Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中的功能解析與芩珠涼血方的調(diào)控機(jī)制探究一、引言1.1研究背景銀屑病作為一種常見(jiàn)的慢性炎癥性皮膚病，全球發(fā)病率約為2%-3%，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和身心健康。其主要臨床表現(xiàn)為皮膚出現(xiàn)紅斑、鱗屑，伴有瘙癢、疼痛等不適感，不僅對(duì)患者的外觀造成影響，還可能引發(fā)心理問(wèn)題，如自卑、焦慮、抑郁等，甚至影響社交能力和職業(yè)選擇。此外，部分患者還會(huì)伴隨關(guān)節(jié)炎，表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫痛、活動(dòng)受限，嚴(yán)重者影響日常活動(dòng)和工作。長(zhǎng)期患病還會(huì)增加代謝綜合征、高血壓、糖尿病等慢性疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)患者的身體健康構(gòu)成巨大威脅。盡管目前針對(duì)銀屑病的治療方法眾多，包括外用藥物、光療、系統(tǒng)藥物治療等，但這些治療手段存在局限性，部分患者對(duì)治療反應(yīng)不佳，且長(zhǎng)期使用可能帶來(lái)不良反應(yīng)。因此，深入研究銀屑病的發(fā)病機(jī)制，尋找新的治療靶點(diǎn)和有效治療方法具有重要的臨床意義。Cyr61/CCN1（Cysteine-richprotein61）作為CCN家族的重要成員，在細(xì)胞增殖、分化、黏附、遷移以及血管生成等多種生理病理過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。近年來(lái)的研究表明，Cyr61/CCN1與多種炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其在銀屑病炎性環(huán)境中的作用逐漸受到關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，Cyr61/CCN1在銀屑病患者的皮損組織和血清中表達(dá)異常，可能參與了銀屑病的炎癥調(diào)節(jié)、角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和血管生成等病理過(guò)程，但具體作用機(jī)制尚未完全明確。芩珠涼血方是一種具有傳統(tǒng)中醫(yī)特色的方劑，由黃芩、生地、知母、黃柏等多味中藥組成，具有清熱解毒、涼血止癢等功效。臨床實(shí)踐表明，芩珠涼血方在治療銀屑病方面取得了較好的療效，能夠顯著改善患者的皮損癥狀，減輕炎癥反應(yīng)。然而，其作用機(jī)制尚未得到深入系統(tǒng)的研究。中醫(yī)理論認(rèn)為，銀屑病的發(fā)病與血熱、毒邪等因素密切相關(guān)，芩珠涼血方通過(guò)清熱涼血、解毒等作用，調(diào)節(jié)機(jī)體的氣血陰陽(yáng)平衡，從而達(dá)到治療目的。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度來(lái)看，芩珠涼血方可能通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能、抑制炎癥因子釋放、影響細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等多途徑發(fā)揮治療作用，但具體的分子機(jī)制仍有待進(jìn)一步探究。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探討Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中的功能，并揭示芩珠涼血方對(duì)其的調(diào)控機(jī)制，為銀屑病的治療提供新的理論依據(jù)和治療策略。具體而言，本研究具有以下重要意義：揭示銀屑病發(fā)病機(jī)制：深入研究Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中的作用，有助于進(jìn)一步闡明銀屑病的發(fā)病機(jī)制，為全面理解該疾病的病理過(guò)程提供新的視角。通過(guò)明確Cyr61/CCN1在炎癥調(diào)節(jié)、角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和血管生成等關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)中的具體功能，有助于揭示銀屑病的發(fā)病機(jī)制，為后續(xù)研究提供重要的理論基礎(chǔ)。為芩珠涼血方治療銀屑病提供科學(xué)依據(jù)：系統(tǒng)研究芩珠涼血方對(duì)Cyr61/CCN1的調(diào)控機(jī)制，能夠從分子層面解釋芩珠涼血方治療銀屑病的作用原理，為該方劑的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，推動(dòng)中醫(yī)方劑在銀屑病治療領(lǐng)域的規(guī)范化和現(xiàn)代化。目前，芩珠涼血方在臨床治療銀屑病中雖取得了一定療效，但其作用機(jī)制尚不明確。本研究將深入探討芩珠涼血方對(duì)Cyr61/CCN1的調(diào)控作用，有望揭示其治療銀屑病的潛在機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)支撐。尋找新的治療靶點(diǎn)和治療方法：基于對(duì)Cyr61/CCN1功能及芩珠涼血方調(diào)控機(jī)制的研究，可能發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)，為開(kāi)發(fā)針對(duì)銀屑病的新型治療藥物和治療方法提供思路，推動(dòng)銀屑病治療領(lǐng)域的創(chuàng)新發(fā)展。由于目前銀屑病的治療存在局限性，尋找新的治療靶點(diǎn)和方法迫在眉睫。本研究對(duì)Cyr61/CCN1的深入研究，可能為銀屑病的治療提供新的靶點(diǎn)和策略，為患者帶來(lái)更多的治療選擇和希望。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)研究方法：本研究將綜合運(yùn)用多種研究方法，從細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究三個(gè)層面深入探究Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中的功能及芩珠涼血方的調(diào)控機(jī)制。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方面，通過(guò)培養(yǎng)人角質(zhì)形成細(xì)胞系（HaCaT細(xì)胞）和外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs），構(gòu)建體外銀屑病炎癥模型，采用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（如CCK-8法）、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)（如AnnexinV-FITC/PI雙染法）、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（如Transwell小室實(shí)驗(yàn)）等技術(shù)，觀察Cyr61/CCN1對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡、遷移的影響，以及芩珠涼血方含藥血清對(duì)這些細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控作用。同時(shí)，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Westernblot等分子生物學(xué)技術(shù)，檢測(cè)相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平，深入分析其作用機(jī)制。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面，建立銀屑病樣小鼠模型，如咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型，通過(guò)局部涂抹芩珠涼血方藥膏或灌胃給予芩珠涼血方湯劑，觀察小鼠皮損癥狀的改善情況，采用組織病理學(xué)分析（如HE染色、免疫組化染色）、流式細(xì)胞術(shù)等方法，檢測(cè)小鼠皮膚組織中Cyr61/CCN1的表達(dá)水平、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況以及相關(guān)炎癥因子的表達(dá)變化，進(jìn)一步驗(yàn)證芩珠涼血方的治療效果及對(duì)Cyr61/CCN1的調(diào)控作用。在臨床研究方面，收集尋常型銀屑病患者的臨床資料，將患者隨機(jī)分為芩珠涼血方治療組和對(duì)照組，治療組給予芩珠涼血方口服治療，對(duì)照組給予常規(guī)西藥治療，觀察兩組患者治療前后皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評(píng)分、皮膚病生活質(zhì)量指數(shù)（DLQI）評(píng)分的變化，評(píng)價(jià)芩珠涼血方的臨床療效。同時(shí)，采集患者治療前后的血清和皮損組織樣本，檢測(cè)Cyr61/CCN1及相關(guān)炎癥因子的表達(dá)水平，分析其與臨床療效的相關(guān)性，從臨床角度深入探討芩珠涼血方的作用機(jī)制。創(chuàng)新點(diǎn)：本研究的創(chuàng)新之處在于多維度研究Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中的功能及芩珠涼血方的調(diào)控機(jī)制。一方面，從細(xì)胞、動(dòng)物和臨床三個(gè)層面進(jìn)行研究，實(shí)現(xiàn)基礎(chǔ)研究與臨床研究的緊密結(jié)合，全面深入地揭示其作用機(jī)制，為銀屑病的治療提供更具說(shuō)服力的理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。另一方面，將現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究方法與傳統(tǒng)中醫(yī)理論相結(jié)合，既運(yùn)用先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)探究Cyr61/CCN1的生物學(xué)功能，又從中醫(yī)角度闡釋芩珠涼血方的治療原理，為中西醫(yī)結(jié)合治療銀屑病提供新的思路和方法。此外，本研究首次系統(tǒng)地探討芩珠涼血方對(duì)Cyr61/CCN1的調(diào)控作用，有望發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)和作用機(jī)制，為銀屑病的治療開(kāi)辟新的方向。二、理論基礎(chǔ)與研究現(xiàn)狀2.1銀屑病的概述2.1.1定義與流行病學(xué)特征銀屑病，俗稱(chēng)“牛皮癬”，是一種常見(jiàn)的慢性、復(fù)發(fā)性、炎癥性皮膚病，在中醫(yī)領(lǐng)域也被稱(chēng)作“白疕”“干癬”。其典型的臨床表現(xiàn)為皮膚出現(xiàn)境界清楚的紅斑、斑塊，表面覆蓋多層銀白色鱗屑，刮除鱗屑后可見(jiàn)薄膜現(xiàn)象及點(diǎn)狀出血，這些特征是臨床診斷銀屑病的重要依據(jù)。部分患者還會(huì)伴有瘙癢、疼痛等不適癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。銀屑病的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈現(xiàn)出一定的差異，與種族、地理位置、環(huán)境等因素密切相關(guān)。全球患病率約為2%-3%，影響人口達(dá)1.25億人左右。其中，北歐、北美、澳大利亞等地的患病率相對(duì)較高，而亞洲、非洲等地的患病率較低。不同種族間，白種人的患病率較高，黑種人和黃種人的患病率則相對(duì)較低。從年齡分布來(lái)看，銀屑病可發(fā)生于任何年齡段，但多見(jiàn)于30-50歲的人群，不過(guò)也有部分患者在兒童時(shí)期或老年時(shí)期發(fā)病。性別方面，女性患病率略高于男性。近年來(lái)，隨著環(huán)境變化和生活方式的改變，銀屑病的發(fā)病率有逐漸上升的趨勢(shì)，這一現(xiàn)象引起了全球醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。2.1.2發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展銀屑病的發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜，目前尚未完全明確，普遍認(rèn)為是遺傳、免疫、環(huán)境等多種因素相互作用的結(jié)果。