無(wú)菌制劑工藝

培訓(xùn)

無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)一、無(wú)菌制劑對(duì)廠房設(shè)施及設(shè)備要求對(duì)無(wú)菌工藝制劑的潔凈區(qū)必須有監(jiān)控微粒和微生物的設(shè)施；其潔凈廠房在使用前必須進(jìn)行靜態(tài)測(cè)試合格，否則認(rèn)為驗(yàn)收不合格；其潔凈廠房的潔凈級(jí)別劃分必須以動(dòng)態(tài)條件下測(cè)試的數(shù)據(jù)為準(zhǔn)；必須用日常的動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)監(jiān)控證明其潔凈級(jí)別始終如一。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)1.GMP對(duì)潔凈級(jí)別的劃分潔凈級(jí)別

顆粒度(≥0.5um/m3

)

懸浮菌（cfu/m3)沉降菌Φ90mm培養(yǎng)皿cfu/4h100352011100035200731000035200010510000010050無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)2.關(guān)鍵區(qū)域的控制關(guān)鍵區(qū)域：無(wú)菌藥物和容器及密封件所暴露的環(huán)境區(qū)域，這個(gè)區(qū)域必須可以維持產(chǎn)品在無(wú)菌的狀態(tài)（如無(wú)菌過(guò)濾和無(wú)菌灌封）。關(guān)鍵區(qū)域的操作活動(dòng)包括：灌裝和封口之前及過(guò)程中的無(wú)菌物料的操作，如無(wú)菌連接和無(wú)菌組分的添加。無(wú)菌區(qū)域必須控制≥0.5um的顆粒，在使用后必須在動(dòng)態(tài)測(cè)試下符合100級(jí)要求。動(dòng)態(tài)檢測(cè)時(shí)的檢測(cè)距離為在氣流范圍內(nèi)離操作區(qū)≤1英尺（0.3048m）塵埃粒子計(jì)數(shù)器的放置和采樣口的朝向必須合理，以獲得有效的樣品。對(duì)于高效空氣過(guò)濾器安裝在房間頂棚上的潔凈區(qū)，其塵埃粒子計(jì)數(shù)器應(yīng)放在離地0.7～1m處，采樣口朝上。）日常生產(chǎn)每班都應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌區(qū)顆粒度的監(jiān)測(cè)。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)采用動(dòng)態(tài)條件下操作前的顆粒水平來(lái)判定有否外源性顆粒污染。采用能維持單向流的高效空氣清除關(guān)鍵區(qū)域的顆粒。應(yīng)控制區(qū)域中的紊流和靜置空氣的產(chǎn)生，因?yàn)樗鼈優(yōu)榭諝馕廴咎峁┝饲?。有完整的測(cè)試記錄來(lái)分析證明其空氣流是否為單向.關(guān)鍵區(qū)域的空氣監(jiān)測(cè)結(jié)果是最終沒(méi)有微生物的污染，如果發(fā)生則應(yīng)高度重視并調(diào)查。3.支持區(qū)域的控制支持區(qū)域的定義：用于制備、貯存或轉(zhuǎn)移非無(wú)菌組分、配方產(chǎn)品、中控物質(zhì)、設(shè)備、容器密封件的區(qū)域。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)4.潔凈區(qū)的隔離預(yù)防污染的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)在于對(duì)不同操作區(qū)域間的有效隔離，應(yīng)確保潔凈區(qū)的空氣流以合適方式從高級(jí)別區(qū)流向相鄰的低級(jí)別區(qū)。在高級(jí)別區(qū)和低級(jí)別區(qū)之間應(yīng)至少保持5Pa的正壓差。進(jìn)入無(wú)菌工藝操作間的更衣室和緩沖間的潔凈級(jí)別應(yīng)與無(wú)菌操作間的潔凈級(jí)別一致。無(wú)菌操作間與其鄰近的無(wú)任何潔凈級(jí)別要求的房間必須始終保持≥10Pa的正壓差來(lái)防止污染。如果壓差低于設(shè)定的最低限值，必須對(duì)無(wú)菌操作間的環(huán)境質(zhì)量進(jìn)行修復(fù)和再確認(rèn)。對(duì)于低壓差的發(fā)生應(yīng)有報(bào)警裝置進(jìn)行監(jiān)控。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)5.對(duì)過(guò)濾器的要求5.1對(duì)氣體和液體過(guò)濾器的要求常用氣體過(guò)濾的－－疏水性材料－－PTFE（聚四氟乙烯），使用中必須干燥（應(yīng)防冷凝水的堵塞和微生物的生長(zhǎng)）。常用藥液過(guò)濾的－－親水性材料－－聚砜常用注射劑用水過(guò)濾的－－親水性材料－－PVDF（聚偏二氟乙烯）。用于無(wú)菌產(chǎn)品的過(guò)濾器應(yīng)進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)、無(wú)菌過(guò)濾性能試驗(yàn)和完整性（起泡點(diǎn)）試驗(yàn)（使用前后）。無(wú)菌用過(guò)濾器對(duì)數(shù)細(xì)菌減少量應(yīng)＞7。過(guò)濾器必須進(jìn)行周期性更換。在對(duì)無(wú)菌藥液過(guò)濾器的驗(yàn)證中除了完成上述三項(xiàng)試驗(yàn)外，還應(yīng)對(duì)過(guò)濾器的溶出物檢查、過(guò)濾器的清潔度檢查及與藥液適應(yīng)性試驗(yàn)。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)5.2對(duì)HEPA（高效空氣過(guò)濾器）的要求HEPA的完整性必須維持無(wú)菌的生產(chǎn)條件，在安裝時(shí)必須做檢漏測(cè)試。檢測(cè)位置：邊框、濾器表面。檢漏方法：DOP氣溶膠法和PAO氣溶膠法（

DOP－鄰苯二甲酸二辛脂、PAO－聚α烯烴）（DOP法因?yàn)橛型蛔冃裕F(xiàn)國(guó)外已全部改用PAO作為氣溶膠煙霧劑）。取樣速度和距離：每分鐘1立方英尺(0.0283m3/min－－中國(guó)驗(yàn)證指南的取樣速度為3～5cm/s)，氣溶膠光度計(jì)的取樣口應(yīng)離濾器和邊框表面約1～2英寸（0.0254m～0.0508m－－中國(guó)驗(yàn)證指南的距離為2～4cm）。要排除替代的煙霧劑對(duì)HEPA造成微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)HEPA的過(guò)濾效率應(yīng)能夠截留99.97%的大于0.33um的顆粒。無(wú)菌工藝的HEPA檢漏應(yīng)有適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔確認(rèn)，每年最少檢查2次。當(dāng)空氣潔凈度不合格或可能引起墻壁或屋頂結(jié)構(gòu)變化的設(shè)施翻修或培養(yǎng)基灌裝失敗或藥物無(wú)菌測(cè)試失敗時(shí)，必須加做額外的檢漏測(cè)試。HEPA檢漏測(cè)試必須有完整的書面記錄備查，一旦發(fā)現(xiàn)氣溶膠光度計(jì)的讀數(shù)≥0.01%時(shí)表明有泄漏，應(yīng)及時(shí)更換或維修，更換維修后必須重新測(cè)試。通過(guò)HEPA過(guò)濾器的空氣速度均一性的周期性確認(rèn)非常重要，其速度的變化會(huì)造成紊流而增加污染的風(fēng)險(xiǎn)。其單向氣流速度的測(cè)定必須于距離過(guò)濾器表面約6英寸（15.24cm）處進(jìn)行測(cè)試，或是在無(wú)菌操作關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)過(guò)濾器工作表面中心的確定距離內(nèi)測(cè)定。如果檢測(cè)為非單向氣流或是有副作用的氣流模式，都必須更換HEPA。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)

