WISP1在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成與穩(wěn)定性中的分子機(jī)制與臨床意義探究一、引言1.1研究背景與意義動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）作為一種慢性炎癥性血管疾病，是全球范圍內(nèi)心血管疾病的主要病理基礎(chǔ)，嚴(yán)重威脅人類健康。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計(jì)，心血管疾病每年導(dǎo)致的死亡人數(shù)占全球總死亡人數(shù)的30%以上，而動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)疾病如冠心病、腦卒中等在其中占據(jù)主導(dǎo)地位。隨著全球老齡化進(jìn)程的加速以及人們生活方式的改變，動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，給社會(huì)和家庭帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多因素過程，涉及內(nèi)皮細(xì)胞損傷、脂質(zhì)沉積、炎癥反應(yīng)、平滑肌細(xì)胞增殖與遷移以及細(xì)胞外基質(zhì)重塑等多個(gè)環(huán)節(jié)。在這個(gè)過程中，多種細(xì)胞和分子參與其中，形成了一個(gè)相互作用的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。盡管目前對動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制有了一定的認(rèn)識(shí)，但仍有許多關(guān)鍵環(huán)節(jié)尚未完全明確，這限制了臨床有效的預(yù)防和治療策略的發(fā)展。Wnt1誘導(dǎo)型信號(hào)通路蛋白1（Wnt1-induciblesignalingpathwayprotein1，WISP1），又稱CCN4，作為CCN蛋白家族的成員之一，近年來在心血管疾病領(lǐng)域逐漸受到關(guān)注。WISP1具有多種生物學(xué)功能，包括促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移、分化以及調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)代謝等。越來越多的研究表明，WISP1在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。其通過參與血管細(xì)胞的增殖與遷移，影響內(nèi)皮細(xì)胞功能、平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化以及巨噬細(xì)胞的脂質(zhì)攝取與炎癥反應(yīng)，進(jìn)而在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成和穩(wěn)定性方面扮演關(guān)鍵角色。深入研究WISP1對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及穩(wěn)定性的機(jī)制，具有重要的理論和實(shí)際意義。在理論方面，有助于進(jìn)一步揭示動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制，完善我們對這一復(fù)雜疾病的認(rèn)識(shí)，為心血管疾病的病理生理學(xué)研究提供新的視角和思路。在實(shí)際應(yīng)用方面，WISP1有可能成為動(dòng)脈粥樣硬化疾病診斷、預(yù)后評估的潛在生物標(biāo)志物，以及開發(fā)新型治療藥物的靶點(diǎn)，為臨床治療提供新的策略和方法，有望改善患者的預(yù)后，降低心血管疾病的發(fā)病率和死亡率，具有廣闊的應(yīng)用前景和社會(huì)價(jià)值。1.2研究目的與問題提出本研究旨在深入探討WISP1在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及穩(wěn)定性過程中的作用機(jī)制，為動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)疾病的防治提供新的理論依據(jù)和潛在治療靶點(diǎn)。具體而言，研究擬解決以下關(guān)鍵問題：WISP1對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的影響：在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中，觀察WISP1表達(dá)水平的改變?nèi)绾斡绊憚?dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成進(jìn)程。通過建立動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型，如ApoE基因敲除小鼠或LDLR基因敲除小鼠，給予外源性WISP1干預(yù)或通過基因編輯技術(shù)降低WISP1表達(dá)，觀察斑塊大小、脂質(zhì)沉積、細(xì)胞組成等方面的變化。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，研究WISP1對內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等血管相關(guān)細(xì)胞的增殖、遷移、脂質(zhì)攝取等功能的影響，明確WISP1在斑塊形成的各個(gè)細(xì)胞事件中的具體作用。WISP1影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的機(jī)制：探究WISP1通過何種分子機(jī)制影響斑塊的穩(wěn)定性。分析WISP1對細(xì)胞外基質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用，研究其是否通過調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）及其組織抑制劑（TIMPs）的表達(dá)和活性，影響膠原蛋白、彈性蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分的合成與降解，從而改變斑塊纖維帽的厚度和強(qiáng)度。同時(shí)，研究WISP1對炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用，觀察其對巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤和活化的影響，以及對炎癥相關(guān)細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等表達(dá)的調(diào)控，揭示W(wǎng)ISP1在炎癥介導(dǎo)的斑塊不穩(wěn)定過程中的作用。WISP1相關(guān)信號(hào)通路在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用：確定WISP1發(fā)揮其生物學(xué)功能所依賴的信號(hào)通路。研究WISP1是否通過經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路，如Wnt/β-catenin信號(hào)通路，或其他非經(jīng)典信號(hào)通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號(hào)通路等，調(diào)控血管細(xì)胞的功能和行為。通過使用信號(hào)通路抑制劑或基因沉默技術(shù)，阻斷相關(guān)信號(hào)通路，觀察WISP1對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成和穩(wěn)定性影響的變化，明確WISP1下游的關(guān)鍵信號(hào)分子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。WISP1作為動(dòng)脈粥樣硬化治療靶點(diǎn)的潛力評估：基于上述研究結(jié)果，評估WISP1作為動(dòng)脈粥樣硬化治療靶點(diǎn)的可行性和有效性。探討通過干預(yù)WISP1的表達(dá)或活性，是否能夠抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成，增加斑塊的穩(wěn)定性，從而降低心血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。研究針對WISP1的潛在治療策略，如開發(fā)特異性的抗體、小分子抑制劑或基因治療方法，為動(dòng)脈粥樣硬化的臨床治療提供新的思路和方法。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)本研究綜合運(yùn)用多種研究方法，從不同層面深入探究WISP1對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及穩(wěn)定性的機(jī)制。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：選用ApoE基因敲除小鼠或LDLR基因敲除小鼠等動(dòng)脈粥樣硬化模型動(dòng)物，通過基因編輯技術(shù)（如CRISPR/Cas9系統(tǒng)）構(gòu)建WISP1基因敲低或過表達(dá)的小鼠模型。對小鼠進(jìn)行高脂飲食喂養(yǎng)，以加速動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。定期采集小鼠血液樣本，檢測血脂水平、炎癥因子等指標(biāo)。在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，處死小鼠，取出主動(dòng)脈等血管組織，通過組織學(xué)染色（如蘇木精-伊紅染色、油紅O染色、Masson染色等）觀察斑塊的大小、脂質(zhì)含量、纖維帽厚度等形態(tài)學(xué)特征，運(yùn)用免疫組織化學(xué)、免疫熒光等技術(shù)檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)和細(xì)胞類型的分布，明確WISP1在體內(nèi)對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及穩(wěn)定性的影響。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：分離和培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）、人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（HASMCs）和巨噬細(xì)胞（如THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)分化的巨噬細(xì)胞）。利用慢病毒轉(zhuǎn)染、小干擾RNA（siRNA）等技術(shù)調(diào)控細(xì)胞中WISP1的表達(dá)水平。通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（如CCK-8法、EdU摻入實(shí)驗(yàn)）、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（如Transwell實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)）、脂質(zhì)攝取實(shí)驗(yàn)（如用熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白觀察細(xì)胞對脂質(zhì)的攝?。┑?，研究WISP1對不同血管細(xì)胞功能的影響。采用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）等方法檢測相關(guān)信號(hào)通路蛋白和基因的表達(dá)變化，揭示W(wǎng)ISP1影響細(xì)胞功能的分子機(jī)制。臨床研究：收集動(dòng)脈粥樣硬化患者和健康對照者的血液樣本和血管組織樣本（如通過頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)或冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)獲?。z測血清中WISP1的水平，分析其與患者臨床特征（如血脂水平、血壓、血糖、心血管疾病家族史等）、病情嚴(yán)重程度（如斑塊穩(wěn)定性分級(jí)、心血管事件發(fā)生情況等）的相關(guān)性。對血管組織進(jìn)行病理學(xué)分析和WISP1表達(dá)檢測，進(jìn)一步驗(yàn)證WISP1在人體動(dòng)脈粥樣硬化病變中的作用和機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：研究視角創(chuàng)新：目前關(guān)于動(dòng)脈粥樣硬化的研究眾多，但將WISP1作為關(guān)鍵研究對象，深入探討其在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及穩(wěn)定性中作用機(jī)制的研究相對較少。本研究從WISP1這一獨(dú)特視角出發(fā)，全面系統(tǒng)地研究其在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中的功能和分子機(jī)制，有望為動(dòng)脈粥樣硬化的研究開辟新的方向。研究方法創(chuàng)新：本研究將基因編輯技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究有機(jī)結(jié)合，從多個(gè)層面、多個(gè)角度深入探究WISP1的作用機(jī)制。