第1頁(yè)/共1頁(yè)2024北京重點(diǎn)校高二（下）期末生物匯編動(dòng)物細(xì)胞工程一、單選題1．（2024北京海淀高二下期末）植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的共性是（

）A．均出現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象B．融合細(xì)胞的染色體組數(shù)均增加C．均需用胰蛋白酶處理D．均可用滅活的病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合2．（2024北京石景山高二下期末）單克隆抗體在疾病診斷和治療中發(fā)揮重要作用。下列敘述正確的是（）A．將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，形成的細(xì)胞均為雜交瘤細(xì)胞B．單克隆抗體是不同于天然抗體的人工合成生物分子C．將細(xì)胞毒素類藥物與單克隆抗體結(jié)合，可特異性識(shí)別腫瘤抗原并殺傷腫瘤細(xì)胞D．將某滅活病原體作為疫苗接種人體后，能產(chǎn)生針對(duì)抗原的單克隆抗體3．（2024北京石景山高二下期末）向鼠的成纖維細(xì)胞中導(dǎo)入Oct3/4等4種基因，用多能性標(biāo)志物Fbx15篩選轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞，可獲得誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞），該細(xì)胞具有與胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）相似的特性。下列說(shuō)法正確的是（）A．iPS細(xì)胞具有組織特異性，只能分化為特定的細(xì)胞B．可用顯微注射法直接將4種基因注入成纖維細(xì)胞C．iPS細(xì)胞的培養(yǎng)與一般的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不同，不會(huì)發(fā)生接觸抑制D．由iPS細(xì)胞產(chǎn)生的特定細(xì)胞可用于新藥測(cè)試，避免了倫理問(wèn)題4．（2024北京延慶高二下期末）新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）表面的S蛋白由S1和S2兩個(gè)亞基組成?？蒲腥藛T制備獲得了鼠抗S蛋白特異性單克隆抗體，為分析該單克隆抗體的特異性，將SARS-CoV-2的S蛋白進(jìn)行電泳得到圖A，用該單克隆抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交并顯色得到圖B。下列表述錯(cuò)誤的是（

）A．該單克隆抗體特異性的識(shí)別S蛋白的S2亞基B．制備單克隆抗體的過(guò)程體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞膜具有流動(dòng)性C．免疫后小鼠體內(nèi)的漿細(xì)胞只產(chǎn)生一種抗S蛋白抗體D．制備單克隆抗體的過(guò)程可用滅活病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合5．（2024北京延慶高二下期末）試管牛技術(shù)和核移植技術(shù)已應(yīng)用于培育良種牛。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．試管牛技術(shù)和核移植技術(shù)均可實(shí)現(xiàn)良種牛的大量克隆B．試管牛技術(shù)和核移植技術(shù)培育良種牛均需進(jìn)行胚胎移植C．進(jìn)行胚胎移植可以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛力D．需要注射促性腺激素促進(jìn)供卵牛超數(shù)排卵6．（2024北京朝陽(yáng)高二下期末）我國(guó)科研工作者運(yùn)用生物打印技術(shù)將肌腱干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以分層方式分布在支架中，制備了下圖所示的可用于肌腱與骨組織界面再生的多細(xì)胞支架。相關(guān)敘述正確的是（

）A．同一個(gè)體的肌腱細(xì)胞與骨細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能差異是基因選擇性缺失的結(jié)果B．肌腱干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能自我更新和分化為成年動(dòng)物體內(nèi)的任何一種細(xì)胞C．體外培養(yǎng)兩種干細(xì)胞均需要無(wú)菌無(wú)毒、36.5℃左右、pH7.2～7.4和適宜滲透壓條件D．利用多細(xì)胞支架治療肌腱斷裂可保證異體來(lái)源的細(xì)胞移植不引起免疫排斥7．（2024北京大興高二下期末）人造皮膚的構(gòu)建、動(dòng)物分泌蛋白的規(guī)模化生產(chǎn)等，都離不開動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述錯(cuò)誤的是（

）A．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境需要O?，也需要一定濃度的CO?B．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)，培養(yǎng)時(shí)需保證無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境C．培養(yǎng)液中通常含有糖類、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清D．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是動(dòng)物細(xì)胞的全能性8．（2024北京大興高二下期末）下列實(shí)驗(yàn)操作程序不正確的是（

）A．蔬菜加工+泡菜鹽水→加調(diào)料、裝壇泡菜B．動(dòng)物組織制備細(xì)胞懸液→原代培養(yǎng)→傳代培養(yǎng)C．挑選葡萄、沖洗、榨汁果酒果醋D．離體組織消毒、接種愈傷組織試管苗9．（2024北京大興高二下期末）我國(guó)科學(xué)家利用基因編輯技術(shù)，獲得一只生物節(jié)律核心基因敲除的獼猴。取其成纖維細(xì)胞與去核的卵母細(xì)胞融合，將發(fā)育形成的早期胚胎植入代孕雌猴，獲得5只克隆猴，用于研究節(jié)律機(jī)制。以下敘述錯(cuò)誤的是（

）A．克隆猴基因組成差異小，作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物便于研究B．可用滅活的病毒誘導(dǎo)去核卵母細(xì)胞和成纖維細(xì)胞融合C．克隆猴的遺傳物質(zhì)全部來(lái)自獼猴的成纖維細(xì)胞D．克隆猴的獲得體現(xiàn)了動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性10．（2024北京東城高二下期末）為緩解飼養(yǎng)動(dòng)物帶來(lái)的環(huán)境、經(jīng)濟(jì)壓力，與傳統(tǒng)肉類感官特性相似的“細(xì)胞培養(yǎng)肉”引發(fā)人們關(guān)注。其生產(chǎn)流程如下圖，以下敘述不正確的是（）A．技術(shù)應(yīng)用了干細(xì)胞能分化成其他類型細(xì)胞的原理B．體外培養(yǎng)干細(xì)胞時(shí)需置于CO2培養(yǎng)箱以促進(jìn)細(xì)胞呼吸C．生物反應(yīng)器擴(kuò)大生產(chǎn)時(shí)培養(yǎng)基需加入動(dòng)物血清等物質(zhì)D．細(xì)胞培養(yǎng)肉進(jìn)入市場(chǎng)銷售前還需進(jìn)行安全性評(píng)估11．（2024北京東城高二下期末）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)技術(shù)都是細(xì)胞工程的基礎(chǔ)性技術(shù)，兩種技術(shù)都（）A．能實(shí)現(xiàn)大量獲得細(xì)胞產(chǎn)物B．以細(xì)胞的全能性為技術(shù)原理C．需要使用液體培養(yǎng)基D．使用酶將組織分散為細(xì)胞12．（2024北京西城高二下期末）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)分為貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)。科學(xué)家嘗試馴化貼壁依賴性細(xì)胞——犬腎臟細(xì)胞（MDCK），使其能懸浮培養(yǎng)，結(jié)果如圖所示。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A．