網(wǎng)框的間隙（無(wú)空氣滯留）

無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)6.對(duì)潔凈區(qū)整體設(shè)計(jì)的要求總則：無(wú)菌工藝要求盡可能的減少潛在的污染。必須控制產(chǎn)品暴露的時(shí)限，提供最高級(jí)別的環(huán)境控制，優(yōu)化工藝路線和防止低質(zhì)量空氣進(jìn)入百級(jí)的設(shè)備設(shè)計(jì)都是高度無(wú)菌確認(rèn)的關(guān)鍵。－優(yōu)化人流物流，防止無(wú)必要的活動(dòng)發(fā)生；－設(shè)備的布局必須符合人體工程學(xué)的要求，優(yōu)化操作工的操作；－必須盡可能的減少操作工人數(shù)；－人流的設(shè)計(jì)必須盡可能限制人員進(jìn)出無(wú)菌工藝間的頻率；－必須盡量減少關(guān)鍵區(qū)域和一般潔凈區(qū)域或隔離器之間的傳遞次數(shù)；－必須限制在關(guān)鍵區(qū)域旁的活動(dòng)，以防止低質(zhì)量空氣的引入。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)無(wú)菌工藝中所用的設(shè)備必須有適當(dāng)?shù)脑O(shè)計(jì)防止人為增加污染的危險(xiǎn)因素。如：使用在線稱量裝置可減少重復(fù)的手動(dòng)操作，工藝路線的自動(dòng)化操作可降低產(chǎn)品污染的風(fēng)險(xiǎn)。產(chǎn)品必須在合適的潔凈級(jí)別下進(jìn)行轉(zhuǎn)移。例如：凍干工藝的半壓塞產(chǎn)品只能在關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)轉(zhuǎn)移，設(shè)施設(shè)計(jì)必須確保灌裝生產(chǎn)線和凍干機(jī)在百級(jí)保護(hù)下，轉(zhuǎn)移和御載操作也必須受到相同級(jí)別的保護(hù)。如果無(wú)菌工藝區(qū)或軋蓋前房間內(nèi)有帶塞小瓶（即未軋蓋的產(chǎn)品），必須有局部保護(hù)措施防止產(chǎn)品受到污染。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)必須仔細(xì)定義和控制各房間之間的動(dòng)態(tài)過(guò)程?？梢允褂秒p門或集成滅菌器確保低級(jí)別區(qū)到高級(jí)別區(qū)的正確合適的直接物流；使用氣閘室和聯(lián)鎖門控制無(wú)菌工藝設(shè)施內(nèi)空氣壓力，無(wú)菌制造區(qū)域入口處和其他無(wú)級(jí)別區(qū)的鄰近處必須設(shè)氣閘室；當(dāng)人員和物料從低級(jí)別區(qū)域進(jìn)入高級(jí)別區(qū)時(shí)應(yīng)嚴(yán)格采取措施防止污染（如必要的洗手消毒、更衣、物料的滅菌等規(guī)程）。建造潔凈區(qū)的材料必須容易清洗和消毒，如無(wú)縫和弧形設(shè)計(jì)的墻角、平整堅(jiān)硬的頂棚/墻壁/地板、不藏塵HEPA框架等。工藝設(shè)備和系統(tǒng)必須配備衛(wèi)生裝置和閥門。無(wú)菌工藝操作間內(nèi)應(yīng)不設(shè)下水道（地漏），如果不可避免，那么任何這樣的設(shè)施都必須有設(shè)計(jì)說(shuō)明。設(shè)備應(yīng)便于安裝拆御和無(wú)菌處理；不阻礙潔凈區(qū)氣流，在關(guān)鍵區(qū)不得打亂單向氣流；對(duì)潔凈區(qū)環(huán)境的影響必須有足夠的說(shuō)明；沒(méi)有積累顆粒的水平表面和突起部位。因非正常情況導(dǎo)致的空氣系統(tǒng)或其他設(shè)施的停機(jī)，以及建造活動(dòng)對(duì)設(shè)施的影響等必須在偏差和變更控制系統(tǒng)中加以說(shuō)明解釋，必須有書面的程序說(shuō)明在停機(jī)后如何恢復(fù)正常運(yùn)行。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)圖例：1）.無(wú)菌操作的微生物污染控制無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)圖例2）.環(huán)境區(qū)域劃分和正確的更衣事例無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)三、人員要求3.1操作人員質(zhì)量部門必須為制造操作提供常規(guī)的監(jiān)督以確保操作人員的無(wú)菌操作始終符合已建立的書面規(guī)程。任何人在進(jìn)入無(wú)菌操作區(qū)前必須接受如下培訓(xùn)內(nèi)容的培訓(xùn)：消毒技術(shù)和更衣操作；微生物學(xué)和衛(wèi)生學(xué)；精制包裝行為準(zhǔn)則；非無(wú)菌藥物造成的病人安全性危害；無(wú)菌制造區(qū)域內(nèi)的所有書面操作規(guī)程等。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)維持無(wú)菌物品和表面無(wú)菌狀態(tài)的人員操作技術(shù)有：只使用無(wú)菌器具接觸無(wú)菌物料，為防止物料間的交叉污染，應(yīng)根據(jù)需要及時(shí)更換無(wú)菌器具；在更衣后無(wú)菌手套必須經(jīng)常消毒或更換，應(yīng)避免將衣物和手套直接接觸無(wú)菌產(chǎn)品和容器；人員的移動(dòng)必須緩慢，必須有目的的移動(dòng)，應(yīng)避免因漫無(wú)目的的移動(dòng)而造成的單向氣流混亂；為避免無(wú)菌產(chǎn)品受污染，應(yīng)確保操作人員的身體處于單向氣流之外；操作人員進(jìn)行的必需的無(wú)菌操作不得危害產(chǎn)品的無(wú)菌性，應(yīng)避免垂直操作打亂單向氣流，應(yīng)避免在關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)說(shuō)話；（通常從側(cè)面的操作可以確保無(wú)菌產(chǎn)品周期的無(wú)菌條件）。無(wú)菌操作之前和整個(gè)過(guò)程中必須避免著裝的意外污染（著裝的維持和控制）。只有有資歷的人員，穿合適的著裝方可允許進(jìn)入無(wú)菌操作區(qū)。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)工作服必須進(jìn)行消毒處理，且不得有絲織物脫落；著裝（包括：面罩、面具、胡罩、防護(hù)眼鏡和彈性手套）必須能夠覆蓋所有的皮膚和毛發(fā)，一旦發(fā)現(xiàn)著裝有損壞必須立即更換。操作人員調(diào)任其他崗位應(yīng)經(jīng)過(guò)再培訓(xùn)和取得上崗資格。3.2實(shí)驗(yàn)室人員無(wú)菌技術(shù)和無(wú)菌制造人員的要求同樣適用于進(jìn)行無(wú)菌取樣和微生物測(cè)試的實(shí)驗(yàn)室人員。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)3.3人員的監(jiān)控程序操作人員是嚴(yán)重影響無(wú)菌產(chǎn)品的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，必須建立高度預(yù)警且靈敏的人員監(jiān)控程序。可通過(guò)獲得每天每個(gè)操作工手套的表面樣品，或者是每批生產(chǎn)的相關(guān)樣品來(lái)建立監(jiān)控程序。監(jiān)控樣品還應(yīng)包括衣物上合理部分的合適取樣頻率下獲得的樣品。對(duì)無(wú)菌操作人員的監(jiān)控目標(biāo)是始終維持在操作過(guò)程中保持手套和衣物的無(wú)污染狀態(tài)，單單取操作前的滅菌手套是不夠的，因?yàn)樵诤罄m(xù)的操作中微生物會(huì)重新繁殖。一旦操作工表面微生物超過(guò)建立的規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)或是顯示出不利的趨勢(shì)，必須立即進(jìn)行調(diào)查。后續(xù)采取的措施應(yīng)包括增加取樣、增加觀測(cè)、重新培訓(xùn)、再確認(rèn)著裝程序、特殊情況下的人員重新調(diào)整。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)四、對(duì)組分和密封件的要求4.1組分