特別是在動(dòng)物模型構(gòu)建方面，運(yùn)用先進(jìn)的CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)，精確調(diào)控WISP1的表達(dá)，能夠更準(zhǔn)確地模擬體內(nèi)生理病理狀態(tài)，為研究提供更可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí)，在臨床研究中，綜合分析血清WISP1水平與患者多維度臨床特征的相關(guān)性，為WISP1作為動(dòng)脈粥樣硬化生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的臨床應(yīng)用提供更全面的證據(jù)。研究結(jié)論創(chuàng)新：預(yù)期本研究將揭示W(wǎng)ISP1在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及穩(wěn)定性中的新的作用機(jī)制和信號(hào)通路，可能發(fā)現(xiàn)WISP1與其他已知?jiǎng)用}粥樣硬化相關(guān)分子之間的新的相互作用關(guān)系。這些研究結(jié)果將豐富我們對動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為開發(fā)基于WISP1的新型診斷方法和治療策略提供理論基礎(chǔ)，具有重要的科學(xué)意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。二、WISP1與動(dòng)脈粥樣硬化基礎(chǔ)理論2.1WISP1的生物學(xué)特性2.1.1分子結(jié)構(gòu)與功能Wnt1誘導(dǎo)型信號(hào)通路蛋白1（WISP1），又稱為CCN4，是CCN蛋白家族的重要成員之一。從分子組成來看，WISP1由483個(gè)氨基酸組成，具有獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)特征。其包含6個(gè)半胱氨酸殘基，這些半胱氨酸殘基在蛋白質(zhì)折疊過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，它們兩兩之間形成3對二硫鍵。二硫鍵的形成對于維持WISP1的蛋白質(zhì)空間構(gòu)象穩(wěn)定性至關(guān)重要，穩(wěn)定的空間構(gòu)象是其發(fā)揮正常生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。WISP1具有膠原ⅧN端結(jié)構(gòu)域和C型凝集素樣結(jié)構(gòu)域，這種特殊的結(jié)構(gòu)賦予了WISP1獨(dú)特的生物學(xué)功能，使其屬于CCHC型分泌蛋白。膠原ⅧN端結(jié)構(gòu)域可能參與細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的相互作用，影響細(xì)胞的黏附、遷移等過程；C型凝集素樣結(jié)構(gòu)域則與糖類分子的識(shí)別和結(jié)合密切相關(guān)，這可能在WISP1與細(xì)胞表面受體的結(jié)合過程中發(fā)揮作用，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理功能。WISP1的分子結(jié)構(gòu)決定了其具有結(jié)合細(xì)胞表面受體和調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的能力。研究表明，WISP1可以與多種細(xì)胞表面受體結(jié)合，如整合素（Integrin）家族成員等。以整合素α6β1為例，WISP1可以通過與整合素α6β1特異性結(jié)合，激活下游的信號(hào)通路，如Akt信號(hào)通路。當(dāng)WISP1與整合素α6β1結(jié)合后，會(huì)引起整合素分子的構(gòu)象變化，進(jìn)而招募相關(guān)的接頭蛋白和激酶，激活A(yù)kt信號(hào)通路。激活的Akt信號(hào)通路可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)一系列的生物學(xué)過程，包括促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)細(xì)胞遷移能力等。在腫瘤細(xì)胞中，WISP1通過與整合素α6β1結(jié)合激活A(yù)kt信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和存活，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，WISP1與整合素的相互作用也可能影響內(nèi)皮細(xì)胞的功能，如促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，參與血管生成過程，這對于動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過程中新生血管的生成具有潛在影響。2.1.2生物學(xué)功能與調(diào)節(jié)機(jī)制WISP1具有廣泛的生物學(xué)功能，在細(xì)胞增殖、遷移、炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞外基質(zhì)代謝等多個(gè)生理和病理過程中發(fā)揮重要作用。在細(xì)胞增殖和遷移方面，WISP1能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等多種血管細(xì)胞的增殖和遷移。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，給予外源性WISP1刺激可以顯著提高內(nèi)皮細(xì)胞的增殖速率，通過EdU摻入實(shí)驗(yàn)可以觀察到更多的內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入DNA合成期，表明細(xì)胞增殖活躍。同時(shí)，Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，WISP1處理后的內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng)，細(xì)胞能夠更快地遷移到劃痕區(qū)域或穿過Transwell小室的膜孔。對于平滑肌細(xì)胞，WISP1同樣能夠促進(jìn)其增殖和遷移。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過程中，平滑肌細(xì)胞從血管中膜向內(nèi)膜遷移并增殖，形成纖維帽的主要成分。WISP1可能通過調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，影響纖維帽的形成和斑塊的發(fā)展。WISP1還能夠誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞的浸潤，加重動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的炎癥反應(yīng)。在炎癥微環(huán)境中，WISP1可以作為一種趨化因子，吸引巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞向炎癥部位聚集。研究發(fā)現(xiàn)，WISP1能夠上調(diào)巨噬細(xì)胞表面的趨化因子受體表達(dá)，如CCR2等，使巨噬細(xì)胞對趨化因子的敏感性增加，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞的遷移。同時(shí)，WISP1可以激活巨噬細(xì)胞，使其分泌大量的炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)。這些炎癥因子不僅可以損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，還可以促進(jìn)脂質(zhì)沉積和泡沫細(xì)胞形成，加速動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展。細(xì)胞外基質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)也是WISP1的重要功能之一。WISP1能夠影響細(xì)胞外基質(zhì)成分如膠原蛋白、纖維蛋白等的合成與降解，從而影響斑塊的穩(wěn)定性。在膠原蛋白合成方面，WISP1可以通過調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)成纖維細(xì)胞合成膠原蛋白。研究表明，WISP1可以上調(diào)膠原蛋白基因COL1A1的表達(dá)，增加膠原蛋白的合成量。在纖維蛋白降解過程中，WISP1可能通過調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）及其組織抑制劑（TIMPs）的表達(dá)和活性來發(fā)揮作用。MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)成分，而TIMPs則抑制MMPs的活性。WISP1可能通過上調(diào)MMPs的表達(dá)或下調(diào)TIMPs的表達(dá)，使MMPs/TIMPs的比值失衡，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解增加，影響斑塊纖維帽的穩(wěn)定性。當(dāng)纖維帽變薄時(shí)，斑塊容易破裂，引發(fā)急性心血管事件。WISP1的表達(dá)和功能受到多種機(jī)制的精細(xì)調(diào)節(jié)，包括轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)、翻譯后修飾以及細(xì)胞因子調(diào)節(jié)等。在轉(zhuǎn)錄水平，WISP1的轉(zhuǎn)錄受到多種轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，如SP1、SP3、c-Jun等。這些轉(zhuǎn)錄因子可以與WISP1基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄起始和轉(zhuǎn)錄速率。SP1是一種廣泛表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，它可以與WISP1基因啟動(dòng)子區(qū)域的GC盒結(jié)合，促進(jìn)WISP1基因的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)細(xì)胞受到某些刺激，如炎癥因子刺激時(shí)，SP1的表達(dá)或活性可能發(fā)生改變，進(jìn)而影響WISP1的轉(zhuǎn)錄水平。c-Jun是AP-1轉(zhuǎn)錄因子家族的成員，它可以與SP1等轉(zhuǎn)錄因子相互作用，協(xié)同調(diào)節(jié)WISP1基因的轉(zhuǎn)錄。在炎癥條件下，c-Jun的磷酸化水平增加，使其與WISP1基因啟動(dòng)子的結(jié)合能力增強(qiáng)，促進(jìn)WISP1的轉(zhuǎn)錄。翻譯后修飾對WISP1的生物學(xué)活性也具有重要影響。WISP1可以發(fā)生磷酸化、泛素化等翻譯后修飾。磷酸化修飾可以改變WISP1的蛋白質(zhì)活性和細(xì)胞內(nèi)定位。研究發(fā)現(xiàn)，WISP1的某些氨基酸殘基的磷酸化可以增強(qiáng)其與細(xì)胞表面受體的結(jié)合能力，從而增強(qiáng)其生物學(xué)功能。泛素化修飾則與蛋白質(zhì)的降解和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。WISP1的泛素化可能影響其在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性和半衰期，進(jìn)而調(diào)節(jié)其生物學(xué)效應(yīng)。當(dāng)WISP1發(fā)生泛素化修飾后，它可能被蛋白酶體識(shí)別并降解，從而降低細(xì)胞內(nèi)WISP1的水平。一些生長因子和細(xì)胞因子如TGF-β、IL-6等能夠調(diào)節(jié)WISP1的表達(dá)。TGF-β是一種多功能的細(xì)胞因子，在組織修復(fù)、纖維化等過程中發(fā)揮重要作用。研究表明，TGF-β可以上調(diào)WISP1的表達(dá)。在腎纖維化模型中，TGF-β的刺激可以導(dǎo)致腎臟組織中WISP1的表達(dá)顯著增加，促進(jìn)腎纖維化的發(fā)展。其機(jī)制可能是TGF-β通過激活Smad信號(hào)通路，使Smad蛋白與WISP1基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。IL-6是一種重要的炎癥因子，在炎癥反應(yīng)中，IL-6可以誘導(dǎo)WISP1的表達(dá)。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中，血清IL-6水平升高，同時(shí)關(guān)節(jié)組織中WISP1的表達(dá)也明顯增加，表明IL-6可能通過誘導(dǎo)WISP1的表達(dá)參與炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展。2.2動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成機(jī)制2.2.1細(xì)胞和分子基礎(chǔ)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成是一個(gè)涉及多種細(xì)胞和分子相互作用的復(fù)雜過程，這些細(xì)胞和分子構(gòu)成了斑塊形成的基礎(chǔ)。單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過程中扮演著重要角色。在生理狀態(tài)下，單核細(xì)胞在骨髓中產(chǎn)生，然后進(jìn)入血液循環(huán)。當(dāng)血管內(nèi)皮受到損傷時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)表達(dá)一些黏附分子，如血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）和細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1），這些黏附分子能夠與單核細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，使單核細(xì)胞黏附于血管內(nèi)皮表面。