全國職業(yè)院校檢驗檢疫技術(shù)競賽

生物化學(xué)和免疫學(xué)檢驗-血清總蛋白測定+乙肝病毒表面抗體檢測試卷（高職組、本科

組）

一、競賽說明

1.主要考核醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)、衛(wèi)生檢驗與檢疫技術(shù)專業(yè)學(xué)生對生化檢驗和免

疫學(xué)檢驗基本操作技術(shù)的熟練程度和對半自動生化分析儀、酶標(biāo)儀等常規(guī)設(shè)備的

規(guī)范操作能力。

2.本題滿分100分，完成時間55分鐘。

3.獨立完成，不得相互詢問或討論。

4.考核成績?yōu)椴僮鬟^程評分、操作結(jié)果和考核時間評分、職業(yè)素養(yǎng)之和。

5.全部操作過程時間和操作后處理時間計入時間限額，超過規(guī)定時間將終止操

作。

6.設(shè)定項目：血清總蛋白（TP）測定（雙縮胭法）+乙肝病毒表面抗體檢測項

目（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附法）。

二、實驗原理

1.血清總蛋白測定原理：血清蛋白質(zhì)分子中的肽鍵（-CO-NH-）在堿性溶液中能

與試劑中的Cu2+作用生成穩(wěn)定的紫紅色的絡(luò)合物，此絡(luò)合物在540nm處有明顯

的吸收峰，其溶液吸光度在一定濃度范圍內(nèi)與血清（漿）蛋白質(zhì)（TP）含量成正

比，經(jīng)與同樣處理的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液比較，即可求得血清（漿）TP含量。

2.乙肝表面抗體測定原理（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附法）：在微孔板條上預(yù)包

被HBsAg,加入待測樣本及酶標(biāo)抗原（HBsAg-HRP）試劑進(jìn)行孵育：樣本中的HBsAb

與包被抗原和醐標(biāo)抗原形成“包被抗原-抗體-酶標(biāo)抗原”復(fù)合物；洗板后加入酶

底物顯色溶液，復(fù)合物上連接的HRP催化色原底物發(fā)生顯色反應(yīng)。若樣品中無

HBsAb時，不發(fā)生顯色反應(yīng)。

三、實驗器材和試劑

1.血清總蛋白測定：小號試管4只（使用3只，備用1只），試管架，移液槍

1支（規(guī)格5?50可）及配套槍頭、槍頭盒，1ml、2ml刻度吸管各1支，洗耳球

1個，計時器1個，托盤1個。半自動生化分析儀、恒溫水浴箱、銳涔盒、廢液

缸、污物缸、垃圾回收桶、膠水、簽字筆、記號筆等。

2.乙肝病毒表面抗體檢測：微孔板（己用純化HBsAg包被，96孔），洗耳球1

個、試管架1個，手動可調(diào)式移液器（己校正）1把及配套槍頭、槍頭盒、濾紙、

沖洗瓶（內(nèi)裝已經(jīng)稀釋的洗滌液）、標(biāo)記筆、計算器、簽字筆、計時器、恒溫水

浴箱、計時器（孵育專用）、酶標(biāo)儀、消毒洗手液、面盆、抹布、廢液缸、銳器

盒，濾紙，移液槍架、振蕩器、廢液中轉(zhuǎn)箱，醫(yī)療廢物桶（反應(yīng)板/杯）

3.實驗試劑：雙縮版法總蛋白測定試劑盒、乙肝病毒表面抗體檢測試劑盒（含

陶標(biāo)記、成底物顯色溶液、陰性對照、陽性對照）

四、實驗標(biāo)本

血清總蛋白測定建議購買質(zhì)控血清作為標(biāo)本。乙肝病毒表面抗體檢測使用不同

濃度無溶血血清標(biāo)本C

五、操作步驟

1.血清總蛋白測定

取3支潔凈的小試管，按表1操作如下：

TP的操作

加入物空白管（B）標(biāo)準(zhǔn)管（S）測定管（U）

生理鹽水（H1）2500

蛋白標(biāo)準(zhǔn)液（g）0250

血清標(biāo)本（回）0025

雙縮服試劑（ml）2.02.02.0

混勻，37℃水浴lOmin,波長540nm,用半自動化生化分析儀讀其測定值并打

印結(jié)果（以上各加液量及參數(shù)以選用的試劑盒使用要求為準(zhǔn)）。

2.乙肝病毒表面抗體檢測

（1）實驗準(zhǔn)備核對實驗儀器和材料，檢查試劑和標(biāo)本，選取所需反應(yīng)板并做

好標(biāo)記。（設(shè)立空白對照孔1孔，陰性對照2孔，陽性對照2孔。陽性對照用紅

色記號筆，陰性對照用黑色記號筆）。

（2）稀釋濃縮洗液按照說明書要求稀釋濃縮液，混勻備用。（已配制好待用）

（3）加待測標(biāo)本按照既定順序依次加入陰性對照（2孔）、陽性對照（2孔）、

待測標(biāo)本（7孔）各502待測?？瞻讓φ眨?孔）不加。（3min內(nèi)完成）

（4）加酶結(jié)合物每孔用滴瓶滴加1滴（空白孔不加），通過振蕩器充分混勻

(時間30s),封板，置37c水浴箱中孵育25min。(孵育期間同時進(jìn)行總蛋白測

定操作)

(5)洗板取出反應(yīng)板，棄液、拍干，每孔注滿洗滌液，靜置5秒后棄液、甩

干，重復(fù)洗滌5次，在干凈的濾紙上拍干。

(6)加顯色劑每孔先后加顯色劑A、B各1滴，通過振蕩器充分混勻(時間

30s),封板，放置37℃水浴箱中避光孵育lOmin。

(7)終止反應(yīng)每孔加入終止液1滴，混勻。

(8)測定打開電腦軟件進(jìn)行布板、選擇酶標(biāo)儀雙波長(450nm/630nm)比色、

選用空白孔校零，點擊開始，讀取各孔0D值，并打印并粘貼結(jié)果。

全國職業(yè)院校檢驗檢疫技術(shù)競賽

生化檢瞼和免疫學(xué)技術(shù)及檢驗-血清總蛋白測定+乙肝病毒表面抗體檢測答題卷（高職組、本科組）

一、血清總蛋白測定數(shù)據(jù)記錄:

血清總蛋白結(jié)果書寫（小數(shù)點后

打印結(jié)果報告粘貼處

測定結(jié)果兩位）：

說明：打印報告單上選手（只寫場次、組號和工位號，不得寫選手姓名）、

現(xiàn)場裁判都需簽字確認(rèn)。

得分

裁判簽名

二、乙肝表面抗體檢測數(shù)據(jù)記錄與計算

1.數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果計算（將酶標(biāo)儀測試結(jié)果打印并粘貼此處）

結(jié)果粘貼處

得分

裁判簽名

2.計算陽性判定閾值（cut-off）（寫出計算公式及過程，結(jié)果取3位小數(shù)點）