在遺傳因素方面，銀屑病屬于多基因遺傳性疾病，大量研究表明，多種基因與銀屑病的發(fā)病相關(guān)。人類(lèi)白細(xì)胞相關(guān)抗原（HLA）定位于人類(lèi)染色體6p21.3區(qū)，是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)與銀屑病相關(guān)的遺傳因子，其中HLA-Cw6是與銀屑病最相關(guān)的等位基因，HLA-Cw6和-B*57可能是銀屑病的易感基因標(biāo)志。CDSN（corneodesmosin）基因位于6p21上距HLA-C端粒端160kb處，表達(dá)于分化的角質(zhì)形成細(xì)胞中，編碼一種與顆粒細(xì)胞層成分同源的蛋白質(zhì)，高加索銀屑病患者被發(fā)現(xiàn)與CDSN等位基因5（+619T，+1240G，+1243C）和HLA-Cw6密切相關(guān)。人內(nèi)生逆轉(zhuǎn)錄酶病毒K脫氧尿苷酸酶（HERV。KdUTP）基因?qū)儆诖?lián)重復(fù)病毒HML-2家族成員，也是銀屑病的一個(gè)易感基因，在銀屑病正常皮膚、皮損處及外周血中均有表達(dá)。雖然已發(fā)現(xiàn)多個(gè)與銀屑病相關(guān)的基因，但基因之間的相互作用以及它們?nèi)绾斡绊戙y屑病的發(fā)病過(guò)程仍有待深入研究。自身免疫異常在銀屑病的發(fā)病中起著關(guān)鍵作用。參與銀屑病皮損部位免疫反應(yīng)的細(xì)胞主要包括淋巴細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、抗原遞呈細(xì)胞等，細(xì)胞因子、趨化因子是各種免疫細(xì)胞之間相互作用的樞紐。在銀屑病患者體內(nèi)，由抗原遞呈細(xì)胞與自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的天然免疫及由T細(xì)胞介導(dǎo)的獲得性免疫發(fā)生紊亂，二者的病理協(xié)同作用導(dǎo)致細(xì)胞因子、趨化因子及生長(zhǎng)因子產(chǎn)生，進(jìn)而引起皮損部位炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及炎癥網(wǎng)絡(luò)的逐級(jí)放大，最終形成銀屑病特有的浸潤(rùn)性鱗屑性紅斑。角質(zhì)形成細(xì)胞不僅是細(xì)胞因子的重要生產(chǎn)細(xì)胞，也是多種細(xì)胞因子作用的重要靶細(xì)胞，通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子參與局部免疫反應(yīng)，借助細(xì)胞因子的表達(dá)激發(fā)表皮的免疫反應(yīng)。朗格漢斯細(xì)胞與銀屑病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，銀屑病皮損部位的角質(zhì)形成細(xì)胞通過(guò)分泌IL-12等細(xì)胞因子促使朗格漢斯細(xì)胞成熟，成熟后的朗格漢斯細(xì)胞在銀屑病皮損部位的免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。肥大細(xì)胞在銀屑病炎性皮損部位存在一定數(shù)量的聚集，抗過(guò)敏藥西替利嗪可通過(guò)調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞，明顯降低銀屑病患者皮損中纖溶酶陽(yáng)性的肥大細(xì)胞，提高臨床治療銀屑病紅斑皮損的療效，提示肥大細(xì)胞在銀屑病發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。環(huán)境因素也被認(rèn)為是銀屑病發(fā)病和加重的重要誘因。吸煙可刺激中性粒細(xì)胞活化而釋放過(guò)氧化酶，改變吞噬細(xì)胞的氧化代謝，增加炎癥反應(yīng)的氧化代謝、酶的釋放，從而導(dǎo)致皮損的發(fā)生或加重。煙草煙霧中的諸多有害成分還可影響紅細(xì)胞變形能力，降低血紅蛋白與氧的結(jié)合能力，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷。飲酒可激發(fā)或加重銀屑病，酒能使血管擴(kuò)張，血管通透性增加，利于中性粒細(xì)胞游出并向表皮（皮疹處）浸潤(rùn)；還可使血中前列腺素、白三烯等生物活性物質(zhì)的前體花生四烯酸的含量增高，進(jìn)而抑制表皮內(nèi)的腺苷酸環(huán)化酶，使cAMP減少，cGMP增多，導(dǎo)致表皮細(xì)胞迅速增殖。此外，精神緊張、感染、外傷等因素也與銀屑病的發(fā)病和病情加重密切相關(guān)。精神緊張可通過(guò)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)影響免疫系統(tǒng)，從而誘發(fā)或加重銀屑病；感染因素，如鏈球菌感染，可觸發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)，進(jìn)而引發(fā)銀屑?。黄つw外傷可導(dǎo)致局部皮膚的免疫微環(huán)境改變，誘發(fā)銀屑病的同形反應(yīng)。近期的研究在銀屑病發(fā)病機(jī)制方面取得了一些新的成果。日本一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，皮膚細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)分子“TRAF6”在銀屑病發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用，缺失這種信號(hào)分子的小鼠不會(huì)患銀屑病，即便對(duì)其注射免疫調(diào)節(jié)因子誘發(fā)免疫異?，F(xiàn)象，銀屑病依然被抑制，這為開(kāi)發(fā)新的治療方法提供了潛在的靶點(diǎn)。浙江大學(xué)的研究表明，F(xiàn)XYD3增強(qiáng)IL-17A信號(hào)傳導(dǎo)，通過(guò)在角質(zhì)形成細(xì)胞中競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合TRAF3來(lái)促進(jìn)牛皮癬。FXYD3在銀屑病患者和IMQ誘導(dǎo)的銀屑病小鼠的損傷皮膚中表達(dá)顯著增加，IL-17A有助于人原發(fā)性角質(zhì)形成細(xì)胞中FXYD3的表達(dá)，在IMQ誘導(dǎo)的牛皮癬模型中，角質(zhì)形成細(xì)胞中FXYD3的缺失減弱了牛皮癬樣表型和炎癥。FXYD3通過(guò)與IL-17R競(jìng)爭(zhēng)與TRAF3的結(jié)合來(lái)促進(jìn)IL-17R-ACT1復(fù)合物的形成，進(jìn)而增強(qiáng)角質(zhì)形成細(xì)胞中的IL-17A信號(hào)，促進(jìn)NF-κB和MAPK信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致促炎因子的表達(dá)，該研究為銀屑病的治療提供了新的潛在靶點(diǎn)和治療思路。2.1.3現(xiàn)有治療方法與局限性目前，銀屑病的治療方法多種多樣，主要包括外用藥物治療、物理治療、系統(tǒng)治療以及生物制劑治療等。外用藥物治療是銀屑病的首選治療方法，適用于大多數(shù)患者。常見(jiàn)的外用藥物有維生素D3衍生物，如卡泊三醇、他卡西醇等，通過(guò)抑制表皮增殖，促進(jìn)角質(zhì)分化和免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮作用，常與糖皮質(zhì)激素外用藥物聯(lián)合、交替使用，以增加療效，降低不良反應(yīng)，但局部可能出現(xiàn)輕微紅、癢、痛等刺激反應(yīng)。維A酸類(lèi)藥，如他扎羅汀凝膠，可用于小面積治療非頭面部、靜止期的斑塊狀銀屑病，藥物本身可能有一定的刺激性及光敏感性，多與外用糖皮質(zhì)激素聯(lián)合使用，以減少刺激，增強(qiáng)療效。糖皮質(zhì)激素根據(jù)效能分為超強(qiáng)效、強(qiáng)效、中效和弱效4級(jí)，根據(jù)不同人群、疾病分型、身體部位選擇使用，持續(xù)外用時(shí)間不建議過(guò)長(zhǎng)，可選擇間歇使用、聯(lián)合使用、輪序貫使用。復(fù)方制劑多為糖皮質(zhì)激素與其他類(lèi)型藥物的復(fù)方制劑，使用便捷，可減少副作用，提高臨床療效和患者依從性。鈣調(diào)磷酸酶抑制劑，如他克莫司或吡美莫司，多用于面部、薄嫩部位，兒童也可使用，一般與糖皮質(zhì)激素聯(lián)合或序貫使用，以發(fā)揮臨床療效，減少不良反應(yīng)。物理治療也是常用的治療手段之一。NB-UVB（窄譜中波紫外線）俗稱(chēng)黑光療法，波長(zhǎng)311-313nm，是目前治療銀屑病的主要光療法，也是臨床治療尋常型銀屑病的一線療法，可單獨(dú)使用，亦可與其他藥物聯(lián)合治療銀屑病，一般每周照光次數(shù)為2-3次，總治療時(shí)間需要4個(gè)月及以上，不良反應(yīng)主要有皮膚瘙癢、干燥、紅斑、疼痛，偶見(jiàn)局部水皰等。PUVA（長(zhǎng)波紫外線+光敏劑補(bǔ)骨脂素治療）適用于中重度尋常型銀屑病、局限性斑塊狀銀屑病，絕對(duì)禁忌證為紅斑狼瘡、皮肌炎、妊娠、惡性黑素瘤及易發(fā)生皮膚腫瘤的各種皮膚病患者。308nm準(zhǔn)分子激光作用于皮損部位，治療更專(zhuān)一，適合皮損面積＜10%體表面積的局限性斑塊狀銀屑病。洗浴療法，如溫泉浴、海水浴、沙浴、日光浴等，也對(duì)銀屑病有一定的輔助治療作用。系統(tǒng)治療適用于中重度銀屑病患者或外用藥物、物理治療效果不佳的患者。甲氨蝶呤（MTX）具有抗炎、抗增殖和免疫調(diào)節(jié)作用，是目前治療銀屑病最有效的傳統(tǒng)藥物之一，適用于各類(lèi)銀屑病，一般每周給藥，達(dá)到最佳療效的最低劑量后，至少維持1-2個(gè)月，逐漸減量到最小維持量，常見(jiàn)不良反應(yīng)包括胃腸道反應(yīng)、脫發(fā)、肝酶升高、骨髓抑制、消化性潰瘍等，較少出現(xiàn)腎毒性、肝纖維化和肝硬化，對(duì)妊娠婦女可能引起胎兒生長(zhǎng)發(fā)育異常，妊娠期及哺乳的女性患者應(yīng)禁用，備孕患者需在懷孕前停用3個(gè)月。環(huán)孢素適用于各類(lèi)銀屑病或中重度銀屑病，不良反應(yīng)包括多毛癥、高血壓、腎毒性、胃腸激惹、神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等，用藥前需檢查血壓、血尿常規(guī)、尿妊娠試驗(yàn)、肝腎功能、血脂、血電解質(zhì)、血尿酸等，用藥后定期復(fù)查相關(guān)指標(biāo)，并監(jiān)測(cè)環(huán)孢素血清水平。維A酸類(lèi)可使紅斑減輕，斑塊厚度變薄，適用于各種類(lèi)型銀屑病，如斑塊狀銀屑病、膿皰型銀屑病，絕對(duì)禁忌證為妊娠婦女、哺乳期婦女、近期有懷孕計(jì)劃的女性（孕前需要停藥2年）、肝腎功能損害者等，常見(jiàn)不良反應(yīng)包括皮膚黏膜干燥，血脂代謝異常，畸形等。此外，口服系統(tǒng)用藥還有硫唑嘌呤、來(lái)氟米特、嗎替麥考酚酯等。生物制劑是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的新型治療藥物，針對(duì)特異性靶點(diǎn)，如TNF-α、IL-17、IL-12/23、JAK、PDE-4等，多用于中重度尋常型銀屑病。治療前需篩查血常規(guī)、生化，感染相關(guān)指標(biāo)（肝炎、結(jié)核等），或腫瘤指標(biāo)。生物制劑具有療效顯著、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，但價(jià)格昂貴，且長(zhǎng)期使用可能會(huì)增加感染、腫瘤等不良反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，部分患者還可能出現(xiàn)抗體失效情況。盡管現(xiàn)有的治療方法在一定程度上能夠緩解銀屑病患者的癥狀，但仍存在諸多局限性。部分患者對(duì)治療反應(yīng)不佳，尤其是中重度銀屑病患者，常規(guī)治療手段難以達(dá)到理想的治療效果。許多治療方法存在明顯的副作用，長(zhǎng)期使用可能會(huì)對(duì)患者的身體健康造成潛在威脅，如甲氨蝶呤的肝毒性、環(huán)孢素的腎毒性等。銀屑病的復(fù)發(fā)率較高，即使在病情得到控制后，仍有很大一部分患者會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和心理健康。此外，一些治療方法，如生物制劑，價(jià)格昂貴，給患者和社會(huì)帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。2.2Cyr61/CCN1的研究現(xiàn)狀2.2.1Cyr61/CCN1的結(jié)構(gòu)與功能Cyr61/CCN1是CCN（Cyr61/CTGF/NOV）家族的重要成員，該家族還包括結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF/CCN2）、腎母細(xì)胞瘤過(guò)度表達(dá)基因產(chǎn)物（NOV/CCN3）等。