實(shí)驗(yàn)一：使用高倍顯微鏡觀察幾種細(xì)胞

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

1、學(xué)會(huì)如何使用顯微鏡觀察細(xì)胞；

2、了解細(xì)胞的結(jié)構(gòu)；

3、學(xué)會(huì)制作臨時(shí)裝片。

二、實(shí)驗(yàn)材料：(實(shí)驗(yàn)材料可換)松針、動(dòng)物血液、動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞永久裝片

三、實(shí)驗(yàn)用具：載玻片、蓋玻片、蒸儲(chǔ)水、滴管、鏡子、土豆、刀片、顯

微鏡(物鏡5X、10X、40X)

四、方法步驟：

1、制作松針的臨時(shí)切片：

(1)取干凈的載玻片一個(gè)平置于試驗(yàn)臺(tái)上，用滴管在載玻片中央滴一滴蒸播

水。

(2)將土豆切成條狀(截面約：0.5X0.5cm)取兩條，將一根松針夾在兩個(gè)土

豆條之間，用刀片削成盡量薄的薄片，削時(shí)，手腕不動(dòng)，靠大臂帶動(dòng)小臂移動(dòng)刀

片。切片數(shù)次。從中選取較薄的切片，置于載玻片的水滴上。

(3)從一側(cè)輕輕蓋上蓋玻片，不要產(chǎn)生氣泡。用吸水紙輕輕吸去蓋玻片周圍

的水滴，即完成臨時(shí)切片的制作。

2、觀察切片：

(1)取出顯微鏡，置于試驗(yàn)臺(tái)上靠左的位置，打開光源。

(2)將上步制作好的切片置于顯微鏡的載物臺(tái)上，調(diào)整載物臺(tái)位置，使蓋玻

片對(duì)準(zhǔn)光源。

(3)使用5X物鏡觀察切片，使松針切片在視野中心，換成10X物鏡，觀察

松針葉面橫切結(jié)構(gòu)。

(4)換成40X物鏡觀察，注意細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)結(jié)構(gòu)，畫圖。

3、動(dòng)物血液臨時(shí)裝片的制作及觀察(除了不用切片，其他類似)

4、動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞永久裝片的觀察。

五、考點(diǎn)提示：

1、松針的葉面結(jié)構(gòu)是什么樣的？

2、動(dòng)物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)是什么樣的？與植物細(xì)胞又什么不同？

3、顯微鏡的物鏡倍數(shù)愈大，視野的亮度如何？物體的大小如何？

4、如何調(diào)節(jié)焦距？

5、如何才能使切片盡量的薄？切片的厚薄對(duì)顯微鏡下觀察的效果有什么影

響。

實(shí)驗(yàn)二：檢測(cè)生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

嘗試用化學(xué)試劑檢測(cè)生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)，闡明實(shí)驗(yàn)原理一顏色

反應(yīng)，識(shí)記和區(qū)分用于可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)鑒定的試劑及產(chǎn)生的特定顏

色，初步掌握鑒定上述化合物的基本方法，學(xué)會(huì)描述實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，掌握Na（）H溶液和

CuS04溶液的使用方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理：

某些化學(xué)試劑能使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合物，產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。

1、生物組織中普遍存在的可溶性糖類較多，有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗

糖。前三種糖的分子內(nèi)都含有游離的具還原性的半縮醛羥基，因此叫做還原糖；蔗

糖分子內(nèi)沒有，為非還原糖。實(shí)驗(yàn)中所用的斐林試劑，只能鑒定生物組織中可溶性

還原糖，而不能鑒定可溶性非還原糖。

可溶性還原糖（如葡萄糖、果糖、麥芽糖）與斐林試劑發(fā)生作用，可生成磚紅色的

Cu20沉淀。如：

葡萄糖+2Cu2++40H—加熱葡萄糖酸+Cu20I（磚紅色）+

II20

即Cu2+被還原成Cu20,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。

用斐林試劑鑒定還原糖時(shí)，溶液變化過程為：淺藍(lán)色一棕色一磚紅色沉淀

淀粉遇碘變藍(lán)色（直鏈）或紫（紅）色（支鏈）。

2、脂肪和類脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）統(tǒng)稱為脂類。它是構(gòu)成人體組織的