貼壁細(xì)胞在生長(zhǎng)增殖時(shí)會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象B．細(xì)胞活率反映馴化過(guò)程中MDCK的適應(yīng)程度C．MDCK先適應(yīng)懸浮培養(yǎng)環(huán)境再開始大量增殖D．懸浮培養(yǎng)不需進(jìn)行傳代，適合規(guī)?；囵B(yǎng)13．（2024北京西城高二下期末）骨骼干細(xì)胞（SSC）具有自我更新能力和分化潛能，在骨骼發(fā)育中起重要作用。2024年我國(guó)科學(xué)家鑒定出首個(gè)位于長(zhǎng)骨干骺端的骨骼干細(xì)胞群。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A．SSC屬于成體干細(xì)胞B．SSC具有無(wú)限增殖能力C．培養(yǎng)SSC需要提供O2和CO2D．SSC可應(yīng)用于骨骼的再生和修復(fù)14．（2024北京延慶高二下期末）研究者將M病毒膜蛋白注射小鼠，分離小鼠脾細(xì)胞并將其與S細(xì)胞融合，通過(guò)篩選獲得單個(gè)穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。下列相關(guān)敘述正確的是（）A．用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)M病毒，通過(guò)離心可獲得膜蛋白作為抗原B．可用M病毒膜蛋白多次免疫小鼠，以獲得更多的漿細(xì)胞C．S細(xì)胞應(yīng)具備產(chǎn)生抗體和無(wú)限增殖的能力D．體外培養(yǎng)單個(gè)雜交瘤細(xì)胞獲得大量抗體體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性15．（2024北京延慶高二下期末）微載體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是以懸浮在培養(yǎng)液中的微珠作為細(xì)胞貼附的載體，在輕度攪拌下進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．輕度攪拌有利于細(xì)胞的氧氣供應(yīng)B．培養(yǎng)液中需添加糖、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)C．該技術(shù)能提高單位體積培養(yǎng)液的細(xì)胞產(chǎn)率D．該技術(shù)不能應(yīng)用于病毒疫苗的生產(chǎn)過(guò)程中二、非選擇題16．（2024北京海淀高二下期末）黃曲霉毒素（AFB）是黃曲霉（一種真菌）產(chǎn)生的具有極強(qiáng)致癌力的代謝產(chǎn)物。為準(zhǔn)確檢測(cè)食品中殘留的AFB，科研人員開展下列研究。(1)科研人員利用小鼠制備抗AFB的單克隆抗體（AFB單抗），過(guò)程如圖1。雜交瘤細(xì)胞需進(jìn)行步驟Ⅱ和Ⅲ檢測(cè)，經(jīng)過(guò)多次篩選。(2)食品中的有害殘留毒素還可能有黃綠青霉素（CIT）、伏馬菌素（FB）。若想確認(rèn)上述流程獲得的AFB單抗具有極強(qiáng)的特異性，應(yīng)補(bǔ)充的檢測(cè)和結(jié)果是。(3)科研人員擬將抗AFB單抗固定在一種新材料上，制備為“檢測(cè)探針”。已知材料M穩(wěn)定性、發(fā)光性能等方面有明顯優(yōu)勢(shì)，但它很難與抗體結(jié)合；物質(zhì)P可以提高材料M對(duì)抗體的親和力。制備檢測(cè)探針的流程如圖2，探針發(fā)光性能與物質(zhì)P的濃度關(guān)系如圖3。依據(jù)圖3結(jié)果，科研人員選擇物質(zhì)P的濃度為0.8mg/mL作為生產(chǎn)檢測(cè)探針的條件，原因是在該濃度下，探針發(fā)光性能與更高濃度時(shí)，而該濃度可節(jié)省成本。(4)科研人員制備定量檢測(cè)AFB的免疫試紙，如圖4。測(cè)定樣品前，先配制一系列不同濃度的AFB標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別與等量“MP-抗AFB單抗探針”混合均勻，滴至加樣處。科研人員測(cè)定了T線、C線的發(fā)光值，從而繪制出特定范圍AFB濃度的線性標(biāo)準(zhǔn)曲線（選填字母），作為后續(xù)檢測(cè)食品中是否含有AFB的參照曲線。17．（2024北京豐臺(tái)高二下期末）雙特異性抗體是含有2種特異性抗原結(jié)合位點(diǎn)的人工抗體。PSMA是癌細(xì)胞的一種表面抗原。T細(xì)胞有效激活依賴于T細(xì)胞的表面受體CD28在癌細(xì)胞與T細(xì)胞結(jié)合部位的聚集。科研人員嘗試構(gòu)建雙特異性抗體PSMA×CD28（簡(jiǎn)稱“PC雙抗”）來(lái)治療癌癥，制備過(guò)程如圖1，PC雙抗的結(jié)構(gòu)及作用機(jī)理如圖2。(1)制備PC雙抗的過(guò)程中，用到的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)主要有（答出2點(diǎn)）。(2)制備PC雙抗時(shí)，應(yīng)先將（物質(zhì)X）分別注射到小鼠體內(nèi)再分離出B淋巴細(xì)胞。將B淋巴細(xì)胞分別與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，常用的誘導(dǎo)融合方法有。之后篩選得到兩種雜交瘤細(xì)胞，再誘導(dǎo)兩種細(xì)胞融合，成功融合的雜交瘤細(xì)胞表達(dá)兩種L鏈和兩種H鏈。據(jù)圖2分析，雜交瘤細(xì)胞A×B會(huì)產(chǎn)生多種抗體，原因是。因此還需通過(guò)篩選才能獲得PC雙抗。(3)科研人員將某種癌細(xì)胞和T細(xì)胞共同培養(yǎng)，加入不同抗體后檢測(cè)T細(xì)胞活化水平，結(jié)果如圖3，結(jié)果說(shuō)明。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，這種癌細(xì)胞大量表達(dá)PD-L1，識(shí)別結(jié)合T細(xì)胞表面的PD-1受體，從而T細(xì)胞活化。為了有更好的治療效果，請(qǐng)利用已有的PC雙抗提出一種新的治療手段。18．（2024北京昌平高二下期末）手足口病由多種腸道病毒感染引起，主要表現(xiàn)為手、足和口腔黏膜等處皰疹，柯薩奇病毒A組2型（CV-A2）是引發(fā)該病的主要病原體之一、制備抗CV-A2的單克隆抗體，對(duì)檢測(cè)和治療手足口病具有重要意義。(1)將純化的CV-A2抗原間隔多次注射給小鼠，一段時(shí)間后，取免疫小鼠的脾細(xì)胞與體外培養(yǎng)的細(xì)胞，利用誘導(dǎo)融合后，選擇培養(yǎng)得到雜交瘤細(xì)胞。再經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，初次篩選獲得13株雜交瘤細(xì)胞。(2)科研人員對(duì)上述13株雜交瘤細(xì)胞再進(jìn)一步篩選，通過(guò)抗CV-A2單抗特異性分析結(jié)果可知（圖1），應(yīng)選擇第株雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)獲取大量的單克隆抗體，理由是。(3)科研人員使用高、中、低3個(gè)濃度的CV-A2抗原稀釋液，對(duì)不同溫度下放置3d的抗CV-A2單抗進(jìn)行檢測(cè)，圖2結(jié)果表明單抗穩(wěn)定性良好。判斷依據(jù)是：在37℃和4℃的條件下放置3d后，各稀釋液濃度下的檢測(cè)值。(4)制備的抗CV-A2單抗在檢測(cè)和治療手足口病方面的具體應(yīng)用是（寫出1條即可）。19．（2024北京石景山高二下期末）學(xué)習(xí)以下材料，回答（1）~（4）題。H3K9me3修飾——克隆胚胎的“路障”與“路標(biāo)”體細(xì)胞核移植（SCNT）技術(shù)已在動(dòng)物保護(hù)、育種及疾病研究和治療等方面展現(xiàn)出廣泛的應(yīng)用前景。但是嚴(yán)重的胚胎發(fā)育缺陷和極低的出生率卻阻礙了SCNT的進(jìn)一步發(fā)展。由于受精胚胎的核基因組與供體細(xì)胞基本相同，所以供體細(xì)胞核的表觀遺傳狀態(tài)成為導(dǎo)致克隆胚胎發(fā)育異常的主要影響因素。H3K9me3作為真核細(xì)胞內(nèi)最重要的抑制性組蛋白修飾（如下圖所示），對(duì)于抑制基因組內(nèi)廣泛存在的重復(fù)序列和維持基因組穩(wěn)定性是至關(guān)重要的。研究者比較了小鼠體細(xì)胞克隆胚胎與自然受精的胚胎，發(fā)現(xiàn)相比于自然受精的胚胎，克隆胚胎的部分基因組區(qū)域仍存在較高水平的H3K9me3，說(shuō)明受體細(xì)胞無(wú)法充分抹除供體細(xì)胞基因組攜帶的高水平的H3K9me3，最終會(huì)導(dǎo)致這些區(qū)域內(nèi)基因的異常轉(zhuǎn)錄抑制。向核移植細(xì)胞中注射表達(dá)組蛋白去甲基化酶Kdm4b的mRNA，可以有效降低供體基因組的H3K9me3修飾水平，激活克隆胚胎基因組的轉(zhuǎn)錄，顯著改善克隆胚胎著床前的發(fā)育缺陷。這種策略已成功提高了SCNT在多個(gè)物種中的克隆效率，也促使了克隆猴“中中”和“華華”的誕生。此外，研究人員還發(fā)現(xiàn)在胚胎著床前的發(fā)育過(guò)程中，在特定基因組區(qū)域上建立新的H3K9me3模式對(duì)維持克隆胚胎的正常發(fā)育同樣是非常重要的。在未來(lái)的工作中，闡明早期胚胎中H3K9me3修飾模式的建立機(jī)制，以及克隆胚胎中新生H3K9me3異常的原因，將有助于發(fā)展出更高效的體細(xì)胞克隆技術(shù)。(1)H3K9me3組蛋白修飾是一種表觀修飾現(xiàn)象，這種修飾并未改變，但基因表達(dá)和表型發(fā)生變化。除此之外，常見的表觀遺傳修飾還有。(2)Z基因、D基因和M基因是重要的全能性標(biāo)記基因。據(jù)文中信息推測(cè)，這類基因在自然受精胚胎細(xì)胞階段的表達(dá)量克隆胚胎此階段的表達(dá)量。(3)下圖表示克隆猴“中中”和“華華”的培育流程。對(duì)應(yīng)文中“供體”的是圖中的。處理①用的是滅活仙臺(tái)病毒，起到的作用。據(jù)文中信息判斷，處理②的操作是。(4)請(qǐng)根據(jù)文中信息，解釋題目中指出H3K9me3修飾既是克隆胚胎的“路障”又是“路標(biāo)”的含義。

