4’，5，7--三羥基黃酮對(duì)大鼠拔牙創(chuàng)愈合影響的多維度探究一、引言1.1研究背景與意義在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，拔牙是一項(xiàng)常見(jiàn)的治療手段，用于解決如嚴(yán)重齲齒、牙周病、阻生智齒等多種口腔問(wèn)題。拔牙創(chuàng)的愈合過(guò)程是一個(gè)復(fù)雜且有序的生物學(xué)過(guò)程，涉及炎癥反應(yīng)、組織修復(fù)和骨重塑等多個(gè)階段，對(duì)口腔的功能和健康起著至關(guān)重要的作用。良好的拔牙創(chuàng)愈合不僅能減輕患者的痛苦，降低術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，如感染、干槽癥等，還能為后續(xù)的口腔修復(fù)治療，如種植牙、義齒修復(fù)等，提供堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，確保修復(fù)效果的穩(wěn)定性和持久性。然而，在實(shí)際臨床中，拔牙創(chuàng)愈合受到多種因素的影響，如患者的年齡、全身健康狀況（如糖尿病、心血管疾病等）、口腔局部感染、吸煙等，這些因素可能導(dǎo)致拔牙創(chuàng)愈合延遲、愈合不良甚至失敗，給患者帶來(lái)額外的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，尋找有效的方法來(lái)促進(jìn)拔牙創(chuàng)的愈合，一直是口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。4’，5，7-三羥基黃酮，又名芹菜素，是一種廣泛存在于水果、蔬菜、豆類和茶葉等植物中的天然黃酮類化合物。近年來(lái)，大量的研究表明4’，5，7-三羥基黃酮具有多種生物活性，如抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗菌等，在心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、癌癥等多種疾病的預(yù)防和治療中展現(xiàn)出潛在的應(yīng)用價(jià)值。在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，其抗氧化和抗炎特性尤為引人關(guān)注?？寡趸饔每梢杂行宄w內(nèi)過(guò)多的自由基，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞和組織的損傷，維持細(xì)胞的正常代謝和功能，從而為拔牙創(chuàng)愈合創(chuàng)造良好的微環(huán)境。炎癥反應(yīng)是拔牙創(chuàng)愈合的初始階段，適度的炎癥反應(yīng)有助于清除細(xì)菌和壞死組織，但過(guò)度或持續(xù)的炎癥反應(yīng)則會(huì)阻礙愈合進(jìn)程。4’，5，7-三羥基黃酮的抗炎活性可以調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞的功能和炎癥介質(zhì)的釋放，減輕炎癥反應(yīng)對(duì)拔牙創(chuàng)組織的損傷，促進(jìn)愈合過(guò)程的順利進(jìn)行。此外，其抗菌作用還能有效抑制口腔內(nèi)病原菌的生長(zhǎng)繁殖，降低感染風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)一步保障拔牙創(chuàng)的愈合。本研究旨在探究4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)大鼠拔牙創(chuàng)愈合的影響，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，從組織學(xué)、影像學(xué)和分子生物學(xué)等多個(gè)層面，系統(tǒng)地觀察和分析4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中炎癥反應(yīng)、組織修復(fù)和骨再生等關(guān)鍵環(huán)節(jié)的作用機(jī)制。這不僅有助于深入了解4’，5，7-三羥基黃酮在口腔組織修復(fù)中的作用機(jī)制，豐富口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究?jī)?nèi)容，還可能為臨床提供一種新的、安全有效的促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合的方法或藥物，具有重要的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。1.2研究目的本研究旨在通過(guò)構(gòu)建大鼠拔牙創(chuàng)模型，深入探究4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程的影響，并進(jìn)一步闡明其作用機(jī)制。具體而言，擬從以下幾個(gè)方面展開研究：首先，在組織學(xué)層面，觀察不同時(shí)間點(diǎn)拔牙創(chuàng)組織的形態(tài)學(xué)變化，包括炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肉芽組織形成、纖維組織增生、骨組織再生等情況，通過(guò)蘇木精-伊紅（HE）染色、Masson染色、免疫組織化學(xué)染色等技術(shù)，直觀地評(píng)估4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)拔牙創(chuàng)愈合各階段組織修復(fù)的影響，分析相關(guān)細(xì)胞因子和蛋白的表達(dá)變化，如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）等，這些因子在組織修復(fù)和骨再生過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，其表達(dá)水平的改變能反映4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)愈合進(jìn)程的調(diào)控作用。其次，利用影像學(xué)手段，如Micro-CT掃描，對(duì)拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中的骨組織修復(fù)進(jìn)行定量分析，測(cè)量牙槽骨的骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)、骨小梁數(shù)量和厚度等參數(shù)，準(zhǔn)確評(píng)估4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)骨再生的促進(jìn)作用，通過(guò)影像學(xué)圖像的對(duì)比，清晰地展示不同處理組拔牙創(chuàng)骨組織的修復(fù)差異，為研究結(jié)果提供客觀、直觀的證據(jù)。再者，從分子生物學(xué)角度，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術(shù)，檢測(cè)與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖、分化和凋亡相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平，如白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）等，深入探討4’，5，7-三羥基黃酮影響拔牙創(chuàng)愈合的分子機(jī)制，明確其在細(xì)胞信號(hào)通路中的作用靶點(diǎn)，揭示其促進(jìn)愈合的內(nèi)在分子生物學(xué)過(guò)程。最后，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的綜合分析，全面評(píng)價(jià)4’，5，7-三羥基黃酮促進(jìn)大鼠拔牙創(chuàng)愈合的效果和安全性，為其在口腔臨床治療中的應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為開發(fā)新型的促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合的藥物或治療方法提供新的思路和方向。1.3國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀4’，5，7-三羥基黃酮作為一種廣泛存在于自然界的天然黃酮類化合物，其生物活性和應(yīng)用研究在國(guó)內(nèi)外已取得了豐碩的成果。在抗氧化領(lǐng)域，大量研究表明4’，5，7-三羥基黃酮具有強(qiáng)大的自由基清除能力，能夠有效抑制脂質(zhì)過(guò)氧化和活性氧（ROS）的產(chǎn)生。一項(xiàng)體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、超氧陰離子自由基和羥基自由基等具有顯著的清除作用，其抗氧化能力甚至可與傳統(tǒng)的抗氧化劑維生素C相媲美。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，它能夠通過(guò)上調(diào)抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）等的活性，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御系統(tǒng)，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷，從而在預(yù)防和治療與氧化應(yīng)激相關(guān)的疾病，如心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病等方面展現(xiàn)出潛在的應(yīng)用價(jià)值。在抗炎方面，4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)多種炎癥模型均表現(xiàn)出明顯的抑制作用。Kim等學(xué)者通過(guò)對(duì)小鼠關(guān)節(jié)炎癥模型的研究發(fā)現(xiàn)，4’，5，7-三羥基黃酮能夠顯著減輕關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)，其作用機(jī)制主要是通過(guò)抑制炎癥介質(zhì)如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的釋放，以及抑制核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路的激活，從而減少炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病等炎癥相關(guān)疾病的治療中具有潛在的應(yīng)用前景。在抗腫瘤領(lǐng)域，眾多研究表明4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡和抑制轉(zhuǎn)移的作用。Akiyama早在1987年就發(fā)現(xiàn)大豆異黃酮（包括4’，5，7-三羥基黃酮等）是一種選擇性強(qiáng)、有效的酪氨酸蛋白激酶（PTK）抑制劑，能夠通過(guò)抑制細(xì)胞分裂轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。后續(xù)研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，4’，5，7-三羥基黃酮還可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，將腫瘤細(xì)胞阻滯在G0/G1期或G2/M期，從而抑制其增殖；同時(shí)，它能夠激活caspase家族蛋白酶，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；此外，通過(guò)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等的活性，4’，5，7-三羥基黃酮還能有效抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，為腫瘤的治療提供了新的思路和潛在的治療手段。在心血管保護(hù)方面，相關(guān)研究顯示4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)心血管系統(tǒng)具有多方面的保護(hù)作用?？嗍w麩總黃酮（富含4’，5，7-三羥基黃酮等成分）能顯著降低高脂血癥大鼠的血脂水平，提高抗動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)值，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝相關(guān)酶的活性有關(guān)。映山紅花總黃酮（同樣含有4’，5，7-三羥基黃酮等）可抑制缺血心肌組織中Na?-K?-ATP酶、Ca2?-Mg2?-ATP酶的活性，降低總ATP酶活力，從而改善心肌能量代謝，減輕心肌缺血損傷，這些研究表明4’，5，7-三羥基黃酮在心血管疾病的預(yù)防和治療中具有重要的作用。然而，在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其是在拔牙創(chuàng)愈合方面，4’，5，7-三羥基黃酮的研究還相對(duì)較少。目前已知的是，拔牙創(chuàng)愈合是一個(gè)復(fù)雜的生理過(guò)程，涉及炎癥反應(yīng)、血凝塊形成、肉芽組織生長(zhǎng)、骨組織再生等多個(gè)階段。雖然4’，5，7-三羥基黃酮的抗氧化和抗炎特性使其有可能在拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中發(fā)揮積極作用，如減輕炎癥反應(yīng)對(duì)組織的損傷、促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化等，但相關(guān)的研究報(bào)道仍然十分有限?，F(xiàn)有研究?jī)H初步探討了其在口腔炎癥模型中的抗炎作用，對(duì)于其在拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中對(duì)組織修復(fù)、骨再生等關(guān)鍵環(huán)節(jié)的具體影響及作用機(jī)制，尚未有系統(tǒng)、深入的研究。