血液和尿液中239種合成大麻素及代謝物的液相色譜-高分辨質譜檢驗方法2合內標溶液由符合5.1e)1)的內標儲備溶液用甲醇稀釋得到，50ng/mL的內標工作溶液用乙腈稀釋得到。密封，置于冰箱中冷凍保存，有效期3個月。5.2儀器和設備儀器和設備及要求如下。a)液相色譜-高分辨質譜儀：配有電噴霧離子源(ESD。b)電子天平：分度值≤0.1mg。c)旋渦混合器。d)聚四氟乙烯濾膜：0.22μ.f)移液器。6定性分析6.1樣品前處理6.1.1檢材樣品6.1.1.1血液樣品取血液100L,加入內標工作溶液900L,渦旋混勻，12000r/min離心5min,取上清液，經(jīng)濾膜過濾，濾液直接供液相色譜-高分辨質譜儀分析。6.1.1.2尿液樣品取尿液100μL,加入β-葡萄糖醛苷酸酶10μ,渦旋混勻，在55℃下孵育30min,酶解后的樣品取出冷卻，加入內標工作溶液900μL,渦旋混勻，12000r/min離心5min。取上清液，經(jīng)濾膜過濾，濾液直接供液相色譜-高分辨質譜儀分析。6.1.2空白樣品取空白血液(或尿液)100山作為空白樣品，按6.1.1的方法，與檢材樣品平行操作。6.1.3質控樣品取空白血液(或尿液)100μL,添加質控標準工作溶液10μL,配制成50ng/mL的質控樣品，然后按6.1.1的方法，與檢材樣品平行操作。6.1.4添加樣品取空白血液(或尿液)100pμL,添加標準物質工作溶液，配制成濃度相近的檢材樣品中出現(xiàn)的可疑合成大麻素及代謝物的添加樣品，然后按6.1.1的方法，與檢材樣品平行操作。6.2儀器檢測6.2.1儀器條件6.2.1.1液相色譜條件以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器等實際情況進行調整。a)色譜柱：C18柱(100m×2.1mm,1.7μm)或其他等效柱。b)流動相：流動相A為水(含0.1%甲酸),流動相B為甲醇(含0.1%甲酸):采用梯度洗脫，梯度洗脫程序見表1。c)流速：0.4mL/min。d)柱溫：35℃。e)自動進樣器溫度：4℃。3表1流動相梯度洗脫程序06.2.1.2質譜條件6.2.1.2.1以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器等實際情況進行調整。a)離子源：電噴霧電離-正離子模式(ESI+)。b)噴霧電壓：3500V。c)輔助氣流速：10Arb。d)鞘氣流速：40Arb。e)加熱器溫度：300℃。f)毛細管溫度：350℃。g)一級掃描分辨率：60000.h)二級掃描分辨率：17500.i)掃描范圍：m/z100~1000。j)碰撞能量：20eV、25eV、30eV、35eV、40eV。6.2.1.2.2在符合6.2.1.1和6.2.1.2的液相色譜條件和質譜條件下，目標物的相關信息、質譜參數(shù)、保留時間和檢出限參見附錄A。分別吸取空白樣品提取液、檢材樣品提取液和添加樣品提取液，按6.2.1的條件進樣分析。記錄空白樣品、檢材樣品和添加樣品中目標物可疑色譜峰的保留時間、前體離子、碎片離子和離子豐度比。6.4定性判斷依據(jù)以保留時間、前體離子、碎片離子和離子豐度比作為定性判斷依據(jù)。應滿足以下要求。a)在相同試驗條件下，檢材樣品中出現(xiàn)前體離子與單同位素峰的理論值質量精度至少在5×10*以內。b)色譜峰保留時間與添加樣品的色譜峰保留時間相比較，相對誤差在±2.5%內。c)檢材樣品中包含至少1個前體離子和1個碎片離子，與添加樣品中對應目標物的前體離子和碎片離子的質量精度相一致，質荷比大于等于200時，相對誤差至少在5×10*以內，質荷比小于200時，絕對誤差小于1mDa.d)檢材樣品與相同基質添加樣品中目標物比較，離子豐度比與添加樣品的離子豐度比之相對誤差不超過表2規(guī)定的范圍，則判斷檢材樣品中檢出該化合物。表2特征離子豐度比的最大允許相對誤差7分析結果評價5(資料性)目標物的相關信息、質譜參數(shù)、保留時間和檢出限A.1目標物的相關信息目標物的相關信息見表A.1。表A.1目標物的相關信息123N-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1-(環(huán)45(1-(3-氯戌基)-1H-吲唑-3-雙基)-L-蝴氨酸甲酯6一7N-[1-(4-氯苯基)-1-甲基乙基]-1-成基-1893,3-二甲基-2-[1-(4-氰基丁基)吲S)-4-(3-((1-甲氧基-3,3-二甲基-1-一N-[[1-(4-氟戊基)-1B-3-吲唑基]規(guī)基]-3-(1-(4-氧戊基)-IH-吲唑-3-族基)-L-罐氨酸甲酯3.3-二甲基-2-[1-(4-氟丁型)吲2-[1-(4-氟丁基)-1H-吲哇-3-甲酰氨基N-[[1-(4-氟丁基)-1H-3-叫唑基1羰基]-3-1-(5-氟戊基)-N-[1-(4-氟1-(5-氟戊基)-N-[1-(4-氟N-(1-氨甲?