第39講微生物的培養(yǎng)技術(shù)和應(yīng)用1．（2023秋·江蘇揚(yáng)州·高三揚(yáng)州中學(xué)?？茧A段練習(xí)）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說(shuō)法正確的是（

）A．平板涂布時(shí)需在酒精燈火焰旁，打開(kāi)皿蓋放在一邊，用滅菌后的涂布器進(jìn)行涂布B．空白平板使用前需進(jìn)行無(wú)菌鑒定，接種后未長(zhǎng)出菌落的平板可以直接丟棄C．采用稀釋涂布平板計(jì)數(shù)時(shí)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果往往多于原始菌液中微生物數(shù)量D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物【答案】D【分析】微生物常見(jiàn)的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落；②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落?！驹斀狻緼、倒平板時(shí)，用左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，A錯(cuò)誤；B、接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基，也可能有少量微生物，為避免污染環(huán)境，不能直接丟棄，B錯(cuò)誤；C、采用稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法獲得的菌落有可能是由多個(gè)細(xì)胞聚集在一起繁殖形成的，所以往往少于實(shí)際的活菌數(shù)，C錯(cuò)誤；D、利用以尿素為唯一氮源的平板上，若微生物可以產(chǎn)生脲酶，則可以利用脲酶分解尿素氨而獲得氮源生長(zhǎng)，其它不能產(chǎn)生脲酶的微生物則不能生長(zhǎng)，可以把合成脲酶的微生物分離出來(lái)，D正確。故選D。2．（2022·湖北武漢·統(tǒng)考二模）在生活飲用水中如果大腸桿菌含量超標(biāo)，會(huì)造成細(xì)菌性痢疾，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成脫水，甚至?xí)＜吧??？衫帽碇械呐囵B(yǎng)基對(duì)生活飲用水中的大腸桿菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)，下列敘述正確的是（

