向日葵總DNA快速提取及檢測技術規(guī)程編制說明近10余年來，隨著分子生物學的飛速發(fā)展，DNA高通量測序技術的完善，品的DNA。在一些分子生物學實驗中，DNA提取的產(chǎn)量、質量和提取如CTAB法、SDS法、Chelex-100法等，但是，CTAB、SDS方法，在D過程中，仍需用多種試劑，有些試劑試對人體有害的有機試劑，而且耗時較長，系-向日葵種質資源評價項目，十二五期間開展了向日葵總DNA快速提取及檢測根據(jù)國家特色油料產(chǎn)業(yè)技術體系-向日葵種質資源評價與創(chuàng)新崗項目以及科技廳、財政廳項目任務要求和《自治區(qū)市場監(jiān)管局關于征集2021年內蒙古自治及其用量、震蕩時間、抽提次數(shù)等參數(shù)和條件，以PCR檢測來判斷這些因素對基因組DNA提取的影響，確定了最佳的提取條件，建立了一種向日葵樣本用量小、經(jīng)濟、快速、便捷的基因組DNA提取方法，為大量開展向日葵分子生物學關鍵。CTAB法、SDS法、Chelex-貓糞便樣品采集及DNA提取技術規(guī)程》、《親子鑒定DNA提取標準操作規(guī)程》內蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院承擔國家特色油料產(chǎn)業(yè)技術體系-向日葵種質資根據(jù)《自治區(qū)市場監(jiān)管局關于征集2021年內蒙古自治區(qū)地方標準制修訂項蒙古地方標準項目建議書和2021年第一批內蒙古自治區(qū)地方標準修訂項目計劃外的50份食用向日葵種質資源進行基礎類群劃分，對100條引物采集、保存、預處理等過程設計試驗，并對現(xiàn)有CTAB法改進，以獲得高質量的及質量目標、材料藥品準備、DNA提取中的樣品研磨、DNA抽提、離心沉淀、風內蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院承擔國家特色油料產(chǎn)業(yè)技術體系向日葵種子資入到預先加好700μl無水乙醇的1.5ml離心管中，輕輕的上），），（2）PCR擴增程序（RAPD），95℃預變性4min；94℃變性40s；38℃退（該基礎溫度隨品種不同而不同，一般在54℃~60℃)），RAPD反應體系以參考文獻的反應體系（20μl）:模板DNA100ng，理和5個引物濃度處理進行正交試驗，電泳檢測表明，當20μl體系模板濃度為40ng，引物濃度為1.60umol/L時擴增出的條帶清晰、穩(wěn)定，易于統(tǒng)計分析PCR擴增程序以參考文獻提供的反映程序：94℃4min,94℃40s,38℃1.5溫度處理進行PCR擴增后，電泳結果表明，因而確立最700bp500700bp500bp400bp300bp200bp700bp500bp400bp300bp200bpp200bpp:引物序列序列C-06GAACGGACTCN-03GGTACTCCCCC-07GTCCCGACGAN-07CAGCCCAGAGC-09CTCACCGTCCN-15CAGCGACTGTC-14TGCGTGCTTGN-17CATTGGGGAGC-16CACACTCCAGN-19GTCCGTACTGF-11TTGGTACCCCO-04AAGTCCGCTCF-18TTCCCGGGTTO-06CCACGGGAAGG-12CAGCTCACGAO-07CAGCACTGACN-02ACCAGGGGCAO-13GTCAGAGTCC0-18CTCGGAGTGC利用篩選出的19條引物分別對50份食用向日葵基因組DNA進行PCR增,19條引物共擴增出141條DNA1200bp700bp500bp300bp200bp100bp1200bp800bp200bp500bp200bp800bp200bp圖2：引物F-18對50份食用向日葵種8786C-14TGCGTGCTTG88676N-0264N-0776N-0376N-1576N-1775N-19756597878698以實驗數(shù)據(jù)為基礎，Quantityone軟降統(tǒng)計RAPD擴增條帶，采用D和EXCEl表格進行統(tǒng)計分析。本標準是起草單位在多年開展相關研究實驗基礎上總結形成的《向日葵總1范哪些研究工作或者技術的實施等而進行的標準2CTAB法相比做了哪些優(yōu)化；該標準中使用的CTAB法與其他DNA提取方法的優(yōu)點，以及不同3試劑的