無(wú)菌產(chǎn)品組分包括活性成分、注射用水和其他輔料。如果使用了一個(gè)或多個(gè)含有微生物或細(xì)菌內(nèi)毒素的組分，則產(chǎn)品會(huì)被污染，因此對(duì)這些組分中的微生物載量和內(nèi)毒素指標(biāo)的確認(rèn)及建立合適的可接受限度非常重要。非腸道產(chǎn)品要求無(wú)熱原，因此必須有書面的規(guī)程和的規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)來(lái)規(guī)定產(chǎn)品中每個(gè)組分的細(xì)菌內(nèi)毒素可接受標(biāo)準(zhǔn)，任何細(xì)菌內(nèi)毒素不合格的組分都必須拒不使用。無(wú)菌制劑的組分通常單個(gè)滅菌或是多個(gè)組分混合后的混合物滅菌。常用的方法是將組分溶于溶劑中再于無(wú)菌條件下進(jìn)行除菌過(guò)濾，或是將各組分分別溶解后單獨(dú)無(wú)菌過(guò)濾最后進(jìn)行無(wú)菌混合（此法適用于組分混合后最終產(chǎn)生大分子的混懸針劑）。過(guò)濾的藥液再進(jìn)行灌封或無(wú)菌結(jié)晶或凍干成粉末。對(duì)熱穩(wěn)定而又不溶解的組分可采用干熱滅菌的方式。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)4.2容器/密封件制備非腸道產(chǎn)品所使用的容器具/密封件必須無(wú)菌、無(wú)熱原，其滅菌方法必須符合它們的材質(zhì)性質(zhì)，其滅菌的有效性必須進(jìn)行驗(yàn)證證明。對(duì)其滅菌后可保持無(wú)菌無(wú)熱原的時(shí)間限度和再驗(yàn)證周期必須有書面的規(guī)定。無(wú)菌制劑產(chǎn)品的容器具/密封件清洗的最后一道清洗劑必須是符合《中國(guó)藥典》2010年版質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的注射用水。評(píng)詁去熱原工藝的有效性方法：向容器/密封件中添加已知量的細(xì)菌內(nèi)毒素，然后去熱原處理，再測(cè)定其殘留的熱原量，同時(shí)使用陽(yáng)對(duì)照的方法計(jì)算細(xì)菌內(nèi)毒素的回收率。驗(yàn)證研究數(shù)據(jù)必須證明采用的方法可以將細(xì)菌內(nèi)毒素降低至