）成分蛋白胨蔗糖乳糖K2HPO4顯色劑（伊紅美藍(lán)）瓊脂含量10.0g5.0g5.0g2.0g0.2g12.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mLA．根據(jù)用途劃分該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基B．在配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先調(diào)節(jié)pH值，再滅菌后倒平板C．使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要經(jīng)過(guò)消毒處理，以免污染環(huán)境D．為防止雜菌污染，還可以向培養(yǎng)基中添加適量抗生素【答案】B【分析】分析表格可知，該培養(yǎng)基中加入了顯色劑，屬于鑒別培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的碳源有蔗糖、乳糖和蛋白胨，蛋白胨還可提供氮源，在配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先調(diào)節(jié)pH，再滅菌后倒平板，若先滅菌，后調(diào)PH，可能在調(diào)PH的過(guò)程中再次引發(fā)雜菌污染?！驹斀狻緼、該培養(yǎng)基中含伊紅美藍(lán)顯色劑，根據(jù)用途劃分該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基，A錯(cuò)誤；B、在配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先調(diào)節(jié)pH值，再滅菌后倒平板，B正確；C、使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要經(jīng)過(guò)滅菌處理，以免污染環(huán)境，C錯(cuò)誤；D、不可以在培養(yǎng)基中添加抗生素，以免影響大腸桿菌的生長(zhǎng)，D錯(cuò)誤。故選B。3．（2023秋·全國(guó)·高三校聯(lián)考階段練習(xí)）塑料廢棄后難以降解，給人類(lèi)的生存環(huán)境造成極大污染。科學(xué)家從嗜鹽細(xì)菌中找到一種具有塑料的理化特性且易被微生物降解的聚羥基脂肪酸酯(PHA)?？蒲腥藛T從某鹽湖中取水，接種到特殊培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，挑選單菌落并分別擴(kuò)大培養(yǎng)，再檢測(cè)菌的數(shù)目和PHA的產(chǎn)量，最終獲得目標(biāo)菌株。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．實(shí)驗(yàn)用到的特殊培養(yǎng)基中應(yīng)含有較高的鹽分B．挑選的單菌落是由若干嗜鹽細(xì)菌繁殖而來(lái)的C．進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中需加入適量瓊脂D．實(shí)驗(yàn)中，只有接種需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行【答案】A【分析】選擇培養(yǎng)和擴(kuò)大培養(yǎng)：（1）選擇培養(yǎng)：通常根據(jù)菌落的特征選擇菌株，應(yīng)采用固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。（2）擴(kuò)大培養(yǎng)：主要目的是讓菌體快速繁殖和將營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分利用，常采用液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。【詳解】A、由題意可知，科研人員從某鹽湖中取水挑選目的菌株（嗜鹽細(xì)菌），所以實(shí)驗(yàn)用到的特殊培養(yǎng)基中應(yīng)含有較高的鹽分，A正確；B、挑選的單菌落是由單個(gè)嗜鹽細(xì)菌繁殖而來(lái)的，B錯(cuò)誤；C、進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基一般使用液體培養(yǎng)基，無(wú)需加入瓊脂，C錯(cuò)誤；D、實(shí)驗(yàn)中，整個(gè)操作過(guò)程均需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染，D錯(cuò)誤。故選A。4．（2023秋·湖北·高三校聯(lián)考階段練習(xí)）大豆富含蛋白質(zhì)，但其含有的不被人吸收的棉籽糖和水蘇糖卻常使人出現(xiàn)脹氣等不適癥狀。幾千年來(lái)，中國(guó)人在豆子的轉(zhuǎn)化中展現(xiàn)著自己的智慧。湖北多地都有做醬豆的傳統(tǒng)，以大豆為主要原料，依次經(jīng)過(guò)選豆—浸泡—蒸豆—在蓬松的干稻草中自然發(fā)酵—調(diào)味裝壇。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．脹氣可能是腸道微生物分解棉籽糖和水蘇糖產(chǎn)生氣體所致B．黃豆中的蛋白質(zhì)在發(fā)酵中被分解成小分子肽和氨基酸，易被人體吸收C．干稻草可能提供了菌種，且起到吸水和保溫的作用D．醬豆制作中參與發(fā)酵的主要菌體的代謝類(lèi)型最可能為異養(yǎng)厭氧型【答案】D【分析】發(fā)酵是發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)，在發(fā)酵過(guò)程中，要隨時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)液中的微生物數(shù)量、產(chǎn)物濃度等，以了解發(fā)酵進(jìn)程，還要及時(shí)添加必需的營(yíng)養(yǎng)組分，要嚴(yán)格控制溫度、pH和溶解氧等發(fā)酵條件，環(huán)境條件不僅會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)繁殖，而且會(huì)影響微生物代謝物的形成?！驹斀狻緼、由題干信息可知，人體無(wú)法消化吸收棉籽糖和水蘇糖，則脹氣可能是腸道微生物分解棉籽糖和水蘇糖產(chǎn)生氣體所致，A正確；B、發(fā)酵過(guò)程中，微生物產(chǎn)生的蛋白酶，可將黃豆中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸，B正確；C、干稻草上可能有一些菌體的芽孢，且干稻草能起到吸水和保溫的作用，C正確；D、蓬松的干稻草可以提供空氣，所以該過(guò)程中主要菌體的代謝類(lèi)型最可能為異養(yǎng)需氧型，D錯(cuò)誤。故選D。5．（2023春·全國(guó)·高二隨堂練習(xí)）下列有關(guān)微生物培養(yǎng)基的描述，正確的是（）A．微生物在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，可形成肉眼可見(jiàn)的菌落B．各種微生物培養(yǎng)基都含有的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括水、糖類(lèi)、脂肪、蛋白質(zhì)和無(wú)機(jī)鹽C．培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素D．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟依次是計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、倒平板、滅菌【答案】C【分析】微生物培養(yǎng)基的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽等，有的還需要生長(zhǎng)因子等特殊的營(yíng)養(yǎng)；微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵是無(wú)菌操作，篩選和分離微生物常用的接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法?！驹斀狻緼、微生物在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，不能形成菌落，在固體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)才能形成菌落，A錯(cuò)誤；B、微生物培養(yǎng)基的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽等，但一些自養(yǎng)生物培養(yǎng)時(shí)可以不加入有機(jī)碳源，B錯(cuò)誤；C、維生素是乳酸菌生長(zhǎng)繁殖所必須的，在體內(nèi)又不能合成，因此要在培養(yǎng)乳酸菌的培養(yǎng)基中添加維生素，C正確；D、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是：計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板，D錯(cuò)誤。故選C。6．（2023春·全國(guó)·高二課堂例題）下圖表示研究人員在實(shí)驗(yàn)室中使用的分批培養(yǎng)細(xì)菌的方法，下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．尿素分解菌可利用培養(yǎng)基中的尿素是因?yàn)槟芎铣呻迕窧．平板劃線操作中，灼燒接種環(huán)的次數(shù)等于在培養(yǎng)基上劃線區(qū)域數(shù)C．液體選擇培養(yǎng)基通常可用于選擇培養(yǎng)，增加目標(biāo)菌種的濃度D．將三角瓶放在搖床上振蕩培養(yǎng)能提高溶氧量和養(yǎng)料的利用率【答案】B【分析】液體選擇培養(yǎng)基通?？捎糜谶x擇培養(yǎng)，增加目標(biāo)菌種的濃度。將錐形瓶放在搖床上振蕩培養(yǎng)能提高溶氧量和養(yǎng)料的利用率?！驹斀狻緼、尿素分解菌可利用培養(yǎng)基中的尿素是因?yàn)槟芎铣呻迕?，而其他微生物不能合成脲酶故不能分解尿素，A正確；B、平板劃線操作中，每次劃線前灼燒接種環(huán)，最后劃線完成后也需要灼燒接種環(huán)，灼燒接種環(huán)的次數(shù)大于在培養(yǎng)基上劃線區(qū)域數(shù)，B錯(cuò)誤；C、液體選擇培養(yǎng)基可重復(fù)利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，利于菌種的繁殖，通?？捎糜谶x擇培養(yǎng)，增加目標(biāo)菌種的濃度，C正確；D、將三角瓶放在搖床上振蕩培養(yǎng)既能提高溶氧量，提高有氧呼吸的速率，又能提高養(yǎng)料的利用率，D正確。故選B。7．（2023春·全國(guó)·高二課堂例題）下列有關(guān)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)描述錯(cuò)誤的是（）A．土壤中的細(xì)菌，絕大多數(shù)分布在距離地表約3～8cm的土壤中，取樣時(shí)一般鏟去表層土B．測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用102、103、104倍數(shù)的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)C．取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都需要滅菌D．在稀釋土壤溶液的過(guò)程中，每一步都要在火焰旁操作【答案】B【分析】培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源因不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物?！驹斀狻緼、土壤中的細(xì)菌，絕大多數(shù)分布在距離地表約3～8cm的土壤中，因此在取樣時(shí)一般要鏟去表層土，A正確；B、土壤中細(xì)菌比真菌多，在測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量時(shí)，一般選用104、105和106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，B錯(cuò)誤；C、為了防止雜菌污染，取土壤用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都要滅菌，C正確；D、在稀釋土壤溶液的過(guò)程中，為了防止雜菌污染，每一步都要在火焰旁操作，D正確。故選B。8．（2023秋·福建漳州·高三統(tǒng)考階段練習(xí)）纖維素分解菌是一種新型飼料添加劑，能夠提高粗纖維飼料的轉(zhuǎn)化率，為養(yǎng)殖業(yè)提供更多的飼料來(lái)源。研究人員從反芻動(dòng)物糞便中分離篩選纖維素分解菌，步驟如下：

關(guān)于上述實(shí)驗(yàn)的分析正確的是（

）A．可采用干熱滅菌法對(duì)培養(yǎng)基A、B進(jìn)行滅菌B．培養(yǎng)基B中應(yīng)加入纖維素作為唯一氮源C．④能通過(guò)涂布平板法培養(yǎng)獲得單菌落D．乙中透明圈與菌落的直徑比值越小說(shuō)明細(xì)菌分解纖維素能力越強(qiáng)【答案】C【分析】土壤中存在著大量纖維素分解酶，包括真菌、細(xì)菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶。在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長(zhǎng)，其他微生物則不能生長(zhǎng)?！驹斀狻緼、對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌，不能用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌，A錯(cuò)誤；B、纖維素的元素組成是C、H、O，不含N元素，因此培養(yǎng)基B中不能用纖維素作為氮源，B錯(cuò)誤；C、步驟③對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋的目的是將聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，步驟④將稀釋樣液接種得到培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，故通過(guò)③④可實(shí)現(xiàn)將聚集的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，C正確；D、剛果紅與纖維素結(jié)合形成紅色復(fù)合物，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，乙中透明圈與菌落的直徑比值越大說(shuō)明細(xì)菌分解纖維素能力越強(qiáng)，D錯(cuò)誤。故選C。9．（2023秋·湖南·高三校聯(lián)考階段練習(xí)）為了分離和純化高效分解石油的細(xì)菌，科研人員利用被石油污染過(guò)的土壤進(jìn)行下圖A所示的實(shí)驗(yàn)。同學(xué)甲進(jìn)行步驟④的操作，其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖B所示。同學(xué)乙也按照同學(xué)甲的接種方法進(jìn)行了步驟④的操作：將1mL樣品稀釋100倍，在5個(gè)培養(yǎng)基平板上分別接入0.1mL稀釋液，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，無(wú)菌落產(chǎn)生。下列敘述正確的是（

