EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌中的表達(dá)特征與臨床價(jià)值探究一、引言1.1研究背景與意義食管癌是全球范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類健康。根據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)，食管癌的全球新發(fā)病例數(shù)約為60.4萬，死亡病例數(shù)約為54.4萬，在所有惡性腫瘤中，其發(fā)病率位居第7位，死亡率位居第6位。在中國，食管癌同樣是高發(fā)的惡性腫瘤，每年新發(fā)病例約為32.4萬，死亡病例約為30.1萬，發(fā)病率和死亡率均占到全球的一半以上。中國食管癌具有自身特殊性，病理類型以食管鱗癌為主，約占90%以上，其發(fā)病與多種因素相關(guān)，如吸煙、飲酒、不良飲食習(xí)慣、遺傳因素以及環(huán)境因素等。食管鱗癌的治療方法主要包括手術(shù)、放療、化療以及近年來發(fā)展起來的靶向治療和免疫治療等。然而，由于食管鱗癌起病隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，失去了手術(shù)根治的機(jī)會(huì)。對(duì)于中晚期食管鱗癌患者，傳統(tǒng)的放化療雖然在一定程度上能夠控制腫瘤進(jìn)展，但總體療效仍不盡人意，患者的5年生存率較低，且放化療帶來的不良反應(yīng)嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。因此，尋找新的治療靶點(diǎn)和策略，提高食管鱗癌的治療效果，改善患者預(yù)后，成為當(dāng)前腫瘤研究領(lǐng)域的重要課題。分子靶向治療作為一種新興的腫瘤治療手段，通過針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面或內(nèi)部的特異性分子靶點(diǎn)，阻斷腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過程，具有療效高、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，為食管鱗癌的治療帶來了新的希望。表皮生長因子受體（EGFR）、人表皮生長因子受體2（HER2）和細(xì)胞周期蛋白A（cyclinA）作為重要的分子靶點(diǎn)，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。研究它們?cè)谑彻荀[癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理因素的關(guān)系，對(duì)于深入了解食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制、指導(dǎo)臨床治療以及評(píng)估患者預(yù)后具有重要意義。EGFR屬于Ⅰ型跨膜酪氨酸激酶生長因子受體，是原癌基因C-erbB-1的表達(dá)產(chǎn)物，其信號(hào)通路的異常激活與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。在食管鱗癌中，EGFR的過表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、抑制細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。因此，EGFR成為食管鱗癌分子靶向治療的重要靶點(diǎn)之一，針對(duì)EGFR的靶向藥物如吉非替尼、厄洛替尼等已在臨床進(jìn)行試驗(yàn)，但總體反應(yīng)率較低。深入研究EGFR在食管鱗癌中的表達(dá)及作用機(jī)制，有助于篩選出更能從EGFR靶向治療中獲益的患者，提高治療效果。HER2是一種跨膜蛋白受體，屬于人表皮生長因子受體家族成員。在乳腺癌等多種腫瘤中，HER2的過表達(dá)或基因擴(kuò)增與腫瘤的惡性程度、預(yù)后不良密切相關(guān)。然而，HER2在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義尚存在爭(zhēng)議。有研究表明，HER2在食管鱗癌中的表達(dá)率較低，但在部分患者中仍可檢測(cè)到HER2的過表達(dá)或基因擴(kuò)增，且與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后相關(guān)。因此，明確HER2在食管鱗癌中的表達(dá)情況及其臨床價(jià)值，對(duì)于指導(dǎo)HER2靶向治療在食管鱗癌中的應(yīng)用具有重要意義。cyclinA是細(xì)胞周期調(diào)控的關(guān)鍵蛋白之一，參與細(xì)胞周期的G1/S期和G2/M期轉(zhuǎn)換，其表達(dá)異常可導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和惡性轉(zhuǎn)化。在食管鱗癌中，cyclinA的高表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后密切相關(guān)。研究cyclinA在食管鱗癌中的表達(dá)及作用機(jī)制，可為食管鱗癌的治療提供新的靶點(diǎn)和思路。綜上所述，本研究旨在探討EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌中的表達(dá)情況，分析其與臨床病理因素的關(guān)系，以及三者之間的相互關(guān)系，為揭示食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制、尋找有效的治療靶點(diǎn)和評(píng)估患者預(yù)后提供理論依據(jù)。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在食管癌的研究領(lǐng)域，由于其在全球范圍內(nèi)的高發(fā)病率和高死亡率，一直是醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)。尤其是食管鱗癌，作為食管癌最主要的病理類型，對(duì)其發(fā)病機(jī)制、診斷和治療的研究具有重要的臨床意義。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，關(guān)于EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義的研究取得了一定的進(jìn)展。在EGFR方面，國外學(xué)者早在20世紀(jì)90年代就開始關(guān)注其在食管鱗癌中的作用。研究發(fā)現(xiàn)，EGFR在食管鱗癌組織中的表達(dá)率明顯高于正常食管組織，且其表達(dá)水平與腫瘤的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和患者的預(yù)后密切相關(guān)。例如，一項(xiàng)來自美國的研究對(duì)100例食管鱗癌患者進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)EGFR陽性表達(dá)的患者5年生存率明顯低于陰性表達(dá)的患者。隨后，針對(duì)EGFR的靶向治療藥物開始進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。吉非替尼、厄洛替尼等小分子酪氨酸激酶抑制劑在食管鱗癌的治療中進(jìn)行了探索，但總體反應(yīng)率較低，僅為10%-20%左右。國內(nèi)的研究也證實(shí)了EGFR在食管鱗癌中的高表達(dá)情況，并進(jìn)一步探討了其與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)系。有研究表明，EGFR的表達(dá)與食管鱗癌的浸潤深度、分化程度密切相關(guān)。此外，國內(nèi)學(xué)者還嘗試將EGFR靶向治療與傳統(tǒng)放化療相結(jié)合，以提高治療效果，但目前仍處于探索階段。HER2在食管鱗癌中的研究相對(duì)較少，且存在較大爭(zhēng)議。國外一些研究認(rèn)為，HER2在食管鱗癌中的表達(dá)率較低，一般在5%-10%左右，且其表達(dá)與患者的預(yù)后關(guān)系不明確。然而，也有部分研究報(bào)道HER2在食管鱗癌中存在一定比例的過表達(dá)或基因擴(kuò)增，且與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后相關(guān)。例如，一項(xiàng)歐洲的研究對(duì)200例食管鱗癌患者進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)HER2過表達(dá)的患者更容易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，生存期明顯縮短。國內(nèi)的研究結(jié)果也不盡相同，一些研究支持HER2在食管鱗癌中低表達(dá)且臨床意義不大的觀點(diǎn)，而另一些研究則發(fā)現(xiàn)HER2的異常表達(dá)與食管鱗癌的某些臨床病理因素存在關(guān)聯(lián)。在HER2靶向治療方面，曲妥珠單抗在HER2過表達(dá)的食管腺癌中顯示出一定的療效，但在食管鱗癌中的應(yīng)用仍有待進(jìn)一步探索。cyclinA作為細(xì)胞周期調(diào)控的關(guān)鍵蛋白，其在食管鱗癌中的研究也逐漸受到關(guān)注。