99.9%（3Logs）。對(duì)玻璃容器一般采用干熱方法滅菌和除熱原，對(duì)此滅菌方法的驗(yàn)證必須包括熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)和使用最短的消毒時(shí)間。容器的放置必須與實(shí)際生產(chǎn)相一致。非腸道制劑所使用的塑料容器也必須是無(wú)熱原的。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)橡膠密封件（膠塞和注射器活塞）在進(jìn)行純蒸汽滅菌前的最初清洗水至少使用符合《中國(guó)藥典》2010年版標(biāo)準(zhǔn)的純化水，最后沖洗水必須是注射用水。使用熱注射用水多次沖洗可以達(dá)到去除熱原的目的。為防止微生物滋生的污染，橡膠密封件滅菌后必須徹底干燥，其含水量應(yīng)符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)清洗滅菌的過(guò)程必須進(jìn)行驗(yàn)證，以確認(rèn)這些物料上的內(nèi)毒素被完全去除。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)微生物能夠穿透的密封件不適合無(wú)菌產(chǎn)品的生產(chǎn)。對(duì)最后分裝好的產(chǎn)品的檢查中發(fā)現(xiàn)任何被破壞或有缺陷的單個(gè)容器必須檢出并被銷毀。設(shè)備適用性問(wèn)題或購(gòu)入的容器/密封件質(zhì)量缺陷都會(huì)造成容器密封系統(tǒng)的不完整，如果危害是由于沒(méi)有及時(shí)檢出而造成的完整性破壞，必須立即改善這些系統(tǒng)。遞送裝置（如灌注裝置）的功能缺陷，使遞送的體積不一致，同樣可以導(dǎo)至產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題，必須采用合適的中控方法進(jìn)行監(jiān)控。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)五、對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的控制注射產(chǎn)品的細(xì)菌內(nèi)毒素污染是不好的GMP控制造成的。藥物成分、容器/密封件、儲(chǔ)存時(shí)間限制和制造設(shè)備都應(yīng)在細(xì)菌內(nèi)毒素的控制范圍內(nèi)。設(shè)備的充分清洗、干燥和保存可以控制微生物的載量，防止細(xì)菌內(nèi)毒素的載量增加。設(shè)備必須設(shè)計(jì)成容易拆御/裝配/清洗/消毒或滅菌。如果沒(méi)有足夠的控制方法，產(chǎn)品中的細(xì)菌內(nèi)毒素將會(huì)由上游的設(shè)備而增加。無(wú)菌級(jí)別的過(guò)濾器和濕熱滅菌不能夠有效的去除細(xì)菌內(nèi)毒素。對(duì)設(shè)備內(nèi)表面的細(xì)菌內(nèi)毒素可以采用高溫干熱滅活，或采用清洗程序去除細(xì)菌內(nèi)毒素。一些CIP規(guī)程可以先使用合適的高純水或洗滌劑（如稀酸稀堿、表面活性劑）初洗，最后用熱的注射用水沖洗。清洗滅菌的設(shè)備除非立即進(jìn)入無(wú)菌操作的過(guò)程中，否則在清洗后必須進(jìn)行干燥。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)六、生產(chǎn)時(shí)間限制無(wú)菌工藝的每步操作都最好設(shè)定時(shí)間限制；時(shí)間限制必須包括：大批量產(chǎn)品的配制和滅菌時(shí)間間隔、過(guò)濾工藝時(shí)間間隔、產(chǎn)品暴露在生產(chǎn)線上的時(shí)間間隔、無(wú)菌設(shè)備/容器/密封件的保存時(shí)間限制等。不同產(chǎn)品生產(chǎn)環(huán)節(jié)的時(shí)間限制的建立必須有數(shù)據(jù)支持。生物載量和細(xì)菌內(nèi)毒素載量必須在建立配方加工階段的時(shí)間限制的時(shí)候進(jìn)行評(píng)詁。產(chǎn)品過(guò)濾的總時(shí)間必須建立，以防止微生物穿過(guò)過(guò)濾器。這個(gè)時(shí)間限制也可以防止上游的生物載量和細(xì)菌內(nèi)毒素載量的增加。如果過(guò)濾器可以提供微生物吸附的基底，必須確定和合理解釋其最多的使用次數(shù)。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)七、對(duì)無(wú)菌工藝和滅菌方法驗(yàn)證7.1模擬無(wú)菌工藝研究7.1.1研究方法的設(shè)計(jì)為確保產(chǎn)品無(wú)菌，應(yīng)對(duì)其無(wú)菌灌裝和封口操作及滅菌方法進(jìn)行驗(yàn)證，必須進(jìn)行“培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)”－－用培養(yǎng)基替代產(chǎn)品模擬整個(gè)工藝過(guò)程（包括生產(chǎn)環(huán)境），確認(rèn)培養(yǎng)基是否在工藝過(guò)程中被污染。原則：綜合考慮生產(chǎn)線上所有潛在的污染源，評(píng)詁工藝控制的有效性，考慮最差的情景模擬，挑戰(zhàn)極端的環(huán)境等。必須有完整的批記錄，環(huán)境監(jiān)控記錄等支持這樣的模擬研究，必須書面定義條件的選擇原因。研究設(shè)計(jì)應(yīng)考慮的要素：生產(chǎn)線允許的最長(zhǎng)時(shí)間范圍，可造成潛在污染的相關(guān)因素；人員數(shù)量及操作活動(dòng)；無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)每次運(yùn)行中的常規(guī)中斷操作次數(shù)、類別和復(fù)雜程度以及非常規(guī)的中斷操作和干擾事件（如維護(hù)、停產(chǎn)、設(shè)備調(diào)整）；設(shè)備的無(wú)菌裝配；無(wú)菌分裝和凍干過(guò)程；有代表性的無(wú)菌加料和轉(zhuǎn)移操作的次數(shù)；班次變化、中途休息和合適的更衣次數(shù)；無(wú)菌設(shè)備連接/斷開(kāi)的類別；無(wú)菌取樣操作；生產(chǎn)線速度和構(gòu)造；稱重；容器密封系統(tǒng)（如大小、類別、設(shè)備兼容性）；書面規(guī)程中的無(wú)菌工藝相關(guān)的特殊限定（如CIP指令前的環(huán)境要求）無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)7.1.2模擬研究運(yùn)行次數(shù)和頻率：在最初的確認(rèn)時(shí)，至少應(yīng)進(jìn)行三次連續(xù)且獨(dú)立的模擬。日常每半年重復(fù)一次，以評(píng)詁其控制能力；每班的代表性活動(dòng)和中斷操作、換班都必須在半年確認(rèn)程序中涵蓋；所有被授權(quán)進(jìn)入無(wú)菌工藝間的人員（包括技術(shù)工人和設(shè)備維修人員），都必須每年至少參加一次無(wú)菌灌裝測(cè)試，參加者的操作都必須和其日常工作相一致；每次產(chǎn)品或生產(chǎn)線的變化都必須有書面的變更控制系統(tǒng)評(píng)詁。任何可能影響無(wú)菌工藝性能的變更或事件都必須增加額外的培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)來(lái)評(píng)詁。如設(shè)備設(shè)施的改變、生產(chǎn)線構(gòu)造的變化、人員重大變化、環(huán)境監(jiān)控結(jié)果的異常、容器密封系統(tǒng)的變更、延期的關(guān)機(jī)或最終成品無(wú)菌檢查顯示產(chǎn)品被污染等都可引發(fā)對(duì)系統(tǒng)的再驗(yàn)證；如果灌裝試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明工藝不受控，必須對(duì)污染的起原和問(wèn)題涉及面進(jìn)行調(diào)查。制定了整改措施，就必須進(jìn)行模擬試驗(yàn)以確認(rèn)缺陷已經(jīng)被修復(fù)，工藝已回到了受控狀態(tài)。當(dāng)調(diào)查得不出有說(shuō)服力的結(jié)論時(shí)，在加強(qiáng)監(jiān)控的前提下連續(xù)進(jìn)行三次成功的生產(chǎn)就可以了。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)7.1.3模擬研究運(yùn)行持續(xù)時(shí)間以最大批量和運(yùn)行時(shí)間基礎(chǔ)上灌裝試驗(yàn)是最真實(shí)的模型，若采用任何其他的合適模型都必須進(jìn)行合理的解釋。灌裝試驗(yàn)的運(yùn)行持續(xù)時(shí)間必須考慮實(shí)際操作時(shí)間和中斷操作的時(shí)間。一般性發(fā)生的中斷操作必須在日常模擬中涵蓋，那些不經(jīng)常發(fā)生的中斷操作可在周期性的模擬中確認(rèn)。如果無(wú)菌工藝中有一定操作工的手工操作，在模擬工藝中此類操作持續(xù)的時(shí)間不得少于實(shí)際的制造工藝時(shí)間，以盡可能的模擬由于操作工所引入的潛在污染風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于凍干操作，建議使用不封閉的容器暴露在部分抽空的設(shè)備內(nèi)來(lái)模擬正常工藝，不需冷凍產(chǎn)品，必須小心操作確保培養(yǎng)基處于有氧狀態(tài)，以避免抑制潛在的微生物生長(zhǎng)。7.1.4模擬研究生產(chǎn)線速度培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)程序必須充分解釋生產(chǎn)期間的生產(chǎn)線速度范圍，每次培養(yǎng)基灌裝操作必須評(píng)詁一個(gè)生產(chǎn)線速度，必須對(duì)選擇的速度進(jìn)行合理的解釋。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)7.1.5模擬研究環(huán)境條件：培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)必須在足以代表實(shí)際的生產(chǎn)環(huán)境下進(jìn)行。人為特別控制條件下的灌裝將導(dǎo)致不正確的評(píng)詁。在SOP允許的“壓力條件”（如最大工人數(shù)和提高的運(yùn)行水平）內(nèi)，灌裝試驗(yàn)涵蓋這些挑戰(zhàn)是非常重要的，也支持了這些研究的有效性，此所謂的“壓力條件”不包括人為制造的極端環(huán)境條件（如將HVAC系統(tǒng)調(diào)整為最差條件）。7.1.6模擬研究的培養(yǎng)基要求：一般情況選用大豆酪蛋白消化液培養(yǎng)基，特殊情況選用厭氧菌培養(yǎng)基（硫代硫酸鹽培養(yǎng)基）。選擇的培養(yǎng)基必須證明能夠促進(jìn)G＋、G－、酵母菌和霉菌的生長(zhǎng)。環(huán)境監(jiān)控和無(wú)菌測(cè)試的菌種必須用于促生長(zhǎng)的挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，菌種的接種單位必須<100CFU。如果促生長(zhǎng)試驗(yàn)失敗，模擬試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的任何污染的來(lái)源應(yīng)進(jìn)行調(diào)查，培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)必須立刻重新進(jìn)行。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)每個(gè)單元都必須灌入合適數(shù)量和類別的培養(yǎng)基，并確保其接觸到容器的內(nèi)部（倒置或旋轉(zhuǎn)），以便目測(cè)觀察微生物的生長(zhǎng)。灌裝完成后進(jìn)行外觀檢查，所有完好的單元必須立即進(jìn)行培養(yǎng)，有完整性缺陷（如無(wú)塞/破瓶等）的必須拋棄。培養(yǎng)基單元必須在足以檢測(cè)到最難生長(zhǎng)的微生物條件下培養(yǎng)，根據(jù)以下選定培養(yǎng)條件：－－培養(yǎng)溫度必須符合生物載量和環(huán)境中菌種的生長(zhǎng)，一般不超過(guò)20~35℃（通常菌種都有規(guī)定的培養(yǎng)溫度范圍），培養(yǎng)時(shí)必須維持在目標(biāo)溫度的±2.5℃內(nèi)；－－培養(yǎng)的時(shí)間不得少于14天，如果灌裝的培養(yǎng)基連續(xù)使用兩個(gè)溫度點(diǎn)培養(yǎng)，則每個(gè)單元在每個(gè)溫度的培養(yǎng)時(shí)間不得少于7天；無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)培養(yǎng)過(guò)后任何被破壞的單元必須和灌裝過(guò)程中損壞的單元一起計(jì)數(shù)，從最終計(jì)數(shù)中排除這些單元的決定都必須全面解釋，并在培養(yǎng)基灌裝報(bào)告中作為偏差解釋。如果發(fā)現(xiàn)在很難檢測(cè)損壞與微生物污染之間有必然的聯(lián)系，必須進(jìn)行完整的調(diào)查來(lái)查明原因。如果書面程序和批記錄中描述了在培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中可以被移出的單元或清除率，則這些被移出的單元不必進(jìn)行培養(yǎng)。為收率和物料平衡建立合適的可接收標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基灌裝記錄的物料平衡記錄必須包括每批的總數(shù)目以及詳細(xì)描述拒收單元的情況。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)7.1.7模擬研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋：工藝模擬的運(yùn)行必須在QC部門的監(jiān)控下進(jìn)行，污染單元的數(shù)量必須和灌裝試驗(yàn)?zāi)M的時(shí)間和活動(dòng)相一致。任何被污染的單元都被認(rèn)為是不好的且需要調(diào)查的。相關(guān)的染菌必須調(diào)查污染的可能原因。無(wú)論灌裝運(yùn)行批量多大，只要模擬運(yùn)行中發(fā)現(xiàn)了污染，就必須認(rèn)為存在著潛在的無(wú)菌保證問(wèn)題。灌裝試驗(yàn)的總數(shù)和被污染的數(shù)目沒(méi)有直接比例關(guān)系。測(cè)試結(jié)果必須可靠且可以重復(fù)的表明無(wú)菌工藝操作生產(chǎn)的產(chǎn)品是無(wú)菌的。在合理設(shè)計(jì)的設(shè)施內(nèi)的無(wú)菌工藝操作被證明可以達(dá)到零污染率，且一般不會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)被污染。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)