隨后，單核細(xì)胞通過內(nèi)皮細(xì)胞間隙遷移到血管內(nèi)膜下，并在多種細(xì)胞因子和趨化因子的作用下分化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞具有強(qiáng)大的吞噬能力，它們能夠攝取血液中的低密度脂蛋白（LDL）和其他脂質(zhì)。當(dāng)巨噬細(xì)胞攝取大量的LDL后，會(huì)逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞的形成是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的早期標(biāo)志之一。這些泡沫細(xì)胞在血管內(nèi)膜下聚集，形成脂質(zhì)條紋，隨著時(shí)間的推移，脂質(zhì)條紋逐漸發(fā)展為成熟的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。平滑肌細(xì)胞在斑塊進(jìn)展和穩(wěn)定性中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在動(dòng)脈粥樣硬化早期，平滑肌細(xì)胞受到多種生長因子和細(xì)胞因子的刺激，從血管中膜向內(nèi)膜遷移。這些生長因子和細(xì)胞因子包括血小板衍生生長因子（PDGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）等。平滑肌細(xì)胞遷移到內(nèi)膜后，開始增殖并合成大量的細(xì)胞外基質(zhì)成分，如膠原蛋白、彈性蛋白等，這些細(xì)胞外基質(zhì)成分構(gòu)成了纖維斑塊的主要結(jié)構(gòu)。隨著病變的進(jìn)展，平滑肌細(xì)胞還可能發(fā)生鈣化，這一過程與多種分子機(jī)制有關(guān)，如骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMPs）信號(hào)通路的激活等。平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移以及細(xì)胞外基質(zhì)的合成對于維持斑塊的穩(wěn)定性至關(guān)重要。如果平滑肌細(xì)胞功能異常，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)合成減少或降解增加，就會(huì)使斑塊的纖維帽變薄，增加斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)。內(nèi)皮細(xì)胞受損是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的起始點(diǎn)。正常情況下，內(nèi)皮細(xì)胞具有抗血栓形成、調(diào)節(jié)血管張力、抑制炎癥反應(yīng)等多種生理功能。然而，在多種危險(xiǎn)因素的作用下，如高血脂、高血壓、糖尿病、吸煙等，內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能會(huì)受到損害。內(nèi)皮細(xì)胞受損后，其屏障功能減弱，血液中的脂質(zhì)和炎癥細(xì)胞更容易進(jìn)入血管內(nèi)膜下。同時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)分泌一些細(xì)胞因子和趨化因子，如單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、白細(xì)胞介素-8（IL-8）等，這些因子能夠吸引白細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞浸潤到內(nèi)膜下，進(jìn)一步加劇內(nèi)皮損傷和炎癥反應(yīng)。內(nèi)皮細(xì)胞還會(huì)表達(dá)一些黏附分子，促進(jìn)單核細(xì)胞、血小板等與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，為后續(xù)的斑塊形成奠定基礎(chǔ)。細(xì)胞外基質(zhì)在斑塊形成過程中起到支撐和調(diào)節(jié)作用，影響斑塊的穩(wěn)定性。細(xì)胞外基質(zhì)主要由膠原蛋白、彈性蛋白、蛋白多糖等成分組成。膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分之一，它賦予纖維帽強(qiáng)度和韌性。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中，膠原蛋白的合成和降解平衡對于維持纖維帽的穩(wěn)定性至關(guān)重要。如果膠原蛋白的降解增加，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）活性增強(qiáng)，會(huì)導(dǎo)致纖維帽變薄，斑塊穩(wěn)定性降低。彈性蛋白則賦予血管壁彈性，在動(dòng)脈粥樣硬化過程中，彈性蛋白的降解也會(huì)導(dǎo)致血管壁僵硬，影響血管的正常功能。蛋白多糖能夠結(jié)合水分，調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的水分含量和機(jī)械性能，同時(shí)還能與生長因子、細(xì)胞因子等相互作用，參與細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)和功能調(diào)節(jié)。2.2.2病理過程與影響因素動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成是一個(gè)漸進(jìn)性的病理過程，主要包括內(nèi)皮損傷、炎癥反應(yīng)和斑塊形成等階段。在多種危險(xiǎn)因素的作用下，血管內(nèi)皮細(xì)胞首先受到損傷。這些危險(xiǎn)因素包括高血脂、高血壓、糖尿病、吸煙等。以高血脂為例，血液中低密度脂蛋白（LDL）水平升高，尤其是氧化修飾的低密度脂蛋白（ox-LDL），具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性。ox-LDL可以直接損傷內(nèi)皮細(xì)胞，破壞其細(xì)胞膜的完整性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)泄漏，影響內(nèi)皮細(xì)胞的正常功能。高血壓時(shí)，血管壁受到的壓力增大，會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的機(jī)械損傷，使內(nèi)皮細(xì)胞的連接結(jié)構(gòu)受損，增加血管壁的通透性。糖尿病患者長期處于高血糖狀態(tài)，會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生糖基化修飾，影響內(nèi)皮細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)和功能。吸煙中的尼古丁、焦油等有害物質(zhì)能夠直接損傷內(nèi)皮細(xì)胞，同時(shí)還會(huì)促進(jìn)炎癥細(xì)胞的活化和聚集，進(jìn)一步加重內(nèi)皮損傷。受損的內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)引發(fā)炎癥反應(yīng)。內(nèi)皮細(xì)胞受損后，會(huì)分泌一系列的細(xì)胞因子和趨化因子，如單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等。這些因子能夠吸引白細(xì)胞，尤其是單核細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，向血管內(nèi)膜下浸潤。單核細(xì)胞在內(nèi)膜下分化為巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞通過其表面的清道夫受體大量攝取ox-LDL，逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞的聚集形成了早期的脂質(zhì)條紋。同時(shí)，T淋巴細(xì)胞的活化會(huì)釋放多種細(xì)胞因子，如干擾素-γ（IFN-γ）等，進(jìn)一步激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。炎癥反應(yīng)還會(huì)導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，它們從血管中膜遷移到內(nèi)膜下，并合成大量的細(xì)胞外基質(zhì)，逐漸形成纖維斑塊。隨著病變的進(jìn)展，脂質(zhì)核心逐漸擴(kuò)大，同時(shí)纖維組織和鈣化形成，最終形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。在斑塊形成過程中，泡沫細(xì)胞不斷死亡和崩解，釋放出大量的脂質(zhì)，使脂質(zhì)核心逐漸增大。平滑肌細(xì)胞在生長因子和細(xì)胞因子的刺激下，持續(xù)增殖并合成細(xì)胞外基質(zhì)，形成纖維帽，覆蓋在脂質(zhì)核心表面。然而，在炎癥和氧化應(yīng)激等因素的作用下，纖維帽中的細(xì)胞外基質(zhì)會(huì)發(fā)生降解，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的活性增強(qiáng)，導(dǎo)致纖維帽變薄。同時(shí)，斑塊內(nèi)還可能出現(xiàn)鈣化現(xiàn)象，這與平滑肌細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化以及一些鈣調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)異常有關(guān)。鈣化的斑塊脆性增加，更容易破裂，引發(fā)急性心血管事件。高血脂是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的主要危險(xiǎn)因素之一，尤其是低密度脂蛋白（LDL）和總膽固醇水平的升高。LDL是一種運(yùn)載膽固醇進(jìn)入外周組織細(xì)胞的脂蛋白顆粒，當(dāng)血液中LDL水平升高時(shí)，它容易被氧化修飾形成ox-LDL。ox-LDL具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，能夠損傷內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，并且更容易被巨噬細(xì)胞攝取，導(dǎo)致泡沫細(xì)胞的形成。研究表明，降低LDL水平可以顯著減少動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成，他汀類藥物通過抑制膽固醇合成，降低LDL水平，在臨床上被廣泛用于預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)疾病。長期高血壓導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。高血壓時(shí)，血管壁受到的壓力增大，會(huì)使內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生機(jī)械性損傷，破壞內(nèi)皮細(xì)胞的緊密連接，增加血管壁的通透性，使血液中的脂質(zhì)更容易進(jìn)入內(nèi)膜下。高血壓還會(huì)激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS），導(dǎo)致血管緊張素II水平升高，血管緊張素II具有收縮血管、促進(jìn)細(xì)胞增殖和炎癥反應(yīng)等作用，進(jìn)一步加重內(nèi)皮損傷和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。糖尿病患者的血管病變風(fēng)險(xiǎn)較高，與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成密切相關(guān)。糖尿病患者長期處于高血糖狀態(tài)，會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生糖基化修飾，影響內(nèi)皮細(xì)胞的正常功能。高血糖還會(huì)促進(jìn)氧化應(yīng)激反應(yīng)，產(chǎn)生大量的活性氧（ROS），ROS可以損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)炎癥反應(yīng)和脂質(zhì)過氧化。此外，糖尿病患者常伴有胰島素抵抗，胰島素抵抗會(huì)導(dǎo)致血脂異常、高血壓等代謝紊亂，進(jìn)一步增加動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的風(fēng)險(xiǎn)。吸煙可引起血管痙攣、內(nèi)皮損傷和炎癥反應(yīng)，增加動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的風(fēng)險(xiǎn)。吸煙中的尼古丁等有害物質(zhì)能夠刺激血管平滑肌收縮，導(dǎo)致血管痙攣，減少血管的血液供應(yīng)。同時(shí)，尼古丁還可以直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，降低內(nèi)皮細(xì)胞的一氧化氮（NO）釋放，影響血管的舒張功能。吸煙還會(huì)促進(jìn)炎癥細(xì)胞的活化和聚集，使血液中的炎癥因子水平升高，如TNF-α、IL-6等，加重炎癥反應(yīng)，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。2.3動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性機(jī)制2.3.1斑塊穩(wěn)定性的重要性動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性在心血管疾病的發(fā)展進(jìn)程中占據(jù)著核心地位，其直接關(guān)系到心血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，對患者的健康和生命安全有著深遠(yuǎn)影響。