2.2動物細(xì)胞工程——動物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體動物細(xì)胞融合技術(shù)01020305單克隆抗體的制備單克隆抗體在臨床上的應(yīng)用我們知道：

運用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)，可以跨越不同植物之間生殖隔離的屏障，培育出新的作物類型。那么，有沒有技術(shù)能讓不同種動物的體細(xì)胞進(jìn)行雜交，培育出集不同細(xì)胞的優(yōu)勢于一身的動物細(xì)胞呢？1.動物細(xì)胞融合實例1：自然條件受精作用1.動物細(xì)胞融合1970年人工條件下的人-鼠細(xì)胞融合實驗實例2：人工誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞形成一個細(xì)胞的過程。1.概念：2.結(jié)果：形成的具有原來______________________________的_________細(xì)胞，稱為_____________。單核兩個或多個細(xì)胞遺傳信息雜交細(xì)胞3.原理：細(xì)胞膜的流動性4.動物細(xì)胞融合的方法：物理方法（離心、振動、電激）化學(xué)方法（聚乙二醇融合法）生物方法（滅活病毒誘導(dǎo)法）動物細(xì)胞沒有細(xì)胞壁，可以直接誘導(dǎo)融合。動物細(xì)胞融合所特有的融合方式。1.動物細(xì)胞融合1、什么是病毒的滅活？

滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。2、滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的機(jī)理是什么？

病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞相互凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。1.動物細(xì)胞融合

滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面↓細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通↓細(xì)胞膜連接↓細(xì)胞核融合，形成雜交細(xì)胞用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程：動物細(xì)胞A動物細(xì)胞B動物細(xì)胞______培養(yǎng)物理、化學(xué)、生物法誘導(dǎo)雜交細(xì)胞（單核）膜融合、質(zhì)融合5.構(gòu)建動物細(xì)胞融合模型：1.動物細(xì)胞融合①融合過程:細(xì)胞膜融合→細(xì)胞質(zhì)融合→________融合。②重組細(xì)胞的特點:具有____________________,雜種細(xì)胞表現(xiàn)出兩個____________的特點。③融合后的雜交細(xì)胞經(jīng)過__________后仍能形成兩個完整的雜交細(xì)胞細(xì)胞核親本細(xì)胞有絲分裂兩種細(xì)胞的遺傳信息突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體6.意義：7.應(yīng)用：

前段時間，全國在抗擊COVID-19疫情的時候，我們從新聞里看到很多康復(fù)者在捐獻(xiàn)血漿，用來治療其他病人。那么，血漿里到底是什么東西能夠治療新型冠狀病毒感染？2.單克隆抗體反復(fù)注射人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法：動物體內(nèi)抗原多種漿細(xì)胞缺點：產(chǎn)量低、純度低，制備的抗體特異性差、反應(yīng)不靈敏每一個漿細(xì)胞只能產(chǎn)生一種特異性抗體體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體多達(dá)百萬種多種抗體（血清）多克隆抗體：由多個漿細(xì)胞克隆產(chǎn)生，是多種抗體的混合物。2.單克隆抗體

一個捐獻(xiàn)者的200-300毫升的血漿，如果合格，潛在的也只能治療2-3個患者，如何大量制備？

此外，在鑒定此類抗原時，其專一性不是很理想，常常會出現(xiàn)假陽性，也稱為交叉反應(yīng)性。如何產(chǎn)生大量的單一抗體呢？1.抗體的產(chǎn)生:效應(yīng)B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）每一個B淋巴細(xì)胞只能分泌一種特異性抗體一個B淋巴細(xì)胞克隆B淋巴細(xì)胞群產(chǎn)生單克隆抗體

如果利用單個效應(yīng)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖（克?。纬杉?xì)胞群，這樣的細(xì)胞群就有可能產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)、靈敏度高的抗體——單克隆抗體。2.單克隆抗體如何產(chǎn)生大量的單一抗體呢？2.單克隆抗體②什么細(xì)胞能無限增殖？癌細(xì)胞③有什么方法將這兩種細(xì)胞的特點結(jié)合起來？動物細(xì)胞融合①體外培養(yǎng)的條件下，一個B淋巴細(xì)胞能不能無限增殖？不能,單個B淋巴細(xì)胞壽命有限，又因為能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞屬于高度分化的細(xì)胞，不能無限繁殖不可能無限增殖。B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞米爾斯坦設(shè)想：如果把一種B淋巴細(xì)胞與能在體外大量增殖的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，所得到的融合細(xì)胞就能大量增殖，產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體。1975年成功獲得單克隆抗體1984年獲得了諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎科勒英國科學(xué)家德國科學(xué)家2.單克隆抗體用特定的抗原免疫，從小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞。用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選∶在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長。單克隆抗體的制備過程：2.單克隆抗體幾種融合細(xì)胞？BB、B瘤、瘤瘤√單克隆抗體的制備過程：2.單克隆抗體對選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。單克隆抗體的制備過程：2.單克隆抗體將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)小鼠腹水中提取體外培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)液提取既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞（一選）選擇性培養(yǎng)基：篩選出雜交瘤細(xì)胞2.單克隆抗體原理：選擇培養(yǎng)基只允許雜交瘤細(xì)胞生長、增殖，未融合的親本細(xì)胞和融合了同種核的細(xì)胞不能生存小資料：細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。①人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。

②鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，可是能不斷分裂增殖。在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集雜交瘤細(xì)胞！將雜交瘤細(xì)胞群稀釋，約每孔1個進(jìn)行培養(yǎng)（克隆化培養(yǎng)）一段時間后，用標(biāo)記的抗原檢測每個小孔上清液里是否含有我們需要的特異性的抗體（抗原抗體能結(jié)合即為陽性孔）（二選）：篩選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞方法：克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測2.單克隆抗體AB1、AB2、AB3……經(jīng)過多次克隆化培養(yǎng)以及有限稀釋法的篩選，就能選出需要的那種雜交瘤細(xì)胞（AB3）多孔細(xì)胞培養(yǎng)板注射特定蛋白免疫小鼠培養(yǎng)小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞多種細(xì)胞多種雜交瘤細(xì)胞能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)專一抗體檢測注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖體外培養(yǎng)單克隆抗體融合2.單克隆抗體動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞培養(yǎng)篩選一篩選二特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備3.單克隆抗體的應(yīng)用資料1.用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的"早早孕診斷試劑盒"，在妊娠第8天就可以作出診斷，這比原來的診斷方法提前了10d左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準(zhǔn)確率在90%以上。女性懷孕后會分泌一種糖蛋白——人絨毛膜促性腺激素（HCG），尿液中會檢出HCG的存在。用抗HCG單克隆抗體制備的試紙可以測試女性是否懷孕。①作為診斷試劑：(最廣泛的用途)②用于疾病的治療和運載藥物(主要用于癌癥的治療)生物導(dǎo)彈——單克隆抗體＋抗癌藥物(放射性同位素/細(xì)胞毒素）3.單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體：(1).特異性強(qiáng)、靈敏度高

生物導(dǎo)彈單抗抗癌藥物★原理：★組成：(2).療效高、毒副作用小：不損傷正常細(xì)胞，減少劑量導(dǎo)向作用，將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在位置抗癌藥物：殺死癌細(xì)胞1.除了細(xì)胞毒素，還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物？①可以用放射性同位素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行靶向放療；②一些作用于細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細(xì)胞的信號通路來抑制其生長，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結(jié)合進(jìn)行治療。3.單克隆抗體的應(yīng)用3.單克隆抗體的應(yīng)用兩個過程動物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法

－－滅活病毒一個新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備的優(yōu)勢一、概念檢測1.下列有關(guān)動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交比較的敘述，錯誤的是（

）A.它們的原理都涉及細(xì)胞膜的流動性B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導(dǎo)融合C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細(xì)胞D.前者主要是為了獲得細(xì)胞產(chǎn)品，后者主要是為了獲得雜種植株2.科學(xué)家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原，制備出了單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A.利用該單克隆抗體可以診斷是否感染SARS病毒B.體外培養(yǎng)單個B淋巴細(xì)胞可以獲得針對SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合，經(jīng)誘導(dǎo)后融合的細(xì)胞即為雜交瘤細(xì)胞D.將純化的核衣殼蛋白反復(fù)注射到小鼠體內(nèi)，從小鼠血清中分離出的抗體為單克隆抗體CA二、拓展應(yīng)用假如你掌握了動物細(xì)胞融合技術(shù)，你想用這種技術(shù)來解決哪些問題?解決這些問題的大致思路是怎樣的?這樣做會有什么風(fēng)險?請查閱相關(guān)資料，完善自己的思路，并形成文字報告，與同學(xué)交流。提示：可以利用動物細(xì)胞融合技術(shù)培育多倍體胚胎，研究其發(fā)育機(jī)制，甚至可能培育出新的物種。但是，目前相關(guān)技術(shù)還不成熟，存在融合率低、胚胎死亡率高等問題，并且還可能帶來一些倫理方面的問題。4.下圖表示抗人體胃癌的單克隆抗體的制備過程，下列有關(guān)敘述不正確的是A．圖中實驗小鼠注射的甲是能與抗人體胃癌抗體特異性結(jié)合的抗原B．利用聚乙二醇、滅活的病毒和電激等方法均可誘導(dǎo)細(xì)胞融合獲得乙C．用特定的選擇性培養(yǎng)基對乙篩選，融合細(xì)胞均能生長，未融合細(xì)胞均不能生長D．丙需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選后可獲得大量能分泌所需抗體的丁C單克隆抗體5.英國科學(xué)家威爾穆特首次用羊的體細(xì)胞、乳腺細(xì)胞