推薦的可接受標(biāo)準(zhǔn)：

對(duì)于任何批量的大小，灌裝試驗(yàn)中間斷的發(fā)生微生物污染應(yīng)意味著存在低級(jí)別的污染問(wèn)題，是必須調(diào)查的。對(duì)于一條生產(chǎn)線上重復(fù)發(fā)生試驗(yàn)污染事故，無(wú)論是否符合接受標(biāo)準(zhǔn)，都是一個(gè)信號(hào)表明無(wú)菌工藝生產(chǎn)線的不好趨勢(shì)，必須確認(rèn)問(wèn)題、改正和再驗(yàn)證。模擬灌裝試驗(yàn)的可接受標(biāo)準(zhǔn)允許有少量的污染，這并不意味著無(wú)菌產(chǎn)品的批號(hào)中可以存在著非無(wú)菌單元灌裝數(shù)量可接受污染量處理措施﹤5000瓶0調(diào)查后重新驗(yàn)證5000~100001調(diào)查，必要時(shí)重新驗(yàn)證2調(diào)查后重新驗(yàn)證﹥100001調(diào)查2調(diào)查后重新驗(yàn)證無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)7.2過(guò)濾效率過(guò)濾是藥品溶液無(wú)菌處理的常用方法。無(wú)菌級(jí)過(guò)濾器必須驗(yàn)證可以從工藝流中重復(fù)去除活的微生物來(lái)獲得無(wú)菌液體。無(wú)菌過(guò)濾器的孔徑應(yīng)≤0.2um，可以使用一級(jí)或多級(jí)過(guò)濾器。無(wú)菌過(guò)濾驗(yàn)證中必須包括模擬最差生產(chǎn)條件下的微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)和過(guò)濾器完整性測(cè)試。應(yīng)選擇代表最差情況的生物指示菌評(píng)詁其去生物載量的能力，微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)常用的指示菌為缺陷假小單胞菌（PseudomonasdiminutaATCC19146)，它的直徑為0.3um。滅菌前產(chǎn)品的生物載量必須檢測(cè)以確定潛在污染微生物的趨勢(shì)特征。挑戰(zhàn)試驗(yàn)所需生物指示菌的濃度至少為107CFU/cm2

（則驗(yàn)證所需指示菌數(shù)量＝過(guò)濾器濾膜有效表面積×107CFU/cm2

），使用此濃度的目的是為實(shí)際生產(chǎn)提供一個(gè)安全界限。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)