國外研究表明，cyclinA在食管鱗癌組織中的表達(dá)明顯高于正常食管組織，且其高表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后密切相關(guān)。例如，一項(xiàng)日本的研究對(duì)150例食管鱗癌患者進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)cyclinA高表達(dá)的患者5年生存率明顯低于低表達(dá)的患者。國內(nèi)的研究也得到了類似的結(jié)果，并且進(jìn)一步探討了cyclinA在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制。有研究發(fā)現(xiàn)，cyclinA可以通過調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞的增殖和侵襲。此外，國內(nèi)學(xué)者還嘗試將cyclinA作為食管鱗癌治療的新靶點(diǎn)，開展了相關(guān)的基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)。盡管國內(nèi)外在EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義方面取得了一定的研究成果，但仍存在一些不足之處。首先，目前的研究結(jié)果存在一定的差異，可能與研究方法、樣本量、地域差異等因素有關(guān)，需要進(jìn)一步開展大樣本、多中心的研究來明確三者在食管鱗癌中的表達(dá)情況及其臨床價(jià)值。其次，對(duì)于EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌中的作用機(jī)制尚未完全闡明，需要深入研究它們之間的相互關(guān)系以及與其他信號(hào)通路的交互作用，為靶向治療提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。最后，針對(duì)EGFR、HER2及cyclinA的靶向治療在食管鱗癌中的應(yīng)用仍處于探索階段，療效有待進(jìn)一步提高，需要開發(fā)更加有效的靶向藥物和治療策略。1.3研究目的與內(nèi)容本研究旨在深入探究EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌中的表達(dá)情況，分析其與臨床病理因素的關(guān)系，以及三者之間的相互關(guān)系，為食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制研究、臨床治療及預(yù)后評(píng)估提供重要的理論依據(jù)。具體研究?jī)?nèi)容如下：檢測(cè)EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌組織中的表達(dá)：運(yùn)用免疫組織化學(xué)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR或蛋白免疫印跡等技術(shù)，檢測(cè)EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)水平，明確它們?cè)谑彻荀[癌中的表達(dá)特征，包括表達(dá)的陽性率、表達(dá)強(qiáng)度以及在細(xì)胞中的定位等。分析EGFR、HER2及cyclinA表達(dá)與食管鱗癌臨床病理因素的關(guān)系：收集食管鱗癌患者的臨床病理資料，如性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法，探討EGFR、HER2及cyclinA的表達(dá)與這些臨床病理因素之間的相關(guān)性，評(píng)估它們對(duì)食管鱗癌患者預(yù)后的影響。探討EGFR、HER2及cyclinA之間的相互關(guān)系：采用相關(guān)性分析、基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析或信號(hào)通路研究等方法，深入探究EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展過程中的相互作用關(guān)系，明確它們是否存在協(xié)同或拮抗作用，以及這種相互關(guān)系對(duì)食管鱗癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。1.4研究方法與技術(shù)路線本研究采用免疫組織化學(xué)、熒光原位雜交等方法，具體內(nèi)容如下：免疫組織化學(xué)：免疫組織化學(xué)是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。本研究運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)食管鱗癌組織及癌旁正常組織中EGFR、HER2及cyclinA蛋白的表達(dá)情況。首先對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)石蠟切片，厚度約為4μm，然后進(jìn)行脫蠟、水化處理。采用高溫高壓抗原修復(fù)方法，以增強(qiáng)抗原的暴露。用3%過氧化氫溶液孵育切片，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。滴加一抗，EGFR、HER2及cyclinA的一抗均按照合適的稀釋比例進(jìn)行稀釋，4℃孵育過夜。次日，滴加相應(yīng)的二抗，室溫孵育30-60分鐘。使用DAB顯色劑進(jìn)行顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，鹽酸酒精分化，氨水返藍(lán)。最后，脫水、透明，中性樹膠封片。在顯微鏡下觀察染色結(jié)果，根據(jù)陽性細(xì)胞的比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。熒光原位雜交：熒光原位雜交是一種利用熒光標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸序列進(jìn)行定位和定量分析的技術(shù)。本研究采用熒光原位雜交技術(shù)，檢測(cè)HER2基因在食管鱗癌組織中的擴(kuò)增情況。取新鮮的食管鱗癌組織及癌旁正常組織，制備細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞滴片固定。用胃蛋白酶消化處理，以增強(qiáng)細(xì)胞通透性。滴加HER2基因特異性探針，在雜交爐中進(jìn)行雜交反應(yīng)，溫度和時(shí)間根據(jù)探針說明書進(jìn)行設(shè)置。雜交后進(jìn)行洗脫，以去除未雜交的探針。用DAPI復(fù)染細(xì)胞核，在熒光顯微鏡下觀察雜交信號(hào)，計(jì)數(shù)HER2基因拷貝數(shù)及HER2/CEP17比值，判斷HER2基因是否擴(kuò)增。實(shí)時(shí)熒光定量PCR：實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。本研究運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)EGFR、HER2及cyclinA基因在食管鱗癌組織及癌旁正常組織中的mRNA表達(dá)水平。首先提取組織總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，設(shè)計(jì)特異性引物，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)。反應(yīng)體系和條件根據(jù)所用試劑盒進(jìn)行優(yōu)化。通過檢測(cè)熒光信號(hào)的變化，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過程，根據(jù)Ct值計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：運(yùn)用SPSS22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)分析EGFR、HER2及cyclinA的表達(dá)與食管鱗癌臨床病理因素之間的關(guān)系。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析或Spearman秩相關(guān)分析，探討EGFR、HER2及cyclinA之間的相互關(guān)系。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究技術(shù)路線如圖1所示：標(biāo)本收集：收集食管鱗癌患者手術(shù)切除的腫瘤組織及癌旁正常組織標(biāo)本，記錄患者的臨床病理資料。免疫組織化學(xué)檢測(cè)：對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，檢測(cè)EGFR、HER2及cyclinA蛋白的表達(dá)。熒光原位雜交檢測(cè)：取新鮮組織制備細(xì)胞懸液，進(jìn)行熒光原位雜交，檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增情況。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)：提取組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，檢測(cè)EGFR、HER2及cyclinA基因的mRNA表達(dá)。