）

A．乙同學(xué)計(jì)算得出每升樣品中的活菌數(shù)約為3.3×108個(gè)B．步驟③與步驟②中培養(yǎng)基成分的最大區(qū)別是步驟③的培養(yǎng)基中石油是唯一碳源C．步驟④甲同學(xué)出現(xiàn)圖B結(jié)果可能的操作失誤是樣品的稀釋程度太低導(dǎo)致D．步驟⑤后取樣測(cè)定石油含量的目的是篩選出能分解石油的細(xì)菌【答案】B【分析】1、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選，可以人為提供有利于目的菌生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度和pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)。在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱(chēng)為選擇培養(yǎng)基，本題中③為以石油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，能分解石油的細(xì)菌可以生長(zhǎng)。2、稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。【詳解】A、乙同學(xué)實(shí)驗(yàn)平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191，數(shù)據(jù)之間差值過(guò)大，應(yīng)分析誤差產(chǎn)生的原因，重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，不能這些數(shù)值去計(jì)算，A錯(cuò)誤；B、該實(shí)驗(yàn)的目的是為了分離和純化高效分解石油的細(xì)菌，因此步驟③是以石油是唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，與步驟②中培養(yǎng)基成分相比，最大的區(qū)別是石油是唯一碳源，B正確；C、步驟④甲同學(xué)出現(xiàn)圖B結(jié)果是菌落分布不均勻，可能的操作失誤是用涂布器涂布平板時(shí)涂布不均導(dǎo)致，C錯(cuò)誤；D、步驟⑤后取樣測(cè)定石油含量的目的是篩選出能高效分解石油的細(xì)菌，D錯(cuò)誤。故選B。10．（2023·湖南永州·統(tǒng)考一模）一般情況下，一定濃度的抗生素會(huì)殺死細(xì)菌，但變異的細(xì)菌可能產(chǎn)生耐藥性。為探究某種抗生素對(duì)細(xì)菌的選擇作用，實(shí)驗(yàn)人員在接種了金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基中放置了含某種抗生素的圓形濾紙片和不含抗生素的圓形濾紙片，一段時(shí)間后測(cè)量濾紙片周?chē)志Φ闹睆健囊志吘壍木渖咸羧〖?xì)菌富集培養(yǎng)，然后重復(fù)上述步驟培養(yǎng)三代，結(jié)果如下表所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

培養(yǎng)代數(shù)平板各區(qū)域?yàn)V紙片周?chē)志Φ闹睆?cm①號(hào)區(qū)域②號(hào)區(qū)域③號(hào)區(qū)域④號(hào)區(qū)域第一代02.272.132.27第二代01.952.021.87第三代01.801.871.78A．一定濃度的抗生素會(huì)誘導(dǎo)細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的變異B．采用稀釋涂布平板法將金黃色葡萄球菌接種到固體培養(yǎng)基上C．平板中①號(hào)區(qū)域的濾紙片不含抗生素，起空白對(duì)照的作用D．隨培養(yǎng)代數(shù)增多，抑菌圈的直徑越小，說(shuō)明細(xì)菌的耐藥性越強(qiáng)【答案】A【分析】1、抗生素是指由微生物（包括細(xì)菌、真菌、放線菌屬）或高等動(dòng)植物在生活過(guò)程中所產(chǎn)生的具有抗病原體或其他活性的一類(lèi)次級(jí)代謝產(chǎn)物，能干擾其他生活細(xì)胞發(fā)育功能的化學(xué)物質(zhì)。抗生素的抑菌或殺菌作用，主要是針對(duì)“細(xì)菌有而人（或其他動(dòng)植物）沒(méi)有”的機(jī)制進(jìn)行殺傷，包含四大作用機(jī)理，即：抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成、增強(qiáng)細(xì)菌細(xì)胞膜通透性、干擾細(xì)菌蛋白質(zhì)合成、抑制細(xì)菌核酸復(fù)制轉(zhuǎn)錄。2、實(shí)驗(yàn)原理：若病原菌對(duì)各種抗生素敏感，在該抗生素紙片周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)透明圈，透明圈越大，說(shuō)明病原菌對(duì)抗生素越敏感，若病原菌對(duì)各種抗生素不敏感，則不會(huì)出現(xiàn)透明圈。根據(jù)題干信息實(shí)驗(yàn)人員在接種了金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基中放置了含某種抗生素的圓形濾紙片和不含抗生素的圓形濾紙片，故抑菌圈直徑越大說(shuō)明耐藥性弱，抑菌圈直徑越小，細(xì)菌耐藥性越強(qiáng)。【詳解】A、細(xì)菌耐藥性的變異是在使用抗生素之前就已存在，一定濃度的抗生素起選擇作用，能夠篩選出具有耐藥性的細(xì)菌，A錯(cuò)誤；B、稀釋涂布平板法可以獲得的單個(gè)菌落且便于計(jì)數(shù)，故采用稀釋涂布平板法將金黃色葡萄球菌接種到固體培養(yǎng)基上，B正確；C、為排除濾紙片對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，應(yīng)增設(shè)空白對(duì)照組，即增加不含抗生素的濾紙片或含無(wú)菌水的濾紙片作為對(duì)照組；平板①號(hào)區(qū)域的濾紙片不含抗生素，起空白對(duì)照的作用，C正確；D、根據(jù)題干信息實(shí)驗(yàn)人員在接種了金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基中放置了含某種抗生素的圓形濾紙片和不含抗生素的圓形濾紙片，故抑菌圈直徑越小，說(shuō)明細(xì)菌的耐藥性越強(qiáng)，題表可知隨培養(yǎng)代數(shù)增多，抑菌圈的直徑越小，說(shuō)明細(xì)菌的耐藥性越強(qiáng)，D正確。故選A。11．（2024·新疆·校聯(lián)考模擬預(yù)測(cè)）某研究小組設(shè)計(jì)了一個(gè)利用作物秸稈生產(chǎn)燃料乙醇的小型實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)流程如圖所示(清水淋洗時(shí)菌T不會(huì)流失)。下列分析錯(cuò)誤的是（

