第五章園藝植物制片方法

植物制片是進行園藝植物科學研究所需用的一種基本方法，比如進行植物各個器官的解剖構(gòu)造觀察、花芽分化研究、授粉受精觀察、貯藏營養(yǎng)觀測以及染色體觀察等等都需要進行制片。。通過對切片結(jié)果的分析，可以比較不同試驗處理的效果以及了解不同樹種和品種相應(yīng)的生物特性等。植物制片技術(shù)是一個相對獨立的體系，內(nèi)容繁多。本章中我們僅介紹在園藝植物科學研究中常用的一些基本方法和原理。

第一節(jié)徒手制片一、徒手制片及特點徒手制片（切片）一般指徒手用刀片（常用單面刀片）把新鮮的植物材料切成薄片的制片方法。此法在植物制片中具有十分重要的地位，是一種普遍應(yīng)用的制片方法。徒手制片的主要優(yōu)點是：（1）能及時觀察研究植物生活組織的結(jié)構(gòu)和天然色彩；（2）方法及用具簡單，不需切片機等機械設(shè)備，短時間即可完成，這是其他方法所不及的；主要缺點是（3）對于微小、柔軟、水分過多以及堅硬的材料，難以用徒手切成薄片；（4）對于操作不熟練者，往往切成厚薄不勻或不完整的切片。二、徒手制片的方法及注意事項徒手制片最主要的工具就是刀片，?？捎脝蚊姹０驳镀?。要獲得良好的切片，首先要保持刀口的鋒利，切片前，先準備好一個培養(yǎng)皿盛好清水，同時準備好顯微鏡、載玻片、蓋玻片、刀片等用具，然后拿取材料進行切片。材料可以是新鮮的材料，也可以是經(jīng)過固定的材料。切片時，將欲切材料斷面和刀片上滴上清水以保持材料濕潤。以左手拇指、食指、中指捏住材料，拇指應(yīng)低于食指，以免切傷手指；材料高出指尖。右手執(zhí)刀，將刀平放在食指上，刀口朝內(nèi)，刀面與材料斷面平行，然后以均勻快捷的動作自左前方向右后方以臂力帶動刀片水平切割移動，不要用腕力。切片時還要注意，切時動作要迅速，材料一次切下，切忌停頓或拉鋸式切割。連續(xù)切數(shù)片后，將切下的薄片輕輕移入盛水的培養(yǎng)皿中備用。然后挑選薄而透明的切片，放在載玻片上的水滴中，加上蓋玻片制成臨時制片進行觀察。用徒手切片的材料不宜過大，一般以表面不超過5-8mm2為宜。對于過于柔軟或微小的材料（如葉片、細小的根尖等）需要借助一些夾持物方可進行切片，如果臨時制片需保存一段時間，（1）將材料封在水中，每隔20-30分鐘再加一滴水，此法可保持數(shù)小時；（2）用10%-30%的甘油水溶液代替清水封片，并將制片放在鋪有濕濾紙的大培養(yǎng)皿中保存，或用石蠟或指甲油封邊保存，可保存1-2周或更長時間。第二節(jié)壓片及涂片涂片和壓片是進行植物染色體觀察研究常用的制片方法。其中涂片是將新鮮的材料或者是經(jīng)過固定的材料于載片上，托涂成均勻一層，經(jīng)染色后蓋上蓋玻片鏡檢。壓片是將處理后的材料于載片上分散后加蓋片，用拇指或鑷子輕輕擠壓蓋片，使組織分散成一片，然后鏡檢。

用此法進行染色體觀察時注意，若進行染色體數(shù)目測定要求取樣個體數(shù)在5個以上，細胞總數(shù)在30個以上；若進行染色體核型分析（組型分析)則要求取樣應(yīng)是來源于不同個體的5個細胞。一、常規(guī)壓片法

1.取材：與細胞分裂旺盛時期取樣，一般植物在上午9-12時，下午2-5時，一般取根尖、莖尖。

2.預處理（前處理）：目的是防止紡錘體的形成，使細胞分裂停止在中期階段，從而獲得較多的中期分裂相，同時預處理還可以使染色體收縮變短，便于觀察統(tǒng)計。常用的預處理藥劑有：0.05%-0.2%的秋水仙堿溶液、8-羥基喹啉0.002-0.004M、對二氯苯飽和水溶液、富民隆0.01-0.001%。預處理的時間一般為2-12小時。

3.固定：目的是把細胞迅速殺死，是蛋白質(zhì)變性沉淀，盡量保持材料結(jié)構(gòu)的原有狀態(tài)。常用的固定液為卡諾固定液，即3：1的純酒精:冰醋酸溶液。固定時間一般為1-24小時。

4.解離：用鹽酸處理固定后的材料，使細胞分離，便于壓片。一般可用1N的HCl于60攝氏度下15-20分鐘或5N的HCl室溫下20-25分鐘。

5.染色：用卡寶-品紅或醋酸洋紅等核染色劑進行染色。

6.壓片：將材料移至載玻片上，蓋上蓋玻片，然后輕輕擠壓蓋片，使材料成一薄層。

7.鏡檢：將制好的片子于顯微鏡下進行染色體觀察。

8.封片：臨時封片可用石蠟封邊即可。好的片子可進行冷凍干燥，然后用光學樹膠封固