因?yàn)檫^(guò)濾器膜上通常有些孔徑比一般孔徑要大，有可以使微生物通過(guò)的風(fēng)險(xiǎn)，此風(fēng)險(xiǎn)隨微生物數(shù)量的增加而增大，因此挑戰(zhàn)試驗(yàn)的微生物數(shù)量非常重要。直接在產(chǎn)品中使用生物指示菌過(guò)濾并培養(yǎng)，雖然是最好的方法，但是如果藥物本身具有抗菌作用或是在油性配方中則會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。只要有充分的理由，過(guò)濾器對(duì)藥物制劑配方的有效性可以使用合適的替代方法來(lái)評(píng)詁，但替代產(chǎn)品不能含有抗菌成分，且模擬的工藝和生產(chǎn)條件必須相同。任何使用與實(shí)際產(chǎn)品及工藝條件的模擬物所產(chǎn)生的任何分歧都必須進(jìn)行合理的解釋。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)可以影響過(guò)濾器性能的因素包括：被過(guò)濾物質(zhì)的黏度和表面張力；PH值；被過(guò)濾物質(zhì)或配方組分和過(guò)濾器的相容性；過(guò)濾壓力；過(guò)濾速度；最大使用時(shí)間；過(guò)濾溫度；滲透性（重量滲透濃度表示）；過(guò)濾器被驗(yàn)證通過(guò)后，就必須保證實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中使用相同類別的過(guò)濾器。無(wú)菌過(guò)濾器必須在每批生產(chǎn)后更換，對(duì)那此可以重復(fù)使用的情況必須進(jìn)行合理解釋，其無(wú)菌過(guò)濾驗(yàn)證必須包括最大的可處理的批數(shù)。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)無(wú)菌過(guò)濾器應(yīng)進(jìn)行完整性測(cè)試，其測(cè)試必須在過(guò)濾工藝開(kāi)始前和結(jié)束后均應(yīng)進(jìn)行，以確認(rèn)其使用前和使用后是否有泄漏和穿孔，可以采用前置流速和起泡點(diǎn)測(cè)試來(lái)確認(rèn)其完整性。生產(chǎn)中過(guò)濾器完整性測(cè)試的規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)必須同細(xì)菌截留驗(yàn)證研究產(chǎn)生的數(shù)據(jù)相一致。7.3設(shè)備/容器/密封件的滅菌7.3.1確認(rèn)和驗(yàn)證接觸無(wú)菌產(chǎn)品、無(wú)菌容器和密封件的設(shè)備表面都必須無(wú)菌?？拷鼰o(wú)菌產(chǎn)品的表面，只要有理由懷疑其有潛在污染的可能，都必須保持無(wú)菌狀態(tài)。這些關(guān)鍵設(shè)備的無(wú)菌處理工藝驗(yàn)證與產(chǎn)品/容器密封件的無(wú)菌工藝驗(yàn)證同樣重要，最廣泛的方法是濕熱和干熱滅菌。無(wú)菌工藝設(shè)備的無(wú)菌處理必須每批進(jìn)行。滅菌后，設(shè)備/容器/密封件的傳送、裝御都必須嚴(yán)格按照無(wú)菌操作的方法進(jìn)行保護(hù)和維持產(chǎn)品的無(wú)菌狀態(tài)。驗(yàn)證研究必須可以證明滅菌周期的有效性，且必須進(jìn)行周期性再確認(rèn)。指定的裝載方式、生物指示劑和溫度探頭的位置必須在驗(yàn)證中有記錄。生產(chǎn)批記錄的規(guī)定必須和驗(yàn)證的裝載方法一致。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)必須評(píng)詁滅菌器或使用SIP(在線滅菌）的設(shè)備內(nèi)部潛在的很難達(dá)到的位置（通常說(shuō)的滅菌器的冷點(diǎn)區(qū)），用空載和負(fù)載試驗(yàn)來(lái)確認(rèn)其內(nèi)部不同位置的條件均勻性（如溫度和壓力），這些均勻性研究或參數(shù)布局研究必須使用校驗(yàn)過(guò)的儀器進(jìn)行。熱穿透試驗(yàn)必須使用已經(jīng)建立的負(fù)載模式進(jìn)行評(píng)詁，以確定不能有效達(dá)到滅菌致死率的熱物質(zhì)穿透難度。用放置在溫度傳感器附近的生物指示劑來(lái)評(píng)詁微生物致死率與基于輸入熱量的預(yù)期致死率之間的關(guān)系。當(dāng)確定什么物質(zhì)特別難滅菌時(shí)必須注意過(guò)濾器/泵和灌裝系統(tǒng)的滅菌。最終，這種滅菌方法的滅菌周期標(biāo)準(zhǔn)必須依據(jù)達(dá)到足夠滅菌能力的最低位置所需的時(shí)間來(lái)定。必須證明滅菌方法可以達(dá)到使微生物下降至10-6或是更好的情況。滅菌器的驗(yàn)證程序必須持續(xù)關(guān)注最冷點(diǎn)和最難穿透的部位，其合適性必須建立在確認(rèn)/維護(hù)/變更控制和周期性確認(rèn)（涵蓋微生物挑戰(zhàn)）的基礎(chǔ)上。變更控制程序必須足夠說(shuō)明負(fù)載情況的變化或是滅菌器的結(jié)構(gòu)改變。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)7.3.2設(shè)備控制和儀器校驗(yàn)無(wú)論是驗(yàn)證還是日常監(jiān)控，滅菌監(jiān)控設(shè)備產(chǎn)生的數(shù)據(jù)可信性都是至關(guān)重要的。測(cè)定滅菌周期參數(shù)的設(shè)備都必須進(jìn)行日常校驗(yàn)。必須建立書面的規(guī)程來(lái)確保這此設(shè)備處于校驗(yàn)的有效狀態(tài)，建議的規(guī)定如下：熱法滅菌中使用的溫度和壓力測(cè)定儀器必須進(jìn)行日常周期性校驗(yàn)，且間隔必須合適。驗(yàn)證中使用的傳感器必須在驗(yàn)證的前后都校驗(yàn)；用于監(jiān)控滅菌器滅菌時(shí)間的儀器必須周期性校驗(yàn)；生物指示劑使用的微生物計(jì)數(shù)器必須確認(rèn)，且生物指示劑必須保存在合適的條件下；生物指示劑（如胞子試紙，玻璃安瓿）的D值可以在每批確認(rèn)后接受。否則必須對(duì)接種到滅菌物質(zhì)中的生物指示劑D值進(jìn)行測(cè)定，或是采用供應(yīng)商提供的方法之外的其他方法來(lái)測(cè)定。D值測(cè)定可以使用獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)定完成。對(duì)于干熱滅菌隧道，測(cè)定傳輸帶速度的儀器（如傳感器和發(fā)送器）必須周期性校驗(yàn)；細(xì)菌內(nèi)毒性挑戰(zhàn)試驗(yàn)必須由實(shí)驗(yàn)室合適的配制和測(cè)定。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)八、實(shí)驗(yàn)室控制8.1環(huán)境監(jiān)控8.1.1潔凈室內(nèi)空氣和表面質(zhì)量的評(píng)詁必須從書面定義好的規(guī)程和科學(xué)的測(cè)試方法開(kāi)始。監(jiān)控程序必須涵蓋所有的生產(chǎn)班次，包括空氣、地板、墻壁和設(shè)備表面及那此可能接觸無(wú)菌物料、容器和密封件的關(guān)鍵表面。取樣點(diǎn)位置必須以書面程序說(shuō)明，取樣時(shí)間、頻率和位置都必須在無(wú)菌工藝設(shè)施的監(jiān)控環(huán)境內(nèi)用科學(xué)合理的方法進(jìn)行。