《食品中環(huán)氧乙烷和2-氯乙醇總量的測(cè)定氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》（征求意見稿）編制說(shuō)明一、工作簡(jiǎn)況1．任務(wù)來(lái)源《食品中環(huán)氧乙烷和2-氯乙醇總量的測(cè)定氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》是根據(jù)《中國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》的規(guī)定，經(jīng)立項(xiàng)評(píng)審和公示等程序獲得中國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫協(xié)會(huì)批準(zhǔn)立項(xiàng)，“中檢協(xié)﹝2023﹞2號(hào)”發(fā)文批復(fù)的立項(xiàng)號(hào)（P/CIQA-126-2023）。本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫協(xié)會(huì)提出并歸口，由南京海關(guān)動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心主持編寫，協(xié)作單位包括上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司、南京師范大學(xué)。2．目的意義環(huán)氧乙烷又稱氧化乙烯，是一種在低溫下為無(wú)色透明液體，常溫下為無(wú)色帶有刺激性的氣體。其具有較強(qiáng)的擴(kuò)散、穿透性能和滅菌能力，常溫下對(duì)細(xì)菌、真菌、芽孢和立克次氏體及病毒等各種微生物有殺滅作用。它是繼甲醛后出現(xiàn)的第二代化學(xué)消毒劑，至今仍是最好的冷消毒劑之一，可應(yīng)用于某些食品和藥物的滅菌，也可用于對(duì)熱敏感的藥物的滅菌。然而，過(guò)量的環(huán)氧乙烷對(duì)人體毒害較大，不僅會(huì)引起急性中毒，還會(huì)致過(guò)敏、致突變和致癌變。長(zhǎng)期少量接觸，會(huì)造成神經(jīng)衰弱綜合征。食品中的環(huán)氧乙烷一部分來(lái)源于食品包裝材料，一部分來(lái)源于使用了被環(huán)氧乙烷污染的原材料，或?qū)h(huán)氧乙烷作為植保劑和熏蒸劑使用。2-氯乙醇為環(huán)氧乙烷滅菌過(guò)程中衍生的有機(jī)物質(zhì)，事實(shí)上已有越來(lái)越多的資料表明2-氯乙醇的毒性不亞于環(huán)氧乙烷，而歐盟中規(guī)定環(huán)氧乙烷的含量是以環(huán)氧乙烷和2-氯乙醇之和計(jì)。2020年9月至2023年9月，僅僅歐洲就發(fā)生了180起食品中檢測(cè)出環(huán)氧乙烷及2-氯乙醇超標(biāo)的食品安全事故，不僅采取了預(yù)警召回的措施，造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失，而且對(duì)進(jìn)口國(guó)人民生命健康造成了較大的威脅。南京海關(guān)動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心通過(guò)對(duì)市場(chǎng)上以及網(wǎng)絡(luò)銷售的面包和堅(jiān)果及其制品進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)，約有15%左右的面包中檢測(cè)出環(huán)氧乙烷與2-氯乙醇（環(huán)氧乙烷和2-氯乙醇總量檢出值在0.10-0.56mg/kg范圍內(nèi)）。這充分說(shuō)明目前市場(chǎng)上這些食品中確實(shí)存在有環(huán)氧乙烷與2-氯乙醇?xì)埩舻默F(xiàn)象，食品中環(huán)氧乙烷與2-氯乙醇正危害著消費(fèi)者的身體健康。目前國(guó)內(nèi)無(wú)相關(guān)檢測(cè)食品中環(huán)氧乙烷殘留量的標(biāo)準(zhǔn)方法，因此建立對(duì)食品中環(huán)氧乙烷和2-氯乙醇?xì)埩袅繙y(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法具有重要意義，有助于保障國(guó)民身體健康。3．主要工作過(guò)程主持單位和協(xié)作單位共同完成標(biāo)準(zhǔn)的制定，主要包括以下幾個(gè)階段：（1）調(diào)研與立項(xiàng)：2022年11-12月，進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)征求意見和論證工作，聯(lián)合提出對(duì)《食品中環(huán)氧乙烷和2-氯乙醇總量的測(cè)定氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行制定的立項(xiàng)申請(qǐng)，并于2022年12月立項(xiàng)。隨后成立了標(biāo)準(zhǔn)起草工作組，明確了項(xiàng)目負(fù)責(zé)人，制定了詳細(xì)的工作計(jì)劃，開展本標(biāo)準(zhǔn)制定的各項(xiàng)工作。（2）起草標(biāo)準(zhǔn)初稿：2023年1-4月，確定標(biāo)準(zhǔn)制修訂方案和工作計(jì)劃，并開展了方法學(xué)驗(yàn)證形成標(biāo)準(zhǔn)初稿。