）

A．在粉碎的秸稈中接種菌T是為了將秸稈中的纖維素大量分解B．淋洗液主要為酵母菌的生長(zhǎng)繁殖提供碳源、能源等C．采用濕熱滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)需控制壓力為100kPa，溫度為100℃D．與以糧食為原料發(fā)酵生產(chǎn)乙醇相比，圖中方式能節(jié)約糧食和提高能量利用率【答案】C【分析】果酒的制作離不開(kāi)酵母菌，酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水，在無(wú)氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。故果酒的制作原理是酵母菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精，酵母菌最適宜生長(zhǎng)繁殖的溫度范圍是18~30℃；生產(chǎn)中是否有酒精的產(chǎn)生，可用酸性重鉻酸鉀來(lái)檢驗(yàn)，該物質(zhì)與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色?！驹斀狻緼、菌T能夠分泌纖維素酶，纖維素酶能將纖維素最終分解為葡萄糖，因此在粉碎的秸桿中接種菌T，培養(yǎng)一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn)菌T能夠?qū)⒔蹢U中的纖維素大量分解，A正確；B、采用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母菌，可以用淋洗液為原料制備培養(yǎng)基，淋洗液主要為酵母菌的生長(zhǎng)繁殖提供碳源、能源等，B正確；C、采用濕熱滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)需控制壓力為100kPa，溫度為121℃，C錯(cuò)誤；D、利用作物秸稈生產(chǎn)燃料乙醇與以糧食為原料發(fā)酵生產(chǎn)乙醇相比，能節(jié)約糧食和提高能量利用率，D正確。故選C。12．（2023秋·安徽·高三校聯(lián)考階段練習(xí)）三糖鐵（TS）培養(yǎng)基含有牛肉膏、蛋白陳、蔗糖、乳糖、微量葡萄糖、硫酸亞鐵、氯化鈉、酚紅、瓊脂等成分，可根據(jù)觀察單一細(xì)菌對(duì)三種糖的分解能力及是否產(chǎn)生硫化氫來(lái)鑒別細(xì)菌的種類(lèi)。三糖鐵（TS）瓊脂試驗(yàn)方法是：使用筆直的接種針挑取待測(cè)菌落，將接種針平穩(wěn)刺入三糖鐵固體斜面培養(yǎng)基內(nèi)，然后沿原穿刺途徑慢慢抽出接種針，最后在斜面上進(jìn)行“之”字劃線，36℃下培養(yǎng)18～24h觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。酚紅在酸性條件下顯黃色，在堿性條件下顯紅色。細(xì)菌產(chǎn)生的硫化氫與鐵鹽反應(yīng)生成黑色沉淀。下列敘述正確的是（）A．穿刺或劃線的目的是將純培養(yǎng)物進(jìn)行二次傳代培養(yǎng)，須嚴(yán)格控制交叉污染B．若培養(yǎng)基出現(xiàn)黑色沉淀，可推測(cè)該細(xì)菌不能分解牛肉膏、蛋白C．若細(xì)菌能分解乳糖和葡萄糖而產(chǎn)酸、產(chǎn)CO2，推測(cè)斜面為黃色、底層為紅色且有氣泡D．三糖鐵（TSI）培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基【答案】A【分析】分析題干信息及培養(yǎng)基成分可知，三糖鐵（TSI）培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基，可根據(jù)觀察單一細(xì)菌對(duì)三種糖的分解能力及是否產(chǎn)生硫化氫，來(lái)鑒別細(xì)菌的種類(lèi)?！驹斀狻緼、劃線和穿刺操作一定針對(duì)純培養(yǎng)物，否則實(shí)驗(yàn)操作是無(wú)意義的。劃線或穿刺的目的是將純培養(yǎng)物二次傳代培養(yǎng)，這種操作也見(jiàn)于標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)壯或傳代，整個(gè)操作過(guò)程中要嚴(yán)格規(guī)范操作，嚴(yán)格控制交叉污染，A正確；B、細(xì)菌產(chǎn)生的硫化氫與鐵鹽反應(yīng)生成黑色沉淀，若培養(yǎng)基出現(xiàn)黑色沉淀，可推測(cè)該細(xì)菌能夠分解牛肉膏、蛋白胨，B錯(cuò)誤；C、細(xì)菌分解葡萄糖、乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，使斜面與底層均呈黃色，C錯(cuò)誤；D、三糖鐵（TSI）培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基，D錯(cuò)誤，故選A。13．（2023秋·江西宜春·高三江西省豐城中學(xué)?？茧A段練習(xí)）某同學(xué)欲檢測(cè)消毒餐具中大腸桿菌的數(shù)量是否超標(biāo)，進(jìn)行如下操作：用蒸餾水分3~5次沖洗待檢餐具內(nèi)表面，制成待測(cè)樣液備用；配制伊紅一亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基，將待測(cè)樣液接種于瓊脂培養(yǎng)基上。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．為了確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性，沖洗待檢餐具的蒸餾水應(yīng)該換成無(wú)菌水B．為便于觀察菌落的顏色，應(yīng)將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性C．設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對(duì)照可檢驗(yàn)該鑒別培養(yǎng)基的效果D．生長(zhǎng)在伊紅一亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落具有金屬光澤【答案】C【分析】各種微生物培養(yǎng)基的配方一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。在提供上述幾種主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及O2的需求。例如，在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性?！驹斀狻緼、蒸餾水中可能存在大腸桿菌，對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾，為了確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性，沖洗待檢餐具的蒸餾水應(yīng)該換成無(wú)菌水，A正確；B、大腸桿菌屬于細(xì)菌，在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性，B正確；C、為檢驗(yàn)該鑒別培養(yǎng)基的效果，應(yīng)設(shè)置接種大腸桿菌的伊紅一亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基作對(duì)照，C錯(cuò)誤；D、生長(zhǎng)在伊紅一亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落呈深紫色且具有金屬光澤，D正確。故選C。14．（2023秋·福建三明·高三三明一中校考階段練習(xí)）尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，但若不經(jīng)細(xì)菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物種類(lèi)和數(shù)量繁多，某生物興趣小組完成了“土壤中分解尿素的細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)”的實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中用到的尿素培養(yǎng)基成分如下表所示，具體操作流程如圖所示。請(qǐng)分析回答。KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂1．4g2．1g0．2g10．0g1．0g15．0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL。

