宏基因組二代測序技術(shù)在血液病患者感染病原診斷中的應(yīng)用中國專家共識（2023年版）解讀匯報(bào)人：xxx2024-01-03引言宏基因組二代測序技術(shù)概述血液病患者感染病原診斷現(xiàn)狀及挑戰(zhàn)宏基因組二代測序技術(shù)在血液病患者感染病原診斷中的應(yīng)用專家共識解讀及建議實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)分享與討論contents目錄01引言宏基因組二代測序技術(shù)（mNGS）具有高通量、高靈敏度和無需培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn)，在血液病患者感染病原診斷中具有重要價(jià)值。本共識旨在規(guī)范mNGS技術(shù)在血液病患者感染病原診斷中的應(yīng)用，提高診斷準(zhǔn)確性。提高診斷準(zhǔn)確性本共識結(jié)合國內(nèi)外最新研究進(jìn)展和臨床實(shí)踐，為血液病患者感染病原的診斷提供指導(dǎo)性建議，有助于臨床醫(yī)生更好地應(yīng)用mNGS技術(shù)，改善患者預(yù)后。指導(dǎo)臨床實(shí)踐目的和背景適用人群本共識適用于血液病患者，包括白血病、淋巴瘤、骨髓瘤等惡性血液病患者，以及再生障礙性貧血、骨髓增生異常綜合征等非惡性血液病患者。病原類型本共識涉及的病原類型包括細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等。對于不同病原類型，mNGS技術(shù)的應(yīng)用流程和診斷價(jià)值可能存在差異。檢測方法本共識主要關(guān)注基于宏基因組二代測序技術(shù)的病原檢測方法，包括樣本處理、核酸提取、文庫構(gòu)建、測序和數(shù)據(jù)分析等流程。對于其他檢測方法，如傳統(tǒng)培養(yǎng)、免疫學(xué)檢測和分子生物學(xué)檢測等，本共識僅做簡要概述。共識范圍02宏基因組二代測序技術(shù)概述VS宏基因組二代測序技術(shù)（mNGS）通過對臨床樣本中的微生物群落進(jìn)行無偏倚的高通量測序，能夠快速、全面地檢測樣本中的微生物組成，包括細(xì)菌、真菌、病毒等。該技術(shù)不依賴于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)方法，能夠直接對臨床樣本中的微生物DNA/RNA進(jìn)行測序分析。流程mNGS技術(shù)的實(shí)驗(yàn)流程包括樣本處理、DNA/RNA提取、文庫構(gòu)建、高通量測序和數(shù)據(jù)分析等步驟。其中，樣本處理是關(guān)鍵步驟之一，需要根據(jù)不同類型的樣本采用不同的處理方法，以保證后續(xù)測序的準(zhǔn)確性。原理技術(shù)原理及流程優(yōu)勢mNGS技術(shù)具有高通量、高靈敏度、高分辨率和高準(zhǔn)確性等優(yōu)點(diǎn)，能夠全面檢測樣本中的微生物組成，包括難以培養(yǎng)的微生物和未知微生物。此外，該技術(shù)還能夠?qū)ξ⑸锏幕蚪M和轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行深入研究，為臨床診斷和治療提供更加全面的信息。局限性mNGS技術(shù)的局限性包括樣本處理復(fù)雜、數(shù)據(jù)分析難度大、成本較高等。此外，該技術(shù)對于低豐度的微生物檢測存在一定的假陰性率，需要結(jié)合其他技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。技術(shù)優(yōu)勢與局限性發(fā)展歷程及現(xiàn)狀mNGS技術(shù)自問世以來，經(jīng)歷了不斷的發(fā)展和完善。隨著測序技術(shù)的不斷進(jìn)步和成本的降低，mNGS技術(shù)在臨床微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛。發(fā)展歷程目前，mNGS技術(shù)已經(jīng)在臨床微生物檢測領(lǐng)域取得了重要的進(jìn)展，被廣泛應(yīng)用于各種感染性疾病的診斷和治療。同時，該技術(shù)也在不斷地發(fā)展和完善中，未來有望在更多領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。