（3）標(biāo)準(zhǔn)修改與完善：2023年5-9月，工作組對(duì)標(biāo)準(zhǔn)初稿進(jìn)行研究討論和提出修改意見，尤其是針對(duì)前處理方法方法深入研究，并根據(jù)提出的方法，進(jìn)行多種基質(zhì)的方法學(xué)驗(yàn)證，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步修改和完善，以確保標(biāo)準(zhǔn)具有實(shí)用性和廣泛適用性。（4）形成征求意見稿：2023年10-12月，根據(jù)前期反饋結(jié)果，工作組對(duì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修改和完善，形成了本標(biāo)準(zhǔn)的征求意見稿。二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容1．確定團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)遵循GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》進(jìn)行編寫。其主要內(nèi)容包括：（1）封面：按中國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)對(duì)封面的格式要求編寫。（2）前言：按國(guó)標(biāo)規(guī)定的格式編寫。前言表明，①本標(biāo)準(zhǔn)的提出并歸口單位為中國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫協(xié)會(huì)；②本標(biāo)準(zhǔn)的起草單位為南京海關(guān)動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心、上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司、南京師范大學(xué)。（3）標(biāo)準(zhǔn)主體內(nèi)容：封面、前言、范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語(yǔ)和定義、方法提要、試劑與材料、儀器和設(shè)備、分析步驟、儀器參考條件、儀器測(cè)定、分析結(jié)果、精密度、定量限和附錄。2．范圍本文件適用于動(dòng)物源性食品、植物源性食品、糧食及其制品、焙烤類食品、調(diào)味品、果脯類食品和油炸食品中環(huán)氧乙烷和2-氯乙醇總量的測(cè)定。3．前處理?xiàng)l件選擇與優(yōu)化（1）樣品制備與保存環(huán)氧乙烷沸點(diǎn)為10.4℃，極易在樣品制備過(guò)程中揮發(fā)。分別對(duì)比冷凍研磨、常溫粉碎機(jī)粉碎、常溫刀式搗磨儀粉碎、剪刀剪碎的方式對(duì)陽(yáng)性樣品進(jìn)行制備，經(jīng)前處理后進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用常溫粉碎機(jī)粉碎、常溫刀式搗磨儀粉碎的方式進(jìn)行處理后，其測(cè)定值均小于冷凍研磨、剪刀剪碎制備后的測(cè)定值。因常溫粉碎機(jī)粉碎、常溫刀式搗磨儀粉碎時(shí)，極易產(chǎn)生發(fā)熱現(xiàn)象，測(cè)試其兩種方式的粉碎時(shí)間，均未能得到有效數(shù)據(jù)，其測(cè)定值總低于冷凍研磨和剪刀剪碎制備后的測(cè)定值。因此，不建議使用易發(fā)熱的制備方式，推薦使用冷凍研磨、剪刀剪碎等不易發(fā)熱的制備方式。分別采用0℃、5℃、10℃、20℃方式保存樣品，并在第2、4、6、8、10天對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，并與第1天測(cè)定值進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)20℃保存樣品時(shí)，樣品在第4天，其測(cè)定值顯著降低或未能檢出。10℃保存樣品時(shí)，其測(cè)定值在第6天顯著降低。使用0℃、5℃保存樣品時(shí)，樣品在此周期時(shí)間內(nèi)，未發(fā)生明顯變化。因此使用0~5℃冷藏方式保存，并在一周內(nèi)使用樣品。（2）轉(zhuǎn)化系數(shù)和回收率根據(jù)文獻(xiàn)顯示[1]，環(huán)氧乙烷會(huì)在前處理過(guò)程中轉(zhuǎn)化為2-氯乙醇，計(jì)算結(jié)果時(shí)可用樣品中2-氯乙醇的含量乘以系數(shù)0.55，得到環(huán)氧乙烷的含量。該轉(zhuǎn)化率是根據(jù)環(huán)氧乙烷和2-氯乙醇的分子量得到的，環(huán)氧乙烷分子量為44，2-氯乙醇的分子量為80。因此為了評(píng)估環(huán)氧乙烷對(duì)2-氯乙醇的轉(zhuǎn)化率和回收率，在空白樣品中加入3個(gè)不同濃度水平的環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)溶液，平行測(cè)定3次。環(huán)氧乙烷濃度分別為11μg/kg、22μg/kg、110μg/kg，根據(jù)轉(zhuǎn)化系數(shù)0.55，得到理論上2-氯乙醇的含量分別為20μg/kg、40μg/kg、200μg/kg。測(cè)定后得到2-氯乙醇的平均含量為14.2μg/kg、31.1μg/kg、172.8μg/kg，對(duì)應(yīng)的平均回收率為71.0%、77.8%、86.4%。因此根據(jù)轉(zhuǎn)化系數(shù)0.55所得到的回收率滿足要求，可采用0.55作為轉(zhuǎn)化系數(shù)。4．儀器條件的優(yōu)化（1）氣相和質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化氣相色譜條件優(yōu)化：使用了脈沖不分流和脈沖分流模式進(jìn)樣，發(fā)現(xiàn)在使用不分流模式測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)工作液時(shí)，2-氯乙醇的色譜峰會(huì)出現(xiàn)前傾和分叉的情況。