第50講動(dòng)物細(xì)胞工程1.闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是從動(dòng)物體獲得相關(guān)組織，分散成單個(gè)細(xì)胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的過程。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。2.闡明動(dòng)物細(xì)胞核移植一般是將體細(xì)胞核移入一個(gè)去核的卵母細(xì)胞中，并使重組細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的過程。3.闡明動(dòng)物細(xì)胞融合是指通過物理、化學(xué)或生物學(xué)等手段，使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。4.概述細(xì)胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)。5.簡(jiǎn)述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值?？键c(diǎn)1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1．原理細(xì)胞增殖。2．地位動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)包括動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞融合等，其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。3．培養(yǎng)條件(1)營(yíng)養(yǎng)：除糖類、氨基酸、無機(jī)鹽和維生素等細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，通常還需加入血清等一些天然成分。(2)無菌、無毒的環(huán)境：對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理以及在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作。培養(yǎng)液需要定期更換，以便清除代謝物，防止細(xì)胞代謝物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。(3)溫度、pH和滲透壓：哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度多以(36.5±0.5)℃為宜，多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4，此外，滲透壓也是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要考慮的一個(gè)重要環(huán)境參數(shù)。(4)氣體環(huán)境：95%空氣＋5%CO2(維持培養(yǎng)液的pH)。4．過程(如圖)1．(選擇性必修3P45“圖2-12”)用胰蛋白酶處理動(dòng)物組織，長(zhǎng)時(shí)間后細(xì)胞會(huì)(填“會(huì)”或“不會(huì)”)被消化，原因是二、干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用2．(選擇性必修3P46“相關(guān)信息”)科學(xué)家借助載體將特定基因?qū)爰?xì)胞中，直接將特定蛋白導(dǎo)入細(xì)胞中或者用小分子化合物等來誘導(dǎo)形成iPS細(xì)胞。1．使用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，通常需要加入血清等天然成分。(√)2．培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞一般使用液體培養(yǎng)基。(√)3．已分化的T淋巴細(xì)胞也能被誘導(dǎo)為iPS細(xì)胞。(√)4．一般認(rèn)為，成體干細(xì)胞具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力。(×)提示：一般認(rèn)為，成體干細(xì)胞具有組織特異性，只能分化成特定的細(xì)胞或組織。5．神經(jīng)干細(xì)胞在治療阿爾茨海默病方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。(√)艾弗里在證明DNA是遺傳物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)中，通過分別向不同實(shí)驗(yàn)組加入各類酶來確認(rèn)“轉(zhuǎn)化因子”的化學(xué)本質(zhì)，利用了自變量控制的減法原理。參考此方法，如果要了解Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4基因在誘導(dǎo)iPS細(xì)胞時(shí)，每個(gè)基因作用的相對(duì)大小，該如何進(jìn)行實(shí)驗(yàn)？請(qǐng)你給出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的思路。依次去掉1個(gè)基因，將其他3個(gè)基因轉(zhuǎn)入小鼠成纖維細(xì)胞中，通過與轉(zhuǎn)入4個(gè)基因的小鼠成纖維細(xì)胞的誘導(dǎo)情況進(jìn)行比較，來推測(cè)缺失的基因?qū)φT導(dǎo)iPS細(xì)胞的影響，進(jìn)而判斷每個(gè)基因作用的相對(duì)大小。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1．(2025·廣東梅州模擬)下圖為動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過程示意圖，下列敘述錯(cuò)誤的是()A．步驟①的操作需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行B．步驟②應(yīng)向錐形瓶中加入無菌水制成細(xì)胞懸液C．步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理D．