正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醛、氯仿等脂溶劑中。在化學(xué)組成上，脂類

屬于脂肪酸的酯或與這些酯有關(guān)的物質(zhì)。脂類的主要功能是氧化供能。

脂肪主要存積于脂肪組織中，并以油滴狀的微粒存在脂肪細(xì)胞漿內(nèi)。

在病理檢驗(yàn)中，脂類染色法最常用以證明脂肪變性，脂肪栓子以及腫瘤的鑒

別。脂類染色使用最廣泛的染料是蘇丹染料，最常用的有蘇丹HI,蘇丹IV,蘇丹黑

及油紅0等。脂肪被染色，實(shí)際上是蘇丹染料被脂肪溶解吸附而呈現(xiàn)染料的顏色。

經(jīng)研究認(rèn)為組織中脂質(zhì)在液態(tài)或半液態(tài)時(shí)，對(duì)蘇丹染料著色效果最好。根據(jù)這一原

理，適當(dāng)提高溫度（37℃-60℃）對(duì)組織切片染色效果是有好處的。

脂類染色，用冰凍或石蠟切片，以水溶性封固劑封固，如甘油、明膠和阿拉

伯糖膠等。

脂肪可以被蘇丹in染液染成橘黃色或橙紅色（或被蘇丹w染液染成紅色），

膽脂素呈淡紅色，脂肪酸不著色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。

3、蛋白質(zhì)與雙縮胭試劑發(fā)生作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。（蛋白質(zhì)分子中含有很多

肽鍵，在堿性NaOH溶液中能與雙縮胭試劑中的Cu2+作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。）

ox、山?『0

岷：NH

R-CH、、、!'CH-R

i、、?/?

0=C/u：/C=0

際-J,r、、NH

R-CH?'dh-R

,H26I

紫色絡(luò)合物

三、實(shí)驗(yàn)材料：

1、做可溶性還原性糖鑒定實(shí)驗(yàn)，應(yīng)選含糖高，顏色為白色的植物組織，如蘋

果、梨。（因?yàn)榻M織的顏色較淺，易于觀察。）經(jīng)試驗(yàn)比較，顏色反應(yīng)的明顯程度

依次為蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜。

2、做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)。應(yīng)選富含脂肪的種子，以花生種子為最好，實(shí)驗(yàn)前一

般要浸泡3~4小時(shí)（也可用蔑麻種子）。

3、做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)，可用富含蛋白質(zhì)的黃豆或雞蛋清。

4、淀粉的鑒定：馬鈴薯勻漿。

四、實(shí)驗(yàn)用具：雙面刀片、試管（最好用刻度試管）、試管夾、試管架、大

小燒杯、小量筒、滴管、酒精燈、三腳架、石棉網(wǎng)、火柴、載玻片、蓋玻片、毛

筆、吸水紙、顯微鏡

五、實(shí)驗(yàn)試劑：

1.斐林試劑（包括甲液：質(zhì)量濃度為0.lg/mLNaOH溶液和乙液：質(zhì)量濃度

為0.05g/mLCuS（）4溶液）

2.蘇丹HI或蘇丹IV染液

3.雙縮胭試劑（包括A液：質(zhì)量濃度為0.1g/mLNaOH溶液和B液：質(zhì)量濃

度為0.01g/mLCuS04溶液）

4.體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精溶液

5.碘液

6.蒸僧水

六、方法步驟：

一、可溶性糖的鑒定

操作方法注意問題解釋

1.制備組織樣液。因蘋果多酚氧化酶含量高，

蘋果或梨組織液必須臨

（去皮、切塊、研磨、過組織液很易被氧化成褐色，

時(shí)制備。

濾）將產(chǎn)生的顏色掩蓋。

2.取1支試管，向試管內(nèi)注

入2mL組織樣液。

應(yīng)將組成斐林試劑的甲

斐林試劑很不穩(wěn)定，甲、乙

液、乙液分別配制、儲(chǔ)

液混合保存時(shí)，生成的Cu

存，使用前才將甲、乙

（Oil）2在70~900C下分

3.向試管內(nèi)注入1mL新制的液等量混勻成斐林試

解成黑色CuO和水；

斐林試劑，振蕩。劑；

甲、乙液分別加入時(shí)可能會(huì)

切勿將甲液、乙液分別

與組織樣液發(fā)生反應(yīng)，無Cu

加入蘋果組織樣液中進(jìn)

0H生成。

行檢測(cè)。

4.試管放在盛有50-650C溫最好用試管夾夾住試管防止試管內(nèi)的溶液沖出試

水的大燒杯中，加熱約2分上部，使試管底部不觸管，造成燙傷；

鐘，觀察到溶液顏色：淺藍(lán)及燒杯底部，試管口不縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

色f棕色f磚紅色（沉朝向?qū)嶒?yàn)者。

淀）也可用酒精燈對(duì)試管直

接加熱。

二、脂肪的鑒定

操作方法注意問題解釋

花生種子浸泡、去皮、切下干種子要浸泡

因?yàn)榻輹r(shí)間短，不易切片；浸泡時(shí)

一些子葉薄片，將薄片放在3、4小時(shí),新花

間過長(zhǎng)，組織較軟，切片不易成形。

載玻片的水滴中，用吸水紙生的浸泡時(shí)間可

切片要盡可能薄些，便于觀察。

吸去裝片中的水?？s短。

在子葉薄片上滴2~3滴蘇丹

染色時(shí)間不宜過

in或蘇丹w染液，染色1分

長(zhǎng)。

鐘。

酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，會(huì)