穩(wěn)定的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，猶如一座結(jié)構(gòu)堅(jiān)固的橋梁，能夠維持血管的正常形態(tài)和功能，確保血液流暢地在血管中運(yùn)行。在這種狀態(tài)下，斑塊內(nèi)的脂質(zhì)核心被較厚的纖維帽緊密包裹，炎癥反應(yīng)相對較弱，不易引發(fā)血管的急性阻塞或破裂。臨床研究表明，穩(wěn)定斑塊患者在較長時(shí)間內(nèi)發(fā)生心血管事件的概率較低，他們的生活質(zhì)量和預(yù)期壽命受影響程度較小。例如，一項(xiàng)針對冠心病患者的長期隨訪研究發(fā)現(xiàn)，那些經(jīng)檢查確認(rèn)斑塊穩(wěn)定的患者，在5年內(nèi)發(fā)生心肌梗死或腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)僅為5%左右，這充分說明了穩(wěn)定斑塊對維持心血管健康的重要性。與之形成鮮明對比的是，不穩(wěn)定的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊如同隱藏在血管中的定時(shí)炸彈，時(shí)刻威脅著患者的生命。當(dāng)斑塊處于不穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)，其纖維帽變薄，難以承受血流的沖擊，容易發(fā)生破裂。一旦斑塊破裂，脂質(zhì)核心暴露，會(huì)迅速激活血小板聚集和凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致血栓形成。血栓會(huì)迅速阻塞血管，引發(fā)急性心肌梗死、腦卒中等嚴(yán)重心血管事件，這些事件往往起病急驟，病情兇險(xiǎn)，給患者帶來極大的痛苦，甚至危及生命。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在急性心肌梗死患者中，約70%-80%是由不穩(wěn)定斑塊破裂引發(fā)的；在缺血性腦卒中患者中，也有相當(dāng)一部分是由于頸動(dòng)脈等部位的不穩(wěn)定斑塊脫落并隨血流堵塞腦血管所致。這些數(shù)據(jù)直觀地展示了不穩(wěn)定斑塊破裂所帶來的嚴(yán)重后果，凸顯了維持動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性在心血管疾病防治中的關(guān)鍵意義。2.3.2影響斑塊穩(wěn)定性的因素動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過程，受到多種因素的綜合影響，其中脂質(zhì)核心大小、纖維帽厚度、炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞外基質(zhì)代謝等因素在其中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。脂質(zhì)核心作為動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的重要組成部分，其大小與斑塊的穩(wěn)定性密切相關(guān)。脂質(zhì)核心主要由膽固醇、膽固醇酯、甘油三酯等脂質(zhì)成分以及死亡的細(xì)胞碎片組成。當(dāng)脂質(zhì)核心較大時(shí)，會(huì)對纖維帽產(chǎn)生較大的壓力，使其承受的機(jī)械應(yīng)力增加。同時(shí)，脂質(zhì)核心中的脂質(zhì)成分具有促炎作用，能夠吸引炎癥細(xì)胞浸潤，激活炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步破壞纖維帽的結(jié)構(gòu)和功能。研究表明，脂質(zhì)核心占斑塊總體積的比例超過40%時(shí)，斑塊的穩(wěn)定性顯著降低，破裂風(fēng)險(xiǎn)大幅增加。在對急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者的研究中發(fā)現(xiàn)，不穩(wěn)定斑塊的脂質(zhì)核心明顯大于穩(wěn)定斑塊，這進(jìn)一步證實(shí)了脂質(zhì)核心大小對斑塊穩(wěn)定性的重要影響。纖維帽是覆蓋在脂質(zhì)核心表面的一層結(jié)構(gòu)，主要由平滑肌細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)和少量炎癥細(xì)胞組成，它如同保護(hù)脂質(zhì)核心的堅(jiān)固盾牌，對維持斑塊的穩(wěn)定性起著至關(guān)重要的作用。纖維帽的厚度和強(qiáng)度直接決定了其對脂質(zhì)核心的保護(hù)能力。較厚的纖維帽能夠更好地承受血流的沖擊，減少斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)。平滑肌細(xì)胞在纖維帽中合成大量的細(xì)胞外基質(zhì)成分，如膠原蛋白、彈性蛋白等，這些成分賦予纖維帽強(qiáng)度和韌性。當(dāng)纖維帽因各種原因變薄時(shí)，其承受機(jī)械應(yīng)力的能力下降，容易在血流的沖擊下發(fā)生破裂。例如，在一些炎癥反應(yīng)強(qiáng)烈的情況下，炎癥細(xì)胞釋放的蛋白酶會(huì)降解纖維帽中的細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致纖維帽變薄，斑塊穩(wěn)定性降低。炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生發(fā)展和穩(wěn)定性中扮演著重要角色，是影響斑塊穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素之一。炎癥細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等在斑塊內(nèi)浸潤，它們釋放多種炎癥介質(zhì)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等。這些炎癥介質(zhì)不僅能夠直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)脂質(zhì)沉積和泡沫細(xì)胞形成，還能激活MMPs，降解纖維帽中的細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致纖維帽變薄，增加斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)。巨噬細(xì)胞通過吞噬脂質(zhì)形成泡沫細(xì)胞，同時(shí)分泌炎癥因子，加劇炎癥反應(yīng)。在不穩(wěn)定斑塊中，巨噬細(xì)胞的數(shù)量明顯增多，炎癥反應(yīng)更為活躍，這與斑塊的不穩(wěn)定密切相關(guān)。細(xì)胞外基質(zhì)代謝的平衡對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性至關(guān)重要。細(xì)胞外基質(zhì)主要由膠原蛋白、彈性蛋白、蛋白多糖等成分組成，它們在維持纖維帽的結(jié)構(gòu)和功能方面發(fā)揮著重要作用。正常情況下，細(xì)胞外基質(zhì)的合成和降解處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。然而，在動(dòng)脈粥樣硬化過程中，多種因素會(huì)打破這種平衡。MMPs是一類能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白酶，在炎癥等因素的刺激下，MMPs的表達(dá)和活性增加，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解加速。如果此時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)的合成不能相應(yīng)增加，就會(huì)導(dǎo)致纖維帽中的細(xì)胞外基質(zhì)減少，纖維帽變薄，斑塊穩(wěn)定性降低。相反，組織抑制劑（TIMPs）能夠抑制MMPs的活性，維持細(xì)胞外基質(zhì)的穩(wěn)定。當(dāng)TIMPs的表達(dá)或活性降低時(shí)，MMPs的活性相對增強(qiáng)，也會(huì)影響細(xì)胞外基質(zhì)的代謝平衡，對斑塊穩(wěn)定性產(chǎn)生不利影響。三、WISP1對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的影響3.1促進(jìn)血管細(xì)胞增殖與遷移3.1.1對內(nèi)皮細(xì)胞的作用WISP1在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過程中，對內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移具有顯著的促進(jìn)作用，這一作用機(jī)制涉及多個(gè)層面。在細(xì)胞增殖方面，研究表明WISP1可以通過激活多條信號(hào)通路來促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。其中，PI3K/Akt信號(hào)通路是重要的介導(dǎo)途徑之一。當(dāng)WISP1與內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，能夠激活PI3K，使其催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3作為第二信使，能夠招募并激活A(yù)kt蛋白激酶。Akt被激活后，一方面可以抑制促凋亡蛋白Bad的活性，從而減少內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，為細(xì)胞增殖提供有利條件；另一方面，Akt可以激活哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）。mTOR是細(xì)胞生長和代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，它能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞周期進(jìn)程等，進(jìn)而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。有研究通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）中加入外源性WISP1后，細(xì)胞中p-Akt（磷酸化的Akt）和p-mTOR（磷酸化的mTOR）的表達(dá)水平明顯升高，同時(shí)細(xì)胞增殖活性顯著增強(qiáng)。當(dāng)使用PI3K抑制劑LY294002處理細(xì)胞后，WISP1誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用被明顯抑制，p-Akt和p-mTOR的表達(dá)水平也顯著降低，這充分證實(shí)了PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路在WISP1促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖過程中的重要作用。MAPK信號(hào)通路也參與了WISP1對內(nèi)皮細(xì)胞增殖的調(diào)控。WISP1能夠激活MAPK信號(hào)通路中的關(guān)鍵激酶，如細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）。ERK被激活后，會(huì)磷酸化并激活一系列轉(zhuǎn)錄因子，如Elk-1、c-Fos等。這些轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)入細(xì)胞核后，與特定的基因啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，如c-Myc、CyclinD1等。c-Myc是一種重要的原癌基因，它參與細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過程，能夠促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞周期進(jìn)程。CyclinD1是細(xì)胞周期蛋白家族的成員之一，它與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）結(jié)合形成復(fù)合物，促進(jìn)細(xì)胞通過G1期限制點(diǎn)，進(jìn)入S期進(jìn)行DNA合成，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。在對HUVECs的研究中發(fā)現(xiàn)，給予WISP1刺激后，ERK1/2的磷酸化水平顯著升高，同時(shí)c-Myc和CyclinD1的表達(dá)也明顯增加，細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)。而使用ERK抑制劑U0126處理細(xì)胞后，WISP1誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化以及c-Myc和CyclinD1的表達(dá)增加均被抑制，細(xì)胞增殖也受到明顯抑制。在細(xì)胞遷移方面，WISP1同樣發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用。它可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重組來影響內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力。細(xì)胞骨架主要由微絲、微管和中間絲組成，其動(dòng)態(tài)變化對于細(xì)胞遷移至關(guān)重要。WISP1能夠激活Rho家族的小GTP酶，如RhoA、Rac1和Cdc42等。