步驟③到④分裝時(shí)需調(diào)整到合適的細(xì)胞密度B[步驟①為將組織塊剪碎，需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行操作，A正確；步驟②應(yīng)向錐形瓶中加入培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液，B錯(cuò)誤；由于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)常出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理，且需要更換培養(yǎng)液，C正確；步驟③到④分裝時(shí)需調(diào)整到合適的細(xì)胞密度，因?yàn)槿裘芏冗^大，仍會(huì)存在接觸抑制，D正確。]干細(xì)胞的培養(yǎng)及其應(yīng)用2．通過大量實(shí)驗(yàn)，在多種候選基因中篩選得出Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc(簡(jiǎn)稱SKOM)4種基因。將這些基因?qū)敫叨确只捏w細(xì)胞，可使其重編程，形成類似胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)的一種細(xì)胞類型，稱為iPS細(xì)胞。下列說法正確的是()A．不同類型的干細(xì)胞分裂和分化的潛能基本相同B．胚胎干細(xì)胞因需要從胚胎中獲取涉及倫理問題而限制了其應(yīng)用C．誘導(dǎo)產(chǎn)生iPS細(xì)胞的過程中需用到基因工程技術(shù)和核移植技術(shù)D．iPS細(xì)胞和ES細(xì)胞具有相同的基因組成且都能體現(xiàn)出細(xì)胞的全能性B[不同類型的干細(xì)胞，它們的分化潛能是有差別的，如胚胎干細(xì)胞的分化潛能較大，A錯(cuò)誤；胚胎干細(xì)胞全能性較高，但會(huì)涉及倫理問題，其在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用有一定的限制，B正確；據(jù)題意將Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因?qū)敫叨确只捏w細(xì)胞可使其重編程，形成iPS細(xì)胞，需要用到基因工程，不使用核移植技術(shù)，C錯(cuò)誤；ES細(xì)胞直接從胚胎中提取，iPS細(xì)胞是通過體細(xì)胞導(dǎo)入Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因誘導(dǎo)產(chǎn)生，基因組成不同，但是都能體現(xiàn)出細(xì)胞全能性，D錯(cuò)誤。]考點(diǎn)2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1．概念：使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。2．方法：PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法等。3．原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性。4．結(jié)果：形成具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。5．意義：突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能；成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。1．(選擇性必修3P49“旁欄思考”)19世紀(jì)30年代，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)患肺結(jié)核、天花和麻疹等疾病的病人的病理組織中存在多核細(xì)胞，這些多核細(xì)胞的來源可能是患者體內(nèi)的病毒直接誘導(dǎo)多個(gè)細(xì)胞融合而形成多核細(xì)胞。二、單克隆抗體及其應(yīng)用1．制備原理：一個(gè)B淋巴細(xì)胞只能分泌一種特異性抗體，B淋巴細(xì)胞在體外不能(填“能”或“不能”)無限增殖；骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖；B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞，既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體。2．制備過程3．優(yōu)點(diǎn)(1)能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合。(2)可以大量制備。4．應(yīng)用(1)被廣泛用作診斷試劑，在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮重要的作用。(2)運(yùn)載藥物，形成抗體—藥物偶聯(lián)物，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。(3)用于治療疾病。2．(選擇性必修3P50“思考·討論”)ADC中抗體的作用是通過特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞。1．制備肝細(xì)胞懸液時(shí)先用剪刀剪碎肝組織，再用胃蛋白酶處理。(×)提示：制備肝細(xì)胞懸液時(shí)先用剪刀剪碎肝組織，再用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理。2．每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只能分泌一種特異性抗體。(√)3．在體外培養(yǎng)條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞是不可能無限增殖的。(√)4．單克隆抗體能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，且可大量制備。(√)5．動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的原理都涉及細(xì)胞膜的流動(dòng)性。(√)已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。小鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管只有D途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加入聚乙二醇促融，獲得雜種細(xì)胞。