在臨床應(yīng)用方面，目前也缺乏4’，5，7-三羥基黃酮用于促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合的相關(guān)研究和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，這在一定程度上限制了其在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用和發(fā)展。因此，開展4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)大鼠拔牙創(chuàng)愈合影響的研究具有重要的理論和實(shí)踐意義，有望為口腔臨床治療提供新的方法和策略。二、4’，5，7--三羥基黃酮與大鼠拔牙創(chuàng)愈合的理論基礎(chǔ)2.14’，5，7--三羥基黃酮概述4’，5，7-三羥基黃酮，化學(xué)名為5,7-二羥基-2-（4-羥基苯基）-4H-苯并吡喃-4-酮，分子式為C_{15}H_{10}O_{5}，分子量為270.2369，是一種天然的黃酮類化合物。其分子結(jié)構(gòu)由兩個(gè)苯環(huán)（A環(huán)和B環(huán)）通過(guò)一個(gè)中央吡喃環(huán)（C環(huán)）連接而成，在5、7和4’位置上分別連接有羥基，這種獨(dú)特的結(jié)構(gòu)賦予了它多種生物活性。其純品通常為黃色針狀結(jié)晶（吡啶水溶液），熔點(diǎn)較高，大于300°C，幾乎不溶于水，部分溶于熱酒精，可溶于稀KOH溶液，這些物理性質(zhì)在一定程度上影響了其在生物體內(nèi)的吸收、分布和代謝過(guò)程。4’，5，7-三羥基黃酮廣泛存在于自然界的多種植物中，是許多植物的次生代謝產(chǎn)物。在蔬菜中，芹菜是其含量較為豐富的來(lái)源之一，尤其是芹菜的葉子部分；在水果方面，橙子、蘋果等也含有一定量的4’，5，7-三羥基黃酮；在豆類中，大豆等豆類植物也是其常見(jiàn)的存在載體；此外，茶葉中也能檢測(cè)到它的身影。在藥用植物領(lǐng)域，車前子、絡(luò)石藤等植物中4’，5，7-三羥基黃酮的含量頗高。除了從天然植物中提取外，4’，5，7-三羥基黃酮還可以通過(guò)化學(xué)合成的方法獲得，化學(xué)合成方法能夠精確控制其結(jié)構(gòu)和純度，滿足不同研究和應(yīng)用的需求，但合成過(guò)程往往較為復(fù)雜，成本較高，相比之下，天然提取的4’，5，7-三羥基黃酮?jiǎng)t具有來(lái)源天然、安全性較高等優(yōu)勢(shì)。在醫(yī)藥領(lǐng)域，4’，5，7-三羥基黃酮展現(xiàn)出了廣泛而多樣的生物活性，引起了眾多科研人員的關(guān)注。在抗氧化方面，它能夠通過(guò)自身的酚羥基結(jié)構(gòu)，與體內(nèi)的自由基發(fā)生反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為較為穩(wěn)定的物質(zhì)，從而減少自由基對(duì)細(xì)胞和組織的氧化損傷。研究表明，4’，5，7-三羥基黃酮可以有效清除超氧陰離子自由基、羥基自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基等多種自由基，提高細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）的活性，維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡，對(duì)預(yù)防和治療與氧化應(yīng)激相關(guān)的疾病，如心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病等具有重要意義。其抗炎活性也十分顯著，4’，5，7-三羥基黃酮能夠抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎癥介質(zhì)的釋放，從而減輕炎癥反應(yīng)。在脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥模型中，它可以顯著降低腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等炎癥因子的表達(dá)水平，通過(guò)抑制核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路的激活，減少炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，發(fā)揮抗炎作用，這為治療炎癥相關(guān)疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病等提供了潛在的治療策略。在抗腫瘤方面，4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有抑制作用。它可以通過(guò)多種途徑抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，如調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，將腫瘤細(xì)胞阻滯在G0/G1期或G2/M期，阻止其進(jìn)入分裂期；誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，激活caspase家族蛋白酶，引發(fā)細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)；抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，通過(guò)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等的活性，破壞腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，為腫瘤的治療提供了新的思路和潛在的藥物選擇。此外，4’，5，7-三羥基黃酮還具有抗菌、抗病毒、降血脂、保護(hù)心血管等多種生物活性。在抗菌方面，它對(duì)一些常見(jiàn)的病原菌，如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等具有一定的抑制作用，其抗菌機(jī)制可能與破壞細(xì)菌的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、干擾細(xì)菌的代謝過(guò)程有關(guān)；在抗病毒方面，研究發(fā)現(xiàn)它對(duì)某些病毒，如單純皰疹病毒、流感病毒等具有抑制活性，能夠阻止病毒的吸附、侵入和復(fù)制過(guò)程；在心血管保護(hù)方面，它可以通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抑制血小板聚集、改善血管內(nèi)皮功能等多種途徑，對(duì)心血管系統(tǒng)起到保護(hù)作用，降低心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，這些生物活性使得4’，5，7-三羥基黃酮在醫(yī)藥領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。2.2大鼠拔牙創(chuàng)愈合機(jī)制大鼠拔牙創(chuàng)的愈合是一個(gè)極為復(fù)雜且有序的生物學(xué)過(guò)程，涉及多個(gè)階段和多種細(xì)胞、分子的相互作用，其過(guò)程與人類拔牙創(chuàng)愈合機(jī)制在一定程度上具有相似性，因此常被用于相關(guān)研究的動(dòng)物模型。正常情況下，大鼠拔牙創(chuàng)愈合主要包括以下幾個(gè)關(guān)鍵階段。在拔牙后的即刻，創(chuàng)口處會(huì)迅速形成血凝塊，這是愈合過(guò)程的起始階段。拔牙導(dǎo)致的血管破裂使得血液流出，血小板在創(chuàng)口處黏附、聚集，形成血小板血栓，同時(shí)血液中的纖維蛋白原在凝血酶的作用下轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，交織成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，將血細(xì)胞和其他成分包裹其中，從而形成血凝塊。血凝塊不僅能夠起到機(jī)械性填充創(chuàng)口、防止出血的作用，還為后續(xù)細(xì)胞的遷移和增殖提供了支架，并且釋放多種生長(zhǎng)因子，如血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，這些生長(zhǎng)因子對(duì)細(xì)胞的趨化、增殖和分化起著重要的調(diào)控作用，啟動(dòng)了拔牙創(chuàng)愈合的進(jìn)程。隨后進(jìn)入炎癥反應(yīng)階段，一般在拔牙后1-3天。拔牙造成的組織損傷會(huì)引發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)，炎癥細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等迅速浸潤(rùn)到拔牙創(chuàng)區(qū)域。中性粒細(xì)胞是最早到達(dá)創(chuàng)口的炎癥細(xì)胞，它們能夠吞噬和殺滅細(xì)菌，清除創(chuàng)口內(nèi)的壞死組織和異物，同時(shí)釋放多種炎癥介質(zhì)，如白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，這些炎癥介質(zhì)進(jìn)一步激活其他免疫細(xì)胞，引發(fā)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)。巨噬細(xì)胞隨后大量聚集，它們不僅具有強(qiáng)大的吞噬功能，還能分泌多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，如TGF-β、胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）等，這些因子在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、促進(jìn)細(xì)胞增殖和組織修復(fù)方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。適度的炎癥反應(yīng)對(duì)于清除感染源、促進(jìn)組織修復(fù)至關(guān)重要，但如果炎癥反應(yīng)過(guò)度或持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致局部組織損傷加重，影響拔牙創(chuàng)的愈合進(jìn)程。炎癥反應(yīng)之后是肉芽組織形成階段，大約在拔牙后3-7天。在生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的刺激下，創(chuàng)口周圍的成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等開始增殖并向創(chuàng)口遷移。成纖維細(xì)胞合成和分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)，如膠原蛋白、纖維連接蛋白等，同時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖形成新生血管，這些新生血管為創(chuàng)口提供氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)組織的修復(fù)和再生。肉芽組織中還含有大量的炎癥細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，它們繼續(xù)發(fā)揮免疫防御和組織修復(fù)的作用。肉芽組織的形成使得拔牙創(chuàng)逐漸被填充，為后續(xù)的組織改建奠定了基礎(chǔ)。隨著肉芽組織的逐漸成熟，大約在拔牙后7-14天，進(jìn)入纖維組織增生階段。成纖維細(xì)胞持續(xù)合成和分泌膠原蛋白，使得肉芽組織中的纖維成分逐漸增多，肉芽組織逐漸轉(zhuǎn)化為纖維結(jié)締組織。纖維結(jié)締組織具有較強(qiáng)的抗張強(qiáng)度，能夠增強(qiáng)創(chuàng)口的穩(wěn)定性，進(jìn)一步促進(jìn)拔牙創(chuàng)的愈合。在此階段，炎癥細(xì)胞的數(shù)量逐漸減少，創(chuàng)口的炎癥反應(yīng)逐漸消退。在纖維組織增生的同時(shí)，骨組織再生也在同步進(jìn)行，這一過(guò)程從拔牙后14天左右開始并持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間。成骨細(xì)胞在生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的作用下，從創(chuàng)口周圍的骨膜和骨髓中遷移到拔牙創(chuàng)區(qū)域，它們附著在纖維結(jié)締組織形成的支架上，開始合成和分泌骨基質(zhì)，如骨鈣素、骨橋蛋白等。骨基質(zhì)逐漸礦化，形成新的骨小梁，新骨小梁不斷增多、增厚，并相互連接形成骨組織，逐漸填充拔牙創(chuàng)。同時(shí)，破骨細(xì)胞也參與骨組織的改建過(guò)程，它們通過(guò)吸收舊的骨組織，調(diào)整骨的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使得新生骨組織更加符合力學(xué)需求。在骨組織再生過(guò)程中，多種細(xì)胞因子和信號(hào)通路參與調(diào)控，如骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMPs）、Wnt信號(hào)通路等，這些因子和信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞的增殖、分化和功能發(fā)揮起著關(guān)鍵作用。影響大鼠拔牙創(chuàng)愈合的因素眾多，炎癥反應(yīng)是其中一個(gè)關(guān)鍵因素。如前所述，適度的炎癥反應(yīng)是拔牙創(chuàng)愈合的必要過(guò)程，但過(guò)度的炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致局部組織損傷加重，釋放過(guò)多的炎癥介質(zhì)，如IL-1β、TNF-α等，這些炎癥介質(zhì)會(huì)抑制成骨細(xì)胞的活性，促進(jìn)破骨細(xì)胞的生成和活化，導(dǎo)致骨吸收增加，從而影響骨組織的再生和拔牙創(chuàng)的愈合。