（選一項(xiàng)回答即可）20．（2024北京大興高二下期末）學(xué)習(xí)以下材料,回答(1)~(4)題。不斷發(fā)展的單克隆抗體技術(shù)1975年，生物學(xué)家創(chuàng)造了利用雜交瘤細(xì)胞制備單克隆抗體的技術(shù)。自1986年全球首個(gè)鼠源單抗藥物上市以來(lái)，單抗藥物治療方向不斷發(fā)展，覆蓋腫瘤、心血管疾病、自身免疫病、神經(jīng)性疾病和抗感染等各個(gè)領(lǐng)域。最早期的單克隆抗體均為鼠源單抗，在理論研究及實(shí)踐應(yīng)用中發(fā)揮了重要作用。然而，鼠源單抗作為異源蛋白，在人體內(nèi)活性低，穩(wěn)定性差；且容易讓人產(chǎn)生免疫反應(yīng)——人抗鼠抗體反應(yīng)(HAMA)而被清除。第二代人鼠嵌合單抗是從雜交瘤細(xì)胞分離出鼠源抗體可變區(qū)基因，與人源抗體恒定區(qū)基因連接，插入適當(dāng)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)生的。如下圖.人源基因序列編碼的氨基酸序列占整個(gè)抗體的大部分，降低了單抗的HAMA反應(yīng)。最新一代單抗是全人源單克隆抗體，氨基酸序列均由人源基因編碼，進(jìn)入人體內(nèi)后發(fā)生超敏或排斥反應(yīng)的可能性最低。目前制備全人源單克隆抗體的技術(shù)包括轉(zhuǎn)基因鼠技術(shù)、抗體庫(kù)技術(shù)以及單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)等。轉(zhuǎn)基因鼠技術(shù)是將優(yōu)化的人源抗體合成基因?qū)氲奖旧聿荒芎铣煽贵w的免疫缺陷鼠的基因組中，在對(duì)轉(zhuǎn)基因鼠進(jìn)行特定抗原免疫后，后續(xù)流程與傳統(tǒng)單抗制備方法一致，產(chǎn)生的抗體均由插入的人源抗體基因序列編碼，也保證了單抗的抗原特異性和結(jié)合親和力。噬菌體展示技術(shù)是抗體庫(kù)技術(shù)中的一種，將所選抗體庫(kù)中抗體的可變區(qū)基因，與噬菌體殼蛋白基因構(gòu)成融合基因，隨著子代噬菌體重組，相關(guān)氨基酸序列會(huì)顯示在噬菌體表面，從而篩選出抗體庫(kù)中與特定抗原結(jié)合親和力高的抗體基因。單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)可從患者或接種疫苗人群的外周血中，根據(jù)抗原和細(xì)胞表面標(biāo)記物篩選出單個(gè)B細(xì)胞，再利用逆轉(zhuǎn)錄PCR等技術(shù)直接獲得抗體合成基因。單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是只需少量細(xì)胞就可以快速高效地篩選出潛在的單克隆抗體，在新發(fā)、突發(fā)傳染病等緊急事件中，可以快速獲得針對(duì)病原微生物的高親和力抗體。(1)上述技術(shù)中，除噬菌體展示技術(shù)外，大多需要在箱中進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。當(dāng)培養(yǎng)瓶中貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)現(xiàn)象時(shí)，用酶處理后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。(2)傳統(tǒng)方法通過(guò)雜交瘤細(xì)胞制備單抗時(shí)，需向小鼠注射，再?gòu)男∈笃⑴K中取已免疫的B細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞混合后，誘導(dǎo)細(xì)胞融合。對(duì)經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和，多次篩選后才能獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。(3)文中提到的新技術(shù)中，不需要利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的有；需要使用基因工程技術(shù)的有。A．人鼠嵌合單抗技術(shù)

B．轉(zhuǎn)基因鼠技術(shù)

C．噬菌體展示技術(shù)D．單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)(4)下面是利用單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)，針對(duì)某新型病原體表面的抗原X，制備單克隆抗體的技術(shù)路徑，請(qǐng)結(jié)合材料補(bǔ)充“”上的內(nèi)容。采集康復(fù)者外周血→篩選能夠結(jié)合X的B細(xì)胞→提取→→根據(jù)抗體基因通用序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR→獲得基因→→導(dǎo)入受體細(xì)胞→獲得抗X的單克隆抗體。21．（2024北京東城高二下期末）人類腺病毒55型（HAdV55）是我國(guó)流行的主要呼吸道病原體之一。目前尚無(wú)特異性治療方法。為解決這一問(wèn)題，我國(guó)科學(xué)家通過(guò)不同方法制備抗HAdV55單克隆抗體。(1)通過(guò)細(xì)胞工程技術(shù)制備單克隆抗體，從接種的小鼠中獲取脾臟細(xì)胞，采用處理誘導(dǎo)與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出相應(yīng)的細(xì)胞，大量培養(yǎng)獲得單克隆抗體。為研究抗體的特異性，用抗體與感染不同類型腺病毒的細(xì)胞提取物進(jìn)行雜交檢測(cè)，結(jié)果如圖1。分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知。(2)如圖2，HAdV55通過(guò)其表面蛋白與細(xì)胞表面受體結(jié)合，進(jìn)入細(xì)胞形成囊泡，最終被溶酶體水解。然而某些病毒可以逃離囊泡，釋放進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)并最終到達(dá)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)制。據(jù)圖2，抗HAdV55抗體的作用機(jī)制分為兩種：機(jī)制一是阻斷；機(jī)制二是阻斷病毒逃離囊泡，釋放至細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核?？蒲腥藛T通過(guò)基因工程制備出3種抗HAdV55單克隆抗體A、B和C。為探明幾種抗體的作用和作用機(jī)制，用抗體處理細(xì)胞，在病毒感染后的不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)量囊泡或細(xì)胞質(zhì)中的病毒含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3。請(qǐng)據(jù)此判斷能通過(guò)機(jī)制一發(fā)揮作用的單克隆抗體是，并說(shuō)明理由。22．（2024北京西城高二下期末）臨床常采用化療方法治療癌癥?；熕幬锿ㄟ^(guò)影響DNA合成、損傷DNA等方式殺傷腫瘤細(xì)胞，長(zhǎng)期使用易導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性?？蒲腥藛T以消化道惡性腫瘤——結(jié)直腸癌（CRC）組織為材料，期望通過(guò)分析耐藥機(jī)制找到新的治療靶點(diǎn)。(1)從CRC病人體內(nèi)取出腫瘤組織，用酶處理得到單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。