現(xiàn)狀03血液病患者感染病原診斷現(xiàn)狀及挑戰(zhàn)病毒如巨細(xì)胞病毒、EB病毒等，可引起血液病患者的病毒性感染，導(dǎo)致發(fā)熱、肝脾腫大等癥狀。細(xì)菌血液病患者由于免疫功能低下，容易感染各種細(xì)菌，如革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌等，導(dǎo)致敗血癥、感染性休克等嚴(yán)重并發(fā)癥。真菌如念珠菌、曲霉菌等，可引起血液病患者的真菌性感染，導(dǎo)致肺部、消化道等部位的感染。血液病患者感染病原種類及危害123周期長，陽性率低，無法及時明確病原菌種類。培養(yǎng)法受限于抗體種類和質(zhì)量，易出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果。免疫學(xué)方法雖然具有較高的靈敏度和特異性，但操作復(fù)雜，成本較高。分子生物學(xué)方法傳統(tǒng)診斷方法的局限性可同時檢測多種病原微生物，提高檢測效率。高通量測序通過對測序數(shù)據(jù)的分析，可準(zhǔn)確鑒定病原菌種類及其豐度，為臨床精準(zhǔn)治療提供依據(jù)。精準(zhǔn)診斷不依賴于已知微生物基因組信息，可發(fā)現(xiàn)新的或未知的病原微生物。無偏性檢測針對不同患者的感染病原譜和藥物敏感性，制定個性化的治療方案，提高治療效果。個性化治療01030204宏基因組二代測序技術(shù)的應(yīng)用前景04宏基因組二代測序技術(shù)在血液病患者感染病原診斷中的應(yīng)用樣本采集根據(jù)感染部位和病原體特性選擇合適的樣本類型，如血液、腦脊液、尿液等，確保樣本具有代表性且不受污染。樣本處理對采集的樣本進(jìn)行預(yù)處理，去除雜質(zhì)和宿主細(xì)胞，富集微生物組分，提高測序效率和準(zhǔn)確性。質(zhì)量控制建立嚴(yán)格的質(zhì)量控制流程，包括樣本質(zhì)量評估、DNA提取質(zhì)量檢查、文庫構(gòu)建質(zhì)量驗(yàn)證等，確保測序數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。樣本采集、處理與質(zhì)量控制數(shù)據(jù)分析與解讀結(jié)合患者臨床信息和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，對測序結(jié)果進(jìn)行綜合分析，確定感染病原體種類和藥物敏感性，為臨床診斷和治療提供依據(jù)。結(jié)果解讀對原始測序數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)量評估、過濾和修剪，去除低質(zhì)量和污染序列，得到高質(zhì)量的測序數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)預(yù)處理采用生物信息學(xué)方法對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析，包括序列比對、物種注釋、基因功能預(yù)測等，揭示樣本中微生物的組成和功能。數(shù)據(jù)分析結(jié)果報(bào)告將驗(yàn)證后的測序結(jié)果以書面形式報(bào)告給臨床醫(yī)生，包括病原體種類、藥物敏感性等信息，為臨床診斷和治療提供有力支持。臨床溝通與臨床醫(yī)生保持密切溝通，解釋測序結(jié)果的臨床意義和應(yīng)用價(jià)值，共同制定個性化的治療方案和預(yù)防措施。結(jié)果驗(yàn)證采用傳統(tǒng)微生物學(xué)方法或其他分子生物學(xué)技術(shù)對測序結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。結(jié)果驗(yàn)證與報(bào)告05專家共識解讀及建議宏基因組二代測序技術(shù)（mNGS）在血液病患者感染病原診…共識指出，mNGS技術(shù)具有高靈敏度、高分辨率和高通量等優(yōu)點(diǎn)，能夠同時檢測多種病原微生物，為血液病患者感染病原的診斷提供了有力手段。要點(diǎn)一要點(diǎn)二mNGS技術(shù)的檢測流程和質(zhì)量控制共識詳細(xì)闡述了mNGS技術(shù)的檢測流程，包括樣本采集、處理、核酸提取、文庫構(gòu)建、測序和數(shù)據(jù)分析等步驟，并強(qiáng)調(diào)了質(zhì)量控制的重要性，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。