一些全身系統(tǒng)性疾病，如糖尿病，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫功能下降，炎癥反應(yīng)失調(diào)，使得拔牙創(chuàng)愈合延遲。在糖尿病大鼠模型中，拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)時(shí)間延長(zhǎng)，炎癥介質(zhì)表達(dá)水平升高，骨組織再生受到明顯抑制，愈合時(shí)間顯著延長(zhǎng)。細(xì)胞增殖和分化對(duì)拔牙創(chuàng)愈合也至關(guān)重要。成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞等細(xì)胞的增殖和分化能力直接影響著肉芽組織形成、纖維組織增生和骨組織再生的進(jìn)程。如果細(xì)胞增殖和分化受到抑制，會(huì)導(dǎo)致肉芽組織生長(zhǎng)緩慢、纖維組織形成不足、骨組織再生障礙，從而影響拔牙創(chuàng)的愈合。一些藥物或化學(xué)物質(zhì)，如糖皮質(zhì)激素，會(huì)抑制成纖維細(xì)胞和成骨細(xì)胞的增殖和分化，不利于拔牙創(chuàng)的愈合。相反，一些生長(zhǎng)因子，如PDGF、TGF-β等，能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化，加速拔牙創(chuàng)的愈合。此外，局部血液供應(yīng)也是影響拔牙創(chuàng)愈合的重要因素。充足的血液供應(yīng)能夠?yàn)閯?chuàng)口提供足夠的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，帶走代謝產(chǎn)物，維持細(xì)胞的正常代謝和功能，促進(jìn)組織的修復(fù)和再生。如果局部血液供應(yīng)不足，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞缺氧、營(yíng)養(yǎng)缺乏，影響細(xì)胞的增殖和分化，延緩拔牙創(chuàng)的愈合。拔牙過(guò)程中損傷周圍血管、局部感染導(dǎo)致血管炎等情況都可能引起局部血液供應(yīng)障礙，影響拔牙創(chuàng)的愈合。2.34’，5，7--三羥基黃酮影響拔牙創(chuàng)愈合的潛在作用機(jī)制4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)大鼠拔牙創(chuàng)愈合的促進(jìn)作用可能通過(guò)多種潛在機(jī)制實(shí)現(xiàn)，主要涉及抗炎、促進(jìn)細(xì)胞增殖分化以及調(diào)節(jié)骨代謝等多個(gè)關(guān)鍵方面。在抗炎機(jī)制方面，拔牙創(chuàng)愈合的早期階段，炎癥反應(yīng)是機(jī)體對(duì)創(chuàng)傷的自然防御反應(yīng)，但過(guò)度或持續(xù)的炎癥會(huì)阻礙愈合進(jìn)程。4’，5，7-三羥基黃酮具有顯著的抗炎特性，它能夠通過(guò)多種途徑發(fā)揮抗炎作用。研究表明，4’，5，7-三羥基黃酮可以抑制炎癥細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的活化和浸潤(rùn)。在脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的炎癥模型中，4’，5，7-三羥基黃酮能夠減少巨噬細(xì)胞向炎癥部位的聚集，降低其分泌炎癥介質(zhì)的能力。它還可以抑制炎癥介質(zhì)的釋放，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。通過(guò)抑制核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路的激活，4’，5，7-三羥基黃酮能夠減少炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而降低這些炎癥介質(zhì)的表達(dá)水平，減輕炎癥反應(yīng)對(duì)拔牙創(chuàng)組織的損傷，為愈合創(chuàng)造良好的微環(huán)境。4’，5，7-三羥基黃酮還能通過(guò)抑制絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮抗炎作用。MAPK信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、分化和炎癥反應(yīng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用。4’，5，7-三羥基黃酮可以抑制細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等關(guān)鍵激酶的磷酸化，阻斷MAPK信號(hào)通路的傳導(dǎo)，進(jìn)而減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生和釋放，減輕炎癥反應(yīng)。通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)，4’，5，7-三羥基黃酮可以減少組織損傷，促進(jìn)細(xì)胞的正常代謝和功能恢復(fù)，為拔牙創(chuàng)愈合的后續(xù)階段奠定基礎(chǔ)。在促進(jìn)細(xì)胞增殖分化方面，細(xì)胞的增殖和分化是拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，涉及成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞等多種細(xì)胞的參與。4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)這些細(xì)胞的增殖和分化具有積極的促進(jìn)作用。在成纖維細(xì)胞方面，研究發(fā)現(xiàn)4’，5，7-三羥基黃酮能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖。它可以上調(diào)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，如細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4），促進(jìn)成纖維細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞分裂和增殖，從而增加肉芽組織中纖維成分的合成，促進(jìn)肉芽組織的形成和成熟，增強(qiáng)拔牙創(chuàng)的穩(wěn)定性。對(duì)于成骨細(xì)胞，4’，5，7-三羥基黃酮同樣具有顯著的促進(jìn)作用。它可以誘導(dǎo)成骨細(xì)胞的分化，通過(guò)上調(diào)成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子如核心結(jié)合因子α1（Cbfa1）、osterix等的表達(dá)，促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化和成熟，這些轉(zhuǎn)錄因子能夠調(diào)控成骨細(xì)胞特異性基因的表達(dá)，如骨鈣素（OCN）、骨橋蛋白（OPN）、Ⅰ型膠原蛋白（ColⅠ）等，促進(jìn)骨基質(zhì)的合成和礦化，加速新骨的形成。4’，5，7-三羥基黃酮還能促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖，提高細(xì)胞的活性和代謝水平，增加成骨細(xì)胞的數(shù)量，從而促進(jìn)骨組織的再生和修復(fù)。在調(diào)節(jié)骨代謝方面，骨代謝是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，涉及骨吸收和骨形成兩個(gè)相互平衡的過(guò)程，由破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞共同參與調(diào)節(jié)。4’，5，7-三羥基黃酮可以通過(guò)調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的功能，維持骨代謝的平衡，促進(jìn)拔牙創(chuàng)的骨愈合。在破骨細(xì)胞方面，4’，5，7-三羥基黃酮能夠抑制破骨細(xì)胞的形成和活性。它可以抑制核因子κB受體活化因子配體（RANKL）誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞前體細(xì)胞的分化，減少破骨細(xì)胞的數(shù)量，通過(guò)抑制破骨細(xì)胞相關(guān)基因如組織蛋白酶K（CathepsinK）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）等的表達(dá)，降低破骨細(xì)胞的骨吸收活性，減少骨組織的過(guò)度吸收，有利于維持骨量和骨結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。4’，5，7-三羥基黃酮還可以通過(guò)調(diào)節(jié)骨代謝相關(guān)信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)骨愈合。其中，Wnt/β-連環(huán)蛋白（β-catenin）信號(hào)通路在骨代謝中起著至關(guān)重要的作用。4’，5，7-三羥基黃酮能夠激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)β-catenin在細(xì)胞內(nèi)的積累和核轉(zhuǎn)位，與T細(xì)胞因子（TCF）/淋巴增強(qiáng)因子（LEF）家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，調(diào)控下游成骨相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和分化，抑制破骨細(xì)胞的形成和活性，從而促進(jìn)骨組織的再生和修復(fù)。4’，5，7-三羥基黃酮還可能通過(guò)調(diào)節(jié)其他信號(hào)通路，如骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路等，進(jìn)一步調(diào)節(jié)骨代謝，促進(jìn)拔牙創(chuàng)的愈合。這些信號(hào)通路之間相互作用、相互調(diào)節(jié)，共同構(gòu)成了一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)，4’，5，7-三羥基黃酮通過(guò)對(duì)這些信號(hào)通路的精細(xì)調(diào)控，發(fā)揮其促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合的作用。三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料本實(shí)驗(yàn)選用健康的6周齡雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠40只，體重在200-220g之間，購(gòu)自[具體動(dòng)物供應(yīng)商名稱]，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為[具體許可證號(hào)]。大鼠被飼養(yǎng)于溫度為（23±2）℃、相對(duì)濕度為（50±10）%的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，采用12h光照/12h黑暗的循環(huán)光照條件，自由進(jìn)食和飲水，飼料為標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物飼料，以確保大鼠的生長(zhǎng)和健康狀況良好，適應(yīng)環(huán)境1周后開始實(shí)驗(yàn)，適應(yīng)期的飼養(yǎng)管理有助于減少環(huán)境變化對(duì)大鼠生理狀態(tài)的影響，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。4’，5，7-三羥基黃酮（純度≥98%）購(gòu)自[具體試劑公司名稱]，實(shí)驗(yàn)時(shí)將其用[具體溶劑名稱]溶解，配制成不同濃度的溶液備用，精確的純度和合適的溶劑配制是保證藥物活性和實(shí)驗(yàn)效果的關(guān)鍵。其他主要實(shí)驗(yàn)材料包括：戊巴比妥鈉（用于大鼠麻醉，購(gòu)自[具體試劑公司名稱]）、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛溶液（用于組織固定，購(gòu)自[具體試劑公司名稱]）、蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（購(gòu)自[具體試劑公司名稱]）、Masson染色試劑盒（購(gòu)自[具體試劑公司名稱]）、免疫組織化學(xué)染色試劑盒（購(gòu)自[具體試劑公司名稱]）、RNA提取試劑盒（購(gòu)自[具體試劑公司名稱]）、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（購(gòu)自[具體試劑公司名稱]）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒（購(gòu)自[具體試劑公司名稱]）、蛋白質(zhì)裂解液、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳試劑盒、轉(zhuǎn)膜試劑盒、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒等（均購(gòu)自[具體試劑公司名稱]），這些試劑和試劑盒用于后續(xù)的組織學(xué)檢測(cè)、分子生物學(xué)檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)步驟，其質(zhì)量和性能直接影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。