(1)在實(shí)驗(yàn)中，下列材料或用具需要滅菌的是，需要消毒的是（填序號(hào)）。①培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿②玻棒、試管、錐形瓶③實(shí)驗(yàn)操作者的雙手④操作空間⑤接種用具(2)培養(yǎng)基中加入尿素的目的是，從作用分析這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基，本實(shí)驗(yàn)還同時(shí)設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，目的是。(3)除了本實(shí)驗(yàn)的接種培養(yǎng)方法外，通常還可以采用方法能將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的；此實(shí)驗(yàn)不選這個(gè)方法的原因是。(4)分解尿素的細(xì)菌生長(zhǎng)所需的氮源和碳源分別來(lái)自培養(yǎng)基中的和，實(shí)驗(yàn)需要振蕩的目的是。(5)該興趣小組在三種稀釋度下吸取0．1mL的菌液涂布平板，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，得到下圖數(shù)據(jù)，則10g土樣中的活菌數(shù)約為個(gè)。

平板1平板2平板3104320342356105198243279106231821【答案】(1)①②⑤③④(2)尿素作為唯一氮源用來(lái)分離分解尿素的細(xì)菌選擇判斷尿素（選擇）培養(yǎng)基是否有篩選作用(3)平板劃線法純培養(yǎng)物平板劃線法不能用于微生物的計(jì)數(shù)(4)尿素葡萄糖使土壤微生物充分釋放并均勻分布在無(wú)菌水中(5)2．4×109【分析】1、選擇培養(yǎng)基的概念是：在微生物學(xué)中，將允許特定微生物種類(lèi)生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱(chēng)為選擇培養(yǎng)基，由于分解尿素的細(xì)菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，分解尿素的菌能以尿素為氮源生長(zhǎng)，而不能分解尿素的菌因缺乏氮源而無(wú)法生長(zhǎng)。2、常用的接種微生物的方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尪鹊木和坎嫉焦腆w瓊脂培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，將聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，獲得由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的菌落。【詳解】（1）消毒是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物；滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿、玻棒、試管、錐形瓶、接種用具需要經(jīng)滅菌處理，實(shí)驗(yàn)操作者的雙手和操作空間消毒處理即可，故在實(shí)驗(yàn)中，所給材料或用具需要滅菌的是①②⑤，需要消毒的是③④。（2）結(jié)合題干“某生物興趣小組完成了“土壤中分解尿素的細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)”的實(shí)驗(yàn)”可知，培養(yǎng)基中加入尿素的目的是尿素作為唯一氮源用來(lái)分離分解尿素的細(xì)菌，從作用分析這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基（允許特定微生物種類(lèi)生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基），本實(shí)驗(yàn)還同時(shí)設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，目的是作為對(duì)照，判斷尿素（選擇）培養(yǎng)基是否有篩選作用。（3）常用的接種微生物的方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，故除了本實(shí)驗(yàn)的接種培養(yǎng)方法外，通常還可以采用平板劃線法方法能將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物；此實(shí)驗(yàn)不選這個(gè)方法的原因是平板劃線法不能用于微生物的計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法可用于微生物的計(jì)數(shù)。（4）碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)，結(jié)合題中所給表格可知，氮源、碳源分別是尿素和葡萄糖；實(shí)驗(yàn)需要振蕩的目的是使土壤微生物充分釋放并均勻分布在無(wú)菌水中。（5）105的稀釋度下取0.1mL涂布的三個(gè)平板上的菌落數(shù)在30~300之間，計(jì)算其平均值為(198+243+279)/3＝240。進(jìn)一步可以換算出1g樣品中活菌數(shù)為（240÷0.1)×105=2.4×109個(gè)，故10g土樣中的活菌數(shù)約為2．4×109個(gè)。15．（2023秋·四川綿陽(yáng)·高三四川省綿陽(yáng)南山中學(xué)?？茧A段練習(xí)）在農(nóng)業(yè)用地中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑（含氮有機(jī)化合物）在土壤中不易降解，長(zhǎng)期使用可污染土壤。為修復(fù)被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細(xì)菌（已知該除草劑在水中溶解度一定，含該除草劑的培養(yǎng)基不透明）。

(1)制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度過(guò)高，需將浸出液進(jìn)行處理。(2)要從富含（或長(zhǎng)期使用）該除草劑的土壤中分離目的菌，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點(diǎn)是：固體培養(yǎng)基且（培養(yǎng)基成分應(yīng)具備的主要特點(diǎn)）。若需要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH，應(yīng)該在各種成分都溶化后且分裝（填“前”或“后”）進(jìn)行。對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，常采用的方法是。(3)圖B、C所示方法能夠純化目的菌株的原因是。如果要對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，則應(yīng)采用的接種方法為。(4)經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基上只出現(xiàn)少量帶有透明帶的菌落，大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的最可能原因是。培養(yǎng)基中也出現(xiàn)了極少量沒(méi)有透明帶的菌落，原因是這些微生物?！敬鸢浮?1)稀釋(2)以除草劑為唯一氮源前高壓蒸汽滅菌(3)連續(xù)劃線可以將聚集的菌體逐步稀釋分散開(kāi)來(lái)，從而獲得由單個(gè)菌體繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體（單菌落）稀釋涂布平板法(4)培養(yǎng)基中缺少這些細(xì)菌可利用的氮源可以利用除草劑分解菌提供的代謝產(chǎn)物作為氮源而生長(zhǎng)繁殖/是固氮微生物（可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈矗痉治觥颗囵B(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)；根據(jù)物理性質(zhì)分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽。在提供上述幾種主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時(shí)需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)則需要提供無(wú)氧的條件?！驹斀狻浚?）制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度過(guò)高，將濃度高的溶液通過(guò)稀釋的方法降低濃度。（2）利用該培養(yǎng)基的目的是篩選能降解除草劑的細(xì)菌，需要使用選擇培養(yǎng)基，即培養(yǎng)基中應(yīng)加入除草劑作為唯一的氮源；調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH應(yīng)在分裝前進(jìn)行。常用高壓蒸汽滅菌對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。（3）圖B、C所示方法為平板劃線法，平板劃線法能夠純化目的菌株的原因是連續(xù)劃線可以將聚集的菌體逐步稀釋分散開(kāi)來(lái)，從而獲得由單個(gè)菌體繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體（單菌落）。用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，可對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。（4）在以該除草劑作為唯一氮源的培養(yǎng)基上，不能降解該除草劑的細(xì)菌（除具有固氮能力的細(xì)菌外）是不能生長(zhǎng)的，因此培養(yǎng)基上只出現(xiàn)少量帶有透明帶的菌落，大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)。培養(yǎng)基中出現(xiàn)了極少量沒(méi)有透明帶的菌落，這些微生物可以利用除草劑分解菌提供的代謝產(chǎn)物作為氮源或這些微生物是固氮微生物，可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈础?．（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來(lái)判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是（

