組培苗的培養(yǎng)

生根培養(yǎng)初代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)組培苗生產(chǎn)中常見(jiàn)問(wèn)題及控制組培苗的培養(yǎng)組培苗的培養(yǎng)一、培養(yǎng)含義將植物材料經(jīng)培養(yǎng)，使之生長(zhǎng)，分裂分化形成愈傷組織、芽、胚狀體、原球莖，進(jìn)一步分化成再生植株或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的過(guò)程。二、培養(yǎng)步驟植物組織培養(yǎng)初代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)生根培養(yǎng)目的：芽、莖段、葉片、花器等外植體在離體培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)愈傷組織、側(cè)芽或不定芽、胚狀體、原球莖。培養(yǎng)基：誘導(dǎo)或分化培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中CTK多，IAA少。類型（根據(jù)發(fā)育方向）：

短枝發(fā)生型、叢生芽發(fā)生型、不定芽發(fā)生型、胚狀體發(fā)生型、原球莖的發(fā)生型1、初代培養(yǎng)初代培養(yǎng)微型扦插頂芽CTK刺激帶芽的莖切段側(cè)芽接種培養(yǎng)形成的莖梢節(jié)長(zhǎng)，直立向上呈小灌木叢狀獲得較多嫩莖梢莖段培養(yǎng)繼代擴(kuò)繁試管苗生根培養(yǎng)無(wú)愈傷組織產(chǎn)生初代繼代短枝發(fā)生型頂芽腋芽叢生芽發(fā)生型不定芽發(fā)生型Ⅰ脫分化分化愈傷組織芽、芽叢切割芽叢繼代培養(yǎng)大量芽叢試管苗生根培養(yǎng)外植體初代繼代不定芽發(fā)生型Ⅱ①②愈傷組織培養(yǎng)愈傷組織具分裂能力的細(xì)胞已分化細(xì)胞脫分化繼代愈傷組織分裂誘導(dǎo)期分裂期分化期胚狀體發(fā)生型菊花花瓣體細(xì)胞胚胎發(fā)生及體胚發(fā)育過(guò)程的掃描電鏡觀察原球莖——指縮短的、呈珠粒狀的、由胚性細(xì)胞組成的、類似嫩莖的器官。原球莖發(fā)生型

大花蕙蘭原球莖增殖與植株再生目的：更換新鮮培養(yǎng)基來(lái)繁殖同種類型的材料（愈傷組織、芽），擴(kuò)繁無(wú)根苗（生產(chǎn)上邊擴(kuò)繁邊生根）。擴(kuò)繁方法：以幾何級(jí)數(shù)增加，可切割莖段,分離芽叢、胚狀體、原球莖。培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基或分化培養(yǎng)基實(shí)質(zhì)：增殖培養(yǎng)物2、繼代培養(yǎng)3、生根培養(yǎng)

◆生根培養(yǎng)基：1／2或1／4MS基本培養(yǎng)基；不加或少加CTK，適量添加NAA；糖濃度1-1.5%?！襞囵B(yǎng)條件：增加光強(qiáng)，達(dá)3000-10000lx?！裟康模簩⒀棵甾D(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)成為完整植株的過(guò)程。3、生根培養(yǎng)3、生根培養(yǎng)生根方法與途徑①新梢基部浸入50或100ppmIBA液4－8h；②在含IAA類培養(yǎng)基中培養(yǎng)4－6d；③移入含IAA類的生根培養(yǎng)基培養(yǎng)。④生根困難的則在培養(yǎng)基中搭濾紙橋或按①生根方法與途徑⑤延長(zhǎng)在增殖培養(yǎng)時(shí)間⑥降低增殖倍率，減少CTK用量⑦對(duì)易生根植物，切割粗壯嫩枝在營(yíng)養(yǎng)缽中直接生根⑧胚狀體發(fā)育成小苗不經(jīng)生根階段，但需壯苗生根