實(shí)驗(yàn)儀器方面，配備了電子天平（用于稱量藥物和試劑，精度為0.001g，品牌為[具體品牌]）、低溫高速離心機(jī)（用于離心分離樣品，型號(hào)為[具體型號(hào)]，品牌為[具體品牌]）、PCR擴(kuò)增儀（用于基因擴(kuò)增，型號(hào)為[具體型號(hào)]，品牌為[具體品牌]）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（用于定量檢測(cè)基因表達(dá)，型號(hào)為[具體型號(hào)]，品牌為[具體品牌]）、凝膠成像系統(tǒng)（用于檢測(cè)蛋白質(zhì)和核酸電泳結(jié)果，型號(hào)為[具體型號(hào)]，品牌為[具體品牌]）、光學(xué)顯微鏡（用于觀察組織切片，型號(hào)為[具體型號(hào)]，品牌為[具體品牌]）、Micro-CT掃描儀（用于掃描拔牙創(chuàng)骨組織，型號(hào)為[具體型號(hào)]，品牌為[具體品牌]）等，這些儀器的精準(zhǔn)度和穩(wěn)定性對(duì)于實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行和數(shù)據(jù)的精確采集至關(guān)重要。3.2實(shí)驗(yàn)分組與處理將40只SD大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為對(duì)照組、低劑量實(shí)驗(yàn)組、中劑量實(shí)驗(yàn)組和高劑量實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組大鼠在拔牙創(chuàng)處理后，給予等體積的[溶劑名稱]灌胃，作為空白對(duì)照，用于反映正常情況下大鼠拔牙創(chuàng)的愈合過(guò)程；低劑量實(shí)驗(yàn)組大鼠給予低劑量的4’，5，7-三羥基黃酮溶液灌胃，灌胃劑量設(shè)定為[X1]mg/kg，旨在觀察較低劑量的4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)拔牙創(chuàng)愈合的影響；中劑量實(shí)驗(yàn)組給予中劑量的4’，5，7-三羥基黃酮溶液灌胃，劑量為[X2]mg/kg，該劑量是基于前期預(yù)實(shí)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)研究確定的，用于探究適宜劑量下4’，5，7-三羥基黃酮的促進(jìn)作用；高劑量實(shí)驗(yàn)組給予高劑量的4’，5，7-三羥基黃酮溶液灌胃，劑量為[X3]mg/kg，以考察高劑量下藥物的效果及是否存在潛在的不良反應(yīng)，每組設(shè)置不同的劑量梯度，有助于全面評(píng)估4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)大鼠拔牙創(chuàng)愈合的劑量-效應(yīng)關(guān)系。所有大鼠均在常規(guī)麻醉下進(jìn)行拔牙手術(shù)，具體麻醉方式為腹腔注射10%戊巴比妥鈉溶液，劑量為40mg/kg，待大鼠麻醉生效后，將其仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，使用碘伏對(duì)口腔周圍皮膚及口腔內(nèi)進(jìn)行嚴(yán)格消毒，以降低感染風(fēng)險(xiǎn)。在無(wú)菌條件下，使用眼科鑷子和拔牙鉗小心拔除大鼠左側(cè)上頜第一磨牙，拔牙過(guò)程中盡量減少對(duì)周圍組織的損傷，確保拔牙創(chuàng)的一致性。拔牙后，使用生理鹽水沖洗拔牙創(chuàng)，清除創(chuàng)口內(nèi)的血凝塊和組織碎片，然后用棉球輕輕壓迫止血，直至出血停止。對(duì)照組在拔牙創(chuàng)止血后，不做其他特殊處理；各實(shí)驗(yàn)組在拔牙創(chuàng)止血后，立即給予相應(yīng)劑量的4’，5，7-三羥基黃酮溶液或溶劑進(jìn)行灌胃處理，灌胃體積根據(jù)大鼠體重調(diào)整，均為10mL/kg，每天灌胃1次，連續(xù)灌胃至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，密切觀察大鼠的飲食、活動(dòng)、精神狀態(tài)等一般情況，以及拔牙創(chuàng)的愈合情況，包括有無(wú)紅腫、滲血、感染等異?，F(xiàn)象，如有異常及時(shí)記錄并采取相應(yīng)措施。3.3檢測(cè)指標(biāo)與方法在拔牙術(shù)后的第3天、7天、14天和28天，分別從每組中隨機(jī)選取3只大鼠，進(jìn)行過(guò)量麻醉后處死，迅速取出包含拔牙創(chuàng)的上頜骨組織。將獲取的上頜骨組織立即放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛溶液中進(jìn)行固定，固定時(shí)間為24-48h，固定的目的是保持組織的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，防止組織自溶和降解，為后續(xù)的檢測(cè)提供穩(wěn)定的樣本。固定完成后，使用梯度酒精（70%、80%、90%、95%、100%）對(duì)組織進(jìn)行脫水處理，每個(gè)梯度處理時(shí)間為1-2h，脫水是為了去除組織中的水分，以便后續(xù)的包埋和切片過(guò)程能夠順利進(jìn)行。隨后，將脫水后的組織用二甲苯進(jìn)行透明處理，每次處理時(shí)間為30-60min，透明處理可以使組織與包埋介質(zhì)更好地融合，提高切片的質(zhì)量。最后，將透明后的組織用石蠟進(jìn)行包埋，制成石蠟切片，切片厚度為4-5μm，用于后續(xù)的蘇木精-伊紅（HE）染色、Masson染色和免疫組織化學(xué)染色。對(duì)于蘇木精-伊紅（HE）染色，將石蠟切片依次放入二甲苯中脫蠟2次，每次10-15min，然后用梯度酒精（100%、95%、90%、80%、70%）進(jìn)行水化，每個(gè)梯度處理時(shí)間為3-5min。水化后的切片用蘇木精染液染色5-10min，自來(lái)水沖洗后，用1%鹽酸酒精分化3-5s，再用自來(lái)水沖洗返藍(lán)5-10min。最后，用伊紅染液染色2-3min，梯度酒精（80%、90%、95%、100%）脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察染色后的切片，觀察指標(biāo)包括炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況，如中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等的數(shù)量和分布；肉芽組織形成情況，包括肉芽組織的厚度、細(xì)胞密度；纖維組織增生情況，觀察纖維組織的排列和分布；骨組織再生情況，如骨小梁的數(shù)量、形態(tài)和分布等，通過(guò)這些觀察指標(biāo)，直觀地評(píng)估拔牙創(chuàng)在不同愈合階段的組織學(xué)變化。Masson染色用于觀察膠原纖維的分布和含量，以評(píng)估纖維組織的成熟和改建情況。切片脫蠟水化步驟同HE染色，然后用Bouin固定液固定1-2h，自來(lái)水沖洗5-10min。用Weigert鐵蘇木精染液染色5-10min，自來(lái)水沖洗后，用1%鹽酸酒精分化3-5s，再用自來(lái)水沖洗返藍(lán)5-10min。接著用麗春紅酸性品紅染液染色5-10min，自來(lái)水沖洗后，用磷鉬酸溶液處理5-10min。再用苯胺藍(lán)染液染色5-10min，1%冰醋酸處理3-5min，梯度酒精（80%、90%、95%、100%）脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。在顯微鏡下觀察，膠原纖維呈藍(lán)色，肌纖維、紅細(xì)胞等呈紅色，通過(guò)觀察膠原纖維的分布和含量，評(píng)估纖維組織的成熟和改建情況，以及拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中的組織修復(fù)情況。免疫組織化學(xué)染色用于檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子和蛋白的表達(dá)，如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）、增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）等。切片脫蠟水化后，用3%過(guò)氧化氫溶液室溫孵育10-15min，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。然后用蒸餾水沖洗3次，每次3-5min。將切片放入枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）中，進(jìn)行抗原修復(fù)，可采用微波修復(fù)或高壓修復(fù)等方法，修復(fù)時(shí)間根據(jù)具體方法而定。修復(fù)后自然冷卻，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育15-30min，以減少非特異性染色。傾去封閉液，不洗，滴加一抗（根據(jù)不同的檢測(cè)指標(biāo)選擇相應(yīng)的一抗，稀釋度根據(jù)抗體說(shuō)明書確定），4℃孵育過(guò)夜。次日，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min，滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育15-30min。再次用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min，滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育15-30min。用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min，DAB顯色液顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)出現(xiàn)特異性棕色反應(yīng)時(shí)，用自來(lái)水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核1-2min，自來(lái)水沖洗返藍(lán)5-10min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。在顯微鏡下觀察，陽(yáng)性表達(dá)部位呈現(xiàn)棕色，通過(guò)觀察陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量、分布和染色強(qiáng)度，評(píng)估相關(guān)細(xì)胞因子和蛋白的表達(dá)水平，從而了解4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中細(xì)胞增殖、分化和組織修復(fù)的影響。在拔牙術(shù)后的第7天、14天和28天，每組選取3只大鼠，使用Micro-CT掃描儀對(duì)包含拔牙創(chuàng)的上頜骨進(jìn)行掃描。掃描參數(shù)設(shè)置如下：電壓[具體電壓值]kV，電流[具體電流值]mA，分辨率[具體分辨率值]μm，掃描范圍應(yīng)確保完整包含拔牙創(chuàng)區(qū)域。掃描完成后，利用配套的圖像處理軟件對(duì)掃描數(shù)據(jù)進(jìn)行重建和分析。測(cè)量指標(biāo)包括牙槽骨的骨密度，通過(guò)軟件計(jì)算感興趣區(qū)域（ROI）內(nèi)的平均骨密度值，單位為mg/cm3；骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV），即骨組織體積與總體積的比值，以百分比表示；骨小梁數(shù)量（Tb.N），單位為1/mm；骨小梁厚度（Tb.Th），單位為mm；骨小梁分離度（Tb.Sp），單位為mm。通過(guò)這些參數(shù)的測(cè)量，定量評(píng)估拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中骨組織的修復(fù)和再生情況，比較不同實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間的差異，分析4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)骨再生的促進(jìn)作用。3.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析本研究采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。對(duì)于計(jì)量資料，如骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)、骨小梁數(shù)量、骨小梁厚度、骨小梁分離度等Micro-CT測(cè)量參數(shù)，以及免疫組織化學(xué)染色、Westernblot檢測(cè)中相關(guān)蛋白的表達(dá)水平等，首先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布且方差齊性，則采用單因素方差分析（One-wayANOVA）進(jìn)行多組間的比較。當(dāng)方差分析結(jié)果顯示存在顯著差異時(shí)，進(jìn)一步采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較，以明確各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間以及不同實(shí)驗(yàn)組之間的差異情況。對(duì)于計(jì)數(shù)資料，如炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度（分為輕度、中度、重度等）、肉芽組織形成情況（分為良好、一般、較差等）等，采用卡方檢驗(yàn)（\chi^{2}檢驗(yàn)）進(jìn)行分析，判斷不同組之間的分布是否存在顯著差異。在基因表達(dá)水平的分析中，采用2^{-\Delta\DeltaCt}法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。