）

A．a(chǎn)點(diǎn)時(shí)取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B．b點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C．b點(diǎn)時(shí)取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D．c點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基【答案】D【分析】篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，要用角蛋白氮源培養(yǎng)基?！驹斀狻垦芯磕康氖呛Y選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此既要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白，所以在c點(diǎn)取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，所以D正確，ABC錯(cuò)誤。故選D。2．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）為避免航天器在執(zhí)行載人航天任務(wù)時(shí)出現(xiàn)微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，需要對(duì)航天器及潔凈的組裝車(chē)間進(jìn)行環(huán)境微生物檢測(cè)。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．航天器上存在適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物B．細(xì)菌形成菌膜粘附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕C．在組裝車(chē)間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品D．采用平板劃線法等分離培養(yǎng)微生物，觀察菌落特征【答案】D【分析】微生物常見(jiàn)的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落?！驹斀狻緼、嗜極微生物適應(yīng)極端環(huán)境的特性使它們有在空間暴露環(huán)境或地外星球環(huán)境中存活的可能，因此航天器上存在適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物，A正確；B、細(xì)菌形成菌膜粘附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕，會(huì)腐蝕艙內(nèi)材料以及設(shè)備線路、元器件，B正確；C、對(duì)航天器及潔凈的組裝車(chē)間進(jìn)行環(huán)境微生物檢測(cè)，需要在組裝車(chē)間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品，C正確；D、航天器及潔凈的組裝車(chē)間環(huán)境微生物很少，分離培養(yǎng)微生物，觀察菌落特征，不需要采用平板劃線法，D錯(cuò)誤。故選D。3．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)脲酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，不合理的是（

）A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌【答案】D【分析】為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，其它微生物在該培養(yǎng)基上因缺乏氮源而不能生長(zhǎng)，可用于分離含脲酶的微生物?！驹斀狻緼、農(nóng)田或公園土壤中含有較多的含脲酶的微生物，A正確；B、為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，B正確；C、當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，C正確；D、在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對(duì)分離的菌種做進(jìn)一步鑒定，D錯(cuò)誤。故選D。4．（2023·北京·統(tǒng)考高考真題）高中生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，下列實(shí)驗(yàn)操作能達(dá)成所述目標(biāo)的是（）A．用高濃度蔗糖溶液處理成熟植物細(xì)胞觀察質(zhì)壁分離B．向泡菜壇蓋邊沿的水槽中注滿水形成內(nèi)部無(wú)菌環(huán)境C．在目標(biāo)個(gè)體集中分布的區(qū)域劃定樣方調(diào)查種群密度D．對(duì)外植體進(jìn)行消毒以杜絕接種過(guò)程中的微生物污染【答案】A【分析】成熟的植物細(xì)胞有一大液泡。當(dāng)細(xì)胞液的濃度小于外界溶液的濃度時(shí)，細(xì)胞液中的水分就透過(guò)原生質(zhì)層進(jìn)入到外界溶液中，由于原生質(zhì)層比細(xì)胞壁的伸縮性大，當(dāng)細(xì)胞不斷失水時(shí)，液泡逐漸縮小，原生質(zhì)層就會(huì)與細(xì)胞壁逐漸分離開(kāi)來(lái)，即發(fā)生了質(zhì)壁分離。當(dāng)細(xì)胞液的濃度大于外界溶液的濃度時(shí)，外界溶液中的水分就透過(guò)原生質(zhì)層進(jìn)入到細(xì)胞液中，液泡逐漸變大，整個(gè)原生質(zhì)層就會(huì)慢慢地恢復(fù)成原來(lái)的狀態(tài)，即發(fā)生了質(zhì)壁分離復(fù)原?！驹斀狻緼、成熟的植物細(xì)胞有中央大液泡，用高濃度蔗糖溶液處理，細(xì)胞會(huì)失水，成熟植物細(xì)胞能發(fā)生質(zhì)壁分離，因此用高濃度蔗糖溶液處理成熟植物細(xì)胞觀察質(zhì)壁分離，A正確；B、向泡菜壇蓋邊沿的水槽中注滿水形成內(nèi)部無(wú)氧環(huán)境，不能創(chuàng)造無(wú)菌環(huán)境，B錯(cuò)誤；C、在用樣方法調(diào)查種群密度時(shí)，應(yīng)該做到隨機(jī)取樣，而不是在目標(biāo)個(gè)體集中分布的區(qū)域劃定樣方調(diào)查種群密度，C錯(cuò)誤；D、對(duì)外植體進(jìn)行消毒可以減少外植體攜帶的微生物，但不能杜絕接種過(guò)程中的微生物污染，D錯(cuò)誤。故選A。5．（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）某同學(xué)想從泡菜汁中篩選耐高鹽乳酸菌，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：取泡菜汁樣品，劃線接種于一定NaCl濃度梯度的培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)得到了單菌落。下列敘述正確的是（

