ICS07.080CCSA40植物源產(chǎn)品中左旋多巴的測定高效液相色譜法國家市場監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會IGB/T40267—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC387)提出并歸口。1GB/T40267—2021植物源產(chǎn)品中左旋多巴的測定高效液相色譜法本文件描述了植物源產(chǎn)品中左旋多巴含量的高效液相色譜測定方法。本文件適用于蠶豆(ViciafabaL.)常春油麻藤(MucunasempervirensHemsl.)等植物源干樣品中左旋多巴含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理試樣用2%(體積分數(shù))鹽酸溶液超聲提取后，經(jīng)反相色譜柱分離，紫外(或二極管陣列)檢測器檢5試劑或材料5.1試劑5.1.1磷酸氫二鉀(K?HPO?·3H?O):優(yōu)級純。5.1.2鹽酸(HCl)。5.1.3磷酸(H?PO?)。5.2.12%(體積分數(shù))鹽酸溶液：取鹽酸20mL,加水至1L。用水稀釋至1L。25.3標(biāo)準(zhǔn)品5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取左旋多巴標(biāo)準(zhǔn)品約20mg(精確至0.1mg),用2%(體積分數(shù))鹽酸溶液溶解并定容至10mL,配制成質(zhì)量濃度為2000mg/L的左旋多巴標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于4℃下保存?zhèn)溆茫行跒?個月。5.4.2標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液2.5mL于100mL容量瓶中，用2%(體積分數(shù))鹽酸溶液稀5.4.3低濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)中間液，用2%(體積分數(shù))鹽酸溶液稀釋配制成質(zhì)量濃度為0.500mg/L、1.25mg/L、2.50mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、15.0mg/L、30.0mg/L的低濃5.4.4高濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用2%(體積分數(shù))鹽酸溶液稀釋配制成質(zhì)5.5材料6.1高效液相色譜儀：配紫外檢測器(UV)或二極管陣列檢測器(DAD)。6.2分析天平：感量0.01mg和0.0001g。6.3超聲波發(fā)生器：功率250W,工作頻率40kHz。6.4離心機：轉(zhuǎn)速不低于8000g。6.5酸度計：精度為0.01個pH單位。6.6渦旋混勻器。6.7電動粉碎機。8.1試樣處理稱取試樣1g(精確至0.001g)于50mL具塞離心管中，加入10mL2%(體積分數(shù))鹽酸溶液，渦旋混勻后超聲提取30min,間隔15min搖勻一次，然后在8000(×g)下離心5min,將上清液轉(zhuǎn)移至3GB/T40267—202125mL容量瓶中。殘渣再用10mL2%(體積分數(shù))鹽酸溶液重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，用2%(體8.2.1液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下所示：磷酸氫二鉀溶液=5:95;d)柱溫：20℃;8.2.2標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作依據(jù)試樣中左旋多巴的含量選擇合適質(zhì)量濃度范圍的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液由低到高濃度依次進樣分析，以左旋多巴色譜峰面積為縱坐標(biāo)，溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液色譜圖見8.2.3樣品測定將試樣溶液注入高效液相色譜儀，依據(jù)保留時間定性，記錄峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到試樣溶液中左旋多巴的質(zhì)量濃度，應(yīng)使試樣溶液中左旋多巴的質(zhì)量濃度在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，超過標(biāo)準(zhǔn)工作曲線質(zhì)量濃度上限的樣品應(yīng)稀釋后進樣分析。典型樣品溶液色譜圖見圖A.2。8.3平行試驗按8.1和8.2的規(guī)定對同一試樣進行兩次平行測定。9試驗數(shù)據(jù)處理試樣中左旋多巴的含量按照式(1)計算：式中：w——試樣中左旋多巴含量，單位為克每百克(g/100g);p——由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的試樣中左旋多巴質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L);V——試樣定容體積，單位為毫升(mL);f——試樣溶液稀釋倍數(shù)；m——試樣稱樣量，單位為克(g)。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。4GB/T40267—202110精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。11其他本方法測定左旋多巴的檢出限為0.000275g/100g,定量限為0.00110g/100g。5GB/T40267—2021(資料性)高效液相色譜圖左旋多巴的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液色譜圖見圖A.1,典型樣品溶液色譜圖見圖A.2。r/min