細(xì)胞分離和培養(yǎng)均需在環(huán)境下進(jìn)行。(2)通過(guò)多次給CRC細(xì)胞施加化療藥物5-FU，得到耐藥性癌細(xì)胞（DR），檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DR中LGR4蛋白表達(dá)量顯著高于CRC細(xì)胞。為探究LGR4的作用，研究者用LGR4正常表達(dá)和低表達(dá)的CRC細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)DNA損傷程度，結(jié)果如圖1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LGR4參與耐藥性的形成，判斷的依據(jù)是。(3)LGR4是細(xì)胞膜上的受體蛋白，被激活后可調(diào)控細(xì)胞增殖、分化相關(guān)信號(hào)通路。研究者嘗試制備LGR4抗體作為治療耐藥性的藥物。①向小鼠體內(nèi)注射對(duì)其進(jìn)行免疫，之后取細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，通過(guò)系列篩選獲得雜交瘤細(xì)胞，生產(chǎn)高親和力的抗體。②在化療的基礎(chǔ)上，將上述抗體應(yīng)用于DR的抗藥性治療，請(qǐng)?jiān)趫D2中補(bǔ)全實(shí)驗(yàn)分組的處理并圖示預(yù)期結(jié)果（用“+”或“-”表示添加或不添加）。(4)進(jìn)一步研究表明，LGR4被激活后會(huì)促進(jìn)S基因的轉(zhuǎn)錄，S基因表達(dá)產(chǎn)物是細(xì)胞死亡的抑制因子。綜合上述結(jié)果和信息，分析施加LGR4抗體緩解耐藥性的分子機(jī)制。

參考答案1．B【分析】植物體細(xì)胞雜交技術(shù)是先用纖維素酶和果膠酶去除植物細(xì)胞的細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體，然后誘導(dǎo)兩個(gè)原生質(zhì)體融合，形成雜種細(xì)胞，再利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，將雜種細(xì)胞培育成雜種植株?！驹斀狻緼、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象，而植物體細(xì)胞雜交技術(shù)過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象，A錯(cuò)誤；B、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)得到的融合細(xì)胞的染色體組數(shù)均增加，B正確；C、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)過(guò)程中不需要用胰蛋白酶處理，C錯(cuò)誤；D、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)過(guò)程中不能用滅活的病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合，D錯(cuò)誤。故選B。2．C【分析】1、單克隆抗體是指由單個(gè)B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合成的雜交瘤細(xì)胞，進(jìn)行進(jìn)行有絲分裂增殖形成的細(xì)胞系所產(chǎn)生出的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。2、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可能大量制備。3、單克隆抗體的作用：①作為診斷試劑：（最廣泛的用途）具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)；②用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于治療癌癥等?！驹斀狻緼、將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，形成的細(xì)胞不都為雜交瘤細(xì)胞，還可能有未融合的B淋巴細(xì)胞、未融合的骨髓瘤細(xì)胞以及B淋巴細(xì)胞自身融合的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞自身融合的細(xì)胞，只有B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成的細(xì)胞才是雜交瘤細(xì)胞，A錯(cuò)誤；B、單克隆抗體不是人工合成的生物分子，而是通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)產(chǎn)生的，其化學(xué)本質(zhì)與天然抗體相同，B錯(cuò)誤；C、將細(xì)胞毒素類藥物與單克隆抗體結(jié)合，可特異性識(shí)別腫瘤抗原并殺傷腫瘤細(xì)胞。因?yàn)閱慰寺】贵w能特異性地識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面的抗原，將細(xì)胞毒素類藥物帶到腫瘤細(xì)胞所在位置，從而精準(zhǔn)地殺傷腫瘤細(xì)胞，C正確；D、將某滅活病原體作為疫苗接種人體后，能產(chǎn)生針對(duì)抗原的多種抗體，而不是單克隆抗體。單克隆抗體是通過(guò)特定的技術(shù)手段制備的，疫苗接種引起的免疫反應(yīng)產(chǎn)生的是多克隆抗體，D錯(cuò)誤。故選C。3．D【分析】胚胎干細(xì)胞具有胚胎細(xì)胞的特性，在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。【詳解】A、iPS細(xì)胞具有與胚胎干細(xì)胞（ES）相似的特性，可以分化為多種細(xì)胞，A錯(cuò)誤；B、向鼠成纖維細(xì)胞中導(dǎo)入Oct3/4等四種基因，需要利用基因工程技術(shù)構(gòu)建基因表達(dá)載體后，才能導(dǎo)入受體細(xì)胞，B錯(cuò)誤；C、iPS細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)發(fā)生接觸抑制，C錯(cuò)誤；D、由iPS細(xì)胞產(chǎn)生的特定細(xì)胞可用于新藥測(cè)試，避免了倫理問(wèn)題，因?yàn)槭侨∽杂谧陨淼募?xì)胞，D正確。故選D。4．C【分析】單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，再通過(guò)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體?！驹斀狻緼、由電泳結(jié)果可知，圖A有S1和S2兩個(gè)條帶，圖B只有S2一個(gè)條帶，且條帶比圖A寬，說(shuō)明該單克隆抗體特異性地識(shí)別SARS-CoV-2中S蛋白的S2亞基，A正確；B、制備單克隆抗體的過(guò)程中，將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，細(xì)胞融合過(guò)程體現(xiàn)了細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性，B正確；C、免疫后的小鼠體內(nèi)的漿細(xì)胞可能有多種，每一種漿細(xì)胞只產(chǎn)生一種特異性抗體，C錯(cuò)誤；D、制備單克隆抗體的過(guò)程中，可用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合，獲得雜交瘤細(xì)胞，D正確。故選C。5．A【分析】試管動(dòng)物和克隆動(dòng)物的比較試管動(dòng)物克隆動(dòng)物生殖方式有性生殖無(wú)性生殖技術(shù)手段體外受精、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植核移植技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植遺傳物質(zhì)來(lái)自兩個(gè)個(gè)體主要來(lái)自核供體遺傳規(guī)律遵循不遵循【詳解】A、試管動(dòng)物技術(shù)是通過(guò)人工操作使卵子和精子在體外成熟和受精，并通過(guò)培養(yǎng)發(fā)育成早期胚胎，再經(jīng)胚胎移植導(dǎo)入雌性受體的子宮，分娩產(chǎn)生后代的技術(shù)。核移植技術(shù)是將供體動(dòng)物的體細(xì)胞核移入去核卵母細(xì)胞中，使這個(gè)重組細(xì)胞發(fā)育形成早期胚胎，經(jīng)胚胎移植導(dǎo)入雌性受體的子宮，得到的新個(gè)體即為克隆動(dòng)物。