）A．培養(yǎng)基pH需偏堿性 B．泡菜汁需多次稀釋后才能劃線接種C．需在無(wú)氧條件下培養(yǎng) D．分離得到的微生物均為乳酸菌【答案】C【分析】泡菜是利用附生在蔬菜表面的植物乳桿菌、短乳桿菌和明串珠菌等發(fā)酵制成的。這些微生物一般為厭氧、兼性厭氧或微好氧菌。它們的發(fā)酵產(chǎn)物不僅有乳酸，還會(huì)有醇、酯等，因而使泡菜具有特殊的風(fēng)味?！驹斀狻緼、因?yàn)槿樗峋?jīng)過(guò)無(wú)氧呼吸產(chǎn)生乳酸，故其生活的環(huán)境是酸性，培養(yǎng)基pH需偏酸性，A錯(cuò)誤；B、平板劃線接種時(shí)不需要稀釋?zhuān)珺錯(cuò)誤；C、乳酸菌是厭氧型微生物，所以需在無(wú)氧條件下培養(yǎng)，C正確；D、參與泡菜發(fā)酵的微生物有乳桿菌、短乳桿菌和明串珠菌等，所以分離得到的微生物除了乳酸菌，還會(huì)有其他耐高鹽的微生物，D錯(cuò)誤。故選C。6．（2022·天津·高考真題）下圖所示實(shí)驗(yàn)方法的應(yīng)用或原理，不恰當(dāng)?shù)氖牵?/p>

）實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)用原理A．分離綠葉中的色素B．不同色素在層析液中溶解度不同C．細(xì)菌計(jì)數(shù)D．逐步稀釋A．A B．B C．C D．D【答案】C【分析】平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)，在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。【詳解】AB、圖示為分離綠葉中的色素，常用層析法，原理是各色素隨層析液在濾紙上擴(kuò)散速度不同，從而分離色素，溶解度大，擴(kuò)散速度快;溶解度小，擴(kuò)散速度慢，AB正確；CD、圖示為平板劃線法，是分離微生物的一種方法，不能用于細(xì)菌計(jì)數(shù)，是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞，用接種環(huán)在平板表面上作多次由點(diǎn)到線的劃線稀釋而獲得較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，并讓其成長(zhǎng)為單菌落的方法，C錯(cuò)誤，D正確。故選C。7．（2022·海南·統(tǒng)考高考真題）為探究校內(nèi)植物園土壤中的細(xì)菌種類(lèi)，某興趣小組采集園內(nèi)土壤樣本并開(kāi)展相關(guān)實(shí)驗(yàn)。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．采樣時(shí)應(yīng)隨機(jī)采集植物園中多個(gè)不同地點(diǎn)的土壤樣本B．培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，可選用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基C．土壤溶液稀釋倍數(shù)越低，越容易得到單菌落D．鑒定細(xì)菌種類(lèi)時(shí)，除形態(tài)學(xué)鑒定外，還可借助生物化學(xué)的方法【答案】C【分析】1、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法：（1）稀釋涂布平板法（間接）：①當(dāng)樣品的稀釋庋足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌；②通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)來(lái)推測(cè)樣品中大約含有的活菌數(shù)。（2）利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)?！驹斀狻緼、采集植物園中土壤樣本的原則之一是要隨機(jī)采樣，A正確；B、牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基中含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需的碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等，可用于細(xì)菌的培養(yǎng)，B正確；C、土壤溶液稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，才能將聚集的細(xì)菌分散開(kāi)，有助于在培養(yǎng)基表面形成單菌落，C錯(cuò)誤；D、不同種類(lèi)細(xì)菌的理化特性一般不同，鑒定細(xì)菌種類(lèi)時(shí)，除根據(jù)菌落特征進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定外，還可以借助生物化學(xué)的方法進(jìn)行鑒定，D正確。故選C。8．（2023·遼寧·統(tǒng)考高考真題）細(xì)菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細(xì)菌形成的。利用空氣微生物采樣器對(duì)某市人員密集型公共場(chǎng)所采樣并檢測(cè)細(xì)菌氣溶膠的濃度（菌落數(shù)/m3）。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．采樣前需對(duì)空氣微生物采樣器進(jìn)行無(wú)菌處理B．細(xì)菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時(shí)需將平板倒置C．同一稀釋度下至少對(duì)3個(gè)平板計(jì)數(shù)并取平均值D．稀釋涂布平板法檢測(cè)的細(xì)菌氣溶膠濃度比實(shí)際值高【答案】D【分析】稀釋涂布平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個(gè)菌落，即是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開(kāi)，使成單個(gè)細(xì)胞存在（否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)。【詳解】A、為防止雜菌感染，接種前需要對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、微生物采樣器進(jìn)行滅菌，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作者的雙手進(jìn)行消毒，A正確；B、純化培養(yǎng)時(shí)，為防止污染培養(yǎng)基和水分蒸發(fā)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，B正確；C、微生物計(jì)數(shù)時(shí)在同一稀釋度下，應(yīng)至少需要對(duì)3個(gè)菌落數(shù)目在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，C正確；D、使用稀釋涂布平板法對(duì)微生物計(jì)數(shù)，數(shù)值往往偏小，原因是兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，在平板上只能觀察到一個(gè)菌落，D錯(cuò)誤。故選D。9．（2023·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列關(guān)于細(xì)菌和酵母菌實(shí)驗(yàn)的敘述正確的是（）A．通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比B．通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常細(xì)菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過(guò)濾除菌法除菌D．血細(xì)胞計(jì)數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測(cè)定，也可用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定【答案】A【分析】培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。滅菌常用的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。消毒常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消毒法等?！驹斀狻緼、細(xì)菌是原核生物，酵母菌是真核生物，不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣，通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比，A正確；B、通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快，但形成的菌落，不一定細(xì)菌的大于酵母菌的，與細(xì)菌的種類(lèi)有關(guān)，部分細(xì)菌的菌落小于酵母菌，B錯(cuò)誤；C、通常細(xì)菌和酵母菌的培養(yǎng)基都可以用高壓蒸汽滅菌法滅菌，C錯(cuò)誤；D、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板適用于真菌的計(jì)數(shù)，細(xì)菌計(jì)數(shù)板用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定等，D錯(cuò)誤。故選A。10．（2023·山東·高考真題）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說(shuō)法正確的是（