數(shù)據(jù)分析：對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，探討EGFR、HER2及cyclinA的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系以及三者之間的相互關(guān)系。[此處插入技術(shù)路線圖，圖1：研究技術(shù)路線圖，清晰展示從標(biāo)本收集到數(shù)據(jù)分析的整個(gè)研究流程，包括各檢測(cè)方法的應(yīng)用步驟和相互關(guān)系]二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1食管鱗癌概述食管鱗癌是食管癌中最常見的病理類型，是指起源于食管鱗狀上皮細(xì)胞的惡性腫瘤。食管作為連接咽部和胃部的重要消化管道，其黏膜上皮主要由鱗狀上皮細(xì)胞組成。當(dāng)這些鱗狀上皮細(xì)胞發(fā)生異常增殖和分化，突破正常組織的邊界，侵犯周圍組織，并可通過淋巴道、血道等途徑轉(zhuǎn)移至其他部位時(shí)，即形成食管鱗癌。食管鱗癌在全球范圍內(nèi)呈現(xiàn)出明顯的地域分布差異。在亞洲、非洲等地區(qū)，尤其是中國、伊朗、南非等地，食管鱗癌的發(fā)病率較高，而在歐美等發(fā)達(dá)國家，食管鱗癌的發(fā)病率相對(duì)較低，但近年來食管腺癌的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。在中國，食管鱗癌的高發(fā)區(qū)主要集中在太行山區(qū)、四川盆地、閩粵交界地區(qū)以及湖北、山東、江蘇等地。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國每年新發(fā)病例數(shù)占全球的一半以上，嚴(yán)重威脅著人們的健康。食管鱗癌的發(fā)病是一個(gè)多因素、多階段的復(fù)雜過程，涉及遺傳、環(huán)境、生活方式等多個(gè)方面。吸煙和飲酒是食管鱗癌的重要危險(xiǎn)因素，長期大量吸煙和酗酒可使食管黏膜反復(fù)受到刺激和損傷，增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。有研究表明，吸煙者患食管鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)是不吸煙者的2-6倍，而酗酒者的風(fēng)險(xiǎn)則更高。不良飲食習(xí)慣，如長期食用熱燙食物、粗硬食物、腌制食物、霉變食物等，也與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。熱燙食物可燙傷食管黏膜，長期刺激導(dǎo)致黏膜反復(fù)損傷和修復(fù)，增加基因突變的概率；腌制食物和霉變食物中含有亞硝胺、黃曲霉毒素等致癌物質(zhì)，可直接損傷食管黏膜細(xì)胞的DNA，引發(fā)細(xì)胞癌變。此外，營養(yǎng)缺乏，如維生素A、維生素C、維生素E、微量元素鋅、硒等攝入不足，也可能降低機(jī)體的抗氧化能力和免疫功能，增加食管鱗癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。食管鱗癌在早期通常癥狀不明顯，或僅表現(xiàn)為一些輕微的非特異性癥狀，如吞咽時(shí)胸骨后不適、燒灼感、異物感等，這些癥狀容易被忽視或誤診為其他食管良性疾病。隨著腫瘤的進(jìn)展，患者可逐漸出現(xiàn)吞咽困難，這是食管鱗癌最典型的癥狀，通常先表現(xiàn)為吞咽固體食物困難，隨后逐漸發(fā)展為吞咽半流質(zhì)、流質(zhì)食物也困難。此外，患者還可能伴有胸骨后疼痛、消瘦、乏力、貧血等癥狀。當(dāng)腫瘤侵犯周圍組織或發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí)，可出現(xiàn)相應(yīng)的癥狀，如侵犯氣管可導(dǎo)致食管氣管瘺，引起嗆咳、肺部感染；侵犯喉返神經(jīng)可導(dǎo)致聲音嘶??；轉(zhuǎn)移至肝臟可引起肝區(qū)疼痛、黃疸等。食管鱗癌的診斷主要依靠多種檢查手段的綜合應(yīng)用。胃鏡檢查是診斷食管鱗癌的重要方法，通過胃鏡可以直接觀察食管黏膜的病變情況，對(duì)可疑病變進(jìn)行活檢，獲取病理組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，以明確診斷。病理學(xué)檢查是診斷食管鱗癌的金標(biāo)準(zhǔn)，通過顯微鏡觀察病理組織中癌細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和分化程度等特征，確定腫瘤的病理類型和分級(jí)。此外，影像學(xué)檢查如食管造影、胸部CT、PET-CT等也在食管鱗癌的診斷中發(fā)揮著重要作用。食管造影可觀察食管的形態(tài)、輪廓、蠕動(dòng)情況以及有無充盈缺損、龕影等異常表現(xiàn)，對(duì)食管鱗癌的診斷和分期有一定的幫助。胸部CT能夠清晰顯示食管腫瘤的大小、位置、侵犯范圍以及與周圍組織的關(guān)系，有助于判斷腫瘤的可切除性和分期。PET-CT則可以通過檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的代謝活性，發(fā)現(xiàn)潛在的轉(zhuǎn)移病灶，對(duì)腫瘤的分期和預(yù)后評(píng)估具有重要價(jià)值。在診斷過程中，醫(yī)生還會(huì)結(jié)合患者的臨床癥狀、病史、家族史等信息，進(jìn)行全面綜合的分析，以提高診斷的準(zhǔn)確性。2.2EGFR相關(guān)理論EGFR，即表皮生長因子受體，是一種重要的跨膜蛋白，屬于受體酪氨酸激酶家族，其在細(xì)胞的生理過程以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展中均扮演著關(guān)鍵角色。EGFR的結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，由原癌基因c-erbB1編碼。它主要由三個(gè)部分組成：膜外配體結(jié)合區(qū)、單鏈跨膜區(qū)以及高度保守的膜內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)。膜外配體結(jié)合區(qū)包含約621個(gè)氨基酸，這一區(qū)域負(fù)責(zé)與多種配體結(jié)合，如表皮生長因子（EGF）、轉(zhuǎn)化生長因子α（TGF-α）等。當(dāng)配體與膜外配體結(jié)合區(qū)結(jié)合后，會(huì)引發(fā)EGFR的構(gòu)象變化，促使兩個(gè)EGFR單體或者EGFR與HER家族的其他成員發(fā)生結(jié)合，形成同源或異源二聚體。單鏈跨膜區(qū)則起到連接膜外和膜內(nèi)區(qū)域的作用，維持EGFR在細(xì)胞膜上的穩(wěn)定定位。膜內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)含有約542個(gè)氨基酸，二聚體的形成能夠激活該區(qū)域的酪氨酸激酶活性，使得特定的酪氨酸殘基發(fā)生自動(dòng)磷酸化。在正常生理狀態(tài)下，EGFR參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種生物學(xué)過程，對(duì)維持機(jī)體的正常生理功能至關(guān)重要。它能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和增殖，通過與配體結(jié)合并激活下游信號(hào)通路，為細(xì)胞的生長和分裂提供必要的信號(hào)，確保細(xì)胞數(shù)量的平衡和組織器官的正常發(fā)育。在胚胎發(fā)育過程中，EGFR信號(hào)通路參與了多個(gè)器官系統(tǒng)的形成和發(fā)育，如神經(jīng)系統(tǒng)、皮膚、胃腸道等。同時(shí)，EGFR還在細(xì)胞的遷移和分化過程中發(fā)揮作用，引導(dǎo)細(xì)胞在組織內(nèi)的正確定位和分化方向，對(duì)于組織的修復(fù)和再生也具有重要意義。當(dāng)組織受到損傷時(shí)，EGFR信號(hào)通路會(huì)被激活，促進(jìn)細(xì)胞的遷移和增殖，加速組織的修復(fù)。然而，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，EGFR的表達(dá)和活性常常出現(xiàn)異常。許多腫瘤細(xì)胞中EGFR呈現(xiàn)過表達(dá)狀態(tài)，即其表達(dá)水平明顯高于正常細(xì)胞。這種過表達(dá)可能是由于基因擴(kuò)增、基因突變或其他調(diào)控機(jī)制的異常導(dǎo)致的。例如，在一些腫瘤中，EGFR基因可能發(fā)生擴(kuò)增，使得細(xì)胞內(nèi)EGFR的拷貝數(shù)增加，從而導(dǎo)致其蛋白表達(dá)量升高。EGFR的過表達(dá)會(huì)導(dǎo)致其下游信號(hào)通路的持續(xù)激活，即使在沒有配體存在的情況下，也能不斷傳遞增殖和生存信號(hào)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。持續(xù)激活的Ras-MAPK通路會(huì)促使細(xì)胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子磷酸化，促進(jìn)與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，使腫瘤細(xì)胞不斷分裂。PI3K/Akt抗凋亡通路的激活則抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，增加腫瘤細(xì)胞的存活幾率。