由此可知試管牛技術(shù)是有性生殖，不可實(shí)現(xiàn)良種牛的大量繁殖，A錯(cuò)誤；B、試管牛技術(shù)和核移植技術(shù)培育良種牛的過(guò)程中都需要將早期胚胎經(jīng)過(guò)移植導(dǎo)入雌性受體的子宮，B正確；C、胚胎移植時(shí)，供體只是產(chǎn)生具有優(yōu)良特性的胚胎，妊娠是由雌性受體完成的，大大縮短了供體的繁殖周期，故進(jìn)行胚胎移植可以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛力，C正確；D、促性腺激素能作用于卵巢，促使卵巢產(chǎn)生更多卵細(xì)胞，因此對(duì)供體母牛注射促性腺激素后可促使其超數(shù)排卵，D正確。故選A。6．C【分析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：指從動(dòng)物細(xì)胞中取出相關(guān)的組織，將它們分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的條件下，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的技術(shù)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：①營(yíng)養(yǎng)：一般用液體培養(yǎng)基，要添加血清，以補(bǔ)充動(dòng)物細(xì)胞所需的未知營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；②無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境：培養(yǎng)液定期更換以清除代謝物，防止代謝物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害；③溫度、PH和滲透壓：溫度為36.5±0.5℃、PH為7.2~7.4。④氣體環(huán)境：95%空氣和5%CO2?！驹斀狻緼、同一個(gè)體的肌腱細(xì)胞與骨細(xì)胞的遺傳物質(zhì)相同，但形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能存在差異，這是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果，A錯(cuò)誤；B、肌腱干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有組織特異性，只能分化成特定的細(xì)胞或組織，不能分化為成年動(dòng)物體內(nèi)的任何一種細(xì)胞，B錯(cuò)誤；C、體外培養(yǎng)兩種干細(xì)胞均需要提供適宜的條件，如無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境；營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；適宜的溫度、pH和滲透壓：溫度為36.5±0.5℃、PH為7.2~7.4；適宜的氣體環(huán)境等，C正確；D、肌腱與骨組織界面再生的多細(xì)胞支架所利用的肌腱干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可來(lái)源于病人本身，將它用于病人體內(nèi)，理論上可以避免發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，而不能保證異體來(lái)源的細(xì)胞移植不引起免疫排斥，D錯(cuò)誤。故選C。7．D【分析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是指從動(dòng)物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的技術(shù)。一般來(lái)說(shuō)，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足的條件有：營(yíng)養(yǎng)；無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境；適宜的溫度、pH和滲透壓；氣體環(huán)境（通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將它們置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)）?！驹斀狻緼、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，一般要在含95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，A正確；B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)，培養(yǎng)時(shí)需保證無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境，以防止雜菌污染，B正確；C、培養(yǎng)液中通常含有糖類、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清，C正確；D、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是細(xì)胞增殖（有絲分裂），D錯(cuò)誤。故選D。8．B【分析】果酒和果醋制作過(guò)程中的相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作：（1）材料的選擇與處理：選擇新鮮的葡萄，榨汁前先將葡萄進(jìn)行沖洗，除去枝梗。（2）滅菌：①榨汁機(jī)要清洗干凈，并晾干。②發(fā)酵裝置要清洗干凈，并用70%的酒精消毒。（3）榨汁：將沖洗除枝梗的葡萄放入榨汁機(jī)榨取葡萄汁。（4）發(fā)酵：①將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶，要留要大約三分之一的空間，并封閉充氣口。②制葡萄酒的過(guò)程中，將溫度嚴(yán)格控制在18℃～25℃，時(shí)間控制在10～12d左右，可通過(guò)出料口對(duì)發(fā)酵的情況進(jìn)行。及時(shí)的監(jiān)測(cè)。③制葡萄醋的過(guò)程中，將溫度嚴(yán)格控制在30℃～35℃，時(shí)間控制在前7～8d左右，并注意適時(shí)通過(guò)充氣口充氣?！驹斀狻緼、泡菜的制作的原理是乳酸菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生乳酸，A正確；B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，制備細(xì)胞懸液需要利用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散開，B錯(cuò)誤；C、果酒果醋制作過(guò)程中，先酵母菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生果酒，再醋酸菌有氧呼吸產(chǎn)生果醋，C正確；D、植物組織培養(yǎng)的流程是：離體細(xì)胞消毒、接種，然后脫分化形成愈傷組織，再分化形成試管苗，D正確。故選B。9．C【分析】動(dòng)物體細(xì)胞核移植依據(jù)的原理是細(xì)胞的全能性。動(dòng)物細(xì)胞的全能性隨著動(dòng)物細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到抑制，全能性表達(dá)很難，但是動(dòng)物的細(xì)胞核內(nèi)仍含有該種動(dòng)物的全部遺傳基因，具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能，即動(dòng)物的細(xì)胞核仍具有全能性?！驹斀狻緼、由于克隆猴基因組成差異小，用克隆猴作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，有利于使實(shí)驗(yàn)中的無(wú)關(guān)變量的控制，有利于增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的可信度，A正確；B、細(xì)胞融合的過(guò)程需要人工誘導(dǎo)，如聚乙二醇（PEG）融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法、電融合法等，可用滅活的病毒誘導(dǎo)去核卵母細(xì)胞和成纖維細(xì)胞融合，B正確；C、克隆猴的遺傳物質(zhì)主要來(lái)自獼猴的成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核，少部分來(lái)自去核的卵母細(xì)胞，C錯(cuò)誤；D、動(dòng)物細(xì)胞核含有該物種的全套遺傳信息，克隆猴的獲得體現(xiàn)了動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性，D正確。故選C。10．