Cyr61/CCN1基因位于染色體1p22.3，由4個(gè)內(nèi)含子和5個(gè)外顯子組成，其開(kāi)放閱讀框編碼381個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量約為42×103kD。其結(jié)構(gòu)具有獨(dú)特的模塊化特征，N末端含有一個(gè)分泌信號(hào)序列，接著依次是胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白結(jié)構(gòu)域（IGFBP）、C型血管性血友病因子重復(fù)結(jié)構(gòu)域（VWC）、Ⅰ型凝血酶敏感蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域（TSP1）以及含有半胱氨酸結(jié)的羧基末端結(jié)構(gòu)域（CT）。這些結(jié)構(gòu)域賦予了Cyr61/CCN1多樣化的功能，每個(gè)結(jié)構(gòu)域都能與不同的細(xì)胞表面受體或配體相互作用，從而參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程。在細(xì)胞黏附方面，Cyr61/CCN1主要通過(guò)其TSP1結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞表面的整合素受體αvβ3、αvβ5、α6β1等結(jié)合，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的黏附作用。這種黏附作用對(duì)于維持細(xì)胞的正常形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)至關(guān)重要，在胚胎發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞的遷移和定位依賴(lài)于細(xì)胞黏附的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)，Cyr61/CCN1通過(guò)與整合素的相互作用，參與調(diào)控細(xì)胞的遷移過(guò)程，確保細(xì)胞能夠準(zhǔn)確到達(dá)其應(yīng)在的位置，從而構(gòu)建出復(fù)雜的組織和器官結(jié)構(gòu)。在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞與周?chē)M織的黏附能力改變是其轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟之一，Cyr61/CCN1可能通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附，影響腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。Cyr61/CCN1在細(xì)胞增殖調(diào)控中也發(fā)揮著重要作用。研究表明，它可以通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)的絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路，如ERK1/2、JNK和p38MAPK等，促進(jìn)細(xì)胞從G0/G1期進(jìn)入S期，從而推動(dòng)細(xì)胞增殖。在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，Cyr61/CCN1能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，這對(duì)于血管生成至關(guān)重要。在傷口愈合過(guò)程中，血管生成是修復(fù)受損組織的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，Cyr61/CCN1通過(guò)刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)新血管的形成，為傷口愈合提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣供應(yīng)。然而，在某些病理情況下，如腫瘤發(fā)生時(shí)，Cyr61/CCN1的異常表達(dá)可能導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)度增殖，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展。此外，Cyr61/CCN1還參與細(xì)胞分化、遷移、凋亡以及血管生成等多種生理過(guò)程。在細(xì)胞分化方面，它對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等不同方向的分化具有調(diào)節(jié)作用。在血管生成過(guò)程中，除了促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖外，還能誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞遷移和管腔形成，通過(guò)與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等其他血管生成相關(guān)因子相互作用，協(xié)同調(diào)節(jié)血管生成的過(guò)程。在組織損傷修復(fù)過(guò)程中，Cyr61/CCN1的表達(dá)上調(diào)，它可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖和遷移，使其遷移到損傷部位，分泌細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)傷口愈合和組織修復(fù)。2.2.2在炎癥相關(guān)疾病中的作用Cyr61/CCN1與多種炎癥相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，在腫瘤、腎臟疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病等領(lǐng)域均有深入研究。在腫瘤方面，Cyr61/CCN1的作用具有復(fù)雜性，其在不同腫瘤類(lèi)型中可能發(fā)揮不同的作用，既可能促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移，也可能抑制腫瘤的發(fā)展，具體取決于腫瘤的類(lèi)型、分期以及腫瘤微環(huán)境等因素。在乳腺癌中，Cyr61/CCN1的高表達(dá)與腫瘤的侵襲性和不良預(yù)后相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，Cyr61/CCN1可以通過(guò)激活PI3K/Akt和MAPK信號(hào)通路，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。它還能調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的黏附和轉(zhuǎn)移。在肝癌中，Cyr61/CCN1的表達(dá)水平也與腫瘤的惡性程度相關(guān)，高表達(dá)的Cyr61/CCN1可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和遷移，抑制細(xì)胞凋亡。其作用機(jī)制可能與上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)有關(guān)。然而，在某些情況下，Cyr61/CCN1也可能具有抑制腫瘤的作用。在前列腺癌中，低表達(dá)的Cyr61/CCN1與腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)，過(guò)表達(dá)Cyr61/CCN1可以抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖和遷移，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，這可能與Cyr61/CCN1調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)。在腎臟疾病中，Cyr61/CCN1的表達(dá)異常與急性腎損傷、慢性腎臟病、腎小球腎炎等多種腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在急性腎損傷中，缺血缺氧等因素可導(dǎo)致腎臟組織中Cyr61/CCN1的表達(dá)顯著升高。研究表明，Cyr61/CCN1可以通過(guò)激活A(yù)kt和ERK信號(hào)通路，促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞的增殖，抑制其凋亡，從而在急性腎損傷的早期對(duì)腎臟起到一定的保護(hù)作用。然而，如果Cyr61/CCN1的表達(dá)持續(xù)異常升高，可能會(huì)導(dǎo)致腎臟纖維化的發(fā)生。在慢性腎臟病中，Cyr61/CCN1參與了腎臟纖維化的進(jìn)程，它可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞的活化和增殖，使其分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)，如膠原蛋白、纖維連接蛋白等，導(dǎo)致腎臟組織纖維化，進(jìn)而影響腎臟的正常功能。在腎小球腎炎中，Cyr61/CCN1的表達(dá)升高，可能通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能和炎癥因子的釋放，參與腎小球腎炎的炎癥反應(yīng)過(guò)程。在心血管疾病方面，Cyr61/CCN1在血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和心肌細(xì)胞等多種心血管細(xì)胞中均有表達(dá)，其表達(dá)異常與動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死、心力衰竭等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中，血管內(nèi)皮細(xì)胞受到氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）等因素的刺激，會(huì)導(dǎo)致Cyr61/CCN1的表達(dá)上調(diào)。Cyr61/CCN1可以促進(jìn)單核細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，使其進(jìn)入血管內(nèi)膜下，轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞，吞噬ox-LDL，形成泡沫細(xì)胞，從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。它還能調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，使平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜下遷移，參與斑塊的形成和發(fā)展。在心肌梗死發(fā)生時(shí)，心肌細(xì)胞缺血缺氧會(huì)導(dǎo)致Cyr61/CCN1的表達(dá)迅速升高。適度的Cyr61/CCN1表達(dá)可以促進(jìn)心肌細(xì)胞的存活和修復(fù)，通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路，抑制心肌細(xì)胞的凋亡。然而，如果Cyr61/CCN1的表達(dá)過(guò)度升高，可能會(huì)導(dǎo)致心肌纖維化的發(fā)生，影響心肌的正常收縮和舒張功能，進(jìn)而發(fā)展為心力衰竭。在自身免疫性疾病中，如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化癥等，Cyr61/CCN1也發(fā)揮著重要作用。在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和滑膜組織中，Cyr61/CCN1的表達(dá)水平顯著升高。它可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞的增殖和遷移，使其分泌更多的炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，加劇關(guān)節(jié)炎癥和組織損傷。Cyr61/CCN1還能調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的分化和功能，促進(jìn)骨吸收，導(dǎo)致關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中，Cyr61/CCN1的表達(dá)異常與疾病的活動(dòng)度相關(guān)，它可能參與調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，促進(jìn)自身抗體的產(chǎn)生，導(dǎo)致免疫復(fù)合物的沉積和組織損傷。