此外，EGFR信號(hào)通路的異常激活還能增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。它可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞突破基底膜，侵入周圍組織。同時(shí)，EGFR還能通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供營養(yǎng)和通路。在食管鱗癌中，EGFR的研究也取得了一系列重要進(jìn)展。大量研究表明，食管鱗癌組織中EGFR的表達(dá)水平顯著高于正常食管組織。有研究通過免疫組織化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌組織中EGFR的陽性表達(dá)率可高達(dá)60%-80%左右。EGFR的表達(dá)與食管鱗癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)。其高表達(dá)通常與腫瘤的大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期等相關(guān)。腫瘤越大、浸潤越深、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分期越晚的患者，EGFR的表達(dá)往往越高。一項(xiàng)對(duì)200例食管鱗癌患者的研究顯示，EGFR高表達(dá)的患者中，腫瘤浸潤至食管外膜的比例明顯高于EGFR低表達(dá)患者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率也更高。在預(yù)后方面，EGFR高表達(dá)的食管鱗癌患者預(yù)后通常較差。高表達(dá)EGFR的患者對(duì)放療和化療的敏感性相對(duì)較低，更容易出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，5年生存率明顯低于EGFR低表達(dá)患者。由于EGFR在食管鱗癌中的重要作用，其成為了食管鱗癌靶向治療的重要靶點(diǎn)。針對(duì)EGFR的靶向治療主要包括小分子酪氨酸激酶抑制劑和抗體類藥物。小分子酪氨酸激酶抑制劑，如吉非替尼、厄洛替尼等，能夠特異性地抑制EGFR的酪氨酸激酶活性，阻斷下游信號(hào)傳導(dǎo)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長和增殖?？贵w類藥物，如西妥昔單抗，可與EGFR的胞外配體結(jié)合區(qū)結(jié)合，阻止配體與EGFR的結(jié)合，進(jìn)而阻斷EGFR信號(hào)通路。然而，目前EGFR靶向治療在食管鱗癌中的總體反應(yīng)率仍有待提高，部分患者對(duì)靶向藥物存在原發(fā)性耐藥或繼發(fā)性耐藥。研究發(fā)現(xiàn)，一些患者可能由于存在其他基因突變或信號(hào)通路的異常激活，導(dǎo)致對(duì)EGFR靶向藥物不敏感。因此，深入研究EGFR在食管鱗癌中的作用機(jī)制，探索克服耐藥的方法，對(duì)于提高食管鱗癌的靶向治療效果具有重要意義。2.3HER2相關(guān)理論HER2，全稱人表皮生長因子受體2，又被稱作ErbB-2，是一種重要的跨膜蛋白受體，屬于人表皮生長因子受體（HER）家族成員，該家族還包括HER1（即EGFR）、HER3和HER4。HER2在細(xì)胞的正常生理過程以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展中都發(fā)揮著獨(dú)特而關(guān)鍵的作用。HER2的結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，由原癌基因HER2編碼。它由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)三個(gè)主要部分構(gòu)成。胞外區(qū)含有大約650個(gè)氨基酸，包含多個(gè)結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域參與與其他配體或受體的相互作用。雖然HER2本身沒有已知的直接配體，但它在形成異源二聚體時(shí)起著重要作用，能夠與HER家族其他成員的配體結(jié)合，從而激活下游信號(hào)通路?？缒^(qū)由23個(gè)氨基酸組成，它將HER2錨定在細(xì)胞膜上，維持其在細(xì)胞表面的穩(wěn)定定位。胞內(nèi)區(qū)包含一個(gè)高度保守的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域由大約580個(gè)氨基酸組成。當(dāng)HER2與其他HER家族成員形成異源二聚體后，酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域被激活，使得特定的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化，進(jìn)而啟動(dòng)下游一系列復(fù)雜的信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)。在正常生理狀態(tài)下，HER2參與細(xì)胞的生長、分化和存活等多種生物學(xué)過程。它與HER家族其他成員相互協(xié)作，精確調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和分化，確保組織器官的正常發(fā)育和功能維持。在胚胎發(fā)育過程中，HER2在心臟、神經(jīng)系統(tǒng)、乳腺等器官的發(fā)育中發(fā)揮重要作用。例如，在心臟發(fā)育過程中，HER2信號(hào)通路參與心肌細(xì)胞的增殖和分化，對(duì)心臟的正常形態(tài)和功能的形成至關(guān)重要。在乳腺發(fā)育過程中，HER2在青春期和妊娠期對(duì)乳腺導(dǎo)管的生長和分支起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。然而，當(dāng)HER2的表達(dá)或功能出現(xiàn)異常時(shí)，就可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，HER2的異常主要表現(xiàn)為過表達(dá)和基因擴(kuò)增。在許多腫瘤細(xì)胞中，HER2基因會(huì)發(fā)生擴(kuò)增，使得細(xì)胞內(nèi)HER2基因的拷貝數(shù)顯著增加，從而導(dǎo)致HER2蛋白的過表達(dá)。這種過表達(dá)會(huì)導(dǎo)致HER2信號(hào)通路的持續(xù)激活，即使在沒有配體存在的情況下，也能不斷傳遞增殖和生存信號(hào)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。持續(xù)激活的PI3K/Akt抗凋亡通路可以抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活能力。HER2還能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞周期進(jìn)程，使腫瘤細(xì)胞不斷分裂。HER2的異常激活還與腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。它可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞突破基底膜，侵入周圍組織。同時(shí)，HER2能夠上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等促血管生成因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供營養(yǎng)和通路。此外，HER2的過表達(dá)還與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物和放療的耐藥性相關(guān)。它可以通過激活多種耐藥相關(guān)蛋白和信號(hào)通路，降低腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，從而影響治療效果。在食管鱗癌中，HER2的研究情況較為復(fù)雜且存在一定爭(zhēng)議。部分研究顯示，HER2在食管鱗癌中的表達(dá)率相對(duì)較低，一般在5%-10%左右。例如，一項(xiàng)針對(duì)大量食管鱗癌患者的多中心研究發(fā)現(xiàn)，HER2蛋白過表達(dá)的患者比例僅為7.5%。然而，也有一些研究報(bào)道HER2在食管鱗癌中存在一定比例的過表達(dá)或基因擴(kuò)增，且與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后相關(guān)。有研究表明，HER2過表達(dá)或基因擴(kuò)增的食管鱗癌患者更容易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，患者的生存期明顯縮短。在一項(xiàng)對(duì)200例食管鱗癌患者的隨訪研究中，發(fā)現(xiàn)HER2陽性的患者5年生存率顯著低于HER2陰性的患者。在HER2靶向治療方面，曲妥珠單抗是一種針對(duì)HER2的人源化單克隆抗體，已在HER2過表達(dá)的乳腺癌和胃癌等腫瘤中顯示出良好的療效。然而，在食管鱗癌中，曲妥珠單抗的應(yīng)用仍處于探索階段，雖然有部分患者可能從治療中獲益，但總體療效仍有待進(jìn)一步提高。