B【分析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：①營(yíng)養(yǎng)：一般用液體培養(yǎng)基，要添加血清，以補(bǔ)充動(dòng)物細(xì)胞所需的未知營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；②無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境：培養(yǎng)液定期更換以清除代謝物，防止代謝物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害；③溫度、PH和滲透壓：溫度為36.5±0.5℃、PH為7.2~7.4。④氣體環(huán)境：95%空氣和5%CO2?！驹斀狻緼、分析題圖可知，干細(xì)胞分化成了肌肉細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，說(shuō)明技術(shù)應(yīng)用了干細(xì)胞能分化成其他類型細(xì)胞的原理，A正確；B、體外培養(yǎng)干細(xì)胞時(shí)需置于含95%空氣和5%CO2的培養(yǎng)箱中，其中O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH，B錯(cuò)誤；C、生物反應(yīng)器擴(kuò)大生產(chǎn)時(shí)培養(yǎng)基需加入動(dòng)物血清等物質(zhì)，以滿足動(dòng)物細(xì)胞對(duì)未知營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求，C正確；D、細(xì)胞培養(yǎng)肉進(jìn)入市場(chǎng)銷售前還需進(jìn)行安全性評(píng)估，符合相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)才能上市，D正確。故選B。11．A【分析】1、植物組織培養(yǎng)是指將離體的植物器官、組織或細(xì)胞等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其形成完整植株的技術(shù)，其原理為植物細(xì)胞的全能性。植物組織培養(yǎng)中細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的條件為：離體、嚴(yán)格的無(wú)菌條件、適宜的培養(yǎng)條件及適宜濃度和比例的激素。2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：指從動(dòng)物細(xì)胞中取出相關(guān)的組織，將它們分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的條件下，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的技術(shù)。【詳解】A、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的可獲得大量的細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物，生產(chǎn)實(shí)踐中可將外植體脫分化獲得愈傷組織，再經(jīng)過(guò)細(xì)胞分裂可獲得大量細(xì)胞進(jìn)而獲得大量細(xì)胞產(chǎn)物，即動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)技術(shù)都能實(shí)現(xiàn)大量獲得細(xì)胞產(chǎn)物，A正確；B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中沒有發(fā)育成完整個(gè)體，也沒有分化成其他各種細(xì)胞，沒有體現(xiàn)細(xì)胞的全能性，B錯(cuò)誤；C、植物組織培養(yǎng)技術(shù)使用固體培養(yǎng)基，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般使用液體培養(yǎng)基，C錯(cuò)誤；D、植物組織培養(yǎng)技術(shù)不需要用酶將組織分散成細(xì)胞，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶將組織分散為細(xì)胞，D錯(cuò)誤。故選A。12．D【分析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。過(guò)程：取動(dòng)物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)?！驹斀狻緼、貼壁細(xì)胞隨著細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，從而停止生長(zhǎng)和分裂，A正確；B、該實(shí)驗(yàn)的目的將貼壁依賴性的MDCK馴化為能懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，細(xì)胞活率為因變量，反映馴化過(guò)程中MDCK的適應(yīng)程度，B正確；C、由題圖可知，隨著馴化時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞活率先下降后增加，說(shuō)明MDCK先適應(yīng)懸浮培養(yǎng)環(huán)境再開始大量增殖，C正確；D、培養(yǎng)過(guò)程中由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗及代謝廢物的積累，不利于細(xì)胞增殖，故懸浮培養(yǎng)也需進(jìn)行傳代，D錯(cuò)誤。故選D。13．B【分析】成體干細(xì)胞是成體組織或器官內(nèi)的干細(xì)胞，包括骨髓中的造血干細(xì)胞、神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)干細(xì)胞和睪丸中的精原干細(xì)胞等。一般認(rèn)為，成體干細(xì)胞具有組織特異性，只能分化成特定的細(xì)胞或組織，不具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力。造血干細(xì)胞是發(fā)現(xiàn)最早、研究最多應(yīng)用也最為成熟的一類成體干細(xì)胞，主要存在于成體的骨髓、外周血和臍帶血中?！驹斀狻緼、成體干細(xì)胞是成體組織或器官內(nèi)的干細(xì)胞，骨骼干細(xì)胞（SSC）具有自我更新能力和分化潛能，在骨骼發(fā)育中起重要作用，故SSC屬于成體干細(xì)胞，A正確；B、SSC屬于成體干細(xì)胞，可以分裂分化，但不具有無(wú)限增殖的能力，B錯(cuò)誤；C、培養(yǎng)SSC需要提供O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH，C正確；D、有著自我更新能力及分化潛能的干細(xì)胞，與組織、器官的發(fā)育、再生和修復(fù)等密切相關(guān)，SSC具有自我更新能力和分化潛能可應(yīng)用于骨骼的再生和修復(fù)，D正確。故選B。14．B【分析】單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體?！驹斀狻緼、M病毒必須寄生在活細(xì)胞中才能完成生命活動(dòng)，故不能用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)M病毒，A錯(cuò)誤；B、可用M病毒膜蛋白（抗原）多次免疫小鼠，以獲得更多的能產(chǎn)生特異性抗體的漿細(xì)胞，B正確；C、S細(xì)胞不是雜交瘤細(xì)胞，具有無(wú)限繁殖的特點(diǎn)，不具有產(chǎn)生抗體的特點(diǎn)，C錯(cuò)誤；D、體外培養(yǎng)單個(gè)雜交瘤細(xì)胞由于沒有發(fā)育完整有機(jī)體或分化為任何細(xì)胞，因此不能體現(xiàn)細(xì)胞的全能性，D錯(cuò)誤。故選B。15．D【解析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：（1）無(wú)菌無(wú)毒環(huán)境：無(wú)菌--對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理；在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素；無(wú)毒--定期更換培養(yǎng)液，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)自身造成危害。（2）營(yíng)養(yǎng)成分：所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然成分。（3）溫度和pH值：哺乳動(dòng)物多以36.5±0.5℃為宜，多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。