取樣量大小必須足以使環(huán)境污染的監(jiān)測(cè)最優(yōu)化，以滿足其符合規(guī)定的潔凈級(jí)別。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)監(jiān)控關(guān)鍵區(qū)域的微生物質(zhì)量來(lái)決定灌裝和封口操作中是否保持了無(wú)菌狀態(tài)是尤為重要的?？梢栽谥匾牟僮骰顒?dòng)或是生產(chǎn)中產(chǎn)品暴露位置進(jìn)行空氣和表面取樣。與無(wú)菌產(chǎn)品接觸的關(guān)鍵表面必須在操作過(guò)程中始終保持無(wú)菌。當(dāng)設(shè)定關(guān)鍵取樣點(diǎn)時(shí)，必須考慮這些點(diǎn)在工藝中的污染風(fēng)險(xiǎn)，包括裝備困難、工藝操作持續(xù)時(shí)間、中斷影響等因素。關(guān)鍵表面的取樣操作必須按照無(wú)菌工藝運(yùn)行的要求來(lái)防止直接接觸無(wú)菌的表面。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)所有環(huán)境監(jiān)控點(diǎn)的位置都必須詳細(xì)描述:取樣頻率；取樣時(shí)間（如運(yùn)行到什么階段進(jìn)行取樣）；取樣過(guò)程所用的時(shí)間；取樣量（如表面積、空氣體積）；特殊的取樣設(shè)備和技術(shù)；警告限和行動(dòng)限；超出警告限和行動(dòng)限后的合適反應(yīng)；8.1.2建立監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)和趨勢(shì)分析程序微生物取樣標(biāo)準(zhǔn)必須根據(jù)取樣點(diǎn)位置和操作的相關(guān)性來(lái)確定，這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)必須可以確保整個(gè)無(wú)菌制造設(shè)施內(nèi)的微生物受控?？梢詤⒖?xì)v史數(shù)據(jù)庫(kù)、培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)、潔凈區(qū)確認(rèn)和清潔衛(wèi)生處理研究的數(shù)據(jù)來(lái)建立這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。可以使用相類似的運(yùn)行數(shù)據(jù)來(lái)設(shè)定警告限和行動(dòng)限，尤其對(duì)那些新的運(yùn)行操作非常適用。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)8.1.3消毒效率消毒劑/消毒方法的適應(yīng)性、有效性和局限性都必須評(píng)詁。這些消毒劑/消毒方法的有效性必須根據(jù)其確保潛在污染可以徹底從表面去除的能力大小來(lái)測(cè)定。為了避免引入新的污染消毒劑必須無(wú)菌，且存放在適當(dāng)?shù)模o(wú)菌）容器中并在書面程序預(yù)先規(guī)定的最長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)使用。日常使用的消毒劑必須可以有效的抑制那些菌叢恢復(fù)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)常態(tài)的微生物生長(zhǎng)。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)消毒操作程序必須詳細(xì)描述（如配制方法、使用頻率和接觸時(shí)間）以確保能夠重復(fù)。一旦建立了方法，必須使用日常監(jiān)控程序來(lái)評(píng)詁其有效性和充分性。一旦發(fā)現(xiàn)微生物相關(guān)的不良趨勢(shì)，必須調(diào)查確認(rèn)潔凈室內(nèi)分離到的微生物對(duì)潔凈室內(nèi)使用的消毒劑的敏感性。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)8.1.4監(jiān)控方法可接受的監(jiān)控微生物學(xué)特性的環(huán)境包括：A、擦拭菌－－環(huán)境監(jiān)控涉及不同表面的微生物質(zhì)量取樣測(cè)試，如產(chǎn)品接觸的表面、地板、墻壁和設(shè)備表面都必須測(cè)試?？梢允褂媒邮苊蠛筒潦梅▉?lái)進(jìn)行這類試驗(yàn)。B、浮游菌－－對(duì)空氣的微生物質(zhì)量進(jìn)行評(píng)詁。取樣器必須在收集效率、潔凈度、消毒難易及對(duì)單向空氣的影響大小的基礎(chǔ)上進(jìn)行選擇。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)C、沉降菌檢測(cè)－－沉降皿（將含有營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿敞開(kāi)放置在環(huán)境中）。因?yàn)榭梢员O(jiān)測(cè)到那些降落在培養(yǎng)皿上的微生物，所以沉降菌檢測(cè)方法可以被作為定性或是半定量的空氣監(jiān)控方法。關(guān)鍵區(qū)域的沉降菌數(shù)據(jù)會(huì)因?yàn)閷⑴囵B(yǎng)皿放置在高污染風(fēng)險(xiǎn)的地方而提高。暴露的環(huán)境必須預(yù)先防止漫干燥作用（如漫長(zhǎng)的取樣時(shí)間或高的氣流速度）而妨礙微生物的生長(zhǎng)。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)8.2微生物培養(yǎng)基及微生物微生物監(jiān)控的目的是為了重復(fù)監(jiān)測(cè)微生物，以監(jiān)控環(huán)境控制狀態(tài)。用于環(huán)境監(jiān)控的微生物培養(yǎng)基必須驗(yàn)證在一定的溫度和時(shí)間下，適合于檢測(cè)真菌（如酵母菌和霉菌）和細(xì)菌?？偩鷶?shù)的測(cè)試條件是30～35℃培養(yǎng)48～72小時(shí)，總霉菌一般在20～25℃培養(yǎng)5～7天。外購(gòu)的環(huán)境監(jiān)控培養(yǎng)基必須測(cè)試證明其可以用于培養(yǎng)微生物。促生長(zhǎng)試驗(yàn)必須每個(gè)配制批號(hào)都要進(jìn)行。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)8.3過(guò)濾前生物載量必須設(shè)計(jì)生產(chǎn)工藝控制步驟來(lái)盡可能的降低為過(guò)濾產(chǎn)品的生物載量。除了會(huì)增加對(duì)無(wú)菌過(guò)濾器的挑戰(zhàn)，生物載量還會(huì)產(chǎn)生雜質(zhì)（如細(xì)菌內(nèi)毒素），導(dǎo)致產(chǎn)品降解。因此必須建立過(guò)濾前的生物載量限度。8.4微生物檢測(cè)潛代方法可以在環(huán)境監(jiān)控、中控控制測(cè)試和成品放行測(cè)試中使用其他合適的微生物測(cè)試方法。8.5顆粒度監(jiān)控日常的顆粒度監(jiān)控對(duì)于快速檢測(cè)到空氣潔凈度的明顯變化非常有用。對(duì)于任何位置的超標(biāo)情況必須進(jìn)行調(diào)查，找出根源。調(diào)查范圍必須涵蓋偏離的嚴(yán)重程度以及對(duì)趨勢(shì)數(shù)據(jù)的評(píng)詁。