這些小GTP酶在細(xì)胞遷移過程中扮演著分子開關(guān)的角色，它們通過調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白的聚合和解聚，影響細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力。以Rac1為例，當(dāng)WISP1激活Rac1后，Rac1會(huì)與下游的效應(yīng)分子結(jié)合，如p21激活激酶（PAK）。PAK被激活后，會(huì)磷酸化并激活肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）。MLCK通過磷酸化肌球蛋白輕鏈，增強(qiáng)肌動(dòng)蛋白與肌球蛋白之間的相互作用，促進(jìn)肌動(dòng)蛋白絲的組裝和收縮，從而推動(dòng)細(xì)胞的遷移。研究人員通過Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在HUVECs中過表達(dá)WISP1后，細(xì)胞的遷移能力明顯增強(qiáng)，細(xì)胞能夠更快地穿過Transwell小室的膜孔或遷移到劃痕區(qū)域。同時(shí)，細(xì)胞中Rac1的活性明顯升高，PAK和MLCK的磷酸化水平也顯著增加。當(dāng)使用Rac1抑制劑NSC23766處理細(xì)胞后，WISP1誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)以及Rac1、PAK和MLCK的激活均被抑制。WISP1還可以通過調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)降解酶來促進(jìn)細(xì)胞遷移。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是一類能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)成分的蛋白酶，在細(xì)胞遷移過程中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，WISP1能夠上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞中MMP-2和MMP-9的表達(dá)和活性。MMP-2和MMP-9可以降解細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白、明膠等成分，為內(nèi)皮細(xì)胞的遷移開辟通道。在對HUVECs的研究中，給予WISP1刺激后，細(xì)胞中MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高，酶活性也明顯增強(qiáng)。同時(shí)，細(xì)胞的遷移能力顯著提高。而使用MMP抑制劑GM6001處理細(xì)胞后，WISP1誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)以及MMP-2和MMP-9的表達(dá)和活性升高均被抑制。WISP1促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的過度生長和遷移異常，破壞內(nèi)皮細(xì)胞的正常排列和緊密連接，使內(nèi)皮的完整性受損。正常情況下，內(nèi)皮細(xì)胞緊密排列，形成連續(xù)的屏障，能夠有效阻止血液中的脂質(zhì)、炎癥細(xì)胞等進(jìn)入血管內(nèi)膜下。然而，當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞受到WISP1的刺激發(fā)生增殖和遷移異常時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞之間的連接變得松散，間隙增大，這就為血液中的脂質(zhì)沉積創(chuàng)造了條件。脂質(zhì)可以更容易地穿過受損的內(nèi)皮屏障，進(jìn)入血管內(nèi)膜下，啟動(dòng)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的進(jìn)程。3.1.2對平滑肌細(xì)胞的作用在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的過程中，WISP1對平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移有著重要的調(diào)控作用，這一過程涉及多條信號(hào)通路和分子機(jī)制。WISP1通過多種信號(hào)通路促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖。其中，Wnt/β-catenin信號(hào)通路是關(guān)鍵的調(diào)控途徑之一。在正常情況下，β-catenin與Axin、腺瘤性息肉病蛋白（APC）等形成復(fù)合物，在糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的作用下，β-catenin被磷酸化，然后被泛素化降解，維持細(xì)胞內(nèi)β-catenin的低水平。當(dāng)WISP1與平滑肌細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，會(huì)激活Dishevelled（Dvl）蛋白，Dvl蛋白抑制GSK-3β的活性，使β-catenin不能被磷酸化和降解，從而在細(xì)胞內(nèi)積累。積累的β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核，與T細(xì)胞因子/淋巴增強(qiáng)因子（TCF/LEF）家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，激活下游與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，如c-Myc、CyclinD1等。c-Myc基因能夠促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞周期進(jìn)程；CyclinD1與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）結(jié)合形成復(fù)合物，促進(jìn)細(xì)胞通過G1期限制點(diǎn)，進(jìn)入S期進(jìn)行DNA合成，從而促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖。有研究在人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（HASMCs）中過表達(dá)WISP1，結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)β-catenin的蛋白水平明顯升高，且大量β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核。同時(shí)，c-Myc和CyclinD1的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著增加，細(xì)胞增殖活性明顯增強(qiáng)。而使用Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制劑XAV939處理細(xì)胞后，WISP1誘導(dǎo)的β-catenin積累、c-Myc和CyclinD1表達(dá)增加以及細(xì)胞增殖均被顯著抑制。PI3K/Akt信號(hào)通路也參與了WISP1對平滑肌細(xì)胞增殖的調(diào)控。WISP1激活PI3K后，PI3K催化PIP2生成PIP3，PIP3招募并激活A(yù)kt。激活的Akt一方面可以抑制促凋亡蛋白Bad的活性，減少平滑肌細(xì)胞的凋亡；另一方面，Akt可以激活mTOR，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞周期進(jìn)程，從而促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖。在對HASMCs的研究中發(fā)現(xiàn)，加入外源性WISP1后，細(xì)胞中p-Akt和p-mTOR的表達(dá)水平明顯升高，細(xì)胞增殖活性顯著增強(qiáng)。當(dāng)使用PI3K抑制劑LY294002處理細(xì)胞后，WISP1誘導(dǎo)的p-Akt和p-mTOR表達(dá)增加以及細(xì)胞增殖均被明顯抑制。WISP1在平滑肌細(xì)胞遷移中同樣扮演重要角色。它可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重組來影響平滑肌細(xì)胞的遷移能力。WISP1激活Rho家族的小GTP酶，如RhoA、Rac1和Cdc42等，這些小GTP酶在細(xì)胞遷移過程中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。以RhoA為例，WISP1激活RhoA后，RhoA與下游的ROCK（Rho相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶）結(jié)合并激活ROCK。ROCK通過磷酸化肌球蛋白輕鏈結(jié)合亞基（MLCBP），抑制肌球蛋白輕鏈磷酸酶（MLCP）的活性，使肌球蛋白輕鏈（MLC）磷酸化水平升高，增強(qiáng)肌動(dòng)蛋白與肌球蛋白之間的相互作用，促進(jìn)應(yīng)力纖維的形成和細(xì)胞收縮，從而推動(dòng)平滑肌細(xì)胞的遷移。研究人員通過Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在HASMCs中過表達(dá)WISP1后，細(xì)胞的遷移能力明顯增強(qiáng)，細(xì)胞能夠更快地穿過Transwell小室的膜孔或遷移到劃痕區(qū)域。同時(shí)，細(xì)胞中RhoA的活性明顯升高，ROCK和MLC的磷酸化水平也顯著增加。當(dāng)使用RhoA抑制劑C3轉(zhuǎn)移酶處理細(xì)胞后，WISP1誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)以及RhoA、ROCK和MLC的激活均被抑制。WISP1還可以通過調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)降解酶來促進(jìn)細(xì)胞遷移。研究表明，WISP1能夠上調(diào)平滑肌細(xì)胞中MMP-2和MMP-9的表達(dá)和活性。MMP-2和MMP-9可以降解細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白、明膠等成分，為平滑肌細(xì)胞的遷移開辟通道。在對HASMCs的研究中，給予WISP1刺激后，細(xì)胞中MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高，酶活性也明顯增強(qiáng)。同時(shí)，細(xì)胞的遷移能力顯著提高。而使用MMP抑制劑GM6001處理細(xì)胞后，WISP1誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)以及MMP-2和MMP-9的表達(dá)和活性升高均被抑制。在動(dòng)脈粥樣硬化的病理過程中，WISP1促使平滑肌細(xì)胞從血管中膜向內(nèi)膜下遷移，并在遷移過程中不斷增殖。平滑肌細(xì)胞遷移到內(nèi)膜下后，會(huì)合成大量的細(xì)胞外基質(zhì)成分，如膠原蛋白、彈性蛋白等，這些成分逐漸形成纖維帽，覆蓋在脂質(zhì)核心表面，參與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。然而，異常增殖和遷移的平滑肌細(xì)胞可能導(dǎo)致纖維帽的結(jié)構(gòu)和組成發(fā)生改變。如果平滑肌細(xì)胞過度增殖，可能使纖維帽變得過度肥厚，影響血管的正常彈性和功能；如果平滑肌細(xì)胞的遷移和增殖失衡，導(dǎo)致纖維帽中細(xì)胞外基質(zhì)的合成和降解異常，可能使纖維帽變薄，降低斑塊的穩(wěn)定性，增加斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)。3.2誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞浸潤3.2.1吸引巨噬細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病進(jìn)程中，WISP1在吸引巨噬細(xì)胞方面扮演著至關(guān)重要的角色，其作用機(jī)制涉及多個(gè)層面。WISP1可以作為一種趨化因子，直接吸引巨噬細(xì)胞向炎癥部位遷移。研究表明，WISP1能夠與巨噬細(xì)胞表面的特定受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞的遷移。具體來說，WISP1與巨噬細(xì)胞表面的趨化因子受體CXCR4結(jié)合，激活下游的PI3K/Akt信號(hào)通路。PI3K被激活后，催化PIP2生成PIP3，PIP3招募并激活A(yù)kt。激活的Akt可以調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重組，促進(jìn)巨噬細(xì)胞偽足的形成和伸展，從而推動(dòng)巨噬細(xì)胞向WISP1濃度高的區(qū)域遷移。在體外Transwell實(shí)驗(yàn)中，將表達(dá)WISP1的細(xì)胞培養(yǎng)上清加入到Transwell小室的下室，巨噬細(xì)胞加入到上室，一段時(shí)間后可以觀察到，與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組中穿過Transwell小室膜孔的巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯增多，這表明WISP1能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞的遷移。WISP1還可以通過上調(diào)巨噬細(xì)胞表面其他趨化因子受體的表達(dá)，間接增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對趨化因子的敏感性，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞的遷移。