（4）氣體環(huán)境：通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2主要作用是維持培養(yǎng)液的pH?！驹斀狻緼、輕度攪拌可以增加培養(yǎng)液的溶氧量，有利于細(xì)胞的氧氣供應(yīng)，A正確；B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需添加糖、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，B正確；C、以懸浮在培養(yǎng)液中的微珠作為細(xì)胞貼附的載體，能提高單位體積培養(yǎng)液的細(xì)胞產(chǎn)率，C正確；D、該技術(shù)培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可作為病毒的宿主細(xì)胞，可應(yīng)用于病毒疫苗的生產(chǎn)過(guò)程中，D錯(cuò)誤。故選D。16．(1)克隆化培養(yǎng)抗體（陽(yáng)性）(2)AFB單抗與黃綠青霉素（或“CIT”）、伏馬菌素（或“FB”）進(jìn)行抗原-抗體雜交，結(jié)果為不能雜交（或“陰性”“無(wú)雜交帶”）(3)差異較?。ɑ颉跋嘟保?4)D【分析】由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來(lái)制備，雜交瘤抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。用具備這種特性的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群，可制備針對(duì)一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。(1)小問(wèn)詳解：基因的表達(dá)包含轉(zhuǎn)錄和翻譯，F(xiàn)B1進(jìn)入細(xì)胞后能與tRNA結(jié)合形成復(fù)合物，抑制tRNA與某些氨基酸結(jié)合，從而抑制基因表達(dá)的翻譯過(guò)程。堿基對(duì)的增添、缺失、替換被稱為基因突變。(2)小問(wèn)詳解：①根據(jù)題意可知，參與合成完全抗原的物質(zhì)應(yīng)該為大分子物質(zhì)，即ab為大分子物質(zhì)滿足條件，cde為小分子物質(zhì)，不滿足條件。②融合形成雜交細(xì)胞的目的是為了獲得相應(yīng)的抗體，故最終應(yīng)該選擇能夠產(chǎn)生抗AFB1抗體的雜交瘤細(xì)胞。③由于AFB1與其他黃曲霉素在結(jié)構(gòu)上有相似性，抗AFB1抗體能與其他黃曲霉素發(fā)生一定反應(yīng)，但較AFB1的反應(yīng)弱。根據(jù)交叉反應(yīng)的結(jié)果可看出，3G1的特異性最強(qiáng)，故應(yīng)選擇3G1抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)以獲得大量的該抗體用于檢測(cè)。(3)小問(wèn)詳解：可從種植玉米的土壤中分離并純化以香豆素為唯一碳源的微生物用于分解香豆素。具體方案為：將種植玉米的土壤樣品液接種到以香豆素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基上，選擇透明圈直徑大的菌落（或透明圈直徑與菌落直徑比值大的菌落）進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)，用培養(yǎng)后的菌液處理已污染的玉米樣品?！驹斀狻浚?）如圖1為利用小鼠制備抗AFB的單克隆抗體（AFB單抗）的過(guò)程，其中步驟I為為細(xì)胞融合和篩選得到雜交瘤細(xì)，需進(jìn)一步通過(guò)步驟Ⅱ克隆化培養(yǎng)和步驟Ⅲ抗體陽(yáng)性檢測(cè)，最后經(jīng)過(guò)多次篩選得到能產(chǎn)生AFB單抗的雜交瘤細(xì)胞。（2）若想確認(rèn)上述流程獲得的AFB單抗具有極強(qiáng)的特異性，可以讓AFB單抗與食品中的其它有害殘留毒素如黃綠青霉素（CIT）、伏馬菌素（FB）進(jìn)行抗原-抗體雜交，結(jié)果為陰性，則可確認(rèn)AFB單抗具有極強(qiáng)的特異性。（3）圖3結(jié)果表明，在物質(zhì)P濃度為0.8mg/mL時(shí)，探針發(fā)光性能與更高濃度時(shí)差異很小，因此科研時(shí)可選擇該濃度（0.8mg/mL）作為生產(chǎn)檢測(cè)探針的條件，可節(jié)省成本。（4）根據(jù)科研人員制備免疫試紙和檢測(cè)AFB的原理：用不同濃度的AFB標(biāo)準(zhǔn)溶液分別與等量“MP-抗AFB單抗探針”混合，可推知，隨著AFB濃度增加，與之結(jié)合的探針增加，導(dǎo)致T線/C線的發(fā)光值比下降，從而繪制出特定范圍AFB濃度的線性標(biāo)準(zhǔn)曲線（即標(biāo)準(zhǔn)曲線D）作為后續(xù)檢測(cè)食品中是否含有AFB的參照曲線?！军c(diǎn)睛】本題考查微生物分離和培養(yǎng)、單克隆抗體制備相關(guān)知識(shí)，要求考生理解篩選分解尿素的細(xì)菌的原理，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。17．(1)動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(2)PSMA、CD28PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法L鏈和H鏈隨機(jī)組合，產(chǎn)生多種抗體(3)PC雙抗不能有效激活T細(xì)胞抑制將PC雙抗與PD-L1單抗聯(lián)合使用【分析】單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，再通過(guò)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。【詳解】（1）結(jié)合單克隆抗體的制備過(guò)程可知，制備PC雙抗的過(guò)程中，用到的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)主要有動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。（2）制備雙特異性抗體PSMA×CD28，則抗原是CD28和PSMA，將兩種物質(zhì)分別注射到小鼠體內(nèi)，分離出B淋巴細(xì)胞，將B淋巴細(xì)胞分別和小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞，再誘導(dǎo)雜交瘤細(xì)胞融合。誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的常用方法有PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法。成功融合的細(xì)胞會(huì)表達(dá)兩種L鏈和兩種H鏈，所需的雙特異性抗體PSMA×CD28是特定的L鏈和H鏈結(jié)合形成的，由于L鏈和H鏈隨機(jī)組合而產(chǎn)生多種抗體，因此還需要進(jìn)行篩選，才能獲得所需的抗體。（3）該實(shí)驗(yàn)的自變量是加入抗體的種類，因變量是T細(xì)胞的活化水平（用IL-2濃度表示）。由圖可知，兩組實(shí)驗(yàn)T細(xì)胞的活化水平差別不大，說(shuō)明PC雙抗不能有效激活T細(xì)胞。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，這種癌細(xì)胞大量表達(dá)PD-L1，識(shí)別結(jié)合T細(xì)胞表面的PD-1受體，從而抑制細(xì)胞活化，中和PC雙抗所起的作用。為了有更好的治療效果，可將PC雙抗與PD-L1單抗聯(lián)合使用，從而有效激活T細(xì)胞。18．(1)骨髓瘤PEG/滅活病毒/電脈沖(2)4第4株雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體特異性強(qiáng)且含量最高(3)無(wú)顯著差異(4)檢測(cè)：可應(yīng)用于手足口病感染病毒類型的檢測(cè)/病毒感染的早期診斷；治療：注射抗CV-A2單抗治療手足口病/抗CV-A2單抗可作為治療性抗體【分析】單克隆抗體的制備是將骨髓瘤細(xì)胞與漿細(xì)胞結(jié)合，經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)基的篩選得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)專一抗體檢測(cè)后，培養(yǎng)能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，即可得單克隆抗體?！驹斀狻浚?）骨髓瘤細(xì)胞具有無(wú)限增殖的能力，將純化的CV-A2抗原間隔多次注射給小鼠，一段時(shí)間后，取免疫小鼠的脾細(xì)胞與體外培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞，利用PEG/滅活病毒/電脈沖誘導(dǎo)融合后，選擇培養(yǎng)得到雜交瘤細(xì)胞。