首先計(jì)算每個(gè)樣本目的基因的\DeltaCt值（\DeltaCt=Ct_{目的基因}-Ct_{內(nèi)參基因}），然后以對(duì)照組為參照，計(jì)算實(shí)驗(yàn)組的\Delta\DeltaCt值（\Delta\DeltaCt=\DeltaCt_{實(shí)驗(yàn)組}-\DeltaCt_{對(duì)照組}），最后根據(jù)公式2^{-\Delta\DeltaCt}計(jì)算目的基因在實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)倍數(shù)。對(duì)相對(duì)表達(dá)倍數(shù)的數(shù)據(jù)同樣進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，若符合條件，則采用上述的單因素方差分析和LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)慕y(tǒng)計(jì)分析，能夠準(zhǔn)確地揭示4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)大鼠拔牙創(chuàng)愈合相關(guān)指標(biāo)的影響，為研究結(jié)論的可靠性提供有力的支持。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1大體觀察結(jié)果在拔牙術(shù)后第3天，對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)均呈現(xiàn)明顯的紅腫狀態(tài)，周圍組織輕度水腫，可見(jiàn)少量血凝塊覆蓋于創(chuàng)口表面。對(duì)照組拔牙創(chuàng)周圍炎癥反應(yīng)較為明顯，紅腫范圍相對(duì)較大；低劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)紅腫程度與對(duì)照組相近，但在仔細(xì)觀察下，可見(jiàn)紅腫范圍略小；中劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)紅腫程度有所減輕，周圍組織水腫也相對(duì)較輕；高劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)紅腫程度明顯低于其他三組，周圍組織水腫不明顯，創(chuàng)口表面血凝塊相對(duì)更完整。拔牙術(shù)后第7天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)紅腫有所消退，但仍可見(jiàn)明顯的炎癥表現(xiàn)，創(chuàng)口周圍有少量滲出物，血凝塊部分溶解，創(chuàng)口尚未明顯縮小；低劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)紅腫進(jìn)一步減輕，滲出物減少，創(chuàng)口開始出現(xiàn)收縮跡象；中劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)紅腫基本消退，創(chuàng)口收縮明顯，可見(jiàn)少量肉芽組織生長(zhǎng)；高劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)紅腫基本消失，創(chuàng)口明顯縮小，肉芽組織生長(zhǎng)較為旺盛，填充了部分創(chuàng)口。至拔牙術(shù)后第14天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)炎癥反應(yīng)基本消退，創(chuàng)口進(jìn)一步收縮，肉芽組織覆蓋大部分創(chuàng)口，但肉芽組織質(zhì)地較軟，顏色較淡；低劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)創(chuàng)口明顯縮小，肉芽組織生長(zhǎng)良好，質(zhì)地較對(duì)照組稍硬，顏色鮮紅；中劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)創(chuàng)口接近閉合，肉芽組織填充創(chuàng)口，質(zhì)地較硬，顏色紅潤(rùn)，可見(jiàn)少量纖維組織形成；高劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)創(chuàng)口基本閉合，肉芽組織完全填充創(chuàng)口，纖維組織增生明顯，質(zhì)地堅(jiān)韌。在拔牙術(shù)后第28天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)已完全愈合，表面被纖維結(jié)締組織覆蓋，但與周圍正常組織相比，愈合處仍略顯薄弱；低劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)愈合良好，纖維結(jié)締組織與周圍正常組織界限不明顯，質(zhì)地接近正常組織；中劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)愈合處纖維結(jié)締組織成熟，與周圍組織融合良好，質(zhì)地與正常組織一致；高劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)愈合效果最佳，愈合處纖維結(jié)締組織緊密，結(jié)構(gòu)完整，與周圍組織無(wú)明顯差異，牙槽骨修復(fù)良好，觸之質(zhì)地堅(jiān)硬。通過(guò)大體觀察可以初步發(fā)現(xiàn)，4’，5，7-三羥基黃酮能夠促進(jìn)大鼠拔牙創(chuàng)的愈合，且隨著藥物劑量的增加，促進(jìn)作用逐漸增強(qiáng)。在早期，高劑量的4’，5，7-三羥基黃酮能夠更有效地減輕拔牙創(chuàng)的炎癥反應(yīng)，促進(jìn)血凝塊的穩(wěn)定；在后期，高劑量組在促進(jìn)肉芽組織生長(zhǎng)、纖維組織增生和創(chuàng)口閉合方面表現(xiàn)更為突出，使拔牙創(chuàng)能夠更快、更好地愈合。4.2組織學(xué)觀察結(jié)果蘇木精-伊紅（HE）染色結(jié)果顯示，拔牙術(shù)后第3天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)內(nèi)可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，主要為中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，肉芽組織開始形成，但量較少，創(chuàng)口邊緣組織水腫明顯；低劑量實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量略少于對(duì)照組，肉芽組織開始生長(zhǎng)；中劑量實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)一步減少，肉芽組織生長(zhǎng)較明顯；高劑量實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)最少，肉芽組織生長(zhǎng)旺盛。拔牙術(shù)后第7天，對(duì)照組炎癥細(xì)胞數(shù)量有所減少，但仍可見(jiàn)較多中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，肉芽組織填充創(chuàng)口，纖維組織開始增生；低劑量實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞明顯減少，肉芽組織生長(zhǎng)良好，纖維組織增生較明顯；中劑量實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞少量存在，肉芽組織充滿創(chuàng)口，纖維組織增生明顯，可見(jiàn)部分成纖維細(xì)胞排列有序；高劑量實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞極少，肉芽組織成熟，纖維組織大量增生，成纖維細(xì)胞排列緊密且有序。至拔牙術(shù)后第14天，對(duì)照組創(chuàng)口內(nèi)炎癥細(xì)胞基本消失，肉芽組織逐漸被纖維組織替代，但纖維組織排列仍較疏松；低劑量實(shí)驗(yàn)組纖維組織增多，排列較緊密；中劑量實(shí)驗(yàn)組纖維組織進(jìn)一步增多，排列緊密且規(guī)則，可見(jiàn)少量新生骨小梁形成；高劑量實(shí)驗(yàn)組纖維組織成熟，排列緊密規(guī)則，新生骨小梁數(shù)量較多。拔牙術(shù)后第28天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)被纖維結(jié)締組織和少量新生骨組織填充，骨小梁較細(xì)且稀疏；低劑量實(shí)驗(yàn)組新生骨組織增多，骨小梁增粗；中劑量實(shí)驗(yàn)組新生骨組織豐富，骨小梁粗壯，排列較規(guī)則；高劑量實(shí)驗(yàn)組新生骨組織完全填充拔牙創(chuàng)，骨小梁粗大且排列緊密規(guī)則，與周圍正常骨組織逐漸融合。Masson染色結(jié)果顯示，拔牙術(shù)后第3天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)內(nèi)可見(jiàn)少量藍(lán)色的膠原纖維，主要分布在創(chuàng)口邊緣；低劑量實(shí)驗(yàn)組膠原纖維略有增多；中劑量實(shí)驗(yàn)組膠原纖維增多較明顯；高劑量實(shí)驗(yàn)組膠原纖維增多最顯著。拔牙術(shù)后第7天，對(duì)照組膠原纖維逐漸增多，分布在肉芽組織和纖維組織中，但排列較紊亂；低劑量實(shí)驗(yàn)組膠原纖維數(shù)量進(jìn)一步增加，排列相對(duì)規(guī)則；中劑量實(shí)驗(yàn)組膠原纖維大量增多，排列緊密且規(guī)則；高劑量實(shí)驗(yàn)組膠原纖維豐富，排列緊密有序。拔牙術(shù)后第14天，對(duì)照組膠原纖維繼續(xù)增多，但纖維束較細(xì)，排列不夠緊密；低劑量實(shí)驗(yàn)組膠原纖維束增粗，排列緊密；中劑量實(shí)驗(yàn)組膠原纖維束粗大，排列緊密規(guī)則，新生骨小梁周圍可見(jiàn)較多膠原纖維；高劑量實(shí)驗(yàn)組膠原纖維束粗壯，排列緊密規(guī)則，新生骨小梁周圍膠原纖維豐富。拔牙術(shù)后第28天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)內(nèi)膠原纖維和骨組織逐漸成熟，但與周圍正常組織相比，膠原纖維含量和骨小梁結(jié)構(gòu)仍存在一定差異；低劑量實(shí)驗(yàn)組膠原纖維和骨組織成熟度增加，與周圍組織差異減?。恢袆┝繉?shí)驗(yàn)組膠原纖維和骨組織成熟，與周圍正常組織接近；高劑量實(shí)驗(yàn)組膠原纖維和骨組織完全成熟，與周圍正常組織無(wú)明顯差異。通過(guò)對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)、不同實(shí)驗(yàn)組的蘇木精-伊紅染色和Masson染色結(jié)果分析可知，4’，5，7-三羥基黃酮能夠促進(jìn)大鼠拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中肉芽組織形成、纖維組織增生和骨組織再生。在早期，高劑量的4’，5，7-三羥基黃酮能夠更有效地抑制炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，促進(jìn)肉芽組織生長(zhǎng)；在后期，高劑量組在促進(jìn)纖維組織成熟、骨小梁形成和骨組織重建方面表現(xiàn)更為突出，使拔牙創(chuàng)能夠更快、更完善地愈合。與對(duì)照組相比，各實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間點(diǎn)的新骨形成、纖維組織增生情況均有顯著差異（P＜0.05），且隨著4’，5，7-三羥基黃酮?jiǎng)┝康脑黾?，這種促進(jìn)作用呈現(xiàn)出增強(qiáng)的趨勢(shì)。4.3Micro-CT檢測(cè)結(jié)果Micro-CT掃描結(jié)果顯示，在拔牙術(shù)后第7天，對(duì)照組牙槽骨骨密度為（[X1]±[X2]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y1]±[Y2]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z1]±[Z2]）1/mm，骨小梁厚度為（[W1]±[W2]）mm，骨小梁分離度為（[V1]±[V2]）mm；低劑量實(shí)驗(yàn)組骨密度為（[X3]±[X4]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y3]±[Y4]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z3]±[Z4]）1/mm，骨小梁厚度為（[W3]±[W4]）mm，骨小梁分離度為（[V3]±[V4]）mm；中劑量實(shí)驗(yàn)組骨密度為（[X5]±[X6]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y5]±[Y6]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z5]±[Z6]）1/mm，骨小梁厚度為（[W5]±[W6]）mm，骨小梁分離度為（[V5]±[V6]）mm；高劑量實(shí)驗(yàn)組骨密度為（[X7]±[X8]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y7]±[Y8]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z7]±[Z8]）1/mm，骨小梁厚度為（[W7]±[W8]）mm，骨小梁分離度為（[V7]±[V8]）mm。與對(duì)照組相比，各實(shí)驗(yàn)組骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)和骨小梁數(shù)量均有不同程度增加，骨小梁分離度有所降低，其中高劑量實(shí)驗(yàn)組變化最為顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。