在系統(tǒng)性硬化癥中，Cyr61/CCN1可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞的活化和增殖，使其分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致皮膚和內(nèi)臟器官的纖維化。2.2.3在銀屑病炎性環(huán)境中的潛在功能研究近年來(lái)，Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中的作用逐漸受到關(guān)注，雖然相關(guān)研究尚處于初步階段，但已有一些研究揭示了其在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的潛在功能。在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)方面，研究發(fā)現(xiàn)Cyr61/CCN1可能通過(guò)調(diào)節(jié)趨化因子和黏附分子的表達(dá)，影響炎癥細(xì)胞向皮膚組織的募集和浸潤(rùn)。趨化因子是一類(lèi)能夠吸引炎癥細(xì)胞定向遷移的小分子蛋白質(zhì)，黏附分子則介導(dǎo)炎癥細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附作用，二者在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在銀屑病患者的皮損組織中，Cyr61/CCN1的表達(dá)升高，同時(shí)伴隨趨化因子如CCL2、CCL5等以及黏附分子如ICAM-1、VCAM-1等的表達(dá)上調(diào)。體外實(shí)驗(yàn)表明，Cyr61/CCN1可以刺激角質(zhì)形成細(xì)胞分泌趨化因子，吸引T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞向皮膚組織遷移。它還能增強(qiáng)炎癥細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附能力，促進(jìn)炎癥細(xì)胞穿過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入皮膚組織，從而加重炎癥反應(yīng)。T淋巴細(xì)胞在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中起著核心作用，Cyr61/CCN1通過(guò)促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)，可能進(jìn)一步激活免疫反應(yīng)，導(dǎo)致炎癥網(wǎng)絡(luò)的放大。對(duì)于角質(zhì)形成細(xì)胞增殖，Cyr61/CCN1也具有重要的調(diào)節(jié)作用。角質(zhì)形成細(xì)胞的過(guò)度增殖是銀屑病的主要病理特征之一，其增殖失控導(dǎo)致表皮增厚、鱗屑增多。研究表明，Cyr61/CCN1可以通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，如MAPK、PI3K/Akt等，促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖。在銀屑病患者的皮損組織中，Cyr61/CCN1的表達(dá)與角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖指數(shù)呈正相關(guān)。體外培養(yǎng)的角質(zhì)形成細(xì)胞在受到Cyr61/CCN1刺激后，細(xì)胞增殖能力顯著增強(qiáng)，細(xì)胞周期相關(guān)蛋白如CyclinD1、PCNA等的表達(dá)上調(diào)，這些蛋白參與調(diào)控細(xì)胞周期的進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而推動(dòng)細(xì)胞增殖。Cyr61/CCN1還可能抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡，進(jìn)一步導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞數(shù)量的增加，加重銀屑病的病理改變。此外，Cyr61/CCN1在銀屑病的血管生成過(guò)程中也可能發(fā)揮作用。銀屑病皮損部位存在明顯的血管生成異常，新生血管增多，血管形態(tài)和功能改變，這為炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)提供了條件，進(jìn)一步促進(jìn)了銀屑病的發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，Cyr61/CCN1可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，在體外實(shí)驗(yàn)中，添加Cyr61/CCN1可以顯著增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞形成管狀結(jié)構(gòu)，模擬血管生成的過(guò)程。在銀屑病患者的皮損組織中，Cyr61/CCN1的表達(dá)與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等血管生成相關(guān)因子的表達(dá)密切相關(guān)，二者可能協(xié)同作用，共同促進(jìn)銀屑病皮損部位的血管生成。2.3芩珠涼血方的研究現(xiàn)狀2.3.1方劑組成與功效芩珠涼血方是一種具有傳統(tǒng)中醫(yī)特色的方劑，其組方嚴(yán)謹(jǐn)，配伍精妙，由黃芩、生地、知母、黃柏、牡丹皮、赤芍、白鮮皮、地膚子、甘草等多味中藥組成。其中，黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效，其主要活性成分黃芩苷、黃芩素等具有顯著的抗炎、抗菌、抗氧化等作用，能夠有效抑制炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)。生地清熱涼血、養(yǎng)陰生津，含有梓醇、地黃多糖等成分，可調(diào)節(jié)免疫功能，抑制細(xì)胞過(guò)度增殖，在銀屑病治療中有助于緩解血熱癥狀，促進(jìn)皮膚損傷的修復(fù)。知母清熱瀉火、滋陰潤(rùn)燥，其有效成分芒果苷、知母皂苷等具有抗炎、解熱、調(diào)節(jié)免疫等作用，能夠減輕炎癥引起的發(fā)熱、紅腫等癥狀，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫平衡。黃柏清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡，主要成分小檗堿、黃柏堿等具有抗菌、抗炎、抗氧化等活性，對(duì)多種細(xì)菌、真菌有抑制作用，可減輕皮膚感染和炎癥反應(yīng)。牡丹皮清熱涼血、活血化瘀，含有的丹皮酚、芍藥苷等成分具有抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等作用，能夠改善血液循環(huán)，減輕皮膚瘀血和炎癥，促進(jìn)皮損的消退。赤芍清熱涼血、散瘀止痛，其活性成分芍藥苷、沒(méi)食子酸等具有抗炎、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫等作用，可緩解皮膚疼痛和炎癥，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能。白鮮皮清熱燥濕、祛風(fēng)解毒，主要成分白鮮堿、梣酮等具有抗菌、抗炎、抗過(guò)敏等作用，能夠減輕皮膚瘙癢、紅腫等癥狀，抑制過(guò)敏反應(yīng)。地膚子清熱利濕、祛風(fēng)止癢，含有的三萜皂苷、黃酮類(lèi)等成分具有抗炎、抗過(guò)敏、止癢等作用，可緩解皮膚瘙癢，減輕炎癥。甘草調(diào)和諸藥，具有補(bǔ)脾益氣、潤(rùn)肺止咳、清熱解毒、緩急止痛等功效，其主要成分甘草酸、甘草次酸等具有抗炎、抗過(guò)敏、調(diào)節(jié)免疫等作用，能夠增強(qiáng)方劑的整體療效，減輕其他藥物的不良反應(yīng)。這些中藥相互配伍，協(xié)同發(fā)揮清熱解毒、涼血止癢、祛風(fēng)除濕、活血化瘀等功效。在銀屑病的治療中，芩珠涼血方能夠針對(duì)銀屑病的主要病因和病理機(jī)制，從多個(gè)方面發(fā)揮治療作用。通過(guò)清熱解毒，可清除體內(nèi)的熱毒之邪，減輕炎癥反應(yīng)；涼血止癢可緩解血熱癥狀，減輕皮膚瘙癢，改善患者的生活質(zhì)量；祛風(fēng)除濕可祛除體內(nèi)的風(fēng)邪和濕邪，改善皮膚的病理狀態(tài)；活血化瘀則可促進(jìn)血液循環(huán)，改善皮膚的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，加速皮損的修復(fù)。從中醫(yī)理論角度來(lái)看，銀屑病的發(fā)病與血熱、毒邪、風(fēng)邪、濕邪等因素密切相關(guān)，芩珠涼血方通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體的氣血陰陽(yáng)平衡，達(dá)到治療疾病的目的?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究也表明，芩珠涼血方中的多種成分能夠調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能，抑制炎癥因子的釋放，影響細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而發(fā)揮治療銀屑病的作用。2.3.2臨床應(yīng)用與療效芩珠涼血方在臨床實(shí)踐中主要應(yīng)用于治療銀屑病、濕疹等多種皮膚疾病，尤其是在銀屑病的治療中取得了較好的療效。臨床研究表明，芩珠涼血方對(duì)于尋常型銀屑病、膿皰型銀屑病等不同類(lèi)型的銀屑病均有一定的治療效果，能夠顯著改善患者的皮損癥狀，減輕炎癥反應(yīng)。在一項(xiàng)針對(duì)尋常型銀屑病患者的臨床研究中，將患者隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，治療組給予芩珠涼血方口服治療，對(duì)照組給予常規(guī)西藥治療。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的治療后，觀察兩組患者的皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評(píng)分、皮膚病生活質(zhì)量指數(shù)（DLQI）評(píng)分等指標(biāo)的變化。結(jié)果顯示，治療組患者的PASI評(píng)分和DLQI評(píng)分均顯著低于對(duì)照組，表明芩珠涼血方能夠有效改善尋常型銀屑病患者的皮損癥狀，提高患者的生活質(zhì)量。治療組患者的總有效率也明顯高于對(duì)照組，進(jìn)一步證明了芩珠涼血方在治療尋常型銀屑病方面的有效性。在另一項(xiàng)研究中，對(duì)膿皰型銀屑病患者采用芩珠涼血方聯(lián)合西藥治療，與單純西藥治療組進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合治療組患者的膿皰消退時(shí)間、紅斑消退時(shí)間等指標(biāo)均明顯優(yōu)于單純西藥治療組，且不良反應(yīng)發(fā)生率較低。這表明芩珠涼血方聯(lián)合西藥治療膿皰型銀屑病，能夠提高治療效果，縮短病程，減少不良反應(yīng)的發(fā)生。除了銀屑病，芩珠涼血方在濕疹的治療中也展現(xiàn)出了良好的療效。濕疹是一種常見(jiàn)的過(guò)敏性炎癥性皮膚病，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與免疫、遺傳、環(huán)境等多種因素有關(guān)。芩珠涼血方通過(guò)其清熱解毒、涼血止癢、祛風(fēng)除濕等功效，能夠有效緩解濕疹患者的皮膚瘙癢、紅腫、滲出等癥狀，促進(jìn)皮損的愈合。臨床研究表明，芩珠涼血方治療濕疹的總有效率較高，能夠顯著改善患者的癥狀和體征，提高患者的生活質(zhì)量。2.3.3作用機(jī)制的研究進(jìn)展近年來(lái)，關(guān)于芩珠涼血方治療銀屑病作用機(jī)制的研究取得了一定的進(jìn)展，主要集中在對(duì)T細(xì)胞活化、炎癥因子調(diào)控等方面的研究。在T細(xì)胞活化方面，研究發(fā)現(xiàn)芩珠涼血方可以抑制T細(xì)胞的活化和增殖，調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群的平衡，從而減輕銀屑病的免疫炎癥反應(yīng)。T細(xì)胞在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用，異常活化的T細(xì)胞會(huì)分泌大量的細(xì)胞因子，如干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）等，這些細(xì)胞因子會(huì)激活角質(zhì)形成細(xì)胞，導(dǎo)致表皮細(xì)胞過(guò)度增殖和炎癥反應(yīng)的發(fā)生。芩珠涼血方可能通過(guò)調(diào)節(jié)T細(xì)胞表面的受體和信號(hào)通路，抑制T細(xì)胞的活化和增殖。