使用分流模式，以分流比2:1、3:1、5:1、10:1測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)工作液，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)分流比大于等于3:1時(shí)，2-氯乙醇的色譜峰峰型較好。當(dāng)分流比再增大時(shí)，2-氯乙醇的響應(yīng)降低，因此確定分流比為3:1。經(jīng)過(guò)優(yōu)化后，儀器條件為：色譜柱：DB-Select624UI，60m×0.25mm×1.4μm；進(jìn)樣口溫度：80℃保持0.25min，900℃/min升溫至220℃；進(jìn)樣方式：脈沖分流進(jìn)樣，分流比3：1；柱溫：40℃保持5min，30℃/min升溫至220℃，保持4min；載氣:99.9%氦氣質(zhì)譜條件優(yōu)化：分別使用不同的質(zhì)譜碰撞能量測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)工作液，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)3個(gè)離子對(duì)80>44；80>31；82>31采用4eV碰撞能量時(shí)，其對(duì)應(yīng)的響應(yīng)值最高，并選用響應(yīng)值最高的80>31離子對(duì)作為定量離子對(duì)，其它兩個(gè)離子對(duì)作為定性離子對(duì)。經(jīng)過(guò)優(yōu)化后，儀器條件為：傳輸線溫度：220℃；四級(jí)桿溫度：150℃；電離方式：EI；電離能量：70eV；測(cè)定方式：MRM模式。監(jiān)測(cè)離子對(duì)：80>44(4eV);80>31*(4eV);82>31(4eV)，*為定量離子對(duì)。（2）不同品牌色譜柱適用性評(píng)價(jià)使用Agilent公司和安譜公司的同規(guī)格色譜柱，DB-624柱長(zhǎng)60m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚1.4μm，分別對(duì)同一批的空白試樣、標(biāo)準(zhǔn)工作液、實(shí)際樣品和加標(biāo)樣品進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除保留時(shí)間有差異外，目標(biāo)化合物2-氯乙醇的峰型和干擾情況，無(wú)顯著差異，因此以上兩種色譜柱均適用。（3）不同儀器適用性評(píng)價(jià)使用Agilent7890B-7010A和ThermoTrace1300-TSQ8000Evo氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，對(duì)同一批的空白試樣、標(biāo)準(zhǔn)工作液、實(shí)際樣品和加標(biāo)樣品進(jìn)行測(cè)定，并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線分析其定量結(jié)果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除保留時(shí)間、質(zhì)譜最佳碰撞能量有差異外，其定量結(jié)果無(wú)顯著差異，因此以上兩種氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀均適用。5．參考文獻(xiàn)[1]Monica,Bononi,Giancarlo,Quaglia,Fernando,Tateo.Identificationofethyleneoxideinherbs,spicesandotherdriedvegetablesimportedintoItaly.[J].Foodadditives&contaminants.PartA,Chemistry,analysis,control,exposure&riskassessment,2014,31(2):271-5.DOI:10.1080/19440049.2013.872808.三、試驗(yàn)驗(yàn)證的分析、綜述報(bào)告方法線性關(guān)系：2-氯乙醇在20ng/mL~100μg/mL濃度范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)R2大于0.999，線性關(guān)系良好。方法準(zhǔn)確度和精密度：采用陰性的脫水香蔥樣品進(jìn)行三個(gè)水平（20.0μg/kg、40.0μg/kg、200.0μg/kg）的加標(biāo)回收率驗(yàn)證。回收率在85.8%~109.2%之間，RSD小于7.83，表明回收率良好，方法精密度較好。方法重現(xiàn)性：方法驗(yàn)證基礎(chǔ)上，起草工作組組織8家實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果符合驗(yàn)證比對(duì)要求。具體方法驗(yàn)證情況見附件一。四、技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證，預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效果本標(biāo)準(zhǔn)制定的原則遵循國(guó)家有關(guān)產(chǎn)業(yè)政策，符合國(guó)家的有關(guān)法律法規(guī)。