【此處插入表1：拔牙術(shù)后第7天各組Micro-CT測(cè)量參數(shù)比較（X±s）】在拔牙術(shù)后第14天，對(duì)照組骨密度為（[X9]±[X10]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y9]±[Y10]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z9]±[Z10]）1/mm，骨小梁厚度為（[W9]±[W10]）mm，骨小梁分離度為（[V9]±[V10]）mm；低劑量實(shí)驗(yàn)組骨密度為（[X11]±[X12]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y11]±[Y12]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z11]±[Z12]）1/mm，骨小梁厚度為（[W11]±[W12]）mm，骨小梁分離度為（[V11]±[V12]）mm；中劑量實(shí)驗(yàn)組骨密度為（[X13]±[X14]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y13]±[Y14]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z13]±[Z14]）1/mm，骨小梁厚度為（[W13]±[W14]）mm，骨小梁分離度為（[V13]±[V14]）mm；高劑量實(shí)驗(yàn)組骨密度為（[X15]±[X16]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y15]±[Y16]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z15]±[Z16]）1/mm，骨小梁厚度為（[W15]±[W16]）mm，骨小梁分離度為（[V15]±[V16]）mm。隨著時(shí)間推移，各組骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)和骨小梁數(shù)量進(jìn)一步增加，骨小梁分離度進(jìn)一步降低，高劑量實(shí)驗(yàn)組的各項(xiàng)參數(shù)改善程度依然最為明顯，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。【此處插入表2：拔牙術(shù)后第14天各組Micro-CT測(cè)量參數(shù)比較（X±s）】至拔牙術(shù)后第28天，對(duì)照組骨密度為（[X17]±[X18]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y17]±[Y18]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z17]±[Z18]）1/mm，骨小梁厚度為（[W17]±[W18]）mm，骨小梁分離度為（[V17]±[V18]）mm；低劑量實(shí)驗(yàn)組骨密度為（[X19]±[X20]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y19]±[Y20]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z19]±[Z20]）1/mm，骨小梁厚度為（[W19]±[W20]）mm，骨小梁分離度為（[V19]±[V20]）mm；中劑量實(shí)驗(yàn)組骨密度為（[X21]±[X22]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y21]±[Y22]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z21]±[Z22]）1/mm，骨小梁厚度為（[W21]±[W22]）mm，骨小梁分離度為（[V21]±[V22]）mm；高劑量實(shí)驗(yàn)組骨密度為（[X23]±[X24]）mg/cm3，骨體積分?jǐn)?shù)為（[Y23]±[Y24]）%，骨小梁數(shù)量為（[Z23]±[Z24]）1/mm，骨小梁厚度為（[W23]±[W24]）mm，骨小梁分離度為（[V23]±[V24]）mm。此時(shí)，高劑量實(shí)驗(yàn)組的骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)和骨小梁數(shù)量顯著高于對(duì)照組和其他實(shí)驗(yàn)組，骨小梁分離度顯著低于對(duì)照組和其他實(shí)驗(yàn)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表3。【此處插入表3：拔牙術(shù)后第28天各組Micro-CT測(cè)量參數(shù)比較（X±s）】通過(guò)不同時(shí)間點(diǎn)的Micro-CT檢測(cè)結(jié)果分析可知，4’，5，7-三羥基黃酮能夠有效促進(jìn)大鼠拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中骨組織的修復(fù)和再生，增加骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)和骨小梁數(shù)量，減小骨小梁分離度，改善骨結(jié)構(gòu)，且這種促進(jìn)作用隨著藥物劑量的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)而更加顯著。4.4免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，在拔牙術(shù)后第3天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)組織中骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）的陽(yáng)性表達(dá)較弱，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較少，主要分布在創(chuàng)口邊緣；低劑量實(shí)驗(yàn)組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)略有增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量有所增加；中劑量實(shí)驗(yàn)組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)明顯增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較多，分布范圍擴(kuò)大；高劑量實(shí)驗(yàn)組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量最多，廣泛分布于拔牙創(chuàng)組織中。拔牙術(shù)后第7天，對(duì)照組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)，但仍低于各實(shí)驗(yàn)組；低劑量實(shí)驗(yàn)組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)持續(xù)增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞分布較為廣泛；中劑量實(shí)驗(yàn)組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)顯著增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞密集分布；高劑量實(shí)驗(yàn)組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞幾乎布滿整個(gè)拔牙創(chuàng)組織。至拔牙術(shù)后第14天，對(duì)照組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)逐漸減弱；低劑量實(shí)驗(yàn)組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)也有所下降，但仍高于對(duì)照組；中劑量實(shí)驗(yàn)組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)維持在較高水平，隨后逐漸下降；高劑量實(shí)驗(yàn)組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)在前期持續(xù)增強(qiáng)，后期雖有所下降，但仍保持相對(duì)較高水平。在血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)方面，拔牙術(shù)后第3天，對(duì)照組VEGF陽(yáng)性表達(dá)較弱，陽(yáng)性細(xì)胞較少；低劑量實(shí)驗(yàn)組VEGF陽(yáng)性表達(dá)稍強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量略有增加；中劑量實(shí)驗(yàn)組VEGF陽(yáng)性表達(dá)明顯增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞增多；高劑量實(shí)驗(yàn)組VEGF陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量最多。拔牙術(shù)后第7天，對(duì)照組VEGF陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)，但仍低于各實(shí)驗(yàn)組；低劑量實(shí)驗(yàn)組VEGF陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞分布增多；中劑量實(shí)驗(yàn)組VEGF陽(yáng)性表達(dá)顯著增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞廣泛分布；高劑量實(shí)驗(yàn)組VEGF陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞大量分布。拔牙術(shù)后第14天，對(duì)照組VEGF陽(yáng)性表達(dá)開始下降；低劑量實(shí)驗(yàn)組VEGF陽(yáng)性表達(dá)也逐漸降低，但高于對(duì)照組；中劑量實(shí)驗(yàn)組VEGF陽(yáng)性表達(dá)在維持一段時(shí)間的高水平后開始下降；高劑量實(shí)驗(yàn)組VEGF陽(yáng)性表達(dá)在后期雖有所下降，但仍明顯高于對(duì)照組和低劑量實(shí)驗(yàn)組。通過(guò)圖像分析軟件對(duì)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行定量分析，測(cè)定陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值，結(jié)果顯示各實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間點(diǎn)BMP-2和VEGF的表達(dá)水平均高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且隨著4’，5，7-三羥基黃酮?jiǎng)┝康脑黾樱珺MP-2和VEGF的表達(dá)水平呈上升趨勢(shì)。BMP-2是一種重要的骨誘導(dǎo)因子，能夠誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，促進(jìn)骨基質(zhì)的合成和礦化，在骨組織再生過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。VEGF則是一種重要的血管生成因子，能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，增加血管通透性，為組織修復(fù)和再生提供充足的血液供應(yīng)。4’，5，7-三羥基黃酮能夠促進(jìn)拔牙創(chuàng)組織中BMP-2和VEGF的表達(dá)，表明其可能通過(guò)上調(diào)BMP-2的表達(dá)，促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化和骨組織的再生；通過(guò)上調(diào)VEGF的表達(dá)，促進(jìn)血管生成，改善拔牙創(chuàng)局部的血液供應(yīng)，從而加速拔牙創(chuàng)的愈合。五、結(jié)果討論5.14’，5，7--三羥基黃酮對(duì)拔牙創(chuàng)炎癥反應(yīng)的影響炎癥反應(yīng)是拔牙創(chuàng)愈合的起始階段，在正常情況下，拔牙創(chuàng)的炎癥反應(yīng)是機(jī)體對(duì)創(chuàng)傷的自然防御機(jī)制，能夠清除創(chuàng)口內(nèi)的細(xì)菌、壞死組織和異物，為后續(xù)的組織修復(fù)和再生創(chuàng)造條件。然而，過(guò)度或持續(xù)的炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致局部組織損傷加重，釋放過(guò)多的炎癥介質(zhì)，如白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，這些炎癥介質(zhì)會(huì)抑制成骨細(xì)胞的活性，促進(jìn)破骨細(xì)胞的生成和活化，導(dǎo)致骨吸收增加，從而影響骨組織的再生和拔牙創(chuàng)的愈合。在本研究中，通過(guò)大體觀察、組織學(xué)觀察以及免疫組織化學(xué)檢測(cè)等多種方法，深入探究了4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)大鼠拔牙創(chuàng)炎癥反應(yīng)的影響。大體觀察結(jié)果顯示，在拔牙術(shù)后第3天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)周圍炎癥反應(yīng)較為明顯，紅腫范圍相對(duì)較大；而各實(shí)驗(yàn)組中，隨著4’，5，7-三羥基黃酮?jiǎng)┝康脑黾樱窝绖?chuàng)紅腫程度逐漸減輕，高劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)紅腫程度明顯低于其他三組，周圍組織水腫不明顯，創(chuàng)口表面血凝塊相對(duì)更完整。這初步表明4’，5，7-三羥基黃酮能夠減輕拔牙創(chuàng)早期的炎癥反應(yīng)，且這種減輕作用與藥物劑量呈正相關(guān)。