羅氏Cobase602檢測AFP的性能驗證

摘要：目的對羅氏Cobase602電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測AFP（甲胎蛋白）的分析性能進行驗證。方法對AFP的精密度、準確度、測量線性范圍和參考區(qū)間進行性能驗證實驗。結(jié)果AFP的批內(nèi)精密度高低兩種濃度的CV分別為2.74%和4.92%，批間精密度高低兩種濃度的CV分別為1.46%和1.93%；6份室間質(zhì)控品的檢測結(jié)果與靶值的偏倚在-0.46%~1.53%之間；測量線性范圍與廠家提供的范圍相符合；AFP的測量數(shù)值100%在廠家提供的參考區(qū)間內(nèi)。結(jié)論羅氏Cobase602檢測AFP的方法學(xué)性能良好，檢驗結(jié)果準確可靠，能夠滿足臨床檢測的要求。關(guān)鍵詞：電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀；性能驗證；AFP近年來，檢驗項目的方法學(xué)性能評價成為了目前檢驗醫(yī)學(xué)界討論和關(guān)注的熱點[1-2]。本科室于2017年引進了德國羅氏Cobase602電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。羅氏Cobase602電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀主要用于腫瘤標志物、激素、傳染病以及心肌損傷、貧血等80多種項目的檢測，采用了當今國際上先進的電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，具有快速、簡便、自動化程度高等特點。按照醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準則（ISO15189文件）對實驗室質(zhì)量的要求，實驗室必須對儀器的技術(shù)性能進行相關(guān)的評價，驗證的性能指標主要包括精密度、準確度、測量線性范圍和參考區(qū)間等[3]?，F(xiàn)就我科室羅氏CobasE602電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測定AFP（甲胎蛋白）進行性能驗證，報道如下。1材料與方法1.1.1樣本來源符合要求的本院（鎮(zhèn)江市第三人民醫(yī)院）門診和住院送檢標本。按照WS/T420—2013要求[4]，標本均為新鮮標本，且無溶血、無脂血。1.1.2儀器羅氏Cobase602電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。1.1.3試劑檢測試劑、校準品及質(zhì)控品均為羅氏診斷公司生產(chǎn)的配套產(chǎn)品。1.2方法1.2.1精密度評價實驗批內(nèi)精密度實驗選擇與儀器配套的兩個水平的質(zhì)控品TM1（高值，批號：171132），TM2（低值，批號171133），連續(xù)重復(fù)測定20次，分別計算其平均值（）、標準差（SD）和變異系數(shù)（CV）。批間精密度實驗將TM1和TM2兩個濃度的質(zhì)控品每天測定1次，連續(xù)測定20天，分別計算兩組均值（）、批間標準差（SD）和變異系數(shù)（CV）。1.2.2準確度評價實驗參加2017年6月江蘇省臨檢中心組織的室間質(zhì)量評價（EQA）活動，將臨檢中心發(fā)放的腫瘤標志室間質(zhì)評物（6個樣本）進行檢測。將檢測結(jié)果與臨檢中心提供的質(zhì)評物靶值進行比對，計算檢測值與靶值的相對偏倚（%）。1.2.3測量線性范圍評價實驗參照NCCISEP6-A[5]評價方案，選取臨床患者AFP高值血清（H）和低值血清（L）各一份，血清樣本濃度接近儀器給定的測量線性范圍，將H和L按5H，4H+L，3H+2L，2H+3L，H+4L及5L的比例混合成6個濃度樣品，每份樣品重復(fù)測定3次，計算其均值。以已知分析物濃度為X軸，測定均值為Y軸，用直線回歸統(tǒng)計方法對數(shù)據(jù)進行處理，得直線回歸方程：Y=bX+a。1.2.4參考區(qū)間評價實驗參考NCCLSC28-A2[6]文件要求進行驗證。選擇20份體檢合格的健康人體標本，在羅氏E602上進行測定，對結(jié)果進行統(tǒng)計并與儀器說明書提供的參考區(qū)間進行比較。若至少有95%的測量數(shù)據(jù)在推薦的參考區(qū)間內(nèi)，則驗證實驗通過；否則應(yīng)進行參考區(qū)間的確立實驗。1.2.5統(tǒng)計學(xué)分析采用Excel軟件進行統(tǒng)計分析。

