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DB36

江西省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB36/TXXX—XXXX

飼料及飼料原料中玉米赤霉烯酮的快速篩

查膠體金快速定量法

Screeningofzearalenoneinanimalfeedingstuffs

——RapidQuantitativeMethodofColloidalGoldTechnique

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XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

江西省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DBXX/TXXX—XXXX

目??次

前??言.............................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3原理...............................................................................1

4試劑和材料.........................................................................1

5儀器和設(shè)備.........................................................................2

6試樣制備與保存.....................................................................2

7分析步驟...........................................................................2

8結(jié)果表述...........................................................................3

9重復(fù)性.............................................................................3

附錄A（資料性附錄）膠體金免疫層析快速篩查組件試劑配制與技術(shù)要求.....................4

I

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1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用膠體金免疫層析法快速篩查測(cè)定飼料及飼料原料中玉米赤酶烯酮，為定量篩查方

法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于玉米、小麥、大米、黃豆、豆粕、花生粕、DDGS等原料中及以玉米粉，小麥粉為主要

基質(zhì)的飼料成品中玉米赤霉烯酮的快速定量篩查。檢測(cè)限為50μg/kg(ppb)，檢測(cè)范圍為50μg/kg(ppb)

-1000μg/kg(ppb)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備

3原理

本方法應(yīng)用了免疫層析原理。將氯金酸用還原法制成一定直徑的金溶膠顆粒，標(biāo)記針對(duì)玉米赤霉烯

酮的單克隆抗體，用噴金法固定于硝酸纖維素（NC）膜上，同時(shí)，在硝酸纖維素（NC）膜的顯色區(qū)域有

兩個(gè)條帶：質(zhì)控帶和檢測(cè)帶，質(zhì)控條帶上包被有玉米赤霉烯酮抗原，檢測(cè)條帶上包被有抗玉米赤霉烯酮

單克隆抗體的二抗。試樣提取液中的玉米赤霉烯酮與檢測(cè)條中膠體金微粒上的單克隆抗體發(fā)生反應(yīng)，形

成氯金酸-抗體-抗原聚合物，此聚合物和剩余的氯金酸-抗體聚合物在側(cè)流作用下移動(dòng)，當(dāng)?shù)竭_(dá)質(zhì)控線

時(shí)，質(zhì)控條帶上包被的抗原與剩余的氯金酸-抗體聚合物結(jié)合發(fā)生呈色反應(yīng)，顏色深淺與試樣中玉米赤

酶烯酮毒素含量負(fù)相關(guān)，而氯金酸-抗體-抗原聚合物繼續(xù)在側(cè)流作用下移動(dòng)，到達(dá)檢測(cè)條帶后，與檢測(cè)

條帶上的二抗形成氯金酸-抗體-抗原&二抗的聚合物，此條帶的顏色同試樣中的玉米赤霉烯酮含量正相

關(guān)。由于試樣中的玉米赤酶烯酮的含量一定，質(zhì)控帶的顏色和檢測(cè)帶的顏色此消彼長(zhǎng)，呈相關(guān)性。等試

驗(yàn)反應(yīng)平衡后，用讀數(shù)儀掃描檢測(cè)條上顯色區(qū)域內(nèi)檢測(cè)條帶和質(zhì)控條帶顏色深淺，根據(jù)顏色深淺和讀數(shù)