；?2-甲基內基)-1-(環(huán)己基甲基1-(5-溴戊基)-N-三環(huán)[3.3.1N-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1-(5-N-(金剛烷-1-基)-1-(5-氧戊基)-1H-吲唑-3-(5-氯戊基)-N-1-萘基-1H-吲哚-3N-(1-氨甲?；?2-甲基丙基)-1-(5-氟戊基N-(1-氨甲?；?2-甲基丙基)-1-(5-氟戊基N-(1-氨甲?；?2.2-二甲基丙里)-1-(5-N-(1-甲氧基窺基-2-甲基丙基)-1-(5-氟皮基)N-(1-金剛烷基)-1-(5-氟戊基)吲唑-3-甲1-(5-氟戊基)-N-(2-苯基丙-271-(5-氟戊基)-N-(2-苯基丙-2-[1-(5-氟戊基)-1H-可哚-3-甲酰氨基metabolite4N-[[1-(5-氟-4-羥基戊基)-1H-3-叫哚基2-[1-(5-氟戊基)-1H-吲哚-3-甲酰氨基motabolite83.3-二甲基-2-[1-(3-內酸)吲哚-3-甲航氨基]metabolite93.3-二甲基-2-[6-經(jīng)基-1-(5-氯戊甲酰氨基]丁酸甲酯1-(5-氟成基)-N-三環(huán)[3.3.18-喹啉基酯-1-(5-氟戊基)-1H-吡咯井[2,3-b]N-[1-(氨基族基)-2-甲基丙基]-1-(5-氟-43.3-二甲基-2-[1-(5-氟戊基)叼N-[[1-(5-羥基戊基)-1H-3-唑基]羧基]-3N-(1-氨基-3.3-二甲基-1-氧代丁-2-基)-1-(N-(1-乙氧基族基-2-甲基丙基)-1-(5-氟戊基)N-[[1-(5-羥基戊基)-1H-3-吲唑基]羧基]-L酸N-((1-(5-氟戊基)-1H-吡咯并[2,3-b]metabolite2甲基酮N-(1-(氨基窺基)-2.2-二甲基丙基)-1-(氧戊基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑基酮(鹽酸鹽)N-(2,2-二甲基-1-苯基內基)-1-(5-[1-(2-嗎啉-4-基乙基)-1H-叫哚-3-基]-(2.2.3,3-四甲基環(huán)丙基)甲酮C-HN0.N(2)J-N-[3-(2-甲氧基乙基)-4,5-二甲酰胺[1-[(1-甲基-2-吸啶基)甲基]-1H-叼哚-3-S)-N-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)胺N-[(1S)-1-(氨基撥基)-2-甲基丙基1-(環(huán)己基甲基)-1H-吲哚-3-甲酰胺2-(1-(環(huán)己基甲基)-1H-吲唑-N-[[1-[(4-羥基環(huán)已基)甲基]-1H-叼唑-AB-CHNINACApetaboli4-氨基-3-[[1-(環(huán)已基甲基)-1H-吲哇-3-基]N-(1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1-(4-N-(1-氨甲酰基-2-甲基丙基)-1-(4-氟芐基AB-FUBTNACApetaboli4-氨基-3-[[1-[(4-氟苯基)甲基]-IAB-FUBINACApetaboli3N-[[1-[(4-氟苯基)甲基]-1H-吲吐-3-基AB-FUBINACAnetaboli4X-(1-氨甲?；?2-甲基丙基)-1-皮基叫唑N-[1-(氨基基)-2-甲基丙基]-1-(4-3-[[1-(氨基羰基)-2-甲基丙基]N-(金剛烷-1-基)-1-(環(huán)己基甲基)-1H-吲唑-N-(1-氨基-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)-1N-(1-氨甲酰基-2.2-二甲基內基)-1-(4-N-(1-氨基-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)-1N-(1-氨甲?；?2,2-二甲基丙基)-1-丁基吲N-(1-氨基-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)-1N-(1-氨甲?