）A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B．平板涂布時(shí)涂布器使用前必須進(jìn)行消毒C．接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物【答案】D【分析】1、培養(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。2、按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。3、消毒和滅菌是兩個(gè)不同的概念，消毒是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物的方法殺死物體表面或內(nèi)部的一部分微生物。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。【詳解】A、不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；B、平板涂布時(shí)涂布器使用前必須浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，這種操作屬于滅菌，不屬于消毒，B錯(cuò)誤；C、使用后的培養(yǎng)基即使未長(zhǎng)出菌落也要在丟棄前進(jìn)行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環(huán)境，C錯(cuò)誤；D、脲酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素獲得氮源而進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而無(wú)法生長(zhǎng)，因此以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物，D正確。故選D。11．（2023·北京·統(tǒng)考高考真題）自然界中不同微生物之間存在著復(fù)雜的相互作用。有些細(xì)菌具有溶菌特性，能夠破壞其他細(xì)菌的結(jié)構(gòu)使細(xì)胞內(nèi)容物釋出?？茖W(xué)家試圖從某湖泊水樣中分離出有溶菌特性的細(xì)菌。(1)用于分離細(xì)菌的固體培養(yǎng)基包含水、葡萄糖、蛋白胨和瓊脂等成分，其中蛋白胨主要為細(xì)菌提供和維生素等。(2)A菌通常被用做溶菌對(duì)象。研究者將含有一定濃度A菌的少量培養(yǎng)基傾倒在固體培養(yǎng)平板上，凝固形成薄層。培養(yǎng)一段時(shí)間后，薄層變渾濁（如圖），表明。(3)為分離出具有溶菌作用的細(xì)菌，需要合適的菌落密度，因此應(yīng)將含菌量較高的湖泊水樣后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上。培養(yǎng)一段時(shí)間后，能溶解A菌的菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)。采用這種方法，研究者分離、培養(yǎng)并鑒定出P菌。(4)為探究P菌溶解破壞A菌的方式，請(qǐng)?zhí)岢鲆粋€(gè)假設(shè)，該假設(shè)能用以下材料和設(shè)備加以驗(yàn)證（主要實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備：P菌、A菌、培養(yǎng)基、圓形濾紙小片、離心機(jī)和細(xì)菌培養(yǎng)箱）。【答案】(1)氮源、碳源(2)A菌能在培養(yǎng)平板中生長(zhǎng)繁殖(3)稀釋溶菌圈(4)假設(shè)P菌通過(guò)分泌某種化學(xué)物質(zhì)使A菌溶解破裂【分析】微生物的營(yíng)養(yǎng)成分主要有碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽等。微生物的培養(yǎng)基按其特殊用途可分為選擇性培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基三類(lèi)?！驹斀狻浚?）蛋白胨主要為細(xì)菌提供氮源、碳源和維生素等。（2）將含有一定濃度A菌的少量培養(yǎng)基傾倒在固體培養(yǎng)平板上，凝固形成薄層。培養(yǎng)一段時(shí)間后，薄層變渾濁，表明A菌能在培養(yǎng)平板中生長(zhǎng)繁殖。（3）將含菌量較高的湖泊水樣稀釋后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上。培養(yǎng)一段時(shí)間后，能溶解A菌的菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)溶菌圈。（4）根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備，圓形濾紙小片可用于吸收某種物質(zhì)，離心機(jī)可用于分離菌體和細(xì)菌分泌物，為探究P菌溶解破壞A菌的方式，可假設(shè)P菌通過(guò)分泌某種化學(xué)物質(zhì)使A菌溶解破裂。12．（2022·湖南·高考真題）黃酒源于中國(guó)，與啤酒、葡萄酒并稱(chēng)世界三大發(fā)酵酒。發(fā)酵酒的釀造過(guò)程中除了產(chǎn)生乙醇外，也產(chǎn)生不利于人體健康的氨基甲酸乙酯（EC）。EC主要由尿素與乙醇反應(yīng)形成，各國(guó)對(duì)酒中的EC含量有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)某黃酒釀制工藝流程如圖所示，圖中加入的菌種a是，工藝b是（填“消毒”或“滅菌”），采用工藝b的目的是。(2)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入指示劑，根據(jù)顏色變化，可以初步鑒定分解尿素的細(xì)菌。尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶可用于降解黃酒中的尿素，脲酶固定化后穩(wěn)定性和利用效率提高，固定化方法有（答出兩種即可）。(3)研究人員利用脲酶基因構(gòu)建基因工程菌L，在不同條件下分批發(fā)酵生產(chǎn)脲酶，結(jié)果如圖所示。推測(cè)是決定工程菌L高脲酶活力的關(guān)鍵因素，理由是。(4)某公司開(kāi)發(fā)了一種新的黃酒產(chǎn)品，發(fā)現(xiàn)EC含量超標(biāo)。簡(jiǎn)要寫(xiě)出利用微生物降低該黃酒中EC含量的思路?！敬鸢浮?1)酵母菌消毒目的是殺死啤酒的中大多數(shù)微生物，并延長(zhǎng)其保存期(2)酚紅化學(xué)結(jié)合法、包埋法、物理吸附法(3)pH兩圖中脲酶活力隨時(shí)間變化的曲線基本一致，而維持pH在6.5不變與pH從6.5降為4.5相比較而言，酶活力值始終要高(4)方案一：配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生EC降解酶的細(xì)菌，從細(xì)菌中分離得到EC降解酶，純化的EC降解酶進(jìn)行固定化操作后，加入該黃酒中。方案二：配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌，從細(xì)菌中分離得到脲酶，純化的脲酶進(jìn)行固定化操作后，在黃酒工藝流程的發(fā)酵環(huán)節(jié)中加入?！痉治觥坑捎诩?xì)菌分解在尿素的過(guò)程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，所以可以用檢測(cè)pH的變化的方法來(lái)判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，pH升高，指示劑變紅?！驹斀狻浚?）制造果酒利用的是酵母菌的無(wú)氧呼吸，加入的菌種a是酵母菌。過(guò)濾能除去啤酒中部分微生物，工藝b是消毒，目的是殺死啤酒的中大多數(shù)微生物，并延長(zhǎng)其保存期。（2）由于細(xì)菌分解尿素的過(guò)程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，所以可以用檢測(cè)pH的變化的方法來(lái)判斷尿素是否被分解，故在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可以鑒別尿素分解菌。固定化酶實(shí)質(zhì)上是將相應(yīng)酶固定在不溶于水的載體上，實(shí)現(xiàn)酶的反復(fù)利用