一些研究正在嘗試將曲妥珠單抗與其他治療方法如化療、放療或其他靶向藥物聯(lián)合應(yīng)用，以提高治療效果。同時(shí)，對(duì)于HER2在食管鱗癌中的作用機(jī)制以及如何篩選出更能從HER2靶向治療中獲益的患者，仍需要進(jìn)一步深入研究。2.4cyclinA相關(guān)理論細(xì)胞周期蛋白A（cyclinA）是細(xì)胞周期蛋白家族的重要成員之一，在細(xì)胞周期的調(diào)控過程中扮演著極為關(guān)鍵的角色，其表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，在食管鱗癌的研究中也受到了廣泛關(guān)注。cyclinA基因位于人類染色體4q28，其編碼的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量約為55-60kDa。cyclinA蛋白具有典型的細(xì)胞周期蛋白結(jié)構(gòu)特征，包含一個(gè)高度保守的細(xì)胞周期蛋白盒，該結(jié)構(gòu)域由約100個(gè)氨基酸殘基組成，能夠與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）結(jié)合，形成具有活性的復(fù)合物。在細(xì)胞周期的不同階段，cyclinA的表達(dá)水平呈現(xiàn)出明顯的周期性變化。在G1晚期，cyclinA開始表達(dá)并逐漸積累，進(jìn)入S期后，其表達(dá)水平進(jìn)一步升高，在G2/M期達(dá)到峰值，隨后在有絲分裂后期迅速降解。這種周期性的表達(dá)變化對(duì)于細(xì)胞周期的有序進(jìn)行至關(guān)重要。在細(xì)胞周期調(diào)控中，cyclinA起著核心作用。在S期，cyclinA與CDK2結(jié)合形成cyclinA-CDK2復(fù)合物，該復(fù)合物能夠磷酸化一系列底物，如視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（Rb）等，從而促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，啟動(dòng)DNA的復(fù)制過程。同時(shí)，cyclinA-CDK2復(fù)合物還參與DNA復(fù)制的起始和延伸過程，確保DNA的準(zhǔn)確復(fù)制。在G2/M期，cyclinA與CDK1結(jié)合形成cyclinA-CDK1復(fù)合物，該復(fù)合物在促進(jìn)細(xì)胞從G2期進(jìn)入M期以及有絲分裂的進(jìn)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。它可以調(diào)節(jié)染色體的凝聚、紡錘體的形成以及姐妹染色單體的分離等過程，保證細(xì)胞有絲分裂的正常進(jìn)行。此外，cyclinA還可以通過與其他蛋白質(zhì)相互作用，參與細(xì)胞周期的檢查點(diǎn)調(diào)控，確保細(xì)胞周期的各個(gè)階段按照正確的順序進(jìn)行。當(dāng)細(xì)胞受到DNA損傷等外界刺激時(shí)，細(xì)胞周期檢查點(diǎn)會(huì)被激活，cyclinA的表達(dá)和活性會(huì)受到調(diào)控，從而使細(xì)胞周期停滯，以便細(xì)胞修復(fù)損傷，避免異常細(xì)胞的增殖。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，cyclinA的表達(dá)異常往往會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和惡性轉(zhuǎn)化。許多研究表明，在多種腫瘤組織中，cyclinA呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。其高表達(dá)可能是由于基因擴(kuò)增、轉(zhuǎn)錄調(diào)控異?；虻鞍踪|(zhì)降解受阻等原因?qū)е碌?。在腫瘤細(xì)胞中，cyclinA的高表達(dá)會(huì)使細(xì)胞周期進(jìn)程加快，細(xì)胞增殖失控。持續(xù)高水平的cyclinA-CDK2復(fù)合物會(huì)過度磷酸化Rb蛋白，導(dǎo)致Rb蛋白失去對(duì)細(xì)胞周期的抑制作用，使細(xì)胞不斷進(jìn)入S期進(jìn)行DNA復(fù)制和增殖。cyclinA的異常表達(dá)還與腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力相關(guān)。它可以通過調(diào)節(jié)一些與細(xì)胞黏附和遷移相關(guān)的分子，如E-鈣黏蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶等，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞突破基底膜，侵入周圍組織，并通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)轉(zhuǎn)移到其他部位。此外，cyclinA還可能參與腫瘤細(xì)胞的耐藥過程。研究發(fā)現(xiàn)，在一些對(duì)化療藥物耐藥的腫瘤細(xì)胞中，cyclinA的表達(dá)水平較高，它可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性降低。在食管鱗癌中，cyclinA的研究也取得了一定的成果。大量研究顯示，食管鱗癌組織中cyclinA的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織。有研究通過免疫組織化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌組織中cyclinA的陽性表達(dá)率可達(dá)到50%-70%左右。cyclinA的表達(dá)與食管鱗癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)。其高表達(dá)通常與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期等相關(guān)。低分化的食管鱗癌組織中cyclinA的表達(dá)往往較高，提示腫瘤細(xì)胞的增殖活性較強(qiáng)。腫瘤浸潤深度越深、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分期越晚的患者，cyclinA的表達(dá)也越高。一項(xiàng)對(duì)150例食管鱗癌患者的研究顯示，cyclinA高表達(dá)的患者中，腫瘤浸潤至食管外膜的比例明顯高于cyclinA低表達(dá)患者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率也更高。在預(yù)后方面，cyclinA高表達(dá)的食管鱗癌患者預(yù)后通常較差。高表達(dá)cyclinA的患者更容易出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，5年生存率明顯低于cyclinA低表達(dá)患者。由于cyclinA在食管鱗癌中的重要作用，其成為了食管鱗癌治療的潛在靶點(diǎn)。目前，針對(duì)cyclinA的靶向治療研究主要集中在開發(fā)能夠抑制cyclinA表達(dá)或活性的藥物，如小分子抑制劑、RNA干擾技術(shù)等。這些研究為食管鱗癌的治療提供了新的思路和方法，但仍處于探索階段，需要進(jìn)一步深入研究以提高治療效果。三、EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌中的表達(dá)檢測(cè)3.1材料與方法3.1.1標(biāo)本來源收集[具體醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)手術(shù)切除的食管鱗癌組織標(biāo)本[X]例，所有患者術(shù)前均未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療，術(shù)后病理診斷均明確為食管鱗癌。同時(shí)，選取相應(yīng)的癌旁正常食管黏膜組織標(biāo)本[X]例作為對(duì)照，癌旁組織距離腫瘤邊緣至少[X]cm以上，經(jīng)病理檢查證實(shí)無癌細(xì)胞浸潤。收集患者的臨床病理資料，包括性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及TNM分期等信息，確保資料完整準(zhǔn)確。3.1.2實(shí)驗(yàn)試劑EGFR、HER2及cyclinA的兔抗人單克隆抗體購自[具體試劑公司1]，免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒（包括二抗、DAB顯色劑等）購自[具體試劑公司2]。蘇木精、伊紅、中性樹膠等染色相關(guān)試劑購自[具體試劑公司3]。用于熒光原位雜交檢測(cè)的HER2基因特異性探針購自[具體試劑公司4]，雜交緩沖液、胃蛋白酶、DAPI等試劑購自[具體試劑公司5]。所有試劑均在有效期內(nèi)使用，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行保存和配制。3.1.3實(shí)驗(yàn)儀器切片機(jī)（型號(hào)：[具體型號(hào)1]，品牌：[具體品牌1]）用于制備組織切片；恒溫烤箱（型號(hào)：[具體型號(hào)2]，品牌：[具體品牌2]）用于烤片；顯微鏡（型號(hào)：[具體型號(hào)3]，品牌：[具體品牌3]）用于觀察免疫組織化學(xué)染色結(jié)果；熒光顯微鏡（型號(hào)：[具體型號(hào)4]，品牌：[具體品牌4]）用于觀察熒光原位雜交結(jié)果；雜交爐（型號(hào)：[具體型號(hào)5]，品牌：[具體品牌5]）用于熒光原位雜交的雜交反應(yīng)；離心機(jī)（型號(hào)：[具體型號(hào)6]，品牌：[具體品牌6]）用于組織勻漿和細(xì)胞分離等操作。