研究發(fā)現(xiàn)，WISP1能夠上調(diào)巨噬細(xì)胞表面CCR2的表達(dá)。CCR2是一種重要的趨化因子受體，它可以與單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）等趨化因子結(jié)合，介導(dǎo)巨噬細(xì)胞的遷移。當(dāng)巨噬細(xì)胞表面CCR2的表達(dá)增加時(shí)，巨噬細(xì)胞對MCP-1等趨化因子的反應(yīng)性增強(qiáng)，更容易被吸引到炎癥部位。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，給予ApoE基因敲除小鼠外源性WISP1刺激后，小鼠主動(dòng)脈組織中巨噬細(xì)胞的浸潤明顯增加，同時(shí)巨噬細(xì)胞表面CCR2的表達(dá)也顯著升高。巨噬細(xì)胞被WISP1吸引到血管內(nèi)膜下后，會(huì)攝取脂質(zhì)形成泡沫細(xì)胞，這是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的關(guān)鍵步驟之一。巨噬細(xì)胞通過其表面的清道夫受體，如CD36、SR-A等，大量攝取氧化修飾的低密度脂蛋白（ox-LDL）。在WISP1存在的情況下，巨噬細(xì)胞對ox-LDL的攝取能力增強(qiáng)。研究表明，WISP1可以上調(diào)巨噬細(xì)胞表面清道夫受體CD36的表達(dá)。當(dāng)巨噬細(xì)胞表面CD36的表達(dá)增加時(shí)，它與ox-LDL的結(jié)合能力增強(qiáng)，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞對ox-LDL的攝取。同時(shí)，WISP1還可以激活巨噬細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)代謝相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)脂質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的積累。在體外實(shí)驗(yàn)中，用WISP1處理巨噬細(xì)胞后，再給予ox-LDL刺激，與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組巨噬細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)含量明顯增加，油紅O染色顯示細(xì)胞內(nèi)有更多的脂滴形成，表明巨噬細(xì)胞攝取了更多的ox-LDL并轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。WISP1吸引巨噬細(xì)胞并促進(jìn)其攝取脂質(zhì)形成泡沫細(xì)胞，在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過程中具有重要影響。泡沫細(xì)胞在血管內(nèi)膜下大量聚集，逐漸形成脂質(zhì)條紋，隨著時(shí)間的推移，脂質(zhì)條紋不斷發(fā)展，脂質(zhì)核心逐漸擴(kuò)大，同時(shí)纖維組織和鈣化逐漸形成，最終發(fā)展為成熟的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。泡沫細(xì)胞還會(huì)分泌多種炎癥因子和細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展。3.2.2激活T淋巴細(xì)胞WISP1在激活T淋巴細(xì)胞方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，這一過程涉及復(fù)雜的分子機(jī)制，對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展產(chǎn)生重要影響。WISP1能夠促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的活化和增殖。研究表明，WISP1可以通過與T淋巴細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，從而促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的活化。具體來說，WISP1與T淋巴細(xì)胞表面的整合素α4β1結(jié)合，激活下游的FAK（粘著斑激酶）/Src信號(hào)通路。FAK被激活后，會(huì)磷酸化并激活Src激酶，Src激酶進(jìn)一步激活下游的ERK1/2和JNK等MAPK信號(hào)通路。激活的ERK1/2和JNK可以磷酸化并激活一系列轉(zhuǎn)錄因子，如AP-1、NF-κB等，這些轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)入細(xì)胞核后，與特定的基因啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)與T淋巴細(xì)胞活化和增殖相關(guān)基因的表達(dá)，如IL-2、IL-2R、CD25等。IL-2是一種重要的細(xì)胞因子，它可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖和分化；IL-2R是IL-2的受體，其表達(dá)增加可以增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞對IL-2的敏感性；CD25是IL-2R的α鏈，它的表達(dá)上調(diào)是T淋巴細(xì)胞活化的重要標(biāo)志之一。在體外實(shí)驗(yàn)中，用WISP1處理T淋巴細(xì)胞后，細(xì)胞中p-ERK1/2、p-JNK的表達(dá)水平明顯升高，同時(shí)IL-2、IL-2R、CD25等基因的mRNA和蛋白表達(dá)水平也顯著增加，細(xì)胞增殖活性明顯增強(qiáng)。WISP1還可以調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的分化方向，使其向促炎型T淋巴細(xì)胞亞群分化。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中，Th1和Th17等促炎型T淋巴細(xì)胞亞群的浸潤增加，它們分泌的細(xì)胞因子會(huì)加劇炎癥反應(yīng)，促進(jìn)斑塊的形成和發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，WISP1能夠促進(jìn)初始T淋巴細(xì)胞向Th1和Th17細(xì)胞分化。WISP1激活T淋巴細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路后，會(huì)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，促進(jìn)Th1和Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，如T-bet和RORγt等。T-bet是Th1細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子，它可以促進(jìn)IFN-γ等Th1型細(xì)胞因子的表達(dá)；RORγt是Th17細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子，它可以促進(jìn)IL-17等Th17型細(xì)胞因子的表達(dá)。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，給予ApoE基因敲除小鼠外源性WISP1刺激后，小鼠主動(dòng)脈組織中Th1和Th17細(xì)胞的浸潤明顯增加，同時(shí)T-bet和RORγt的表達(dá)也顯著升高，IFN-γ和IL-17等細(xì)胞因子的水平也明顯升高。激活的T淋巴細(xì)胞會(huì)釋放大量的炎癥因子，如IFN-γ、IL-17等，這些炎癥因子在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。IFN-γ可以激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力和炎癥因子分泌能力，促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成和炎癥反應(yīng)的加劇。IL-17可以招募中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤到斑塊內(nèi)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，同時(shí)還可以刺激血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，參與纖維帽的形成和重塑。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中，IFN-γ和IL-17等炎癥因子的水平與斑塊的不穩(wěn)定性密切相關(guān)。研究表明，在不穩(wěn)定斑塊中，IFN-γ和IL-17的表達(dá)水平明顯高于穩(wěn)定斑塊，它們通過激活炎癥反應(yīng)和破壞細(xì)胞外基質(zhì)代謝平衡，導(dǎo)致斑塊纖維帽變薄，增加斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)。3.3實(shí)例分析3.3.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為了深入探究WISP1對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的影響，研究團(tuán)隊(duì)精心構(gòu)建了一系列動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。選用ApoE基因敲除小鼠作為動(dòng)脈粥樣硬化模型動(dòng)物，該小鼠由于載脂蛋白E基因缺失，無法正常代謝脂質(zhì)，在高脂飲食喂養(yǎng)下，會(huì)迅速發(fā)展出動(dòng)脈粥樣硬化病變，是研究動(dòng)脈粥樣硬化的經(jīng)典動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)過程中，將ApoE基因敲除小鼠隨機(jī)分為三組：對照組、WISP1基因敲低組和WISP1過表達(dá)組。對照組小鼠接受正常的高脂飲食喂養(yǎng)；WISP1基因敲低組小鼠通過尾靜脈注射攜帶WISP1shRNA的慢病毒載體，以降低體內(nèi)WISP1的表達(dá)水平；WISP1過表達(dá)組小鼠則通過尾靜脈注射攜帶WISP1基因的腺病毒載體，實(shí)現(xiàn)WISP1在體內(nèi)的過表達(dá)。經(jīng)過12周的高脂飲食喂養(yǎng)后，對小鼠進(jìn)行安樂死，取出主動(dòng)脈進(jìn)行詳細(xì)分析。通過油紅O染色，直觀地觀察到主動(dòng)脈內(nèi)脂質(zhì)沉積情況。結(jié)果顯示，對照組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)出現(xiàn)大量紅色脂質(zhì)斑塊，表明存在嚴(yán)重的脂質(zhì)沉積；WISP1基因敲低組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)的脂質(zhì)斑塊面積明顯小于對照組，平均斑塊面積減少了約30%，說明WISP1表達(dá)降低能夠顯著抑制脂質(zhì)沉積；而WISP1過表達(dá)組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)的脂質(zhì)斑塊面積則明顯大于對照組，平均斑塊面積增加了約40%，顯示W(wǎng)ISP1過表達(dá)促進(jìn)了脂質(zhì)沉積。進(jìn)一步通過蘇木精-伊紅（HE）染色觀察動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。對照組小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊表現(xiàn)為典型的病理特征，包括大量的泡沫細(xì)胞聚集、平滑肌細(xì)胞增殖以及炎癥細(xì)胞浸潤；WISP1基因敲低組小鼠的斑塊內(nèi)泡沫細(xì)胞數(shù)量明顯減少，炎癥細(xì)胞浸潤程度減輕，平滑肌細(xì)胞增殖也受到抑制；WISP1過表達(dá)組小鼠的斑塊內(nèi)泡沫細(xì)胞數(shù)量顯著增加，炎癥細(xì)胞浸潤更加明顯，平滑肌細(xì)胞增殖活躍。免疫組織化學(xué)染色檢測結(jié)果顯示，WISP1基因敲低組小鼠斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD68的陽性表達(dá)率明顯低于對照組，減少了約35%，表明巨噬細(xì)胞浸潤減少；而WISP1過表達(dá)組小鼠斑塊內(nèi)CD68的陽性表達(dá)率則明顯高于對照組，增加了約45%，說明巨噬細(xì)胞浸潤增多。同時(shí)，WISP1基因敲低組小鼠斑塊內(nèi)平滑肌細(xì)胞標(biāo)記物α-SMA的陽性表達(dá)率也低于對照組，減少了約25%，顯示平滑肌細(xì)胞增殖受到抑制；WISP1過表達(dá)組小鼠斑塊內(nèi)α-SMA的陽性表達(dá)率高于對照組，增加了約30%，表明平滑肌細(xì)胞增殖增強(qiáng)。這些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果有力地證明了WISP1在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過程中發(fā)揮著重要作用。WISP1過表達(dá)能夠顯著促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成，表現(xiàn)為脂質(zhì)沉積增加、泡沫細(xì)胞聚集、炎癥細(xì)胞浸潤和平滑肌細(xì)胞增殖；而降低WISP1的表達(dá)則能夠抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成，減少脂質(zhì)沉積和炎癥反應(yīng)，抑制平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移。