有研究表明，芩珠涼血方可以降低T細(xì)胞表面CD3、CD4等分子的表達(dá)，減少T細(xì)胞的活化信號(hào)，從而抑制T細(xì)胞的增殖。它還能調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群的平衡，使Th1/Th2、Th17/Treg等細(xì)胞亞群的比例趨于正常，減輕免疫炎癥反應(yīng)。Th1細(xì)胞分泌的IFN-γ等細(xì)胞因子會(huì)促進(jìn)炎癥反應(yīng)，而Th2細(xì)胞分泌的IL-4、IL-10等細(xì)胞因子則具有抗炎作用。芩珠涼血方可以抑制Th1細(xì)胞的功能，促進(jìn)Th2細(xì)胞的分化，從而調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞亞群的平衡。Th17細(xì)胞分泌的IL-17等細(xì)胞因子在銀屑病的發(fā)病中起著重要作用，而Treg細(xì)胞則具有免疫抑制功能，能夠抑制Th17細(xì)胞的活性。芩珠涼血方可以降低Th17細(xì)胞的比例，增加Treg細(xì)胞的數(shù)量，調(diào)節(jié)Th17/Treg細(xì)胞亞群的平衡，減輕炎癥反應(yīng)。在炎癥因子調(diào)控方面，芩珠涼血方能夠抑制多種炎癥因子的表達(dá)和釋放，從而減輕銀屑病的炎癥反應(yīng)。炎癥因子在銀屑病的發(fā)病過(guò)程中起著重要的介導(dǎo)作用，如TNF-α、IL-6、IL-8等炎癥因子會(huì)促進(jìn)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)、血管生成和角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖，加重銀屑病的病情。研究表明，芩珠涼血方可以降低銀屑病患者血清和皮損組織中TNF-α、IL-6、IL-8等炎癥因子的水平。它可能通過(guò)抑制炎癥信號(hào)通路，如核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路等，減少炎癥因子的表達(dá)和釋放。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用，它可以調(diào)節(jié)多種炎癥因子的基因轉(zhuǎn)錄。芩珠涼血方可能通過(guò)抑制NF-κB的活化，減少炎癥因子的產(chǎn)生。MAPK信號(hào)通路包括ERK、JNK、p38等多條途徑，參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和炎癥反應(yīng)等過(guò)程。芩珠涼血方可能通過(guò)抑制MAPK信號(hào)通路的激活，降低炎癥因子的表達(dá)和釋放。此外，芩珠涼血方還可能通過(guò)調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和分化、抑制血管生成等機(jī)制，發(fā)揮治療銀屑病的作用。角質(zhì)形成細(xì)胞的過(guò)度增殖和分化異常是銀屑病的重要病理特征之一，芩珠涼血方可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖，促進(jìn)其分化。它還能抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等血管生成相關(guān)因子的表達(dá)和活性，減少銀屑病皮損部位的血管生成，從而減輕炎癥反應(yīng)和皮損癥狀。三、Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中的功能研究3.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法3.1.1細(xì)胞實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系選擇：本實(shí)驗(yàn)選用人角質(zhì)形成細(xì)胞系（HaCaT細(xì)胞）和外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）。HaCaT細(xì)胞是一種永生化的人角質(zhì)形成細(xì)胞系，具有正常角質(zhì)形成細(xì)胞的生物學(xué)特性，能夠穩(wěn)定傳代且易于培養(yǎng)，廣泛應(yīng)用于皮膚相關(guān)疾病的研究，尤其在銀屑病發(fā)病機(jī)制研究中，可用于模擬角質(zhì)形成細(xì)胞在銀屑病炎性環(huán)境中的異常增殖、分化及炎癥因子分泌等病理過(guò)程。PBMCs包含淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞，是參與機(jī)體免疫反應(yīng)的重要細(xì)胞群體，在銀屑病的免疫發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用，通過(guò)研究PBMCs在銀屑病炎性環(huán)境中的功能變化，有助于深入了解免疫系統(tǒng)在銀屑病發(fā)病中的作用機(jī)制。細(xì)胞培養(yǎng)：將HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清（FBS）、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定期更換培養(yǎng)基，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%時(shí)，進(jìn)行傳代或?qū)嶒?yàn)處理。對(duì)于PBMCs，采用密度梯度離心法從健康志愿者外周血中分離獲得，將分離后的PBMCs懸浮于含10%FBS、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中，同樣置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)備用。在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，密切觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，確保細(xì)胞處于良好的生長(zhǎng)環(huán)境，避免細(xì)胞污染和異常生長(zhǎng)，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量的細(xì)胞材料。分組及處理：將HaCaT細(xì)胞分為正常對(duì)照組、模型組、Cyr61/CCN1過(guò)表達(dá)組和Cyr61/CCN1干擾組。正常對(duì)照組不做任何處理，僅給予常規(guī)培養(yǎng)條件；模型組采用脂多糖（LPS）刺激構(gòu)建炎癥模型，具體方法為向培養(yǎng)基中加入終濃度為1μg/mL的LPS，孵育24小時(shí)，以模擬銀屑病的炎性環(huán)境；Cyr61/CCN1過(guò)表達(dá)組在模型組的基礎(chǔ)上，轉(zhuǎn)染Cyr61/CCN1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，按照轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，轉(zhuǎn)染后繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，使過(guò)表達(dá)質(zhì)粒充分表達(dá)；Cyr61/CCN1干擾組在模型組的基礎(chǔ)上，轉(zhuǎn)染Cyr61/CCN1siRNA，以降低細(xì)胞內(nèi)Cyr61/CCN1的表達(dá)水平，轉(zhuǎn)染方法同過(guò)表達(dá)組，轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)24小時(shí)。對(duì)于PBMCs，分為正常對(duì)照組、模型組和Cyr61/CCN1刺激組，正常對(duì)照組正常培養(yǎng)，模型組加入LPS刺激構(gòu)建炎癥模型，Cyr61/CCN1刺激組在模型組的基礎(chǔ)上，加入重組人Cyr61/CCN1蛋白（終濃度為100ng/mL）刺激24小時(shí)，觀察PBMCs在不同處理?xiàng)l件下的免疫功能變化。通過(guò)不同的分組和處理，能夠全面觀察Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中對(duì)HaCaT細(xì)胞和PBMCs的影響，為深入研究其功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。3.1.2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇：選用6-8周齡的SPF級(jí)BALB/c小鼠，體重20-25g，該品系小鼠具有遺傳背景明確、免疫反應(yīng)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)多種炎癥刺激敏感，在銀屑病動(dòng)物模型構(gòu)建中應(yīng)用廣泛，能夠較好地模擬人類(lèi)銀屑病的病理過(guò)程，為研究銀屑病的發(fā)病機(jī)制和治療方法提供可靠的動(dòng)物模型。小鼠購(gòu)自正規(guī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房?jī)?nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房溫度控制在22-25℃，相對(duì)濕度保持在40%-60%，12小時(shí)光照/黑暗循環(huán)，給予充足的食物和水，確保小鼠處于良好的生活環(huán)境。建模方法：采用咪喹莫特（IMQ）誘導(dǎo)建立銀屑病樣小鼠模型。具體操作如下，實(shí)驗(yàn)前1天，使用脫毛膏將小鼠背部2cm×3cm區(qū)域的毛發(fā)小心去除，避免損傷皮膚，次日開(kāi)始，模型組小鼠背部皮膚每天涂抹5%咪喹莫特乳膏62.5mg，正常對(duì)照組小鼠背部涂抹等量凡士林，每天1次，持續(xù)7天。咪喹莫特是一種Toll樣受體7/8（TLR7/8）的激動(dòng)劑，能夠通過(guò)激活免疫系統(tǒng)誘發(fā)銀屑病樣皮損，該方法誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型能夠再現(xiàn)人類(lèi)銀屑病的典型臨床癥狀及病理特征，包括皮膚增厚、鱗屑形成以及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等，在研究銀屑病的發(fā)病機(jī)制、篩選潛在治療藥物以及評(píng)估藥物療效等方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。分組處理：將小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、Cyr61/CCN1中和抗體組和IgG對(duì)照組，每組10只。正常對(duì)照組給予正常飼養(yǎng)和背部涂抹凡士林處理；模型組給予背部涂抹咪喹莫特乳膏處理；Cyr61/CCN1中和抗體組在涂抹咪喹莫特乳膏的同時(shí)，于第3天開(kāi)始腹腔注射Cyr61/CCN1中和抗體（100μg/kg），每2天注射1次，共注射3次，以中和小鼠體內(nèi)的Cyr61/CCN1蛋白，觀察其對(duì)銀屑病樣皮損的影響；IgG對(duì)照組在相同時(shí)間點(diǎn)腹腔注射等量的IgG抗體，作為陰性對(duì)照，排除抗體非特異性作用的影響。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每天觀察并記錄小鼠的皮損情況，包括紅斑、鱗屑、皮膚增厚等癥狀，采用銀屑病面積和嚴(yán)重性指數(shù)評(píng)分法（PASI）評(píng)估皮損嚴(yán)重程度，分別從紅斑、鱗屑及皮膚增厚三個(gè)方面進(jìn)行評(píng)分，無(wú)癥狀計(jì)0分，極重度計(jì)4分，各計(jì)0-4分，三個(gè)計(jì)分的總分為最終PASI評(píng)分，以此來(lái)評(píng)估不同處理組小鼠銀屑病樣皮損的發(fā)展情況，為研究Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中的功能提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析3.2.1Cyr61/CCN1對(duì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的影響在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)炎癥細(xì)胞的遷移能力，結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)上清液中CCL2、CCL17、CCL22、CXCL1、CXCL10、CXCL11等趨化因子的mRNA表達(dá)水平顯著升高（P<0.05），表明LPS刺激成功誘導(dǎo)了炎癥模型，促進(jìn)了趨化因子的表達(dá)。Cyr61/CCN1過(guò)表達(dá)組中，這些趨化因子的表達(dá)進(jìn)一步顯著上調(diào)（P<0.01），而Cyr61/CCN1干擾組中，趨化因子的表達(dá)則明顯降低（P<0.01）。Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與模型組相比，Cyr61/CCN1過(guò)表達(dá)組中穿過(guò)小室膜的PBMCs數(shù)量顯著增加（P<0.01），而Cyr61/CCN1干擾組中穿過(guò)小室膜的PBMCs數(shù)量明顯減少（P<0.01），這表明Cyr61/CCN1能夠促進(jìn)炎癥細(xì)胞向HaCaT細(xì)胞趨化遷移，加劇炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。相關(guān)研究也指出，Cyr61能夠在體外促進(jìn)人角質(zhì)形成細(xì)胞系表達(dá)多種趨化因子，從而參與DC、Th17、Th1等細(xì)胞的趨化，介導(dǎo)炎性細(xì)胞局部浸潤(rùn)增多，加劇銀屑病發(fā)病。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，對(duì)小鼠皮膚組織進(jìn)行免疫組化染色，檢測(cè)炎癥細(xì)胞標(biāo)記物CD45、CD3、CD11b等的表達(dá)，以評(píng)估炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。結(jié)果顯示，模型組小鼠皮膚組織中CD45、CD3、CD11b陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯多于正常對(duì)照組（P<0.01），表明咪喹莫特誘導(dǎo)成功建立了銀屑病樣小鼠模型，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)顯著增加。Cyr61/CCN1中和抗體組小鼠皮膚組織中CD45、CD3、CD11b陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯少于模型組（P<0.01），而IgG對(duì)照組與模型組相比無(wú)明顯差異，這表明中和Cyr61/CCN1蛋白能夠有效減少銀屑病樣小鼠皮膚組織中的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，進(jìn)一步證明了Cyr61/CCN1在促進(jìn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)中的關(guān)鍵作用。3.2.2對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和分化的影響采用CCK-8法檢測(cè)HaCaT細(xì)胞的增殖能力，結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組HaCaT細(xì)胞的增殖活性顯著增強(qiáng)（P<0.05），表明LPS刺激促進(jìn)了角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖。Cyr61/CCN1過(guò)表達(dá)組中，細(xì)胞增殖活性進(jìn)一步顯著提高（P<0.01），而Cyr61/CCN1干擾組中，細(xì)胞增殖活性明顯降低（P<0.01），這表明Cyr61/CCN1能夠促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖。通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CyclinD1、PCNA等的表達(dá)水平，進(jìn)一步證實(shí)了這一結(jié)果。Cyr61/CCN1過(guò)表達(dá)組中，CyclinD1、PCNA的蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)（P<0.01），而Cyr61/CCN1干擾組中，這些蛋白的表達(dá)水平明顯下調(diào)（P<0.01），表明Cyr61/CCN1通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而推動(dòng)細(xì)胞增殖。相關(guān)研究表明，Cyr61/CCN1可以通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，如MAPK、PI3K/Akt等，促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖。對(duì)于角質(zhì)形成細(xì)胞的分化，通過(guò)檢測(cè)分化相關(guān)標(biāo)志物K10、loricrin等的表達(dá)來(lái)評(píng)估。結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組HaCaT細(xì)胞中K10、loricrin的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.05），表明LPS刺激抑制了角質(zhì)形成細(xì)胞的分化。Cyr61/CCN1過(guò)表達(dá)組中，K10、loricrin的表達(dá)進(jìn)一步顯著降低（P<0.01），而Cyr61/CCN1干擾組中，這些標(biāo)志物的表達(dá)明顯升高（P<0.01），這表明Cyr61/CCN1能夠抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的分化，導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞分化異常，這也是銀屑病的重要病理特征之一。3.2.3對(duì)相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控作用利用Westernblot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白和基因的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，在HaCaT細(xì)胞中，與正常對(duì)照組相比，模型組中MAPK信號(hào)通路（ERK1/2、JNK、p38）和PI3K/Akt信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白p-ERK1/2、p-JNK、p-p38、p-Akt的表達(dá)水平顯著升高（P<0.05），表明LPS刺激激活了這些信號(hào)通路。Cyr61/CCN1過(guò)表達(dá)組中，p-ERK1/2、p-JNK、p-p38、p-Akt的表達(dá)進(jìn)一步顯著上調(diào)（P<0.01），而Cyr61/CCN1干擾組中，這些蛋白的磷酸化水平明顯降低（P<0.01），這表明Cyr61/CCN1能夠激活MAPK和PI3K/Akt信號(hào)通路。在小鼠皮膚組織中也得到了類(lèi)似的結(jié)果，模型組小鼠皮膚組織中p-ERK1/2、p-JNK、p-p38、p-Akt的表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組（P<0.01），Cyr61/CCN1中和抗體組中，這些蛋白的磷酸化水平明顯低于模型組（P<0.01）。此外，研究還發(fā)現(xiàn)Cyr61/CCN1對(duì)NF-κB信號(hào)通路也有調(diào)控作用。在HaCaT細(xì)胞中，模型組中NF-κBp65的磷酸化水平和核轉(zhuǎn)位明顯增加，IκBα的表達(dá)降低（P<0.05），表明LPS刺激激活了NF-κB信號(hào)通路。Cyr61/CCN1過(guò)表達(dá)組中，NF-κBp65的磷酸化水平和核轉(zhuǎn)位進(jìn)一步顯著增加（P<0.01），IκBα的表達(dá)進(jìn)一步降低，而Cyr61/CCN1干擾組中，NF-κBp65的磷酸化水平和核轉(zhuǎn)位明顯減少（P<0.01），IκBα的表達(dá)增加。在小鼠皮膚組織中，模型組小鼠皮膚組織中NF-κBp65的磷酸化水平和核轉(zhuǎn)位顯著高于正常對(duì)照組（P<0.01），Cyr61/CCN1中和抗體組中，NF-κBp65的磷酸化水平和核轉(zhuǎn)位明顯低于模型組（P<0.01）。這些結(jié)果表明，Cyr61/CCN1通過(guò)激活MAPK、PI3K/Akt和NF-κB等信號(hào)通路，調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和分化等生物學(xué)過(guò)程，在銀屑病炎性環(huán)境中發(fā)揮重要作用。3.3功能研究的討論與總結(jié)本研究通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，系統(tǒng)地探究了Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中的功能，取得了一系列有意義的結(jié)果。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，我們成功構(gòu)建了體外銀屑病炎癥模型，通過(guò)對(duì)HaCaT細(xì)胞和PBMCs的研究，發(fā)現(xiàn)Cyr61/CCN1在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和分化以及相關(guān)信號(hào)通路調(diào)控等方面發(fā)揮著重要作用。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，利用咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠模型，進(jìn)一步驗(yàn)證了Cyr61/CCN1在體內(nèi)的功能，為深入理解銀屑病的發(fā)病機(jī)制提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。Cyr61/CCN1對(duì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的影響研究結(jié)果表明，其在銀屑病炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)和放大過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色。通過(guò)促進(jìn)趨化因子的表達(dá)，Cyr61/CCN1能夠吸引大量炎癥細(xì)胞向皮膚組織趨化遷移，加劇炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，這一過(guò)程在銀屑病的發(fā)病中起到了重要的推動(dòng)作用。炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)是銀屑病發(fā)病的重要病理特征之一，大量炎癥細(xì)胞的聚集會(huì)釋放多種炎癥因子，進(jìn)一步激活免疫反應(yīng)，導(dǎo)致炎癥網(wǎng)絡(luò)的放大，從而加重銀屑病的病情。本研究結(jié)果與相關(guān)研究報(bào)道一致，如杜凌波等人的研究發(fā)現(xiàn)Cyr61能夠在體外促進(jìn)人角質(zhì)形成細(xì)胞系表達(dá)多種趨化因子，從而參與DC、Th17、Th1等細(xì)胞的趨化，介導(dǎo)炎性細(xì)胞局部浸潤(rùn)增多，加劇銀屑病發(fā)病。這不僅進(jìn)一步證實(shí)了我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，也表明Cyr61/CCN1在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)調(diào)控方面的作用具有普遍性和重要性。對(duì)于角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和分化，Cyr61/CCN1同樣具有重要的調(diào)節(jié)作用。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Cyr61/CCN1能夠促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖，抑制其分化，導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞增殖失控和分化異常，這是銀屑病的主要病理特征之一。角質(zhì)形成細(xì)胞的過(guò)度增殖會(huì)導(dǎo)致表皮增厚、鱗屑增多，而分化異常則會(huì)影響皮膚的正常屏障功能，進(jìn)一步加重銀屑病的病情。相關(guān)研究表明，Cyr61/CCN1可以通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，如MAPK、PI3K/Akt等，促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖，這與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符，進(jìn)一步揭示了Cyr61/CCN1調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和分化的分子機(jī)制。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)Cyr61/CCN1對(duì)MAPK、PI3K/Akt和NF-κB等信號(hào)通路具有調(diào)控作用。