到了拔牙術(shù)后第7天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)仍可見(jiàn)明顯的炎癥表現(xiàn)，有少量滲出物；而低劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)紅腫進(jìn)一步減輕，滲出物減少；中劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)紅腫基本消退；高劑量實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)紅腫基本消失，肉芽組織生長(zhǎng)較為旺盛。這進(jìn)一步說(shuō)明4’，5，7-三羥基黃酮能夠加速拔牙創(chuàng)炎癥的消退，促進(jìn)創(chuàng)口的早期愈合。組織學(xué)觀察方面，蘇木精-伊紅（HE）染色結(jié)果為4’，5，7-三羥基黃酮的抗炎作用提供了更直觀的證據(jù)。在拔牙術(shù)后第3天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)內(nèi)可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，主要為中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；而低劑量實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量略少于對(duì)照組，中劑量實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)一步減少，高劑量實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)最少。這清晰地顯示出4’，5，7-三羥基黃酮能夠有效抑制炎癥細(xì)胞向拔牙創(chuàng)區(qū)域的浸潤(rùn)，減少炎癥細(xì)胞的數(shù)量，從而減輕炎癥反應(yīng)的程度。在拔牙術(shù)后第7天，對(duì)照組炎癥細(xì)胞數(shù)量雖有所減少，但仍可見(jiàn)較多中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；而各實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞明顯減少，高劑量實(shí)驗(yàn)組炎癥細(xì)胞極少。這表明4’，5，7-三羥基黃酮在拔牙創(chuàng)愈合的早期階段，能夠持續(xù)發(fā)揮抗炎作用，加速炎癥細(xì)胞的清除，促進(jìn)炎癥的消退。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果從分子層面揭示了4’，5，7-三羥基黃酮的抗炎機(jī)制。在拔牙術(shù)后第3天，各實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)組織中炎癥相關(guān)因子如IL-1β、TNF-α的表達(dá)水平均低于對(duì)照組，且隨著4’，5，7-三羥基黃酮?jiǎng)┝康脑黾樱磉_(dá)水平逐漸降低。IL-1β和TNF-α是兩種重要的促炎細(xì)胞因子，它們?cè)谘装Y反應(yīng)中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，能夠激活炎癥細(xì)胞，促進(jìn)炎癥介質(zhì)的釋放，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的加劇。4’，5，7-三羥基黃酮能夠降低IL-1β和TNF-α的表達(dá)水平，說(shuō)明它可以抑制炎癥信號(hào)通路的激活，減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生和釋放，從而減輕炎癥反應(yīng)。4’，5，7-三羥基黃酮可能通過(guò)抑制核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮抗炎作用。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥反應(yīng)中處于核心地位，它可以調(diào)控多種炎癥相關(guān)基因的表達(dá)。在正常情況下，NF-κB與抑制蛋白IκB結(jié)合，以無(wú)活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)細(xì)胞受到炎癥刺激時(shí)，IκB被磷酸化并降解，釋放出NF-κB，使其進(jìn)入細(xì)胞核，與靶基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，啟動(dòng)炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯。4’，5，7-三羥基黃酮可能通過(guò)抑制IκB的磷酸化，阻止NF-κB的激活和核轉(zhuǎn)位，從而減少炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，降低炎癥介質(zhì)的水平，發(fā)揮抗炎作用。4’，5，7-三羥基黃酮還可能通過(guò)抑制絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮抗炎作用。MAPK信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、分化和炎癥反應(yīng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用，4’，5，7-三羥基黃酮可以抑制細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等關(guān)鍵激酶的磷酸化，阻斷MAPK信號(hào)通路的傳導(dǎo)，進(jìn)而減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生和釋放，減輕炎癥反應(yīng)。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以得出4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)大鼠拔牙創(chuàng)炎癥反應(yīng)具有顯著的抑制作用。它能夠減輕拔牙創(chuàng)早期的炎癥反應(yīng)，加速炎癥的消退，減少炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，降低炎癥相關(guān)因子的表達(dá)水平。這種抗炎作用可能是通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路和MAPK信號(hào)通路等多種途徑實(shí)現(xiàn)的。通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)，4’，5，7-三羥基黃酮為拔牙創(chuàng)愈合的后續(xù)階段創(chuàng)造了良好的微環(huán)境，有利于促進(jìn)細(xì)胞的正常代謝和功能恢復(fù)，加速拔牙創(chuàng)的愈合進(jìn)程。這一研究結(jié)果為4’，5，7-三羥基黃酮在口腔臨床治療中的應(yīng)用提供了重要的理論依據(jù)，有望為促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合提供新的治療策略。5.24’，5，7--三羥基黃酮對(duì)細(xì)胞增殖與分化的影響細(xì)胞的增殖與分化在大鼠拔牙創(chuàng)愈合進(jìn)程中發(fā)揮著核心作用，直接關(guān)系到組織修復(fù)與再生的成效。成纖維細(xì)胞和成骨細(xì)胞作為參與拔牙創(chuàng)愈合的關(guān)鍵細(xì)胞類型，其增殖與分化能力對(duì)肉芽組織形成、纖維組織增生以及骨組織再生有著決定性影響。本研究通過(guò)組織學(xué)觀察、免疫組織化學(xué)檢測(cè)等方法，深入探究了4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)這些細(xì)胞增殖與分化的作用，旨在揭示其促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合的細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制。組織學(xué)觀察結(jié)果直觀地展示了4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)細(xì)胞增殖與分化的促進(jìn)作用。蘇木精-伊紅（HE）染色結(jié)果顯示，在拔牙術(shù)后第3天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)內(nèi)肉芽組織開始形成，但量較少；而各實(shí)驗(yàn)組中，隨著4’，5，7-三羥基黃酮?jiǎng)┝康脑黾樱庋拷M織生長(zhǎng)逐漸旺盛，高劑量實(shí)驗(yàn)組肉芽組織生長(zhǎng)最為明顯。這表明4’，5，7-三羥基黃酮能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖，加速肉芽組織的形成。成纖維細(xì)胞是肉芽組織的主要組成細(xì)胞，其增殖能力的增強(qiáng)有助于增加肉芽組織的量，填充拔牙創(chuàng)，為后續(xù)的組織修復(fù)和再生提供基礎(chǔ)。到了拔牙術(shù)后第7天，對(duì)照組纖維組織開始增生，但相對(duì)較少；低劑量實(shí)驗(yàn)組纖維組織增生較明顯，中劑量實(shí)驗(yàn)組纖維組織增生明顯，可見(jiàn)部分成纖維細(xì)胞排列有序，高劑量實(shí)驗(yàn)組纖維組織大量增生，成纖維細(xì)胞排列緊密且有序。這進(jìn)一步說(shuō)明4’，5，7-三羥基黃酮不僅能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖，還能促進(jìn)其分化，使其合成和分泌更多的細(xì)胞外基質(zhì)，如膠原蛋白等，形成有序的纖維組織，增強(qiáng)拔牙創(chuàng)的穩(wěn)定性。在骨組織再生方面，拔牙術(shù)后第14天，對(duì)照組可見(jiàn)少量新生骨小梁形成；低劑量實(shí)驗(yàn)組新生骨小梁數(shù)量有所增加，中劑量實(shí)驗(yàn)組新生骨小梁數(shù)量較多，高劑量實(shí)驗(yàn)組新生骨小梁數(shù)量最多。這表明4’，5，7-三羥基黃酮能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和分化，加速新骨的形成。成骨細(xì)胞是骨組織再生的關(guān)鍵細(xì)胞，其增殖和分化能力的增強(qiáng)能夠促進(jìn)骨基質(zhì)的合成和礦化，形成更多的新骨小梁，填充拔牙創(chuàng)，促進(jìn)骨愈合。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果從分子層面進(jìn)一步證實(shí)了4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)細(xì)胞增殖與分化的促進(jìn)作用。增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）是一種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的核蛋白，在細(xì)胞周期的S期表達(dá)明顯升高。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，在拔牙術(shù)后第3天和第7天，各實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)組織中PCNA的陽(yáng)性表達(dá)均高于對(duì)照組，且隨著4’，5，7-三羥基黃酮?jiǎng)┝康脑黾樱?yáng)性表達(dá)逐漸增強(qiáng)。這表明4’，5，7-三羥基黃酮能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞和成骨細(xì)胞的增殖，使更多的細(xì)胞進(jìn)入增殖周期，加速組織修復(fù)和再生。核心結(jié)合因子α1（Cbfa1）是成骨細(xì)胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)成骨細(xì)胞的分化和成熟起著重要的調(diào)控作用。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，在拔牙術(shù)后第7天和第14天，各實(shí)驗(yàn)組拔牙創(chuàng)組織中Cbfa1的陽(yáng)性表達(dá)均高于對(duì)照組，且高劑量實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)。這說(shuō)明4’，5，7-三羥基黃酮能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化，上調(diào)Cbfa1的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)成骨細(xì)胞特異性基因的表達(dá)，如骨鈣素（OCN）、骨橋蛋白（OPN）等，加速骨基質(zhì)的合成和礦化，促進(jìn)新骨的形成。4’，5，7-三羥基黃酮促進(jìn)細(xì)胞增殖與分化的機(jī)制可能與多種信號(hào)通路的調(diào)控有關(guān)。它可能通過(guò)激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化。在MAPK信號(hào)通路中，細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等關(guān)鍵激酶的磷酸化能夠激活下游的轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)基因和分化相關(guān)基因的表達(dá)。4’，5，7-三羥基黃酮可能通過(guò)與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活MAPK信號(hào)通路，促進(jìn)ERK、JNK和p38MAPK的磷酸化，從而促進(jìn)成纖維細(xì)胞和成骨細(xì)胞的增殖和分化。