儀內(nèi)置曲線計(jì)算出試樣中的玉米赤霉烯酮含量。

4試劑和材料

除非另有說(shuō)明，本法所用試劑均為分析純，水為去離子水，符合GB/T6682二級(jí)水的規(guī)定。

4.1膠體金免疫層析快速篩查組件（參見附錄A）。

4.1.1玉米赤霉烯酮?dú)埩魴z測(cè)試紙條。

4.1.2樣本稀釋液。

4.2甲醇。

4.3氫氧化鈉（NaOH1mol/L）：稱取40g氫氧化鈉，加水定容至1000ml，混勻。

4.4鹽酸溶液（HCL，1mol/L）：量取83.33mLρ=1.18g/mL的鹽酸，加水定容至1000mL，混勻。

4.570%甲醇：量取70mL甲醇，加入30mL水，混勻。

5儀器和設(shè)備

1

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5.1天平：感量0.01g。

5.2渦旋儀。

5.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥3000r/min。

5.4微量移液器：20μL～200μL，100μL～1000μL

5.5聚苯乙烯離心管：2mL，50mL。

5.6讀數(shù)儀：可測(cè)定并顯示膠體金定量檢測(cè)條的測(cè)定結(jié)果。

6試樣制備與保存

6.1試樣制備

按GB/T20195要求制備試樣。

6.2試樣保存

將試樣于-10℃～-20℃下避光保存。

7分析步驟

7.1試樣提取

7.1.1稱取(5.00±0.01)g飼料樣品至50mL聚苯乙烯離心管中，加入10mL70%甲醇（4.5），將瓶

塞蓋緊，渦動(dòng)3min，室溫3000r/min以上離心5min，取100μL上清液加入600μL樣本稀釋液（4.1.2），

混勻，待測(cè)。

7.1.2非谷物基質(zhì)，如果上清液pH值小于6或大于8，非谷物基質(zhì)，如果上清液pH值小于6或大于

8，則需要用1mol/L氫氧化鈉溶液（4.3）或1mol/L鹽酸溶液（4.4）調(diào)節(jié)pH至7左右，然后取100μL

此溶液加入600μL樣本稀釋液（4.1.2），混勻，待測(cè)

7.1.3不同廠家的玉米赤酶烯酮膠體金快速定量條所用的樣品制備方法不同，如提供玉米赤霉烯酮膠

體金快速定量檢測(cè)條使用說(shuō)明，則按照使用說(shuō)明中規(guī)定的方法進(jìn)行操作。

7.2試樣篩查

7.2.1將膠體金檢測(cè)條（4.1.1）從冷藏狀態(tài)（2℃-8℃）取出放置至最適試驗(yàn)溫度（23℃-25℃）。將

讀數(shù)儀（5.6）打開，按照提示輸入樣品，檢測(cè)人員，檢測(cè)項(xiàng)目，方法等相關(guān)信息。將比色卡平放于桌

面，用讀數(shù)儀掃描比色卡上的二維碼，等待檢測(cè)。

7.2.2準(zhǔn)確移取100μL待測(cè)溶液（7.1），加入檢測(cè)條加樣孔中，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)5分鐘。

7.2.3孵育5min后，用讀數(shù)儀掃描檢測(cè)卡，按下讀取鍵，幾秒鐘讀數(shù)儀的屏幕上即可顯示測(cè)試樣中玉

米赤霉烯酮的含量信息?？蛇x擇打印，傳輸，儲(chǔ)存此信息。

7.2.4如結(jié)果顯示：invalid，如果檢測(cè)條上質(zhì)控線（C線）無(wú)色，測(cè)試線（T線）上顏色肉眼可見很

深，則表明試樣中玉米赤酶烯酮含量非常高，可將試樣提高稀釋倍數(shù)，重新進(jìn)行檢測(cè)。

8結(jié)果表述

玉米赤霉烯酮含量以ppb(μg/kg微克每千克）表示，由讀數(shù)儀直接顯示和讀取。

9重復(fù)性

2

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在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一操作者使用相同儀器，按相同的測(cè)定方法，并在短時(shí)間內(nèi)對(duì)同一被測(cè)試對(duì)象

相互獨(dú)立進(jìn)行測(cè)試獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值大于算術(shù)平均值20%的情況不超過(guò)5%。

3

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A

附錄A

（資料性附錄）

膠體金免疫層析快速篩查組件試劑配制與技術(shù)要求

A.1樣本稀釋液配制（能達(dá)到相當(dāng)效果者均可）

磷酸二氫鉀0.2g

十二水合磷酸氫二鈉2.9g

氯化鈉8.0g

氯化鉀0.2g

吐溫-200.5mL

加水定容至1000mL。

A.2基本要求

A.2.1工作環(huán)境要求

氣溫：23℃～25℃。

A.3抗原要求

玉米赤霉烯酮半抗原與載體蛋白進(jìn)行化學(xué)偶聯(lián)，能夠達(dá)到包被要求。

A.4抗體要求

用玉米赤霉烯酮抗原免疫小鼠，制備針對(duì)玉米赤霉烯酮的特異性單克隆抗體，能夠達(dá)到檢測(cè)要求。

A.5原材料要求

A.5.1樣品墊：玻璃纖維或無(wú)紡布。

A.5.2金釋放墊：玻璃纖維片，免疫金釋放時(shí)間小于10min，釋放效率大于90%。

A.5.3反應(yīng)膜：硝酸纖維素膜，孔徑為0.45μm，4cm浸潤(rùn)時(shí)間不小于140s。

A.5.4吸水紙。

A.5.5塑料卡盒：丙烯腈、丁二烯和苯乙烯的三元共聚物。

A.6性能要求

A.6.1準(zhǔn)確度

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采用200μg/kg（200ppb）、400μg/kg（4