；?2.2-二甲基內基)-1-(4-ADBICAN-(4-N-[1-(氨基羰基)-2,2-二甲基內基]-1-(AD8-PINACAN-(4-胺酮-(5-氟戊基)-3-(1-恭甲酰基)-AW2201N-(4-表A.1目標物的相關信息(續(xù))AW-694N-(5-[1-(5-羥基戊基)-IH-吲哚-3-基](2-碘代苯N-[(1-皮基-IH-吲唑-3-基)現(xiàn)基]-L.-蝴氨酯3-甲基-2-[1-(環(huán)己基甲基)吲哚-3-甲酰氨基]2-[1-(4-氟芐基)-1H-吲哚-3-甲酰氨3-甲基-2-[1-(4-氟芐基)呵唑-3N-(1-金剛烷基)-1-戊基吲哚-3-甲N-(1-金剛烷基)-1-戊基吲唑-3-甲APINACA(AKB48)N-(5-N-(1-金剛烷基)-1-(5-羥基戊基)吲唑-3-胺N-[(iS)-2-氨基-2-氧代-1-(苯基甲基)乙基N-[(iS)-2-氨基-2-氧代-1-(苯基甲基)乙基N-[(1S)-2-氨基-2-氧代-1-(苯基甲基)乙基2,2,3,3-四甲基環(huán)丙烷膠酸(2Z)-2氧戌基)-1,2-二氫-2-氧代-3日-吲哚-3-亞基]4-氧-1-萃基)[1-(5-氟戊基)-1H-叫哚-甲酮N-(1-甲基-1-苯基乙基)-1-(4-氰基丁基)吲5-戊基-2-(2-苯基丙-2-基)-2,5-二[4,3-b]吲哚-1-酮N-(1-甲基-1-苯乙基)-1-戊基-1H-吲哚-3-胺3-[[(1-甲基-1-苯乙基)氨基]殯基]N-(1-甲基-1-苯基乙基)-1-(4-四氫吡喃X-[(1S)-1-[(乙氨基)羰基]-2,2-基]-1-[(4-氧苯基)甲基]-1H-吲唑-4-乙基-1-恭基)[1-(5-氟戊基)-1H-2-[1-(環(huán)己基甲基)-1H-吲哚-3-[9-(5-氧戊基)-9H-咔唑-3-基]-1-茶基甲酮2-[1-(4-氧芐基)-1H-吲唑-3-甲酰氨(4-氟-1-茶基)[1-(5-氟戊基)-IH哚-3-基]-甲酮[1-(5-氟戊基)-1H-叼唑-3-基](2,2,3,3-四甲基環(huán)丙基)-甲酮1-[(4-氟苯基)甲基]-N-1-萘基-1H吲哚-3-甲-(5-氟戊基)-2-(1-恭甲?；?FUBIMINAN-(5-(1-(5-羥基戊基)-1H-苯井[d]味唑-2-基)(-6aR,10aR)-3-(1.1-二甲基庚fa.7.10.10a-四氫-1-羥基-6,6-二甲1-戊基-1/F吲唑-3-玫酸異丁酯(1-己基-1H-吡咯-3-基)(秦-1-基)甲酮2-甲基-1-戊基-3-(4-甲氧基-1-茶2-乙基-1-戊基-1H-吲哚-3-基)(茶-(1-己基-5-苯基1H-吡咯-3-基)(恭-1-基)甲酮5-(3-(2-(2-氧苯基)乙?；?-1H-吲酸CaHC1N0.(4-乙基茶-1-基)(2-甲基-1-戊基-1H-吲哚-3-2-(2-演苯基)-1-(1-戊基-1H-叫哚-3-酮恭-1-基(5-(萃-1-基)-1-戊基-1H吡咯-酮5-(2-氯苯基)-1-戊基-1H-吡咯-3-4-氯茶-1-基)(1-成基-1H-吲哚-34-氯茶-1-基)(1-(4-羥基戊基)-1H-4-氟茶-1-基)(1-戊基-1H-吲哚-34-氟恭-1-基)(1-(5-羥基戊基)-1H-(1-(5-羥基戊基)-1H-吲哚-3-基)(恭-1-基)甲酮(1-(3-羥基丁基)-1H-吲哚-3-基)(萘-1-基)-甲酮(1-(5-羥基戊基)-1H-吲哚-3-基(4-甲基-1-基2-(2-甲氧基苯基)-1-(1-戊基-1H-吲哚-3-基)1-(1-(4-羥基戊基)-1H-吲哚-(5-(2-氧苯基)-1-戊基-1H-吡咯-3-基)(茶-1-(1-(環(huán)己基甲基)-1H-吲唑-3-羰基)-L-繃氨酸甲酯MAM2201N-(4-(S)-2-(1-(丁-3-烯-1-基)-1H-吲唑-3-甲酰胺3.3-二甲基-2-[1-(4-戊烯-1-基)-11S)-3.3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-)S)-2-(1-丁基-1H-吲唑-3-甲酰膠基)-甲基丁酸甲酯wOMB-BUTINACAbutanoS)-2-(1-丁基-1H-吲唑-3-甲酰胺基)-N-[[9-(環(huán)己基甲基)-91-咔唑-3-基]我基]-N-(1-甲氧基羰基-2,2-二甲基丙基)-1-(環(huán)甲基)吲哚-3-甲酰按MDN1B-OHMICAmetaboli(S)-2-(1-(環(huán)己基甲基)-1H-可哚-3-甲酰胺2-[1-(環(huán)己基甲基)-1H-吲唑-3-2-[1-(4-氟芐基)-1H-吲哚-3-甲酰氨基MDNIB-FUBICAmetaboli3N-[[1-[(4-氟苯基)甲基]-1H-吲哚-3-基N-(1-甲氧基羰基-2.2-二甲基丙基)-1-(4-N-[(1-戊基-1H-吲哚-3-基)族基]-L-纈氨酯N-[[1-(4-戊烯-1-基)-1H-吲哚-3-基]羰基]-N-[[1-(5-氟戊基)-1H-喝哚-3-基]我基]-LWWB-FUBICAmetaboli3N-[[1-[(4-氟苯基)甲基]-1H-叫哚-3-基N-(蒙-1-基)-1-虎基-1H-吲唑-3-甲7-甲氧基-1-[2-(4-嗎啉基)乙基]2S,4R)-1.3.3-三甲基雙環(huán)[2.2.1]庚2-(1-茶基)-1-(1-戊基-1H-吲哚-3N-1-茶基-1-戊基-1日-吲哚-3-甲B-22N-(4-N-[(1S)-1-(氨基羰基)-2.2-二甲基丙基]3-二金-3-(3-羥基-3-甲基丁基)-2-N-(2-甲氧基乙基)-N-[[2-(1-成基吲哚-3-基n-[(1S)-2-氨基-2-氧代-1-(苯基甲基)N-(1-氨甲?；?2-苯基乙基)-1-(5-氟戊基RCS-4N-(4-(1-(4-羥基成基)-IH-吲哚-3-基)(4-甲氧基苯1-[1-(2-環(huán)己基乙基)-IH-吲哚N-(1-金剛燒基)-1-(5-氟成基)哚-3-甲[1-(5-氟戊基)-1H-吲唑-3-基](茶-1-基)甲酮UE-144N-(4-(1-(4-羥基戊基)-1H-可哚-3-基)(2,2.3.3-哚[1-(5-氟-4-羥基戊基)-1H-吲哚-3-基](2,2AKB48-d.(內標物)[3.3.1.13,7]癸-1-基-1H-吲唑-3-甲酰膠(1-(4-羥基戊基)-1H-吲喙-3-基-d5)(茶-1-A.2目標物的質譜參數(shù)、保留時間和檢出限目標物的質譜參數(shù)、保留時間和檢出限見表A.2。表A.2目標物的質譜參數(shù)、保留時間和檢出限序號//min15525534555556557558559555555554-fluoroMIMB-BUTINA554-fluoroMDIB-BUTINAcarboxyindazolenet554-fluoro-CLML-5-fluora554-flooro-CMYL-5-fluaro-P5555555555555555555555555555-fluoroMLNB-PICAnetaboli555-fluoroMDMIB-PICAnotnbolite7555-fluoroMDOIB-PICAnetabolit555-fluoroMLOIB-PICAnetabolit55555555carboxyindazolenet55hydroxypentyl)metabo55序號w昆min出限5-fluoroADBmetabolite5555555-fluoroAUBmetabolite55555-fluoroAUIBnetabolite7555555555555-fluoroDNB-7-PAICAb5-fluoroMDVB-PICAnetabolite555555-fluoroPB-223-carbox55555555pyridinoylindole(hydrochlor555-fluoro-tert-Butylbenzy555555555555555555AB-CHMINACApetabolite55AB-CHNINACAmetaboliteM55AB-CHMINACAnetabolite555555AB+UBINACAnetabolite2A55AB-FUBINACAnetabolite355AB-PINCAN-(4-hydroxypent表A.2目標物的質譜參數(shù)、保留時間和檢出限(續(xù))序號M昆nin出限AB-PINACAN-pentanoicac55555555555555ADBICAN-(4-hydroxypent555555ADB-PINCAN-(4-tydroxypenty55ADB-PINACApentanoicac5555AKB48N-pentanoicac55555555AM2201N-(4-hydroxypent555555AM-694N-(5-hydroxypent55A-694N-pentanoicac55555555555hrdroxypentyl)metabo55555555555BB-223-carbaxyindol