用吸水紙吸去薄片周圍染

影響對(duì)橘黃色脂肪滴的觀察。同時(shí)，

液，用50%酒精洗去浮色，

酒精是脂溶性溶劑，可將花生細(xì)胞中

吸去酒精。

的脂肪顆粒溶解成油滴。

用吸水紙吸去薄片周圍酒

滴上清水可防止蓋蓋玻片時(shí)產(chǎn)生氣

精，滴上「2滴蒸儲(chǔ)水，蓋

泡。

上蓋玻片。

低倍鏡下找到花生子葉薄片

的最薄處，可看到細(xì)胞中有

裝片不宜久放。時(shí)間一長(zhǎng)，油滴會(huì)溶解在乙醇中。

染成橘黃色或紅色圓形小顆

粒。

三、蛋白質(zhì)的鑒定

操作方法注意問題解釋

黃豆浸泡1至2天，容易研磨成

制備組織樣液。

漿，也可購(gòu)新鮮豆?jié){以節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)

(浸泡、去皮研磨、過濾。)

間。

A液和B液也要分先加NaOH溶液，為Cu2+與蛋白質(zhì)

鑒定。加樣液約2ml于試管開配制，儲(chǔ)存。反應(yīng)提供一個(gè)堿性的環(huán)境。A、B

中，加入雙縮胭試劑A,搖鑒定時(shí)先加A液液混裝或同時(shí)加入，會(huì)導(dǎo)致Cu2+

勻；再加入雙縮胭試劑B液后加B液。變成Cu(OH)2沉淀，而失效。

3~4滴，搖勻，溶液變紫色。CuS04溶液不能多否則CuS04的藍(lán)色會(huì)遮蓋反應(yīng)的真

加。實(shí)顏色。

如果稀釋不夠，在實(shí)驗(yàn)中蛋清粘在

試管壁，與雙縮胭試劑反應(yīng)后會(huì)粘

可用蛋清代替豆?jié){。蛋清要先稀釋。

固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不容易徹

底，并且試管也不易洗干凈。

附：淀粉的檢測(cè)和觀察

用試管取2nli待測(cè)組織樣液，

碘液不要滴太多以免影響顏色觀察

向試管內(nèi)滴加2滴碘液，觀察

顏色變化。

七、考點(diǎn)提示：

1、常見還原性糖與非還原性糖有哪些？答：葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還

原性糖；淀粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。

2、還原性糖植物組織取材條件？答：含糖量較高、顏色為白色或近于白色，如:

蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜等。

3、研磨中為何要加石英砂？不加石英砂對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響？答：加石英砂是為了使

研磨更充分。不加石英砂會(huì)使組織樣液中還原性糖減少，使鑒定時(shí)溶液顏色變化不

明顯。

4、斐林試劑甲、乙兩液的使用方法？混合的目的？為何要現(xiàn)混現(xiàn)用？答：混合后

使用；產(chǎn)生氫氧化銅；氫氧化銅不穩(wěn)定。

5、還原性糖中加入斐林試劑后，溶液顏色變化的順序?yàn)椋看穑簻\藍(lán)色棕色不專紅

色。

6、花生種子切片為何要??？答：只有很薄的切片，才能透光，而用于顯微鏡的觀

察。

7、轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋時(shí)，若花生切片的細(xì)胞總有一部分清晰，另一部分模糊，其原

因一般是什么？答：切片的厚薄不均勻。

8、脂肪鑒定中乙醇作用？答：洗去浮色。

9、雙縮胭試劑A、B兩液是否混合后用？先加A液的目的怎樣通過對(duì)比看顏色變

化？答：不能混合；先加A液的目的是使溶液呈堿性；先留出一些大豆組織樣液

做對(duì)比。

實(shí)驗(yàn)三：觀察DNA和RNA在細(xì)胞中的分布

一、實(shí)驗(yàn)原理：

1、真核細(xì)胞的DNA主要分布在細(xì)胞核內(nèi)，RNA主要分布在細(xì)胞質(zhì)中。

2、甲基綠和毗羅紅兩種染色劑對(duì)DNA和RNA的親和力不同，甲基綠對(duì)DNA親

和力強(qiáng)，使DNA顯現(xiàn)出綠色，而毗羅紅對(duì)RNA的親和力強(qiáng)，使RNA呈現(xiàn)出紅色。用

甲基綠、口比羅紅的混合染色劑將細(xì)胞染色，可同時(shí)顯示DNA和RNA在細(xì)胞中的分

布。

3、鹽酸的作用

①鹽酸能改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑的跨膜運(yùn)輸；

②鹽酸使染色體中的DNA與蛋白質(zhì)分離，便于DNA與染色劑的結(jié)合

二、實(shí)驗(yàn)材料：人的口腔上皮細(xì)胞