再經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，初次篩選獲得13株雜交瘤細(xì)胞。（2）分析圖可知，縱坐標(biāo)吸光度大小反應(yīng)與抗原結(jié)合的單抗含量高低，所以第4株雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體特異性強(qiáng)且含量最高，應(yīng)選擇第4株雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)獲取大量的單克隆抗體。（3）分析圖2可知，無(wú)論是在37℃還是在4℃的條件下放置3d后，三種濃度的CV-A2抗原稀釋液中，檢測(cè)值的大小相差不大（無(wú)顯著差異）。（4）制備的抗CV-A2單抗在檢測(cè)和治療手足口病方面的具體應(yīng)用是：檢測(cè)：可應(yīng)用于手足口病感染病毒類型的檢測(cè)/病毒感染的早期診斷；治療：注射抗CV-A2單抗治療手足口病/抗CV-A2單抗可作為治療性抗體。19．(1)基因的堿基序列DNA甲基化(2)高于(3)胎猴誘導(dǎo)細(xì)胞融合注射表達(dá)組蛋白去甲基化酶Kdm4b的mRNA(4)“路障”的含義：克隆胚胎的部分基因組區(qū)域存在供體細(xì)胞基因組攜帶的高水平的H3K9me3修飾，以及胚胎發(fā)育過(guò)程中不能在特定基因組區(qū)域上建立新的H3K9me3模式，都會(huì)造成克隆胚胎的發(fā)育缺陷和死亡。“路標(biāo)”的含義：解決了上述“路障”，就能解決克隆胚胎發(fā)育缺陷問(wèn)題，提高體細(xì)胞克隆技術(shù)的成功率。【分析】1、生物體基因的堿基序列保持不變，但基因表達(dá)和表型發(fā)生可遺傳變化的現(xiàn)象，叫作表觀遺傳?；蚣谆浅Ｒ姷谋碛^遺傳現(xiàn)象，指基因上特定的堿基在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的催化作用下添加上甲基基團(tuán)的過(guò)程，基因的堿基序列沒有變化，但部分堿基發(fā)生了甲基化修飾，抑制了基因的表達(dá)。除了DNA甲基化，構(gòu)成染色體的組蛋白發(fā)生甲基化、乙?；刃揎椧矔?huì)影響基因的表達(dá)。本題中，H3K9me3作為真核細(xì)胞內(nèi)最重要的抑制性組蛋白修飾，通過(guò)抑制基因組的轉(zhuǎn)錄，而影響生物的性狀，也屬于表觀遺傳現(xiàn)象。2、克隆猴“中中”和“華華”的培育流程中，處理①為誘導(dǎo)體細(xì)胞與去核卵母細(xì)胞融合為重構(gòu)胚，處理②為本題提供的解決組蛋白修飾的方案：向核移植細(xì)胞中注射表達(dá)組蛋白去甲基化酶Kdm4b的mRNA，可以有效降低供體基因組的H3K9me3修飾水平，激活克隆胚胎基因組的轉(zhuǎn)錄，顯著改善克隆胚胎著床前的發(fā)育缺陷?！驹斀狻浚?）H3K9me3組蛋白修飾是一種表觀修飾現(xiàn)象，這種修飾并未改變基因的堿基序，即遺傳信息不變，但基因表達(dá)和表型發(fā)生變化。常見的表觀遺傳修飾還有DNA甲基化等。（2）題目信息：“相比于自然受精的胚胎，克隆胚胎的部分基因組區(qū)域仍存在較高水平的H3K9me3，最終會(huì)導(dǎo)致這些區(qū)域內(nèi)基因的異常轉(zhuǎn)錄抑制”，“向核移植細(xì)胞中注射表達(dá)組蛋白去甲基化酶Kdm4b的mRNA，可以有效降低供體基因組的H3K9me3修飾水平，激活克隆胚胎基因組的轉(zhuǎn)錄，顯著改善克隆胚胎著床前的發(fā)育缺陷”，以上信息都說(shuō)明胚胎發(fā)育的全能性相關(guān)基因在自然受精胚胎細(xì)胞階段的表達(dá)量高于克隆胚胎此階段的表達(dá)量。（3）母猴提供卵母細(xì)胞（去核卵母細(xì)胞）作為受體，胎猴提供體細(xì)胞（細(xì)胞核）作為供體；處理①為誘導(dǎo)體細(xì)胞與去核卵母細(xì)胞融合為重構(gòu)胚，可用滅活仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)，也可用電融合法等；據(jù)文中信息“向核移植細(xì)胞中注射表達(dá)組蛋白去甲基化酶Kdm4b的mRNA，可以有效降低供體基因組的H3K9me3修飾水平，激活克隆胚胎基因組的轉(zhuǎn)錄，顯著改善克隆胚胎著床前的發(fā)育缺陷。這種策略已成功提高了SCNT在多個(gè)物種中的克隆效率，也促使了克隆猴“中中”和“華華”的誕生?！保茢嗵幚恝诘牟僮魇亲⑸浔磉_(dá)組蛋白去甲基化酶Kdm4b的mRNA。（4）根據(jù)文中信息：“研究者比較了小鼠體細(xì)胞克隆胚胎與自然受精的胚胎，發(fā)現(xiàn)相比于自然受精的胚胎，克隆胚胎的部分基因組區(qū)域仍存在較高水平的H3K9me3，說(shuō)明受體細(xì)胞無(wú)法充分抹除供體細(xì)胞基因組攜帶的高水平的H3K9me3，最終會(huì)導(dǎo)致這些區(qū)域內(nèi)基因的異常轉(zhuǎn)錄抑制?！?，以及“向核移植細(xì)胞中注射表達(dá)組蛋白去甲基化酶Kdm4b的mRNA，可以有效降低供體基因組的H3K9me3修飾水平，激活克隆胚胎基因組的轉(zhuǎn)錄，顯著改善克隆胚胎著床前的發(fā)育缺陷。這種策略已成功提高了SCNT在多個(gè)物種中的克隆效率，也促使了克隆猴“中中”和“華華”的誕生”，可知，H3K9me3修飾是克隆胚胎的“路障”，其含義為：克隆胚胎的部分基因組區(qū)域存在供體細(xì)胞基因組攜帶的高水平的H3K9me3修飾，以及胚胎發(fā)育過(guò)程中不能在特定基因組區(qū)域上建立新的H3K9me3模式，都會(huì)造成克隆胚胎的發(fā)育缺陷和死亡?！奥窐?biāo)”的含義：解決了上述“路障”，就能解決克隆胚胎發(fā)育缺陷問(wèn)題，提高體細(xì)胞克隆技術(shù)的成功率。20．(1)CO?培養(yǎng)接觸抑制胰蛋白(膠原蛋白)(2)特定抗原抗體檢測(cè)(3)CDABCD(4)總RNA逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA抗X抗體的構(gòu)建基因表達(dá)載體【分析】單克隆抗體的制備：1、細(xì)胞來(lái)源：B淋巴細(xì)胞：能產(chǎn)生特異性抗體，在體外不能無(wú)限繁殖；骨髓瘤細(xì)胞：不產(chǎn)生專一性抗體，體外能無(wú)限繁殖。2、雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體。3、兩次次篩選：①篩選得到雜交瘤細(xì)胞（去掉未雜交細(xì)胞以及自身融合的細(xì)胞）；②篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。4、兩次抗體檢測(cè)：專一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性。5、提取單克隆抗體：從培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取。6、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可能大量制備?！驹斀狻浚?）上述技術(shù)中，除噬菌體展示技術(shù)外，大多需要在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。當(dāng)培養(yǎng)瓶中貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時(shí)，用胰蛋白酶處理后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。（2）傳統(tǒng)方法通過(guò)雜交瘤細(xì)胞制備單抗時(shí)，需向小鼠注射特定抗原，再?gòu)男∈笃⑴K中取已免疫的B細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞混合后，加入化學(xué)試劑PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合。對(duì)經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，多次篩選后才能獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。（3）人鼠嵌合單抗技術(shù)需要基因工程技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)；B轉(zhuǎn)基因鼠技術(shù)需要基因工程技術(shù)，動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)；噬菌體展示技術(shù)需要基因工程技術(shù)；單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)需要基因工程技術(shù)，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)；故文中提到的新技術(shù)中，不需要利用動(dòng)物