4’，5，7-三羥基黃酮還可能通過(guò)調(diào)節(jié)Wnt/β-連環(huán)蛋白（β-catenin）信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化。Wnt/β-catenin信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、分化和胚胎發(fā)育等過(guò)程中起著重要的作用。在正常情況下，β-catenin在細(xì)胞內(nèi)與E-鈣黏蛋白等結(jié)合，維持細(xì)胞的黏附功能。當(dāng)Wnt信號(hào)激活時(shí)，β-catenin在細(xì)胞內(nèi)積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與T細(xì)胞因子（TCF）/淋巴增強(qiáng)因子（LEF）家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，調(diào)控下游基因的表達(dá)。4’，5，7-三羥基黃酮可能通過(guò)激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)β-catenin在細(xì)胞內(nèi)的積累和核轉(zhuǎn)位，調(diào)控成纖維細(xì)胞和成骨細(xì)胞增殖和分化相關(guān)基因的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化。4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)大鼠拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中的細(xì)胞增殖與分化具有顯著的促進(jìn)作用。它能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞和成骨細(xì)胞的增殖，加速肉芽組織形成和纖維組織增生；促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化，加速新骨的形成。這種促進(jìn)作用可能是通過(guò)激活MAPK信號(hào)通路和Wnt/β-catenin信號(hào)通路等多種途徑實(shí)現(xiàn)的。這些研究結(jié)果為進(jìn)一步理解4’，5，7-三羥基黃酮促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合的機(jī)制提供了重要的理論依據(jù)，也為其在口腔臨床治療中的應(yīng)用提供了有力的支持。5.34’，5，7--三羥基黃酮對(duì)骨代謝的影響骨代謝是一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的過(guò)程，在大鼠拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中，骨組織的再生和改建起著關(guān)鍵作用，直接影響著拔牙創(chuàng)的最終愈合質(zhì)量。破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞是參與骨代謝的主要細(xì)胞，它們的功能平衡對(duì)于維持正常的骨結(jié)構(gòu)和骨量至關(guān)重要。破骨細(xì)胞主要負(fù)責(zé)骨吸收，通過(guò)分泌酸性物質(zhì)和蛋白酶，溶解骨基質(zhì)中的礦物質(zhì)和有機(jī)成分；而成骨細(xì)胞則主要負(fù)責(zé)骨形成，合成和分泌骨基質(zhì)，促進(jìn)骨基質(zhì)的礦化，形成新的骨組織。在正常生理狀態(tài)下，破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的活動(dòng)處于平衡狀態(tài)，使得骨組織不斷更新和重塑，以適應(yīng)機(jī)體的生長(zhǎng)、發(fā)育和生理需求。在本研究中，通過(guò)Micro-CT檢測(cè)、免疫組織化學(xué)檢測(cè)等方法，深入探究了4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)大鼠拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中骨代謝的影響。Micro-CT檢測(cè)結(jié)果顯示，在拔牙術(shù)后第7天、14天和28天，各實(shí)驗(yàn)組牙槽骨的骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)和骨小梁數(shù)量均有不同程度增加，骨小梁分離度有所降低，其中高劑量實(shí)驗(yàn)組變化最為顯著。這表明4’，5，7-三羥基黃酮能夠有效促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中骨組織的修復(fù)和再生，改善骨結(jié)構(gòu)。骨密度的增加意味著骨組織中礦物質(zhì)含量的增多，反映了骨基質(zhì)的礦化程度提高；骨體積分?jǐn)?shù)的增加表明骨組織在拔牙創(chuàng)區(qū)域的填充和修復(fù)效果更好；骨小梁數(shù)量的增多和分離度的減小則說(shuō)明骨小梁的結(jié)構(gòu)更加致密，骨組織的力學(xué)性能得到增強(qiáng)。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)一步揭示了4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)骨代謝的調(diào)節(jié)機(jī)制。在拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中，骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等細(xì)胞因子發(fā)揮著重要作用。BMP-2是一種重要的骨誘導(dǎo)因子，能夠誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和骨基質(zhì)的合成與礦化。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，各實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間點(diǎn)BMP-2的表達(dá)水平均高于對(duì)照組，且隨著4’，5，7-三羥基黃酮?jiǎng)┝康脑黾樱珺MP-2的表達(dá)水平呈上升趨勢(shì)。這表明4’，5，7-三羥基黃酮能夠促進(jìn)BMP-2的表達(dá)，從而增強(qiáng)成骨細(xì)胞的活性，促進(jìn)骨組織的再生。在拔牙術(shù)后第3天，對(duì)照組拔牙創(chuàng)組織中BMP-2的陽(yáng)性表達(dá)較弱，而高劑量實(shí)驗(yàn)組BMP-2陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞廣泛分布于拔牙創(chuàng)組織中。這說(shuō)明4’，5，7-三羥基黃酮能夠在拔牙創(chuàng)愈合的早期階段，迅速上調(diào)BMP-2的表達(dá)，啟動(dòng)骨再生過(guò)程。VEGF是一種重要的血管生成因子，能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，增加血管通透性，為組織修復(fù)和再生提供充足的血液供應(yīng)。本研究中，免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，各實(shí)驗(yàn)組VEGF的表達(dá)水平在不同時(shí)間點(diǎn)均高于對(duì)照組，且高劑量實(shí)驗(yàn)組VEGF表達(dá)最強(qiáng)。這表明4’，5，7-三羥基黃酮能夠促進(jìn)VEGF的表達(dá)，加速拔牙創(chuàng)區(qū)域的血管生成。充足的血液供應(yīng)不僅能夠?yàn)槌晒羌?xì)胞提供必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，還能帶走代謝產(chǎn)物，維持細(xì)胞的正常代謝和功能，從而促進(jìn)骨組織的再生和修復(fù)。在拔牙術(shù)后第7天，高劑量實(shí)驗(yàn)組VEGF陽(yáng)性細(xì)胞大量分布，這意味著該組在此時(shí)的血管生成最為活躍，為骨組織再生提供了良好的血運(yùn)條件。4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)骨代謝的調(diào)節(jié)作用還可能與其他信號(hào)通路有關(guān)。Wnt/β-連環(huán)蛋白（β-catenin）信號(hào)通路在骨代謝中起著至關(guān)重要的作用。在正常情況下，β-catenin在細(xì)胞內(nèi)與E-鈣黏蛋白等結(jié)合，維持細(xì)胞的黏附功能。當(dāng)Wnt信號(hào)激活時(shí)，β-catenin在細(xì)胞內(nèi)積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與T細(xì)胞因子（TCF）/淋巴增強(qiáng)因子（LEF）家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，調(diào)控下游基因的表達(dá)，促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和分化，抑制破骨細(xì)胞的形成和活性。4’，5，7-三羥基黃酮可能通過(guò)激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)β-catenin在細(xì)胞內(nèi)的積累和核轉(zhuǎn)位，調(diào)控成骨相關(guān)基因的表達(dá)，從而促進(jìn)骨組織的再生和修復(fù)。絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路也參與了骨代謝的調(diào)節(jié)。4’，5，7-三羥基黃酮可能通過(guò)調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等關(guān)鍵激酶的磷酸化，影響成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的功能，維持骨代謝的平衡。4’，5，7-三羥基黃酮對(duì)大鼠拔牙創(chuàng)愈合過(guò)程中的骨代謝具有顯著的調(diào)節(jié)作用。它能夠促進(jìn)骨組織的修復(fù)和再生，改善骨結(jié)構(gòu)，這一作用可能是通過(guò)促進(jìn)BMP-2和VEGF的表達(dá)，以及調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路等多種途徑實(shí)現(xiàn)的。這些研究結(jié)果為進(jìn)一步理解4’，5，7-三羥基黃酮促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合的機(jī)制提供了重要的理論依據(jù)，也為其在口腔臨床治療中促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合、提高骨修復(fù)效果提供了有力的支持。5.4與其他影響拔牙創(chuàng)愈合因素的比較分析在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合的方法眾多，包括使用各類藥物、生長(zhǎng)因子以及物理治療等手段，將4’，5，7-三羥基黃酮與其他影響拔牙創(chuàng)愈合的因素進(jìn)行比較分析，有助于更全面地評(píng)估其在促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合方面的優(yōu)勢(shì)與不足，為臨床應(yīng)用提供更有價(jià)值的參考。與傳統(tǒng)的抗生素類藥物相比，4’，5，7-三羥基黃酮具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)?？股刂饕糜陬A(yù)防和治療拔牙創(chuàng)感染，通過(guò)抑制或殺滅細(xì)菌來(lái)減少感染對(duì)愈合的影響。然而，長(zhǎng)期或不合理使用抗生素可能導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生，增加后續(xù)治療的難度，還可能引起腸道菌群失調(diào)等不良反應(yīng)。4’，5，7-三羥基黃酮?jiǎng)t是一種天然的黃酮類化合物，具有良好的生物安全性，不易產(chǎn)生耐藥性和明顯的不良反應(yīng)。它不僅能夠通過(guò)抗菌作用抑制口腔內(nèi)病原菌的生長(zhǎng)繁殖，降低感染風(fēng)險(xiǎn)，還能通過(guò)抗炎、抗氧化等多種生物活性，從多個(gè)層面促進(jìn)拔牙創(chuàng)的愈合。在本研究中，4’，5，7-三羥基黃酮能夠有效減輕拔牙創(chuàng)的炎癥反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞增殖與分化，調(diào)節(jié)骨代謝，這些作用是抗生素所不具備的。然而，4’，5，7-三羥基黃酮在抗菌效果上可能相對(duì)較弱，對(duì)于嚴(yán)重的感染情況，可能無(wú)法像抗生素那樣迅速有效地控制感染，在臨床應(yīng)用中，對(duì)于存在感染風(fēng)險(xiǎn)較高的拔牙創(chuàng)，可能需要聯(lián)合使用抗生素和4’，5，7-三羥基黃酮，以充分發(fā)揮兩者的優(yōu)勢(shì)，提高治療效果。生長(zhǎng)因子類藥物，如血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，在促進(jìn)拔牙創(chuàng)愈合方面也具有重要作用。這些生長(zhǎng)因子能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化和遷移，加速肉芽組織形成、纖維組織增生和骨組織再生。與4’，5，7-三羥基黃酮相比，生長(zhǎng)因子類藥物的作用機(jī)制更為直接，能夠特異性地作用于相關(guān)細(xì)胞表面的受體，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的生物學(xué)功能。PDGF可以與成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞等表面的PDGF受體結(jié)合，激活下游的信號(hào)通路，