根、芽胚狀體根、芽愈傷組織芽根

芽外植體

試管苗原球莖根、芽外植體成苗途徑

根三、組培苗生產(chǎn)中常見(jiàn)問(wèn)題及控制1污染問(wèn)題3玻璃化現(xiàn)象常見(jiàn)問(wèn)題

2褐變現(xiàn)象1、污染原因污染是指在組織培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。

病原菌：細(xì)菌及真菌兩大類。（一）污染問(wèn)題2、污染特點(diǎn)⑴細(xì)菌污染特點(diǎn)：菌斑呈黏液狀，接種后1-2天發(fā)現(xiàn)。污染途徑：外植體帶菌、培養(yǎng)基及器皿滅菌不徹底、操作人員未遵守操作規(guī)程⑵真菌污染的特點(diǎn)：污染部分長(zhǎng)有不同顏色的霉菌，接種后3-10天發(fā)現(xiàn)。污染途徑：周圍環(huán)境不清潔、超凈工作臺(tái)過(guò)濾裝置失效、培養(yǎng)瓶的口徑過(guò)大3、污染的預(yù)防措施（1）防止材料帶菌的措施莖尖作外植體時(shí)，進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)（無(wú)糖）或暗培養(yǎng)。無(wú)糖營(yíng)養(yǎng)液或自來(lái)水使枝條抽枝，以新抽嫩枝作外植體。晴天取材，下午取材，經(jīng)日曬過(guò)可殺死部分細(xì)菌或真菌。接種時(shí)除去外部韌皮組織，只接內(nèi)部的分生組織。3、污染的預(yù)防措施（2）外植體的滅菌多次滅菌法，次氯酸鈉-無(wú)菌水-次氯酸鈉多種藥液交替浸泡法，肥皂水-酒精-次氯酸鈉-無(wú)菌水。（3）器皿與金屬器械的滅菌玻璃器皿可采用濕熱滅菌或干熱滅菌金屬器皿一般灼燒滅菌，也可干熱滅菌3、污染的預(yù)防措施（4）布質(zhì)制品的滅菌：濕熱滅菌（5）無(wú)菌操作室的滅菌

2%新潔爾滅或70%酒精擦拭（噴霧），紫外燈照射，定期甲醛和高錳酸鉀熏蒸。（6）嚴(yán)格按照操作程序。褐變是指外植體在培養(yǎng)過(guò)程中體內(nèi)的多酚氧化酶被激活，使細(xì)胞內(nèi)的酚類物質(zhì)氧化成棕褐色的醌類物質(zhì)，這種致死的褐變物向外擴(kuò)散致使培養(yǎng)基逐漸變成褐色，抑制其它酶的活性，影響外植體的分化，最后變褐死亡的現(xiàn)象。（二）褐變現(xiàn)象1、褐變的原因⑴植物種類和品種某些植物酚類物質(zhì)含量較多。⑵外植體的生理狀態(tài)幼年的材料培養(yǎng)含醌類物質(zhì)較少。⑶材料轉(zhuǎn)移時(shí)間時(shí)間過(guò)長(zhǎng)引起材料褐變。1、褐變的原因⑷培養(yǎng)基的成分過(guò)高的無(wú)機(jī)鹽濃度生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)使用不當(dāng)，BA過(guò)多分生能力強(qiáng)的材料，氧化受抑制，褐變也被抑制培養(yǎng)條件不適宜，溫度過(guò)高或光照過(guò)強(qiáng)，褐變加速。2、褐變的防止措施⑴選擇適宜的外植體及最佳培養(yǎng)基。⑵連續(xù)轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)培養(yǎng)初期

。⑶加抗氧化物。⑷加活性炭，0.1-0.5%活性炭。

玻璃化是植物材料進(jìn)行離體繁殖時(shí)，有些組培苗的嫩莖、葉片出現(xiàn)半透明狀和水漬狀的現(xiàn)象。它的出現(xiàn)會(huì)使試管苗生長(zhǎng)緩慢、繁殖系數(shù)有所下降。玻璃化是試管苗的生理失調(diào)癥。（三）玻璃化現(xiàn)象1、玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生原因⑴激素濃度高濃度的細(xì)胞分裂素會(huì)使玻璃化的發(fā)生比例提高。⑵瓊脂濃度瓊脂濃度低，玻璃化苗增加。⑶溫度溫度高易形成玻璃化苗。1、玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生原因⑷光照光照偏弱易形成玻璃化苗。⑸通風(fēng)條件培養(yǎng)瓶容量小，氣體交換不良，玻璃化苗多。⑹離子水平植物種類不同，離子形態(tài)比例量要求不同。2、玻璃化現(xiàn)象預(yù)防措施⑴控制無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分，降低氮（銨