結(jié)果2.1精密度評價對于AFPTM1、TM2兩個濃度的精密度評價實驗，批內(nèi)精密度評價，TM1的均值為1.97ng/mL，S為0.054，CV為2.74%；TM2的均值為155.12ng/mL，S為2.257，CV為1.46%；批間精密度評價，TM1的均值為1.95ng/mL，S為0.096，CV為4.92%；TM2的均值為156.32ng/mL，S為3.023，CV為1.93%。均符合ISO15189認可準則所制定的批內(nèi)精密度和批間精密度可接受范圍（均為≤10%）。同時也小于廠家說明書給定的允許范圍。（見表1）表1精密度實驗結(jié)果AFP批內(nèi)精密度批間精密度濃度（ng/mL）SCV（%）（ng/mL）SCV（%）TM11.970.0542.741.950.0964.92TM2155.122.2571.46156.323.0231.932.2準確度評價實驗結(jié)果通過表2可見，衛(wèi)生部臨床檢驗中心發(fā)放的6份室間質(zhì)評物AFP的檢測結(jié)果與靶值比較，相對偏倚在-0.46%~1.53%之間，評價結(jié)果均為“通過”，遠低于臨檢中心規(guī)定的偏倚±25%，也符合廠家要求<10%的標準，表明儀器檢測準確度高。表2準確度實驗結(jié)果樣本編號靶值/（ng/mL）檢測值/（ng/mL）相對偏倚/（%）17050188.589.010.58170502111112.71.5317050349.7249.65-0.1417050423.5123.530.09170505168.57169.50.5517050612.9612.9-0.462.3線性范圍評價結(jié)果選取高值血清樣本和低值血清樣本，按不同比例混合，配制成系列濃度血清，并進行雙份測定，結(jié)果（見表3）。將6個AFP檢測結(jié)果和已知樣本檢測結(jié)果做散點圖（見圖1），得到直線回歸方程Y=1.0003x-1.3787，R2=0.9995，根據(jù)指南中規(guī)定相關(guān)系數(shù)R2≥0.95，b值在0.97-1.03范圍內(nèi)，可觀察到兩者呈較好的線性相關(guān)，測定的分析范圍可作為真實的分析測量范圍。表3線性范圍評價結(jié)果單位：ng/mL第一次測量第二次測量均值（實測濃度）稀釋度1L2.392.402.402.400.8L+0.2H31.3332.1731.7534.520.6L+0.4H63.3766.2764.9766.640.4L+0.6H95.76100.3098.0398.760.2L+0.8H125.90129.90127.90130.881H159.70166.30163.00163.00實測濃度l)理論濃度（ng/mL）圖12.4參考區(qū)間評價實驗結(jié)果在本實驗中AFP的測量數(shù)值100%在廠家提供的參考區(qū)間內(nèi)，均符合要求，結(jié)果見表4。表4參考區(qū)間評價結(jié)果檢測項目廠家提供參考區(qū)間（ng/mL）符合人數(shù)比率AFP0-720100%

討論羅氏CobasE602電化學(xué)發(fā)光免疫分析采用當今世界較為先進的電化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)，該技術(shù)具有檢測速度快、重復(fù)性好以及試劑穩(wěn)定等優(yōu)勢，目前已被臨床廣泛應(yīng)用。E602擁有封閉的配套系統(tǒng)，儀器、程序、試劑、校準品、質(zhì)控品、配套耗材均由廠家提供，但是不同實驗室之間的條件有很大差異，往往導(dǎo)致檢驗結(jié)果的不統(tǒng)一，容易干擾臨床的準確判斷。因此，每個實驗室應(yīng)建立起各自的檢驗系統(tǒng)，建立規(guī)范化的長效的驗證機制，確保不同檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果的一致性和可靠性。本實驗驗證E602批內(nèi)精密度CV1.46-2.74%，批間精密度CV1.93-4.92%，均符合ISO15189認可準則要求，并在廠家說明書給定的允許范圍之內(nèi)，說明檢測系統(tǒng)重復(fù)性符合要求，精密度良好。本科室參加省臨檢中心組織的室間質(zhì)量評價活動，用其提供的質(zhì)控品進行準確度驗證。本實驗的6份室間質(zhì)控品的檢測結(jié)果與靶值的偏倚介于-0.46%~1.53%之間，均在允許范圍之內(nèi)，順利通過了室間質(zhì)量評價，表明檢測系統(tǒng)準確度性能符合要求。本實驗測試線性范圍，所得結(jié)果在坐標圖上呈現(xiàn)良好的線性趨勢。本實驗所得到的直線回歸方程Y=1.0003x-1.3787，R2=0.9995，對比指南中規(guī)定相關(guān)系數(shù)R2≥0.95，b值在0.97-1.03范圍內(nèi)，可觀察到兩者呈較好的線性相關(guān)。根據(jù)廠家提供的說明書，E602檢測AFP的測量線性范圍為0.605-1210ng/mL，在此范圍內(nèi)測定的分析范圍可作為真實的分析測量范圍。本實驗按照NCCLSC28-A2文件要求，在儀器在控狀態(tài)下，對AFP的參考區(qū)間進行驗證，結(jié)果為AFP有100%的測量數(shù)據(jù)在推薦參考區(qū)間內(nèi)，大于95%的文件要求，故可直接引用廠家提供的參考區(qū)間。綜上所述，羅氏CobasE602電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測AFP的方法學(xué)性能良好，能夠為臨床提供可靠的檢驗結(jié)果，滿足臨床檢測的性能要求。參考文獻：[1]張保平，董莉，馮新平，等.雅培ARCHITECTI2000化學(xué)發(fā)光儀測定6種腫瘤標記物項目的方法學(xué)性能評價[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2011,32（4）：488-490.ZhangBP,DongL,FengXP,etal.PropertyappraisalofAbbottARCHITECTlum-inousinstrumentI2000chemicaldeterminationof6tumormarkers[J].Int-ernationalJournalofMedicalLaboratory,2011,32(4):488-490[2]畢波，呂元。定量檢測方法學(xué)性能驗證的系統(tǒng)設(shè)計[J]。中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2007,30（2）：143-145.BiB,LuY.Anappropriatedesignofmethodperformancevalidatonforquant-Itativetests[J].ClinJLabMed,2007,30(2):143-145.[3]楊振華.臨床（醫(yī)學(xué)）實驗室質(zhì)量管理——ISO15189[J].臨床檢驗雜志，2002,20（8）：2079-2084.[4]《臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》WS/T420-2013.[5]NCCLS.EP6-AEvaluationoftheLinearityofquantitativemeasurementProcedures.Statistecalapprovedguideline[S].PA:NCCLS,2003.[6]NCCLS.C28-A2.Howtodefineandrefernceintervalsintheclinicallab-Oratory[M].Wayne,PA,USA:NCCLS,2000.[7]黃湘寧，鄭春蘇，Rochecobase411全自動化學(xué)發(fā)光分析性能評價[J].檢