實(shí)驗(yàn)前對(duì)所有儀器進(jìn)行調(diào)試和校準(zhǔn)，確保其性能正常。3.1.4免疫組織化學(xué)檢測(cè)步驟組織切片制備：將食管鱗癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本用4%中性甲醛固定24小時(shí)以上，常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚的連續(xù)切片，將切片貼附于經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上，65℃烤箱烤片2小時(shí)，使切片牢固附著在載玻片上。脫蠟與水化：將烤好的切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各10分鐘進(jìn)行脫蠟，然后依次經(jīng)過無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇各5分鐘進(jìn)行水化，最后用蒸餾水沖洗3次，每次3分鐘?？乖迯?fù)：將切片放入盛有0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復(fù)盒中，置于微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)。先用高火加熱至沸騰，然后轉(zhuǎn)中火維持沸騰狀態(tài)10-15分鐘，自然冷卻至室溫后，用PBS沖洗3次，每次3分鐘。阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：將切片浸入3%過氧化氫溶液中，室溫孵育10-15分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，之后用PBS沖洗3次，每次3分鐘。血清封閉：滴加適量的正常山羊血清，室溫孵育20-30分鐘，以減少非特異性染色，傾去血清，勿洗。一抗孵育：根據(jù)抗體說明書，將EGFR、HER2及cyclinA的一抗用抗體稀釋液稀釋至合適濃度，滴加在切片上，4℃孵育過夜。陰性對(duì)照用PBS代替一抗。二抗孵育：次日，取出切片，室溫復(fù)溫30分鐘，用PBS沖洗3次，每次3分鐘。滴加相應(yīng)的生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30-45分鐘，然后用PBS沖洗3次，每次3分鐘。DAB顯色：滴加新鮮配制的DAB顯色液，在顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽性部位呈現(xiàn)清晰的棕黃色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染：將切片放入蘇木精染液中染色3-5分鐘，自來水沖洗后，用1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，再用自來水沖洗返藍(lán)。脫水、透明與封片：將切片依次經(jīng)過70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ各5分鐘進(jìn)行脫水，然后放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各10分鐘進(jìn)行透明，最后用中性樹膠封片。結(jié)果判斷：在顯微鏡下觀察，EGFR、HER2及cyclinA陽性產(chǎn)物均為棕黃色，主要定位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。陽性細(xì)胞百分比評(píng)分：陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為0分，10%-50%為1分，51%-80%為2分，＞80%為3分。染色強(qiáng)度評(píng)分：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將兩者得分相加，0-1分為陰性（-），2-3分為弱陽性（+），4-5分為陽性（++），6分為強(qiáng)陽性（+++）。3.1.5熒光原位雜交檢測(cè)步驟組織切片制備：取新鮮的食管鱗癌組織和癌旁正常組織，切成約1mm3大小的組織塊，立即放入預(yù)冷的甲醇：冰醋酸（3:1）固定液中固定2-3小時(shí)，然后將組織塊轉(zhuǎn)移至70%乙醇中保存。將固定好的組織塊常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚的切片，將切片貼附于經(jīng)APES處理的載玻片上，65℃烤箱烤片2小時(shí)。脫蠟與水化：與免疫組織化學(xué)檢測(cè)步驟相同，將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各10分鐘進(jìn)行脫蠟，然后依次經(jīng)過無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇各5分鐘進(jìn)行水化，最后用蒸餾水沖洗3次，每次3分鐘。預(yù)處理：將切片浸入0.2mol/LHCl溶液中，室溫孵育20分鐘，以去除蛋白質(zhì)，然后用蒸餾水沖洗3次，每次3分鐘。將切片放入預(yù)熱至37℃的胃蛋白酶工作液中，消化10-20分鐘，根據(jù)組織類型和消化效果調(diào)整消化時(shí)間，之后用PBS沖洗3次，每次3分鐘。梯度乙醇脫水：將切片依次放入70%乙醇、85%乙醇、100%乙醇中各2分鐘進(jìn)行脫水，自然晾干。探針變性：將HER2基因特異性探針和雜交緩沖液按照1:10的比例混合，充分混勻后，將混合液置于75℃水浴中變性5-10分鐘，然后迅速放入冰水中冷卻5分鐘。雜交：將變性后的探針混合液滴加在切片上，蓋上蓋玻片，用橡膠水泥密封蓋玻片邊緣，防止雜交液蒸發(fā)。將切片放入雜交爐中，37℃雜交過夜。雜交后清洗：次日，取出切片，揭去蓋玻片，將切片放入2×SSC溶液中，37℃振蕩清洗10-15分鐘，然后依次用1×SSC、0.5×SSC溶液在37℃下各振蕩清洗10-15分鐘，最后用蒸餾水沖洗3次，每次3分鐘。DAPI復(fù)染：滴加適量的DAPI染液，室溫孵育5-10分鐘，然后用蒸餾水沖洗3次，每次3分鐘，去除多余的DAPI染液。封片：用抗熒光淬滅封片劑封片，避免熒光信號(hào)淬滅。結(jié)果判斷：在熒光顯微鏡下觀察，HER2基因探針標(biāo)記的熒光信號(hào)為紅色，CEP17（17號(hào)染色體著絲粒探針）標(biāo)記的熒光信號(hào)為綠色。計(jì)數(shù)至少100個(gè)腫瘤細(xì)胞核中的HER2基因拷貝數(shù)及HER2/CEP17比值。當(dāng)HER2/CEP17比值≥2.0時(shí)，判定為HER2基因擴(kuò)增；當(dāng)HER2/CEP17比值＜2.0，但HER2基因平均拷貝數(shù)≥6.0時(shí)，也判定為HER2基因擴(kuò)增；當(dāng)HER2/CEP17比值＜2.0且HER2基因平均拷貝數(shù)＜6.0時(shí)，判定為HER2基因無擴(kuò)增。3.2結(jié)果3.2.1EGFR、HER2、cyclinA在食管鱗癌及癌旁組織中的表達(dá)免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，EGFR在食管鱗癌組織中的陽性表達(dá)率為63.2%（48/76），在癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率為33.3%（7/21），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。EGFR陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞膜，部分細(xì)胞核也可見陽性表達(dá)，在食管鱗癌組織中，陽性細(xì)胞呈彌漫性或灶狀分布，染色強(qiáng)度不一，從淺黃色到棕褐色不等；而在癌旁正常組織中，陽性細(xì)胞數(shù)量較少，染色較淺，多呈散在分布。[此處插入EGFR在食管鱗癌及癌旁組織中的免疫組化圖片，圖2：EGFR在食管鱗癌及癌旁組織中的免疫組化染色結(jié)果，A為食管鱗癌組織，EGFR陽性表達(dá)，細(xì)胞膜和部分細(xì)胞核呈棕黃色；B為癌旁正常組織，EGFR弱陽性表達(dá)，僅少數(shù)細(xì)胞呈淺黃色染色，標(biāo)尺=100μm]HER2在食管鱗癌組織中的陽性表達(dá)率為3.9%（3/76），在癌旁正常組織中均無表達(dá)。HER2陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞膜，在陽性表達(dá)的食管鱗癌組織中，可見細(xì)胞膜呈棕黃色染色，陽性細(xì)胞數(shù)量較少，散在分布。[此處插入HER2在食管鱗癌及癌旁組織中的免疫組化圖片，圖3：HER2在食管鱗癌及癌旁組織中的免疫組化染色結(jié)果，A為食管鱗癌組織，HER2陽性表達(dá)，細(xì)胞膜呈棕黃色；B為癌旁正常組織，HER2陰性表達(dá)，細(xì)胞膜無染色，標(biāo)尺=100μm]cyclinA在食管鱗癌組織中的陽性表達(dá)率為61.8%（47/76），在癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率為23.8%（5/21），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。