗前血尿酸值?實驗后血尿酸值）5.1.7數(shù)據(jù)處理一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值＜0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)5.1.8結(jié)果判定5.1.8.1正常動物降尿酸試驗：血尿酸指標：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對照組比較，血尿酸下降或血尿酸下降百分率升高有統(tǒng)計學意義，判定該受試樣品對5.1.8.3動物實驗結(jié)果判定：血清尿酸指標陽性，且對正常動物血清尿酸無影響，即可判定該受試樣5.1.9注意事項5.1.9.1高尿酸動物模型構(gòu)建：氧嗪酸鉀誘導(dǎo)模型小鼠形成的高尿酸血癥存在時效性，氧嗪酸鉀注射5.1.9.2高尿酸小鼠模型成立的判定：模型小鼠平均血尿酸是正常小鼠平均值的25.2藥物誘導(dǎo)高尿酸小鼠模型5.2.1原理鼠、兔等常用作動物模型的哺乳動物體內(nèi)存在尿酸氧化酶（UOX），UOX可催化體內(nèi)尿酸氧化成尿囊素或其他物質(zhì)?？梢酝ㄟ^基因誘導(dǎo)或環(huán)境誘導(dǎo)的方法，抑制或者消除尿酸酶的活性建立高尿酸小鼠氧嗪酸鉀是抑制UOX造模的常用藥物，其結(jié)構(gòu)與尿酸的嘌呤環(huán)相似，可競爭性地與尿酸酶結(jié)合，部分抑制尿酸酶的活性，導(dǎo)致尿酸分解減少，造成短時間內(nèi)體內(nèi)尿酸蓄積增多，聯(lián)合高酵母飼料，提高乙胺丁醇會抑制尿酸經(jīng)過腎小管排泄，進而造成血液尿酸升高，聯(lián)合高酵母飼料，提高小鼠體內(nèi)5.2.2儀器及試劑全自動生化儀、天平、氧嗪酸鉀（C4H2KN3O4，分子量195.17）、羧甲基纖維素鈉、乙胺丁醇3推薦用雄性C57BL/6J小鼠，8～12實驗設(shè)三個劑量組、一個模型對照組和空白對照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個劑組，另設(shè)二個劑量組，高劑量一般不超過30倍。同時設(shè)5.2.5.1正常動物降尿酸實驗選健康成年動物按血尿酸水平分組，隨機選1個對照組和1個劑量組。對照組給予溶劑，劑量組給5.2.5.2高尿酸模型動物降尿酸實驗5.2.5.2.1高酵母飼料聯(lián)合氧嗪酸鉀誘導(dǎo)高尿酸小鼠模型購入成年動物，適應(yīng)3～5天后，隨機取15只動物測血尿酸，作為該批次動物基礎(chǔ)血尿酸值。隨機分為5各組，即空白對照組，模型對照組和3個劑量組，每組15只?？瞻讓φ战M不作處理，3個劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，連續(xù)15天?？瞻讓φ战M給與維持飼料飼養(yǎng)，模型對照組和3個劑量組給予高酵母飼料，在此基礎(chǔ)上，給予模型對照組和3個劑量組氧嗪酸鉀2505.2.5.2.2氧嗪酸鉀聯(lián)合乙胺丁醇誘導(dǎo)高尿酸小鼠模型購入成年動物，適應(yīng)3～5天后，隨機取15只動物測血尿酸，作為該批次動物基礎(chǔ)血尿酸值。隨機分為5各組，即空白對照組，模型對照組和3個劑量組，每組15只。空白對照組不作處理，3個劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，連續(xù)15天。給予模型對照組和3個劑量組氧嗪酸鉀250mg/kgBW腹腔注射，同時乙胺丁醇灌胃2505.2.6.1血尿酸：實驗前后，測血尿酸，比較各組動物血尿酸值及血尿酸下降百分率。（實驗前血尿酸值?實驗后血尿酸值）5.2.6.2尿尿酸：實驗前后，收集24h尿，測尿尿酸，計算尿尿尿酸排泄量增加率%=（實驗后尿尿酸排泄量?實驗前尿尿酸排泄量）×100%一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值＜0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到正態(tài)或方5.2.8.1正常動物降尿酸試驗：血尿酸指標：受試樣品劑量組與對照組比較無統(tǒng)計學意義，判定對正a)血尿酸指標：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對照組比較，血尿酸下降或血尿酸下降百分率升高有統(tǒng)計學意義，判定該受試樣品對血b)尿尿酸：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對照組比較，尿尿酸升高或尿尿酸排血45.2.8.3動物實驗結(jié)果判定：血清尿酸和尿酸排泄量兩項中任一項為陽性，且對正常動物血尿酸無影5.2.9注意事項5.2.9.1高尿酸動物模型構(gòu)建：氧嗪酸鉀誘導(dǎo)模型小鼠形成的高尿酸血癥存在時效性，氧嗪酸鉀注射5.2.9.2高尿酸小鼠模型成立的判定：模型小鼠平均血尿酸是正常小鼠平均值的26.1.1年齡18～65歲，不限制性別；420μmol/L≤血清尿酸水平＜540μmol/L（無合并癥）或6.2.3有心、肝、腎等主要臟器并發(fā)癥，或合并有其它嚴重疾病，精神病患者，服用糖皮質(zhì)激素類藥6.2.4不能配合飲食控制而影響觀察6.2.7凡不符合納入標準，未按規(guī)定服用采用組間對照設(shè)計。根據(jù)隨機盲法的要求進行分組。按受試者的血尿酸水平隨機分為試食組和對照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如年齡、性別、飲食等，進行均衡性檢驗，以保證組間的可比6.5.1.1一般狀況（包括精神、睡眠、飲食、大小血尿酸下降百分率=試驗前血血尿酸值×100%524小時尿尿酸排泄量增加百分率=試驗后24小時?尿尿酸排泄量×100%試驗前對每一位受試者按性別、年齡、不同勞動強度、理想體重參照原來生活習慣規(guī)定相應(yīng)的飲食，試食期間堅持飲食控制。試食組在飲食指導(dǎo)的基礎(chǔ)上，按推薦服用方法和服用量每日服用受試樣品，對照組可服用安慰劑或采用空白對照。受試樣品給予時間3個月，必要時可延長至6凡自身對照資料可以采用配對t檢驗，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗，后者需進行方差齊性檢驗，若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t’檢驗或秩和檢驗；方差齊但變異系數(shù)太大（如CV＞50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗。有效率及總有效率采用χ2檢驗進行檢驗。四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時，應(yīng)改用a)試食前后自身比較，血尿酸