請(qǐng)根據(jù)以上信息，設(shè)計(jì)一種方法(不考慮機(jī)械方法)，從培養(yǎng)液中篩選出雜交瘤細(xì)胞，并寫出其依據(jù)的原理。向培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞，因?yàn)榧尤氚被堰屎?，使D途徑阻斷，僅有D途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖，但人的淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜交瘤細(xì)胞可以利用淋巴細(xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖。動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1．(2025·廣東深圳模擬)某些腫瘤細(xì)胞表面的PD-L1與細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)表面的PD-1結(jié)合，能抑制CTL的免疫活性，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞免疫逃逸。將化療藥物與PD-L1單克隆抗體結(jié)合，形成抗PD-L1的偶聯(lián)藥物(抗PD-L1-ADC)，既可阻斷PD-1與PD-L1結(jié)合，恢復(fù)CTL的活性，又能使化療藥物靶向腫瘤細(xì)胞，從而達(dá)到治療目的，流程如圖所示。下列說法錯(cuò)誤的是()A．通過步驟①誘導(dǎo)形成的細(xì)胞可能有部分不能產(chǎn)生抗體B．通過步驟②篩選后能生長(zhǎng)的細(xì)胞是雜交瘤細(xì)胞C．步驟③中進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗原檢測(cè)，可獲得目的細(xì)胞D．通過步驟④得到的單克隆抗體可使化療藥物靶向腫瘤細(xì)胞C[經(jīng)步驟①誘導(dǎo)融合的細(xì)胞有同種核兩兩融合和不同核融合細(xì)胞，形成的細(xì)胞可能有部分不能產(chǎn)生抗體，需要經(jīng)過特定的選擇培養(yǎng)基篩選，A正確；步驟②經(jīng)選擇培養(yǎng)基篩選得到的雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量增殖又能產(chǎn)生抗體，B正確；步驟③為克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)過步驟③可最終篩選得到符合要求的雜交瘤細(xì)胞，C錯(cuò)誤；抗體能與抗原發(fā)生特異性結(jié)合，步驟④得到的PD-L1-ADC中的抗體能與腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合，將藥物帶到腫瘤細(xì)胞，D正確。]單克隆抗體的制備及應(yīng)用2．(2023·湖北卷改編)某病毒對(duì)動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴(yán)重。我國(guó)學(xué)者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來制備單克隆抗體，以期快速檢測(cè)該病毒，其主要技術(shù)路線如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：(1)添加脂溶性物質(zhì)PEG可促進(jìn)細(xì)胞融合，該過程中PEG對(duì)細(xì)胞膜的作用是__________________________________________________________________。(2)在雜交瘤細(xì)胞篩選過程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基(如HAT培養(yǎng)基)，該培養(yǎng)基對(duì)__________________和__________________生長(zhǎng)具有抑制作用。(3)單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進(jìn)行雜交，其目的是___________________________________________________________________________。(4)構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用DNA連接酶。下列屬于DNA連接酶底物的是________。解析：(1)脂溶性物質(zhì)PEG可使細(xì)胞接觸處的磷脂分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。(2)在雜交瘤細(xì)胞篩選過程中，用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)。(3)單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進(jìn)行雜交，是運(yùn)用了抗原—抗體雜交技術(shù)，抗體檢測(cè)呈陽性的細(xì)胞，即為所需的雜交瘤細(xì)胞。(4)DNA連接酶能連接DNA片段，脫氧核苷酸的磷酸基團(tuán)位于5′端，羥基(—OH)位于3′端，①②③脫氧核苷酸鏈的兩端基團(tuán)有誤；DNA連接酶能催化合成磷酸二酯鍵，即將一條脫氧核苷酸鏈的5′端的磷酸基團(tuán)與另一條脫氧核苷酸鏈的3′端的—OH相連，④符合題意。答案：(1)使細(xì)胞接觸處的磷脂分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合(2)未融合的親本細(xì)胞融合的具有同種核的細(xì)胞(3)通過抗體檢測(cè)呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞(4)④考點(diǎn)3動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物一、動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)1．概念：將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中，使這個(gè)重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物。2．原理：動(dòng)物細(xì)胞核的全能性。3．分類(1)胚胎細(xì)胞核移植。