cyclinA陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核，在食管鱗癌組織中，陽性細(xì)胞核呈棕黃色，陽性細(xì)胞分布較為廣泛；在癌旁正常組織中，陽性細(xì)胞核染色較淺，陽性細(xì)胞數(shù)量較少。[此處插入cyclinA在食管鱗癌及癌旁組織中的免疫組化圖片，圖4：cyclinA在食管鱗癌及癌旁組織中的免疫組化染色結(jié)果，A為食管鱗癌組織，cyclinA陽性表達(dá)，細(xì)胞核呈棕黃色；B為癌旁正常組織，cyclinA弱陽性表達(dá)，僅少數(shù)細(xì)胞核呈淺黃色染色，標(biāo)尺=100μm]3.2.2HER2蛋白表達(dá)與基因擴(kuò)增的一致性分析采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HER2蛋白表達(dá)，熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增情況。結(jié)果顯示，HER2蛋白表達(dá)為陽性的3例患者中，HER2基因擴(kuò)增陽性的有3例，符合率為100%；HER2蛋白表達(dá)為陰性的73例患者中，HER2基因非擴(kuò)增的有73例，符合率為100%。兩種方法檢測(cè)結(jié)果完全一致，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。四、表達(dá)與臨床病理因素及相互關(guān)系分析4.1表達(dá)與臨床病理因素關(guān)系本研究對(duì)76例食管鱗癌患者的臨床病理資料進(jìn)行了詳細(xì)分析，探討EGFR、HER2及cyclinA表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理因素的相關(guān)性。結(jié)果顯示，EGFR、HER2和cyclinA的表達(dá)均與脈管累犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P<0.05），表明這三種蛋白的高表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵入脈管系統(tǒng)，增加淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。在脈管累犯方面，EGFR陽性表達(dá)的患者中，脈管累犯的發(fā)生率為[X]%，顯著高于EGFR陰性表達(dá)患者的[X]%；HER2陽性表達(dá)患者的脈管累犯發(fā)生率為[X]%，而陰性表達(dá)患者為[X]%；cyclinA陽性表達(dá)患者的脈管累犯發(fā)生率為[X]%，明顯高于陰性表達(dá)患者的[X]%。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，EGFR陽性表達(dá)患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為[X]%，顯著高于陰性表達(dá)患者的[X]%；HER2陽性表達(dá)患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為[X]%，而陰性表達(dá)患者為[X]%；cyclinA陽性表達(dá)患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為[X]%，明顯高于陰性表達(dá)患者的[X]%。此外，HER2和cyclinA還與腫瘤浸潤深度呈正相關(guān)（P<0.05）。HER2陽性表達(dá)的患者中，腫瘤浸潤至食管外膜或更深層次的比例為[X]%，顯著高于HER2陰性表達(dá)患者的[X]%；cyclinA陽性表達(dá)患者中，腫瘤浸潤至食管外膜或更深層次的比例為[X]%，明顯高于陰性表達(dá)患者的[X]%。這說明HER2和cyclinA的高表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤能力，使腫瘤更容易侵犯食管外組織，導(dǎo)致病情進(jìn)展。而EGFR、HER2及cyclinA的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小及分化程度等因素?zé)o明顯相關(guān)性（P>0.05）。在性別方面，男性患者和女性患者中EGFR、HER2及cyclinA的陽性表達(dá)率無顯著差異；在年齡方面，不同年齡段患者中這三種蛋白的表達(dá)情況也無明顯差異；在腫瘤部位上，食管上段、中段和下段癌患者中EGFR、HER2及cyclinA的表達(dá)無顯著差異；在腫瘤大小方面，腫瘤直徑大于或小于[X]cm的患者中，這三種蛋白的表達(dá)也無明顯差異；在分化程度上，高分化、中分化和低分化的食管鱗癌患者中EGFR、HER2及cyclinA的表達(dá)均無顯著差異。本研究結(jié)果與以往的一些研究結(jié)果具有一致性。例如，有研究表明EGFR在食管鱗癌中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，EGFR高表達(dá)的患者更容易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，這與本研究中EGFR表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)的結(jié)果相符。在HER2方面，部分研究報(bào)道HER2的表達(dá)與腫瘤浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，這與本研究中HER2與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)的結(jié)果一致。對(duì)于cyclinA，已有研究顯示其高表達(dá)與食管鱗癌的浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，這也與本研究結(jié)果相呼應(yīng)。這些一致性進(jìn)一步支持了本研究結(jié)果的可靠性，同時(shí)也表明EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能起著重要作用，它們的異常表達(dá)可能參與了腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程。4.2三者之間相互關(guān)系為深入探究EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展過程中的相互作用關(guān)系，本研究采用Spearman秩相關(guān)分析方法，對(duì)76例食管鱗癌組織中EGFR、HER2及cyclinA的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，EGFR與cyclinA的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.386，P<0.01），即EGFR表達(dá)越高，cyclinA的表達(dá)也越高。這一結(jié)果表明，在食管鱗癌中，EGFR可能通過激活相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)cyclinA的表達(dá)，進(jìn)而影響細(xì)胞周期的調(diào)控，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。已有研究報(bào)道，EGFR的激活可通過Ras-MAPK和PI3K-Akt等信號(hào)通路，上調(diào)cyclinA的表達(dá)，與本研究結(jié)果一致。然而，HER2與EGFR及cyclinA的表達(dá)均未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)性（r=0.105，P>0.05；r=0.123，P>0.05）。這可能是由于HER2在食管鱗癌中的表達(dá)率較低，樣本量相對(duì)較小，導(dǎo)致難以檢測(cè)到其與EGFR及cyclinA之間的相關(guān)性。也有可能HER2在食管鱗癌中的作用機(jī)制與EGFR和cyclinA不同，其可能通過其他途徑參與食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程，而不與EGFR和cyclinA直接相互作用。本研究中EGFR與cyclinA表達(dá)的正相關(guān)關(guān)系，提示在食管鱗癌的治療中，可以考慮同時(shí)靶向EGFR和cyclinA，以提高治療效果。例如，在使用EGFR酪氨酸激酶抑制劑的基礎(chǔ)上，聯(lián)合應(yīng)用針對(duì)cyclinA的靶向藥物，可能會(huì)更有效地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。對(duì)于HER2與EGFR及cyclinA無明顯相關(guān)性的結(jié)果，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究，或者從其他角度深入探討HER2在食管鱗癌中的作用機(jī)制，以尋找針對(duì)HER2的有效治療策略。五、EGFR、HER2及cyclinA表達(dá)的臨床意義5.1對(duì)食管鱗癌診斷的意義早期診斷對(duì)于食管鱗癌的治療和預(yù)后至關(guān)重要，EGFR、HER2及cyclinA的表達(dá)在食管鱗癌的診斷中具有潛在的重要價(jià)值。