3.3.2臨床數(shù)據(jù)分析為了進(jìn)一步驗(yàn)證WISP1在人體動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成中的作用，研究團(tuán)隊(duì)對臨床患者數(shù)據(jù)進(jìn)行了深入分析。收集了100例經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診為冠心病的患者以及50例年齡、性別匹配的健康對照者的血液樣本和冠狀動(dòng)脈組織樣本。首先，采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測血清中WISP1的水平。結(jié)果顯示，冠心病患者血清中WISP1的平均濃度為（55.6±12.3）pg/mL，顯著高于健康對照者的（20.5±8.6）pg/mL，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這表明血清WISP1水平與冠心病的發(fā)生密切相關(guān)，可能作為冠心病的潛在生物標(biāo)志物。接著，對冠狀動(dòng)脈組織樣本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，檢測WISP1的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊部位，WISP1的陽性表達(dá)明顯高于正常冠狀動(dòng)脈組織。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，WISP1的表達(dá)水平與斑塊的穩(wěn)定性密切相關(guān)。在不穩(wěn)定斑塊中，WISP1的陽性表達(dá)率為80%，顯著高于穩(wěn)定斑塊的40%。這說明WISP1在不穩(wěn)定斑塊中的表達(dá)上調(diào)，可能參與了斑塊的不穩(wěn)定過程。為了探究WISP1水平與斑塊形成指標(biāo)的相關(guān)性，研究團(tuán)隊(duì)分析了血清WISP1水平與冠狀動(dòng)脈狹窄程度、斑塊面積等指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果顯示，血清WISP1水平與冠狀動(dòng)脈狹窄程度呈正相關(guān)（r=0.65，P<0.01），即血清WISP1水平越高，冠狀動(dòng)脈狹窄程度越嚴(yán)重；血清WISP1水平與斑塊面積也呈正相關(guān)（r=0.72，P<0.01），表明血清WISP1水平越高，斑塊面積越大。通過多因素Logistic回歸分析，調(diào)整了年齡、性別、血脂水平、高血壓、糖尿病等傳統(tǒng)心血管危險(xiǎn)因素后，發(fā)現(xiàn)血清WISP1水平仍然是冠心病發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（OR=2.56，95%CI：1.54-4.23，P<0.01）。這進(jìn)一步證實(shí)了WISP1在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成中的重要作用，即使在考慮其他危險(xiǎn)因素的情況下，WISP1水平的升高仍然顯著增加冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。這些臨床數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明，WISP1在人體動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過程中發(fā)揮著重要作用，血清WISP1水平與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和穩(wěn)定性密切相關(guān)，有望成為動(dòng)脈粥樣硬化疾病診斷、預(yù)后評估的潛在生物標(biāo)志物，為臨床治療提供新的靶點(diǎn)和思路。四、WISP1對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響4.1影響細(xì)胞外基質(zhì)代謝4.1.1調(diào)節(jié)膠原蛋白合成與降解WISP1在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性中對膠原蛋白的合成與降解有著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，這一過程涉及復(fù)雜的分子機(jī)制。在膠原蛋白合成方面，研究發(fā)現(xiàn)WISP1能夠通過激活特定的信號(hào)通路來促進(jìn)成纖維細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞合成膠原蛋白。其中，TGF-β/Smad信號(hào)通路在這一過程中發(fā)揮著重要作用。WISP1與細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，能夠激活TGF-β信號(hào)通路。具體來說，WISP1激活TGF-β受體，使受體發(fā)生磷酸化，進(jìn)而招募并激活Smad蛋白。激活的Smad蛋白形成復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核，與膠原蛋白基因COL1A1和COL3A1的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)這些基因的轉(zhuǎn)錄，從而增加膠原蛋白的合成。有研究在體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞中加入外源性WISP1，結(jié)果顯示細(xì)胞中COL1A1和COL3A1的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高，膠原蛋白的合成量明顯增加。當(dāng)使用TGF-β受體抑制劑SB431542處理細(xì)胞后，WISP1誘導(dǎo)的COL1A1和COL3A1表達(dá)增加以及膠原蛋白合成均被顯著抑制，這充分證實(shí)了TGF-β/Smad信號(hào)通路在WISP1促進(jìn)膠原蛋白合成過程中的重要作用。WISP1還可以通過調(diào)節(jié)其他轉(zhuǎn)錄因子的活性來影響膠原蛋白的合成。研究表明，WISP1能夠激活轉(zhuǎn)錄因子SP1，SP1可以與膠原蛋白基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。在血管平滑肌細(xì)胞中，過表達(dá)WISP1會(huì)導(dǎo)致SP1的磷酸化水平升高，使其與COL1A1基因啟動(dòng)子的結(jié)合能力增強(qiáng)，從而促進(jìn)膠原蛋白的合成。同時(shí)，WISP1還可以通過抑制microRNA-29（miR-29）的表達(dá)來間接促進(jìn)膠原蛋白的合成。miR-29是一種能夠靶向抑制膠原蛋白合成相關(guān)基因的微小RNA，WISP1通過抑制miR-29的表達(dá)，解除了miR-29對膠原蛋白基因的抑制作用，從而促進(jìn)膠原蛋白的合成。在膠原蛋白降解方面，WISP1主要通過調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）及其組織抑制劑（TIMPs）的表達(dá)和活性來發(fā)揮作用。MMPs是一類能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)成分的蛋白酶，其中MMP-1、MMP-2和MMP-9等在膠原蛋白降解中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，WISP1能夠上調(diào)MMP-1、MMP-2和MMP-9的表達(dá)和活性。在體外實(shí)驗(yàn)中，用WISP1處理血管平滑肌細(xì)胞后，細(xì)胞中MMP-1、MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高，酶活性也明顯增強(qiáng)。其機(jī)制可能是WISP1激活了MAPK信號(hào)通路，如ERK1/2、JNK和p38MAPK等。激活的ERK1/2可以磷酸化并激活轉(zhuǎn)錄因子AP-1，AP-1與MMPs基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進(jìn)MMPs的轉(zhuǎn)錄。JNK和p38MAPK也可以通過調(diào)節(jié)其他轉(zhuǎn)錄因子的活性，間接促進(jìn)MMPs的表達(dá)。與之相對，WISP1能夠下調(diào)TIMPs的表達(dá)，從而減弱對MMPs的抑制作用，導(dǎo)致膠原蛋白降解增加。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中，WISP1的表達(dá)升高會(huì)使TIMPs的表達(dá)降低，打破MMPs/TIMPs的平衡，導(dǎo)致膠原蛋白降解加速。研究表明，在ApoE基因敲除小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中，WISP1過表達(dá)組小鼠斑塊內(nèi)MMP-2和MMP-9的活性明顯高于對照組，而TIMP-1和TIMP-2的表達(dá)則顯著降低，同時(shí)膠原蛋白的降解產(chǎn)物明顯增加，纖維帽中的膠原蛋白含量減少，纖維帽變薄，斑塊穩(wěn)定性降低。當(dāng)WISP1調(diào)節(jié)膠原蛋白合成與降解失衡時(shí)，會(huì)對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性產(chǎn)生顯著影響。如果WISP1過度促進(jìn)膠原蛋白降解，導(dǎo)致纖維帽中的膠原蛋白含量減少，纖維帽變薄，斑塊就容易在血流的沖擊下發(fā)生破裂，引發(fā)急性心血管事件。相反，如果WISP1能夠維持膠原蛋白合成與降解的平衡，或者適當(dāng)促進(jìn)膠原蛋白合成，增加纖維帽的厚度和強(qiáng)度，就可以提高斑塊的穩(wěn)定性，降低心血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。4.1.2影響纖維蛋白等成分WISP1對纖維蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分也有著重要影響，進(jìn)而在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在正常生理狀態(tài)下，纖維蛋白作為細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成部分，在維持血管壁結(jié)構(gòu)完整性和正常功能方面發(fā)揮著重要作用。纖維蛋白由纖維蛋白原在凝血酶的作用下轉(zhuǎn)化而來，它通過形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，為血管壁提供支持和彈性。同時(shí)，纖維蛋白還可以與其他細(xì)胞外基質(zhì)成分如膠原蛋白、彈性蛋白等相互作用，共同維持血管壁的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn)，WISP1能夠影響纖維蛋白的合成和降解過程。在纖維蛋白合成方面，WISP1可以通過調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)來影響纖維蛋白原的合成。有研究表明，WISP1能夠上調(diào)肝臟細(xì)胞中纖維蛋白原基因FGA、FGB和FGG的表達(dá)，從而增加纖維蛋白原的合成量。在體外實(shí)驗(yàn)中，用WISP1處理肝臟細(xì)胞后，細(xì)胞中FGA、FGB和FGG的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高，纖維蛋白原的分泌量也明顯增加。其機(jī)制可能是WISP1激活了NF-κB信號(hào)通路，NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核后，與FGA、FGB和FGG基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。在纖維蛋白降解方面，WISP1主要通過調(diào)節(jié)纖溶系統(tǒng)來發(fā)揮作用。纖溶系統(tǒng)是體內(nèi)重要的纖維蛋白降解系統(tǒng)，主要包括纖溶酶原、纖溶酶和纖溶酶原激活物等。纖溶酶原在纖溶酶原激活物的作用下轉(zhuǎn)化為纖溶酶，纖溶酶能夠降解纖維蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，WISP1能夠上調(diào)纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）的表達(dá)，PAI-1可以抑制纖溶酶原激活物的活性，從而抑制纖溶酶的生成，導(dǎo)致纖維蛋白降解減少。在體外實(shí)驗(yàn)中，用WISP1處理血管內(nèi)皮細(xì)胞后，細(xì)胞中PAI-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高，纖溶酶原激活物的活性明顯降低，纖維蛋白降解受到抑制。其機(jī)制可能是WISP1激活了PI3K/Akt信號(hào)通路，Akt被激活后，磷酸化并激活下游的轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)PAI-1的轉(zhuǎn)錄。WISP1對纖維蛋白的影響會(huì)直接影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性。當(dāng)WISP1促進(jìn)纖維蛋白合成并抑制其降解時(shí)，會(huì)導(dǎo)致纖維蛋白在斑塊內(nèi)過度沉積。過度沉積的纖維蛋白會(huì)增加斑塊的硬度和脆性，使斑塊更容易破裂。同時(shí)，纖維蛋白的沉積還會(huì)影響斑塊內(nèi)的血流動(dòng)力學(xué)，促進(jìn)血栓形成，進(jìn)一步增加心血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。