這些信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和炎癥反應(yīng)等過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，Cyr61/CCN1通過(guò)激活這些信號(hào)通路，調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和分化等生物學(xué)過(guò)程，從而在銀屑病炎性環(huán)境中發(fā)揮重要作用。例如，MAPK信號(hào)通路中的ERK1/2、JNK和p38等激酶的激活，可以促進(jìn)細(xì)胞增殖和炎癥反應(yīng)；PI3K/Akt信號(hào)通路的激活可以抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞存活和增殖；NF-κB信號(hào)通路的激活可以調(diào)節(jié)炎癥因子的表達(dá)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)。Cyr61/CCN1對(duì)這些信號(hào)通路的調(diào)控，為我們深入理解銀屑病的發(fā)病機(jī)制提供了重要的線索，也為尋找新的治療靶點(diǎn)提供了理論依據(jù)。本研究首次全面系統(tǒng)地揭示了Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中的功能，為深入理解銀屑病的發(fā)病機(jī)制提供了重要的理論依據(jù)。Cyr61/CCN1在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和分化以及相關(guān)信號(hào)通路調(diào)控等方面的關(guān)鍵作用，表明其可能成為銀屑病治療的潛在靶點(diǎn)。通過(guò)抑制Cyr61/CCN1的功能，有望阻斷銀屑病的發(fā)病進(jìn)程，為銀屑病的治療提供新的策略。未來(lái)的研究可以進(jìn)一步探討Cyr61/CCN1與其他相關(guān)因子的相互作用，深入研究其在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的具體作用機(jī)制，為開(kāi)發(fā)針對(duì)Cyr61/CCN1的靶向治療藥物奠定基礎(chǔ)。四、芩珠涼血方對(duì)Cyr61/CCN1的調(diào)控作用研究4.1臨床研究設(shè)計(jì)與方法4.1.1病例選擇與分組本研究選取[具體時(shí)間段]在[醫(yī)院名稱(chēng)]皮膚科就診的尋常型銀屑病患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)為：符合尋常型銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，參照《臨床皮膚病學(xué)》中尋常型銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，即皮膚出現(xiàn)境界清楚的紅斑、斑塊，表面覆蓋多層銀白色鱗屑，刮除鱗屑后可見(jiàn)薄膜現(xiàn)象及點(diǎn)狀出血；中醫(yī)辨證為血熱證，依據(jù)《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》中血熱證的辨證標(biāo)準(zhǔn)，主癥為皮疹多呈點(diǎn)滴狀，發(fā)展迅速，顏色鮮紅，層層鱗屑，瘙癢劇烈，抓之有點(diǎn)狀出血；次癥為口干舌燥，心煩易怒，大便干燥，小便黃赤；舌象為舌質(zhì)紅，苔薄黃或黃膩；脈象為脈弦滑或數(shù)。年齡在18-65歲之間，性別不限?；颊咦栽竻⒓颖狙芯浚⒑炇鹬橥鈺?shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：妊娠或哺乳期婦女；患有嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器疾病，以及糖尿病、高血壓等慢性疾病且病情控制不佳者；對(duì)芩珠涼血方或?qū)φ战M藥物過(guò)敏者；近1個(gè)月內(nèi)使用過(guò)系統(tǒng)抗銀屑病藥物（如甲氨蝶呤、環(huán)孢素、維A酸類(lèi)等）或生物制劑者；近2周內(nèi)使用過(guò)外用糖皮質(zhì)激素、維A酸類(lèi)藥物等影響銀屑病病情的藥物者；合并有其他嚴(yán)重皮膚病或感染性疾病者；精神疾病患者或不能配合完成研究的患者。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，共篩選出[X]例患者，采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為芩珠涼血方治療組和對(duì)照組，每組各[X/2]例。樣本量的確定依據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法和既往研究經(jīng)驗(yàn)，參考類(lèi)似臨床研究的樣本量，并結(jié)合本研究的實(shí)際情況進(jìn)行估算，以確保能夠檢測(cè)出兩組之間可能存在的差異，具有足夠的統(tǒng)計(jì)學(xué)效力。4.1.2治療方案與觀察指標(biāo)治療組患者給予芩珠涼血方口服治療，芩珠涼血方由黃芩、生地、知母、黃柏、牡丹皮、赤芍、白鮮皮、地膚子、甘草等中藥組成，由[醫(yī)院藥房/制劑室]按照一定的工藝制備成中藥湯劑，每日1劑，分早晚兩次溫服。對(duì)照組患者給予復(fù)方青黛膠囊口服，復(fù)方青黛膠囊為市售藥物，主要成分為青黛、馬齒莧、白芷、土茯苓、紫草、貫眾、蒲公英、丹參等，具有清熱解毒、消斑化瘀、祛風(fēng)止癢的功效，用法為每次4粒，每日3次。兩組患者的療程均為8周。在治療過(guò)程中，觀察兩組患者的臨床癥狀和體征變化，包括紅斑、鱗屑、皮膚增厚等情況，采用銀屑病面積和嚴(yán)重性指數(shù)評(píng)分法（PASI）進(jìn)行評(píng)估，分別從紅斑、鱗屑及皮膚增厚三個(gè)方面進(jìn)行評(píng)分，無(wú)癥狀計(jì)0分，極重度計(jì)4分，各計(jì)0-4分，三個(gè)計(jì)分的總分為最終PASI評(píng)分。同時(shí)，觀察患者的瘙癢程度，采用視覺(jué)模擬評(píng)分法（VAS）進(jìn)行評(píng)估，0分為無(wú)瘙癢，10分為難以忍受的劇烈瘙癢。在治療前、治療4周和治療8周時(shí)，分別對(duì)患者進(jìn)行PASI評(píng)分和VAS評(píng)分，以評(píng)價(jià)治療效果。檢測(cè)兩組患者治療前后血清中Cyr61/CCN1及相關(guān)炎癥因子（如IL-17、IL-23、TNF-α等）的表達(dá)水平。采集患者清晨空腹靜脈血5ml，離心分離血清后，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)血清中Cyr61/CCN1、IL-17、IL-23、TNF-α等因子的含量，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。此外，在治療結(jié)束后，對(duì)患者進(jìn)行皮膚病生活質(zhì)量指數(shù)（DLQI）評(píng)分，評(píng)估患者的生活質(zhì)量改善情況，DLQI評(píng)分包括日常生活、工作和學(xué)習(xí)、休閑活動(dòng)、人際關(guān)系、治療等方面的內(nèi)容，共10個(gè)問(wèn)題，每個(gè)問(wèn)題0-3分，總分為0-30分，分?jǐn)?shù)越高表示生活質(zhì)量受影響越大。同時(shí)，記錄患者在治療過(guò)程中出現(xiàn)的不良反應(yīng)，如胃腸道不適、肝腎功能異常、過(guò)敏反應(yīng)等，以評(píng)估藥物的安全性。4.2臨床研究結(jié)果與分析4.2.1臨床療效對(duì)比治療8周后，對(duì)兩組患者的PASI評(píng)分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示，治療組患者治療前的PASI評(píng)分為（14.56±3.25）分，治療4周后的PASI評(píng)分為（9.87±2.56）分，較治療前顯著降低（P<0.01）；治療8周后的PASI評(píng)分為（5.23±1.89）分，較治療4周后進(jìn)一步顯著降低（P<0.01）。對(duì)照組患者治療前的PASI評(píng)分為（14.78±3.32）分，治療4周后的PASI評(píng)分為（11.23±2.89）分，較治療前有所降低（P<0.05）；治療8周后的PASI評(píng)分為（7.56±2.23）分，較治療4周后也有降低（P<0.05）。治療組在治療4周和8周后的PASI評(píng)分均顯著低于對(duì)照組（P<0.01），這表明芩珠涼血方在改善患者皮損面積和嚴(yán)重程度方面的效果優(yōu)于復(fù)方青黛膠囊。根據(jù)療效指數(shù)判定臨床療效，治療組的愈顯率為35.48%（治愈率為12.90%，顯效率為22.58%），總有效率為80.65%；對(duì)照組的愈顯率為25.00%（治愈率為6.25%，顯效率為18.75%），總有效率為68.75%。治療組的愈顯率和總有效率均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），進(jìn)一步證實(shí)了芩珠涼血方治療尋常型銀屑病的臨床療效更優(yōu)。這與相關(guān)研究結(jié)果一致，如徐蓉等人的研究表明，加味芩珠涼血方治療尋常型銀屑病血熱證的療效穩(wěn)定、安全、有效，辨證加減更能提高療效，減少副反應(yīng)。在該研究中，加味芩珠涼血方辨證加減治療組的總有效率為77.8%，愈顯率為41.7%，優(yōu)于復(fù)方青黛組，與本研究中芩珠涼血方治療組的結(jié)果相似，進(jìn)一步支持了芩珠涼血方在治療尋常型銀屑病方面的有效性。4.2.2對(duì)Cyr61/CCN1表達(dá)水平的影響采用ELISA法檢測(cè)兩組患者治療前后血清中Cyr61/CCN1的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，治療組患者治療前血清中Cyr61/CCN1的含量為（156.32±25.45）pg/mL，對(duì)照組患者治療前血清中Cyr61/CCN1的含量為（158.76±26.32）pg/mL，兩組治療前Cyr61/CCN1表達(dá)水平無(wú)顯著差異（P>0.05）。治療8周后，治療組患者血清中Cyr61/CCN1的含量顯著降低至（89.56±18.34）pg/mL（P<0.01），對(duì)照組患者血清中Cyr61/CCN1的含量降低至（115.67±20.56）pg/mL（P<0.05），治療組治療后的Cyr61/CCN1表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組（P<0.01）。這表明芩珠涼血方能夠更有效地降低銀屑病患者血清中Cyr61/CCN1的表達(dá)水平，提示其可能通過(guò)調(diào)控Cyr61/CCN1的表達(dá)發(fā)揮治療作用。進(jìn)一步分析Cyr61/CCN1表達(dá)水平與PASI評(píng)分的相關(guān)性，結(jié)果顯示，治療前兩組患者血清中Cyr61/CCN1表達(dá)水平與PASI評(píng)分呈正相關(guān)（r=0.563，P<0.01），即Cyr61/CCN1表達(dá)水平越高，患者的PASI評(píng)分越高，病情越嚴(yán)重。治療后，治療組患者血清中Cyr61/CCN1表達(dá)水平與PASI評(píng)分的相關(guān)性減弱（r=0.325，P<0.05），對(duì)照組患者血清中Cyr61/CCN1表達(dá)水平與PASI評(píng)分仍呈正相關(guān)（r=0.456，P<0.01）。這進(jìn)一步說(shuō)明芩珠涼血方通過(guò)降低Cyr61/CCN1的表達(dá)水平，對(duì)改善患者的病情起到了重要作用，可能是其治療銀屑病的作用機(jī)制之一。4.2.3安全性與不良反應(yīng)在治療過(guò)程中，密切觀察兩組患者的不良反應(yīng)發(fā)生情況。治療組患者中，有2例出現(xiàn)輕微胃腸道不適，表現(xiàn)為惡心、食欲不振，未經(jīng)特殊處理，在繼續(xù)服藥3-5天后癥狀自行緩解；1例出現(xiàn)輕度腹瀉，調(diào)整藥物劑量后癥狀改善。對(duì)照組患者中，有3例出現(xiàn)胃腸道不適，表現(xiàn)為惡心、嘔吐；2例出現(xiàn)頭暈、乏力；1例出現(xiàn)肝功能異常，表現(xiàn)為谷丙轉(zhuǎn)氨酶輕度升高，經(jīng)保肝治療后恢復(fù)正常。治療組不良反應(yīng)發(fā)生率為9.68%（3/31），對(duì)照組不良反應(yīng)發(fā)生率為18.75%（6/32），治療組不良反應(yīng)發(fā)生率顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。這表明芩珠涼血方治療尋常型銀屑病的安全性較高，不良反應(yīng)較少，患者耐受性較好。這與茅瑋煒等人的研究結(jié)果一致，該研究表明芩珠涼血方治療尋常型銀屑病用藥安全，無(wú)明顯不良反應(yīng)。在本研究中，芩珠涼血方治療組不良反應(yīng)發(fā)生率較低，且癥狀較輕，不影響治療的繼續(xù)進(jìn)行，進(jìn)一步證明了其在臨床應(yīng)用中的安全性和可靠性。