如果需要必須執(zhí)行合適的整改措施來(lái)防止將來(lái)發(fā)生類似的偏差。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)九、無(wú)菌測(cè)試無(wú)菌測(cè)試的某些方面特別重要，如測(cè)試環(huán)境的控制、測(cè)試方法局限性的認(rèn)知和陽(yáng)性結(jié)果發(fā)生后的生產(chǎn)系統(tǒng)調(diào)查。測(cè)試的實(shí)驗(yàn)室條件必須與無(wú)菌灌裝操作的設(shè)施和控制相一致，不好或是有缺陷的無(wú)菌測(cè)試設(shè)施會(huì)導(dǎo)致測(cè)試失敗。如果生產(chǎn)設(shè)施和控制水平明顯好于無(wú)菌測(cè)試的設(shè)施和條件，那么無(wú)菌測(cè)試的假陽(yáng)性結(jié)果會(huì)干擾對(duì)于實(shí)際無(wú)菌產(chǎn)品的判斷。這樣的生產(chǎn)缺陷可能不會(huì)被發(fā)現(xiàn)。使用無(wú)菌隔離箱可以最大程度的降低假陽(yáng)性結(jié)果的發(fā)生。9.1微生物實(shí)驗(yàn)室控制作為方法驗(yàn)證的一部分，微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)將證明方法的可重復(fù)性和可靠性。如果微生物生長(zhǎng)被抑制，測(cè)試方法必須進(jìn)行變更（如增加稀釋度和膜過(guò)濾的洗滌次數(shù)及去活劑）來(lái)優(yōu)化回收率。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)進(jìn)行無(wú)菌測(cè)試的培養(yǎng)基必須無(wú)菌且通過(guò)了促生長(zhǎng)試驗(yàn)。操作人員必須進(jìn)行培訓(xùn)且資歷合格，必須有書面的規(guī)程來(lái)維持人員的再培訓(xùn)，確保其操作符合無(wú)菌測(cè)試的要求。9.2取樣和培養(yǎng)無(wú)菌測(cè)試受到其檢測(cè)污染能力的限制，因?yàn)橐话銠z測(cè)樣品都比較少，如按照USP的描述，統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)詁表明無(wú)菌測(cè)試的取樣計(jì)劃“也只能在10次測(cè)試中，9次監(jiān)測(cè)到的污染率高達(dá)10%的批號(hào)”，進(jìn)一步的解釋為：如果批量為10000單元的生產(chǎn)中有0.1%的污染，則使用20個(gè)單元進(jìn)行無(wú)菌測(cè)試時(shí)有98%概率的該批號(hào)會(huì)通過(guò)無(wú)菌測(cè)試。樣品可以代表整個(gè)批號(hào)和工藝條件是非常重要的，必須在以下情況下取樣：在無(wú)菌工藝操作的開(kāi)始、中間和最后取樣；結(jié)合工藝中斷和干擾情況來(lái)考慮取樣。由于測(cè)試方法靈敏度的限制，任何陽(yáng)性結(jié)果都會(huì)被認(rèn)為是最嚴(yán)重的GMP問(wèn)題，都必須進(jìn)行徹底的調(diào)查。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)9.3陽(yáng)性結(jié)果的調(diào)查在無(wú)菌測(cè)試中必須小心防止任何可能污染樣品的行為。一旦發(fā)現(xiàn)微生物生長(zhǎng)，該批產(chǎn)品就被判斷非無(wú)菌，必須進(jìn)行調(diào)查。只有可以造成微生物生長(zhǎng)的明確原因被找出，方可認(rèn)為最初的陽(yáng)性測(cè)試結(jié)果無(wú)效。只有確定且書面記載的證據(jù)清楚的證明污染發(fā)生在測(cè)試過(guò)程中，方可以進(jìn)行新的測(cè)試。如果已有證據(jù)不明確，產(chǎn)品也必須按照不符合無(wú)菌需求的產(chǎn)品那樣拒絕收貨并報(bào)廢。在綜合考慮所有與產(chǎn)品制造和樣品測(cè)試相關(guān)的因素后，必須匯總成為書面的調(diào)查報(bào)告，涵蓋確切的結(jié)論和整改措施。必須給予以下有說(shuō)服力的證據(jù)進(jìn)行調(diào)查：無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)A實(shí)驗(yàn)室測(cè)試和偏差記錄實(shí)驗(yàn)室偏差的審核和調(diào)查的發(fā)現(xiàn)可以幫助證明實(shí)驗(yàn)室是否為污染源的結(jié)論。例如，如果是實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中很少發(fā)現(xiàn)的微生物，那么生產(chǎn)環(huán)境中被污染的可能性就很大；如果該微生物在實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)環(huán)境中都存在，最少也可以表明產(chǎn)品確實(shí)被污染了。合適的處理偏差是實(shí)驗(yàn)室控制的重要環(huán)節(jié)。當(dāng)無(wú)菌測(cè)試過(guò)程中發(fā)生偏差的時(shí)候，必須記錄、調(diào)查和補(bǔ)救。如果任何的偏差被認(rèn)為無(wú)菌測(cè)試的完整性有危害，必須立即終止試驗(yàn)。無(wú)菌測(cè)試的陽(yáng)性結(jié)果可以作為生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室問(wèn)題的表征，必須仔細(xì)的調(diào)查整個(gè)生產(chǎn)制造工藝，因?yàn)檫@樣的問(wèn)題往往延申影響到不止一個(gè)批號(hào)。為了更加準(zhǔn)確的監(jiān)控潛在的污染源，建議分類匯總監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)的趨勢(shì)，包括產(chǎn)品、容器類別、灌裝生產(chǎn)線、取樣操作和測(cè)試人員等等。在終端滅菌產(chǎn)品和無(wú)菌工藝產(chǎn)品采用相類似的無(wú)菌操作的情況下，如果后者的無(wú)菌測(cè)試失敗率高，將是無(wú)菌工藝存在問(wèn)題的表征。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌區(qū)域和人員的微生物監(jiān)控也可以提供有意義的趨勢(shì)信息。實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌區(qū)域的微生物的上升趨勢(shì)必須立即調(diào)查其原因，并整改。在一些情況下，這樣的趨勢(shì)證明實(shí)驗(yàn)室缺陷可能是導(dǎo)致無(wú)菌測(cè)試失敗的原因。如果實(shí)驗(yàn)室保留了這類的缺陷記錄，這樣的歷史數(shù)據(jù)可以降低對(duì)實(shí)驗(yàn)室的懷疑，生產(chǎn)階段被污染的可能性會(huì)更大一些。B、人員監(jiān)控人員每天監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)的審核和趨勢(shì)分析可以為指明污染源提供非常有用的信息。人員操作的適合性和培訓(xùn)都值得重點(diǎn)審核和考慮。

C、產(chǎn)品的生物載量審核產(chǎn)品生物載量的變化趨勢(shì)，并考慮是否發(fā)生了生物載量的不良趨勢(shì)。無(wú)菌制劑工藝-培訓(xùn)D必須審核完整的批生