對共識內(nèi)容的理解和解讀血液病患者感染病原的診斷策略：共識建議，對于疑似感染的血液病患者，應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查和影像學(xué)檢查等多方面的信息，制定個體化的診斷策略。mNGS技術(shù)在血液病患者感染病原診斷中的應(yīng)用時機(jī)：共識指出，對于常規(guī)微生物檢測方法無法明確診斷的疑難病例，以及危重患者和免疫缺陷患者等特殊情況，可以考慮應(yīng)用mNGS技術(shù)進(jìn)行病原檢測。mNGS技術(shù)與其他檢測方法的比較和選擇：共識認(rèn)為，mNGS技術(shù)雖然具有諸多優(yōu)點(diǎn)，但也存在一定的局限性和不足，如假陽性率較高、無法準(zhǔn)確定量等。因此，在實(shí)際應(yīng)用中，應(yīng)根據(jù)患者的具體情況和實(shí)驗(yàn)室條件等因素，綜合考慮選擇最合適的檢測方法。針對血液病患者感染病原診斷的推薦意見未來研究方向和展望共識強(qiáng)調(diào)，為了更好地發(fā)揮mNGS技術(shù)在血液病患者感染病原診斷中的作用，需要加強(qiáng)多學(xué)科之間的協(xié)作和交流，推動相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范的制定和實(shí)施。加強(qiáng)多學(xué)科協(xié)作和標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)共識提出，未來應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)mNGS技術(shù)的研發(fā)和優(yōu)化工作，提高檢測的準(zhǔn)確性、特異性和靈敏度等性能指標(biāo)。mNGS技術(shù)的進(jìn)一步優(yōu)化和改進(jìn)共識建議，未來可以進(jìn)一步探索mNGS技術(shù)在血液病患者感染病原診斷中的拓展應(yīng)用，如用于監(jiān)測病情變化、評估治療效果和預(yù)測預(yù)后等方面。mNGS技術(shù)在血液病患者感染病原診斷中的拓展應(yīng)用06實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)分享與討論案例一利用宏基因組二代測序技術(shù)成功診斷一例血液病患者肺部感染案例?；颊邽橐幻心昱?，因患有急性髓系白血病接受化療后出現(xiàn)肺部感染。通過宏基因組二代測序技術(shù)，醫(yī)生在患者的肺泡灌洗液中檢測到了多種病原菌，包括肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌等，為后續(xù)精準(zhǔn)治療提供了重要依據(jù)。案例二應(yīng)用宏基因組二代測序技術(shù)協(xié)助診斷一例血液病患者顱內(nèi)感染案例?；颊邽橐幻嗌倌昴行裕加屑毙粤馨图?xì)胞白血病，化療后出現(xiàn)顱內(nèi)感染。通過宏基因組二代測序技術(shù)，醫(yī)生在患者的腦脊液中檢測到了腦膜炎奈瑟菌，及時調(diào)整了治療方案，挽救了患者的生命。典型案例介紹實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)總結(jié)與啟示在應(yīng)用宏基因組二代測序技術(shù)時，需要結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析。同時，對于檢測結(jié)果的解讀也需要結(jié)合患者的病史、用藥史等信息進(jìn)行綜合考慮。宏基因組二代測序技術(shù)在血液病患者感染病原診斷中具有重要價(jià)值。通過該技術(shù)，可以全面、快速地檢測患者體內(nèi)的病原菌種類和數(shù)量，為精準(zhǔn)治療提供依據(jù)。宏基因組二代測序技術(shù)的檢測結(jié)果可以為臨床醫(yī)生提供重要的治療參考依據(jù)，但并不能完全替代傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)、藥敏試驗(yàn)等檢測方法。因此，在實(shí)際應(yīng)用中需要結(jié)合多種檢測方法進(jìn)行綜合判斷。宏基因組二代測序技術(shù)的檢測靈敏度和特異性仍需進(jìn)一步提高。目前該技術(shù)對于低