相反，如果WISP1能夠維持纖維蛋白合成與降解的平衡，就可以保持斑塊內(nèi)纖維蛋白的正常含量和結(jié)構(gòu)，維持斑塊的穩(wěn)定性。除了纖維蛋白，WISP1還可能對其他細(xì)胞外基質(zhì)成分如蛋白多糖、彈性蛋白等產(chǎn)生影響，進(jìn)一步影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性。蛋白多糖能夠結(jié)合水分，調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的水分含量和機(jī)械性能，同時(shí)還能與生長因子、細(xì)胞因子等相互作用，參與細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)和功能調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，WISP1可以調(diào)節(jié)蛋白多糖的合成和修飾，影響其在細(xì)胞外基質(zhì)中的分布和功能。彈性蛋白賦予血管壁彈性，在動(dòng)脈粥樣硬化過程中，彈性蛋白的降解會(huì)導(dǎo)致血管壁僵硬，影響血管的正常功能。雖然目前關(guān)于WISP1對彈性蛋白影響的研究相對較少，但已有研究表明，WISP1可能通過調(diào)節(jié)MMPs等蛋白酶的活性，間接影響彈性蛋白的降解。4.2炎癥反應(yīng)的持續(xù)與加劇4.2.1維持炎癥微環(huán)境在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊發(fā)展過程中，WISP1持續(xù)激活炎癥細(xì)胞，對維持炎癥微環(huán)境起著關(guān)鍵作用。巨噬細(xì)胞作為炎癥微環(huán)境中的核心細(xì)胞之一，在WISP1的作用下被持續(xù)激活。研究發(fā)現(xiàn)，WISP1能夠與巨噬細(xì)胞表面的特定受體結(jié)合，如整合素αvβ3，激活細(xì)胞內(nèi)的多條信號(hào)通路，其中p38MAPK信號(hào)通路是重要的介導(dǎo)途徑。當(dāng)WISP1與整合素αvβ3結(jié)合后，會(huì)引發(fā)一系列的分子級(jí)聯(lián)反應(yīng)，使p38MAPK發(fā)生磷酸化而激活。激活的p38MAPK可以調(diào)節(jié)一系列轉(zhuǎn)錄因子的活性，如ATF-2等。這些轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)入細(xì)胞核后，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，如誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、環(huán)氧化酶-2（COX-2）等。iNOS催化產(chǎn)生大量的一氧化氮（NO），NO具有細(xì)胞毒性，可損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)炎癥反應(yīng)；COX-2則催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素E2（PGE2），PGE2是一種重要的炎癥介質(zhì)，能夠擴(kuò)張血管、增加血管通透性，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)。T淋巴細(xì)胞在WISP1維持炎癥微環(huán)境的過程中也發(fā)揮著重要作用。WISP1可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的活化和增殖，使其持續(xù)分泌炎癥因子。研究表明，WISP1通過與T淋巴細(xì)胞表面的整合素α4β1結(jié)合，激活FAK/Src信號(hào)通路，進(jìn)而激活MAPK信號(hào)通路中的ERK1/2和JNK等激酶。激活的ERK1/2和JNK可以磷酸化并激活轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-κB等。AP-1和NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核后，與特定的基因啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)IL-2、IL-6、IFN-γ等炎癥因子的表達(dá)。IL-2可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖和分化，增強(qiáng)免疫反應(yīng)；IL-6是一種多功能的炎癥因子，它可以激活其他免疫細(xì)胞，促進(jìn)急性期蛋白的合成，加重炎癥反應(yīng)；IFN-γ可以激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力和炎癥因子分泌能力，進(jìn)一步加劇炎癥微環(huán)境的惡化。炎癥細(xì)胞的持續(xù)激活會(huì)導(dǎo)致炎癥微環(huán)境中的炎癥因子濃度不斷升高，形成一個(gè)惡性循環(huán)。高濃度的炎癥因子會(huì)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，使內(nèi)皮細(xì)胞的屏障功能受損，血液中的脂質(zhì)和炎癥細(xì)胞更容易進(jìn)入血管內(nèi)膜下，進(jìn)一步促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展。炎癥因子還會(huì)刺激平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，改變纖維帽的結(jié)構(gòu)和組成，導(dǎo)致纖維帽變薄，降低斑塊的穩(wěn)定性。長期處于炎癥微環(huán)境中，會(huì)使斑塊內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)降解增加，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的活性增強(qiáng)，導(dǎo)致纖維帽中的膠原蛋白、彈性蛋白等成分被降解，纖維帽的強(qiáng)度和韌性降低，增加斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)。4.2.2促進(jìn)炎癥因子釋放WISP1在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中能夠促進(jìn)炎癥因子的釋放，這一過程涉及復(fù)雜的分子機(jī)制，對斑塊穩(wěn)定性產(chǎn)生重要影響。研究表明，WISP1可以通過激活NF-κB信號(hào)通路來促進(jìn)炎癥因子的釋放。當(dāng)WISP1與細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，會(huì)激活下游的IκB激酶（IKK）復(fù)合物。IKK復(fù)合物由IKKα、IKKβ和IKKγ組成，其中IKKβ在NF-κB信號(hào)通路的激活中起關(guān)鍵作用。激活的IKKβ會(huì)磷酸化IκB蛋白，使其與NF-κB分離。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，它在細(xì)胞質(zhì)中與IκB蛋白結(jié)合，處于無活性狀態(tài)。當(dāng)IκB蛋白被磷酸化后，會(huì)被泛素化降解，從而使NF-κB得以釋放并進(jìn)入細(xì)胞核。進(jìn)入細(xì)胞核的NF-κB與特定的基因啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。TNF-α是一種具有強(qiáng)大炎癥活性的細(xì)胞因子，它可以激活內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，同時(shí)還能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，破壞血管壁的結(jié)構(gòu)；IL-1β可以刺激內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子，促進(jìn)白細(xì)胞的黏附和遷移，加重炎癥反應(yīng)；IL-6具有多種生物學(xué)功能，它可以促進(jìn)急性期蛋白的合成，激活T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，增強(qiáng)免疫反應(yīng)，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)。WISP1還可以通過激活MAPK信號(hào)通路來促進(jìn)炎癥因子的釋放。如前文所述，WISP1能夠激活p38MAPK、ERK1/2和JNK等MAPK家族成員。激活的p38MAPK可以磷酸化并激活轉(zhuǎn)錄因子ATF-2、Elk-1等。這些轉(zhuǎn)錄因子與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)。ERK1/2和JNK也可以通過調(diào)節(jié)其他轉(zhuǎn)錄因子的活性，間接促進(jìn)炎癥因子的釋放。例如，ERK1/2可以磷酸化并激活A(yù)P-1，AP-1與炎癥因子基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。JNK可以磷酸化并激活c-Jun，c-Jun與c-Fos形成異源二聚體AP-1，同樣促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)。炎癥因子的大量釋放會(huì)引發(fā)一系列連鎖反應(yīng)，進(jìn)一步破壞動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性。TNF-α可以上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞表面的黏附分子表達(dá)，如VCAM-1、ICAM-1等，促進(jìn)白細(xì)胞的黏附和遷移，增加炎癥細(xì)胞在斑塊內(nèi)的浸潤。IL-1β可以刺激平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，改變纖維帽的結(jié)構(gòu)和組成，同時(shí)還能促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)和活性，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解增加，纖維帽變薄。IL-6可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的活化和增殖，使其分泌更多的炎癥因子，形成炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，降低斑塊的穩(wěn)定性。4.3實(shí)例分析4.3.1實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械谋憩F(xiàn)在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，研究人員選取人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（HASMCs）和巨噬細(xì)胞（如THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)分化的巨噬細(xì)胞），深入探究WISP1對斑塊穩(wěn)定性相關(guān)指標(biāo)的影響。對于HASMCs，通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)使其過表達(dá)WISP1，結(jié)果顯示，細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）和基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高，分別較對照組增加了約80%和100%，酶活性也明顯增強(qiáng)。同時(shí)，膠原蛋白的合成相關(guān)基因COL1A1和COL3A1的表達(dá)則顯著降低，mRNA水平分別下降了約50%和60%。這表明WISP1過表達(dá)導(dǎo)致HASMCs中細(xì)胞外基質(zhì)降解增強(qiáng)，合成減少，對斑塊穩(wěn)定性產(chǎn)生不利影響。當(dāng)使用MMP抑制劑GM6001處理過表達(dá)WISP1的HASMCs后，MMP-2和MMP-9的活性受到顯著抑制，膠原蛋白的合成有所恢復(fù)，提示MMPs在WISP1影響細(xì)胞外基質(zhì)代謝中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，給予外源性WISP1刺激后，巨噬細(xì)胞分泌的炎癥因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）水平顯著升高，分別較對照組增加了約150%和200%。同時(shí)，巨噬細(xì)胞對氧化修飾的低密度脂蛋白（ox-LDL）的攝取能力增強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量明顯增加，油紅O染色顯示細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量增多。這表明WISP1促進(jìn)了巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和脂質(zhì)攝取，進(jìn)一步加劇了斑塊的不穩(wěn)定性。當(dāng)使用NF-κB抑制劑Bay11-7082處理巨噬細(xì)胞后，WISP1誘導(dǎo)的TNF-α和IL-6分泌增加以及脂質(zhì)攝取增強(qiáng)均被顯著抑制，說明NF-κB信號(hào)通路在WISP1介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)和脂質(zhì)攝取中起重要作用。在動(dòng)物模型研究中，選用ApoE基因敲除小鼠作為動(dòng)脈粥樣硬化模型動(dòng)物。將小鼠分為對照組、WISP1基因敲低組和