由于食管鱗癌早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)過了最佳治療時(shí)機(jī)。因此，尋找有效的早期診斷標(biāo)志物對(duì)于提高食管鱗癌患者的生存率和生活質(zhì)量具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，EGFR在食管鱗癌組織中的陽性表達(dá)率為63.2%，顯著高于癌旁正常組織的33.3%。這表明EGFR的高表達(dá)與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)，可作為食管鱗癌診斷的一個(gè)重要參考指標(biāo)。在臨床實(shí)踐中，對(duì)于疑似食管鱗癌的患者，檢測(cè)其組織中EGFR的表達(dá)水平，若呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，則有助于提高診斷的準(zhǔn)確性。有研究報(bào)道，通過對(duì)食管黏膜活檢組織進(jìn)行EGFR檢測(cè)，可在早期發(fā)現(xiàn)食管鱗癌的潛在病變，為早期治療提供依據(jù)。HER2在食管鱗癌組織中的陽性表達(dá)率雖然僅為3.9%，但在癌旁正常組織中均無表達(dá)。這說明HER2的表達(dá)具有一定的特異性，對(duì)于HER2陽性表達(dá)的患者，可作為食管鱗癌診斷的一個(gè)補(bǔ)充依據(jù)。雖然HER2陽性表達(dá)率較低，但在少數(shù)患者中其表達(dá)可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，因此不能忽視HER2在食管鱗癌診斷中的潛在價(jià)值。cyclinA在食管鱗癌組織中的陽性表達(dá)率為61.8%，明顯高于癌旁正常組織的23.8%。這表明cyclinA的高表達(dá)也與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)，可作為食管鱗癌診斷的重要參考指標(biāo)。在細(xì)胞周期調(diào)控中，cyclinA起著關(guān)鍵作用，其表達(dá)異常與腫瘤細(xì)胞的增殖和惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。在食管鱗癌中，cyclinA的高表達(dá)提示細(xì)胞周期紊亂，腫瘤細(xì)胞增殖活躍，有助于食管鱗癌的診斷。三者聯(lián)合檢測(cè)可能進(jìn)一步提高食管鱗癌診斷的準(zhǔn)確性。由于EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能通過不同的機(jī)制發(fā)揮作用，它們之間可能存在協(xié)同或互補(bǔ)關(guān)系。通過聯(lián)合檢測(cè)這三個(gè)指標(biāo)，可以從多個(gè)角度反映食管鱗癌的生物學(xué)特征，減少單一指標(biāo)檢測(cè)的局限性。例如，對(duì)于EGFR和cyclinA均高表達(dá)的患者，食管鱗癌的診斷可能性進(jìn)一步增加；而對(duì)于HER2陽性表達(dá)的患者，即使EGFR和cyclinA表達(dá)不明顯，也不能排除食管鱗癌的可能，需結(jié)合其他檢查結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。在實(shí)際臨床應(yīng)用中，可將EGFR、HER2及cyclinA的檢測(cè)與傳統(tǒng)的診斷方法如胃鏡檢查、病理活檢等相結(jié)合，提高食管鱗癌的早期診斷率。在胃鏡檢查時(shí)，對(duì)可疑病變組織進(jìn)行這三個(gè)指標(biāo)的檢測(cè)，有助于在早期準(zhǔn)確判斷病變的性質(zhì)，為患者的治療提供及時(shí)有效的指導(dǎo)。5.2對(duì)治療方案選擇的指導(dǎo)意義EGFR、HER2及cyclinA在食管鱗癌中的表達(dá)情況對(duì)治療方案的選擇具有重要的指導(dǎo)意義，有助于實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)治療，提高治療效果，改善患者預(yù)后。在靶向治療方面，EGFR的表達(dá)為食管鱗癌的靶向治療提供了重要依據(jù)。由于EGFR在食管鱗癌組織中的高表達(dá)，針對(duì)EGFR的靶向治療成為可能。對(duì)于EGFR高表達(dá)的食管鱗癌患者，可考慮使用EGFR酪氨酸激酶抑制劑，如吉非替尼、厄洛替尼等。這些藥物能夠特異性地抑制EGFR的酪氨酸激酶活性，阻斷下游信號(hào)傳導(dǎo)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長和增殖。然而，并非所有EGFR高表達(dá)的患者都能從靶向治療中獲益，部分患者可能存在原發(fā)性耐藥或繼發(fā)性耐藥。因此，在選擇EGFR靶向治療時(shí)，除了檢測(cè)EGFR的表達(dá)水平外，還需要進(jìn)一步研究患者的耐藥機(jī)制，篩選出更能從治療中獲益的患者。對(duì)于HER2，雖然其在食管鱗癌中的表達(dá)率較低，但在少數(shù)HER2陽性表達(dá)或基因擴(kuò)增的患者中，曲妥珠單抗等HER2靶向藥物可能具有一定的治療效果。曲妥珠單抗是一種人源化單克隆抗體，能夠與HER2蛋白的胞外區(qū)結(jié)合，阻斷HER2信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞的生長。對(duì)于HER2陽性的食管鱗癌患者，可考慮將曲妥珠單抗納入治療方案。在HER2陽性表達(dá)的食管鱗癌患者中，使用曲妥珠單抗聯(lián)合化療，患者的無進(jìn)展生存期和總生存期均有一定程度的延長。然而，目前HER2靶向治療在食管鱗癌中的應(yīng)用仍處于探索階段，需要進(jìn)一步開展臨床試驗(yàn)，優(yōu)化治療方案。由于cyclinA在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，針對(duì)cyclinA的靶向治療也成為研究熱點(diǎn)。目前，針對(duì)cyclinA的靶向藥物主要包括小分子抑制劑、RNA干擾技術(shù)等。這些藥物能夠抑制cyclinA的表達(dá)或活性，從而阻斷細(xì)胞周期進(jìn)程，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。在體外實(shí)驗(yàn)中，使用cyclinA小分子抑制劑能夠顯著抑制食管鱗癌細(xì)胞的增殖和遷移能力。然而，這些靶向藥物大多還處于基礎(chǔ)研究階段，尚未進(jìn)入臨床應(yīng)用，需要進(jìn)一步深入研究其安全性和有效性。在放化療方面，EGFR、HER2及cyclinA的表達(dá)也與食管鱗癌患者對(duì)放化療的敏感性相關(guān)。研究表明，EGFR高表達(dá)的食管鱗癌患者對(duì)放療和化療的敏感性相對(duì)較低。EGFR信號(hào)通路的持續(xù)激活可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)能力增強(qiáng)，從而降低放化療對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。對(duì)于EGFR高表達(dá)的患者，在放化療的基礎(chǔ)上，可聯(lián)合使用EGFR靶向藥物，以提高放化療的敏感性。在一項(xiàng)臨床研究中，將EGFR酪氨酸激酶抑制劑與放療聯(lián)合應(yīng)用于EGFR高表達(dá)的食管鱗癌患者，結(jié)果顯示患者的局部控制率和總生存率均有明顯提高。HER2和cyclinA的表達(dá)也可能影響食管鱗癌患者對(duì)放化療的反應(yīng)。HER2陽性表達(dá)或cyclinA高表達(dá)的患者，腫瘤細(xì)胞的增殖活性較強(qiáng)，可能對(duì)放化療更為敏感。然而，具體情況還需要進(jìn)一步的臨床研究來證實(shí)。對(duì)于HER2陽性或cyclinA高表達(dá)的患者，可適當(dāng)調(diào)整放化療的方案，增加藥物劑量或改變治療周期，以提高治療效果。在制定放化療方案時(shí)，還需要綜合考慮患者的身體狀況、腫瘤分期等因素，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療。5.3對(duì)預(yù)后評(píng)估的價(jià)值EGFR、HER2及cyclinA的表達(dá)在食管鱗癌患者的預(yù)后評(píng)估中具有重要價(jià)值，能夠?yàn)榕R床醫(yī)生提供關(guān)鍵信息，幫助預(yù)測(cè)患者的生存情況和疾病復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，從而制定更為合理的治療和隨訪策略。本研究通過對(duì)76例食管鱗癌患者的長期隨訪，分析了EGFR、HER2及cyclinA表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示，EGFR陽性表達(dá)的患者5年生存率為[X]%，顯著低于EGFR陰性表達(dá)患者的[X]%。這表明EGFR的高表達(dá)與食管鱗癌患者的不良預(yù)后密切相關(guān)，EGFR陽性表達(dá)可能提示腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力，更容易導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā)和進(jìn)展，從而降低患者的生存率。已有研究也證實(shí)了這一點(diǎn)，在一