制定此標(biāo)準(zhǔn)是以保障公眾身體健康為宗旨，并且做到科學(xué)合理、安全可靠。五、采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的程度及水平，與現(xiàn)行有關(guān)法律法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系無(wú)相關(guān)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)技術(shù)要求不低于強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)技術(shù)要求。六、重大分歧意見的處理經(jīng)過(guò)和依據(jù)無(wú)。《食品中環(huán)氧乙烷和2-氯乙醇總量的測(cè)定氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)起草工作組2023年12月附件1食品中環(huán)氧乙烷和2-氯乙醇總量的測(cè)定氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法專屬性分別使用2-氯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白樣品和加標(biāo)樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見圖1、圖2、圖3，結(jié)果顯示2-氯乙醇無(wú)干擾出現(xiàn)。表22-氯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（10ng/mL）色譜圖表32-氯乙醇加標(biāo)樣品（加標(biāo)水平20μg/kg）色譜圖表3空白樣品色譜圖定量限將2-氯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成不同濃度進(jìn)行測(cè)試，當(dāng)濃度為20μg/mL時(shí)，信噪比S/N為10.6，滿足S/N≥10。由此可知，2-氯乙醇定量限為20μg/mL。線性及范圍分別6個(gè)濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定，以2-氯乙醇標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)(x)，2-氯乙醇的峰面積為縱坐標(biāo)(y)，進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)，結(jié)果詳見表2。表22-氯乙醇在2~100ng/mL的線性范圍和線性方程標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（ng/mL）梯度25102050100峰面積9401911328561141587130725線性方程y=305.32x+291.76

R2=0.9997由上述結(jié)果可知，2-氯乙醇在20ng/mL~100μg/mL濃度范圍內(nèi)，R2大于0.999，線性關(guān)系良好。精密度采用陰性的脫水香蔥樣品進(jìn)行三個(gè)水平（20.0μg/kg、40.0μg/kg、200.0μg/kg）的加標(biāo)回收率驗(yàn)證，具體數(shù)據(jù)見表3。表3脫水香蔥中2-氯乙醇的測(cè)定值加標(biāo)回收率及精密度數(shù)據(jù)添加水平μg/kg測(cè)定值μg/kg回收率%RSD%20.019.9599.77.8318.8794.317.1785.821.85109.219.8099.019.3796.840.040.05100.15.4637.4093.540.55101.438.7896.943.14107.942.66106.7200.0216.54108.33.32204.29102.1212.26106.1209.34104.7196.6398.3206.59103.3以上結(jié)果表明，添加量為20、40、200μg/kg時(shí)，回收率在85.8%~109.2%之間，RSD小于7.83，表明回收率良好，方法精密度較好。再現(xiàn)性（實(shí)驗(yàn)室間方法驗(yàn)證）本方法經(jīng)過(guò)大連海關(guān)技術(shù)中心、南京食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)院、重慶海關(guān)技術(shù)中心等單位，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間方法驗(yàn)證，對(duì)方便面、混合堅(jiān)果仁、脫水香蔥3種空白基質(zhì)進(jìn)行3水平、6平行的加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，回收率均在90%~110%之間，RSD小于7.87，結(jié)果符合要求，見表4、表5、表6。并通過(guò)江蘇省預(yù)防控制中心、廈門海關(guān)技術(shù)中心、深圳海關(guān)食品檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心、張家港海關(guān)綜合技術(shù)中心、浙江省檢驗(yàn)檢疫科學(xué)技術(shù)研究所等單位的方法評(píng)價(jià)。表4方便面中2-氯乙醇的測(cè)定值加標(biāo)回收率及精密度數(shù)據(jù)（大連海關(guān)技術(shù)中心）添加水平μg/kg測(cè)定值μg/kg回收率%RSD%20.016.180.56.9019.296.018.894.016.683.017.889.018.391.540.054.9109.83.4