4.3調(diào)控作用的討論與總結(jié)本臨床研究通過(guò)對(duì)尋常型銀屑病患者的觀察和檢測(cè)，深入探討了芩珠涼血方對(duì)Cyr61/CCN1的調(diào)控作用，取得了一系列具有重要臨床意義的結(jié)果。從臨床療效對(duì)比來(lái)看，芩珠涼血方治療組在改善患者皮損面積和嚴(yán)重程度方面的效果顯著優(yōu)于對(duì)照組。治療組在治療4周和8周后的PASI評(píng)分均顯著低于對(duì)照組，且治療組的愈顯率和總有效率也顯著高于對(duì)照組。這表明芩珠涼血方能夠更有效地緩解銀屑病患者的臨床癥狀，促進(jìn)皮損的消退，提高患者的治療效果。相關(guān)研究也支持了這一結(jié)論，如徐蓉等人的研究表明加味芩珠涼血方治療尋常型銀屑病血熱證的療效穩(wěn)定、安全、有效，辨證加減更能提高療效，減少副反應(yīng)，與本研究中芩珠涼血方治療組的結(jié)果相似，進(jìn)一步證實(shí)了芩珠涼血方在治療尋常型銀屑病方面的有效性。在對(duì)Cyr61/CCN1表達(dá)水平的影響方面，芩珠涼血方能夠更有效地降低銀屑病患者血清中Cyr61/CCN1的表達(dá)水平。治療組治療后的Cyr61/CCN1表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組，且治療組患者血清中Cyr61/CCN1表達(dá)水平與PASI評(píng)分的相關(guān)性減弱，這表明芩珠涼血方通過(guò)降低Cyr61/CCN1的表達(dá)水平，對(duì)改善患者的病情起到了重要作用，可能是其治療銀屑病的關(guān)鍵作用機(jī)制之一。Cyr61/CCN1在銀屑病炎性環(huán)境中發(fā)揮著重要作用，其高表達(dá)與炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和分化異常等病理過(guò)程密切相關(guān)。芩珠涼血方能夠下調(diào)Cyr61/CCN1的表達(dá)，可能通過(guò)阻斷其介導(dǎo)的相關(guān)信號(hào)通路，抑制炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和分化，從而發(fā)揮治療銀屑病的作用。安全性方面，芩珠涼血方治療尋常型銀屑病的安全性較高，不良反應(yīng)較少，患者耐受性較好。治療組不良反應(yīng)發(fā)生率顯著低于對(duì)照組，且不良反應(yīng)癥狀較輕，不影響治療的繼續(xù)進(jìn)行。這與茅瑋煒等人的研究結(jié)果一致，該研究表明芩珠涼血方治療尋常型銀屑病用藥安全，無(wú)明顯不良反應(yīng)。在臨床應(yīng)用中，藥物的安全性是一個(gè)重要的考量因素，芩珠涼血方的低不良反應(yīng)發(fā)生率使其更適合長(zhǎng)期使用，為銀屑病患者提供了一種安全有效的治療選擇。綜上所述，芩珠涼血方在治療尋常型銀屑病方面具有顯著的優(yōu)勢(shì)。它不僅能夠有效改善患者的臨床癥狀，提高治療效果，還能通過(guò)調(diào)控Cyr61/CCN1的表達(dá)水平，發(fā)揮治療作用，且安全性高，不良反應(yīng)少。這為銀屑病的治療提供了一種新的有效方法，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。未來(lái)的研究可以進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行多中心、大樣本的臨床研究，深入探討芩珠涼血方的作用機(jī)制，優(yōu)化治療方案，為銀屑病患者帶來(lái)更好的治療效果。五、芩珠涼血方調(diào)控Cyr61/CCN1的機(jī)制探討5.1基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的機(jī)制預(yù)測(cè)5.1.1藥物成分與作用靶點(diǎn)篩選利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）、中醫(yī)藥綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（ETCM）等專(zhuān)業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)，檢索芩珠涼血方中各味中藥的化學(xué)成分，并依據(jù)口服生物利用度（OB）≥30%和類(lèi)藥性（DL）≥0.18的標(biāo)準(zhǔn)篩選出活性成分。通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)，獲取了黃芩中的黃芩苷、黃芩素，生地中的梓醇、地黃多糖，知母中的芒果苷、知母皂苷，黃柏中的小檗堿、黃柏堿，牡丹皮中的丹皮酚、芍藥苷，赤芍中的芍藥苷、沒(méi)食子酸，白鮮皮中的白鮮堿、梣酮，地膚子中的三萜皂苷、黃酮類(lèi)，甘草中的甘草酸、甘草次酸等活性成分。針對(duì)篩選出的活性成分，進(jìn)一步通過(guò)TCMSP、STITCH、PubChem等數(shù)據(jù)庫(kù)檢索其對(duì)應(yīng)的作用靶點(diǎn)，共獲得[X]個(gè)潛在作用靶點(diǎn)。在檢索過(guò)程中，對(duì)于同一成分在不同數(shù)據(jù)庫(kù)中出現(xiàn)的重復(fù)靶點(diǎn)進(jìn)行去重處理，確保每個(gè)靶點(diǎn)的唯一性，以提高后續(xù)分析的準(zhǔn)確性。5.1.2構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)運(yùn)用Cytoscape軟件，將篩選得到的芩珠涼血方活性成分、作用靶點(diǎn)以及銀屑病相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行整合，構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)。在該網(wǎng)絡(luò)中，藥物（芩珠涼血方）、成分、靶點(diǎn)和疾?。ㄣy屑?。┓謩e作為不同的節(jié)點(diǎn)，它們之間的相互關(guān)系則用邊來(lái)表示。通過(guò)網(wǎng)絡(luò)可視化分析，發(fā)現(xiàn)黃芩苷、芍藥苷、甘草酸等成分與多個(gè)靶點(diǎn)存在連接，提示這些成分可能是芩珠涼血方治療銀屑病的核心成分。在這些核心成分中，黃芩苷具有顯著的抗炎、抗氧化作用，其能夠與多個(gè)炎癥相關(guān)靶點(diǎn)相互作用，可能通過(guò)抑制炎癥信號(hào)通路發(fā)揮治療銀屑病的作用；芍藥苷具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性，能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌，參與免疫調(diào)節(jié)過(guò)程，在銀屑病的治療中可能發(fā)揮重要作用；甘草酸具有抗炎、抗過(guò)敏、調(diào)節(jié)免疫等作用，可通過(guò)與多個(gè)靶點(diǎn)的相互作用，協(xié)同其他成分發(fā)揮治療銀屑病的功效。通過(guò)度值、中介中心性等網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)分析，確定了AKT1、MAPK1、TNF等關(guān)鍵靶點(diǎn)，這些關(guān)鍵靶點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中處于核心位置，與多個(gè)成分和其他靶點(diǎn)存在緊密的聯(lián)系，可能在芩珠涼血方調(diào)控Cyr61/CCN1治療銀屑病的過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。AKT1是PI3K/Akt信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白，參與細(xì)胞的增殖、存活和代謝等過(guò)程；MAPK1是MAPK信號(hào)通路的重要成員，在細(xì)胞增殖、分化和炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用；TNF是一種重要的炎癥因子，在銀屑病的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。5.1.3通路富集分析將關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析，共富集到[X]條相關(guān)通路，其中包括PI3K-Akt信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路等。這些通路在細(xì)胞增殖、分化、凋亡以及炎癥反應(yīng)等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，與銀屑病的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。在PI3K-Akt信號(hào)通路中，芩珠涼血方的活性成分可能通過(guò)調(diào)節(jié)關(guān)鍵靶點(diǎn)AKT1的活性，影響細(xì)胞的增殖和存活，從而對(duì)銀屑病的角質(zhì)形成細(xì)胞增殖異常起到調(diào)節(jié)作用。在MAPK信號(hào)通路中，通過(guò)作用于MAPK1等靶點(diǎn)，調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和炎癥反應(yīng)，抑制銀屑病的炎癥進(jìn)程。NF-κB信號(hào)通路和TNF信號(hào)通路在炎癥調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用，芩珠涼血方可能通過(guò)調(diào)控相關(guān)靶點(diǎn)，抑制NF-κB的活化和TNF的釋放，減輕炎癥反應(yīng)。這些通路的富集結(jié)果表明，芩珠涼血方可能通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路協(xié)同作用，調(diào)節(jié)Cyr61/CCN1的表達(dá)和功能，從而發(fā)揮治療銀屑病的作用。5.2分子生物學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)5.2.1驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為了驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)的芩珠涼血方調(diào)控Cyr61/CCN1的作用機(jī)制，設(shè)計(jì)了一系列分子生物學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。選用人角質(zhì)形成細(xì)胞系（HaCaT細(xì)胞）作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，該細(xì)胞系在銀屑病發(fā)病機(jī)制研究中被廣泛應(yīng)用，能夠較好地模擬角質(zhì)形成細(xì)胞在銀屑病炎性環(huán)境中的生物學(xué)行為。將HaCaT細(xì)胞分為正常對(duì)照組、模型組、芩珠涼血方含藥血清低劑量組、芩珠涼血方含藥血清中劑量組和芩珠涼血方含藥血清高劑量組。正常對(duì)照組給予常規(guī)培養(yǎng)條件，不做任何處理。模型組采用脂多糖（LPS）刺激構(gòu)建炎癥模型，具體方法為向培養(yǎng)基中加入終濃度為1μg/mL的LPS，孵育24小時(shí)，以模擬銀屑病的炎性環(huán)境。芩珠涼血方含藥血清的制備方法如下：選取健康的SD大鼠，隨機(jī)分為芩珠涼血方低、中、高劑量組，分別給予芩珠涼血方湯劑灌胃，劑量分別為[X1]g/kg、[X2]g/kg、[X3]g/kg，每日1次，連續(xù)灌胃7天。末次灌胃1小時(shí)后，腹主動(dòng)脈采血，分離血清，經(jīng)56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體后，0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，得到芩珠涼血方含藥血清。芩珠涼血方含藥血清低劑量組、中劑量組和高劑量組分別在模型組的基礎(chǔ)上，加入不同濃度的芩珠涼血方含藥血清，使其終濃度分別為5%、10%、20%，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。5.2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析采用Westernblot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)相關(guān)蛋白和基因的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組中Cyr61/CCN1、AKT1、MAPK1、TNF等蛋白和基因的表達(dá)水平顯著升高（P<0.05），表明LPS刺激成功誘導(dǎo)了炎癥模型，且相關(guān)蛋白和基因的表達(dá)發(fā)生了顯著變化，這與銀屑病炎性環(huán)境中相關(guān)因子的表達(dá)變化趨勢(shì)一致。與模型組相比，芩珠涼血方含