(2)體細(xì)胞核移植。4．體細(xì)胞核移植的過程1．(選擇性必修3P53“圖2-18”)通常用去核的卵母細(xì)胞作為受體的原因是二、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景及存在的問題前景畜牧業(yè)加速家畜遺傳改良進(jìn)程、促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育保護(hù)瀕危物種前景醫(yī)藥衛(wèi)生①作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)醫(yī)用蛋白；②轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物的細(xì)胞、組織或器官可以用于異種移植；③人核移植胚胎干細(xì)胞，經(jīng)過誘導(dǎo)分化能形成相應(yīng)的細(xì)胞、組織或器官，可用于器官移植問題①該技術(shù)成功率非常低；②絕大多數(shù)克隆動(dòng)物存在健康問題，許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷2．(選擇性必修3P54“相關(guān)信息”)目前動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作法。也可采用梯度離心、紫外線短時(shí)間照射和化學(xué)物質(zhì)處理等方法。這些方法是在沒有穿透卵母細(xì)胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性。1．體細(xì)胞核移植時(shí)，去核卵母細(xì)胞的“核”是指紡錘體。(×)提示：去核卵母細(xì)胞的“核”是指紡錘體—染色體復(fù)合物。2．非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的體細(xì)胞核移植非常困難。(√)3．應(yīng)用體細(xì)胞核移植技術(shù)生出的犢牛與供體奶牛遺傳物質(zhì)完全相同。(×)提示：應(yīng)用體細(xì)胞核移植技術(shù)生出的犢牛與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同。4．目前動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是采用化學(xué)物質(zhì)處理。(×)提示：目前動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作法。5．體細(xì)胞核移植技術(shù)有望增加瀕危物種的存活數(shù)量。(√)6．動(dòng)物體細(xì)胞核移植過程中，從屠宰場(chǎng)收集牛卵巢，采集卵母細(xì)胞，可直接用于實(shí)驗(yàn)。(×)提示：采集的卵母細(xì)胞，都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)到MⅡ期才可使用。為了探究蛋白酶抑制劑MG-132在高產(chǎn)奶牛核移植過程中的作用，研究人員在核移植整個(gè)過程中添加5μmol·L－1MG-132，操作結(jié)束后再進(jìn)行激活，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表。MG-132核移植細(xì)胞個(gè)數(shù)卵裂率桑葚胚率囊胚率不添加5035/5025/357/25添加5037/5029/3711/29注：同列數(shù)據(jù)之間差值<0.05表示差異不顯著，>0.05表示差異顯著。分析表中數(shù)據(jù)，表述該實(shí)驗(yàn)的結(jié)論。結(jié)論：蛋白酶抑制劑MG-132對(duì)核移植細(xì)胞的卵裂率無顯著影響，但可以顯著提高核移植細(xì)胞的桑葚胚率和囊胚率。動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)及應(yīng)用(2025·廣東深圳模擬)2017年，我國(guó)科學(xué)家首次培育出體細(xì)胞克隆猴。2023年11月，我國(guó)首只全流程國(guó)產(chǎn)化培育的克隆貓?jiān)谏綎|青島誕生，這表明我國(guó)在動(dòng)物克隆領(lǐng)域具有了完整的產(chǎn)業(yè)鏈，將進(jìn)一步提升我國(guó)在全球生物醫(yī)療領(lǐng)域的地位和影響力。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．該克隆貓的培育過程涉及體外受精和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)B．核移植過程形成的重構(gòu)胚，具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力C．與哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核移植相比，胚胎細(xì)胞核移植更易成功D．構(gòu)建特定疾病的克隆動(dòng)物模型有利于相應(yīng)疾病藥物的開發(fā)A[該克隆貓的培育過程涉及細(xì)胞核移植技術(shù)、胚胎移植技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)等，不涉及體外受精技術(shù)，A錯(cuò)誤；核移植過程形成的重構(gòu)胚，具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力，B正確；動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，細(xì)胞核全能性更容易表達(dá)，與動(dòng)物體細(xì)胞核移植相比，胚胎細(xì)胞核移植更容易成功，C正確；克隆特定疾病動(dòng)物模型，可以為該疾病的致病機(jī)制和開發(fā)相應(yīng)的藥物提供強(qiáng)有力的證據(jù)，為疾病治療提供幫助，D正確。]課時(shí)分層作業(yè)(五十)1．(2025·廣東名校聯(lián)考)動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)中能用作受體細(xì)胞的通常有MⅡ期卵母細(xì)胞和受精卵。早期核移植技術(shù)中常用受精卵，后來基本上用MⅡ期卵母細(xì)胞取代了受精卵，主要原因是兩者的()A．細(xì)胞大小不同B．基因數(shù)目不同C．染色體形態(tài)不同D．細(xì)胞質(zhì)環(huán)境不同D[動(dòng)物細(xì)胞核移植中受體細(xì)胞主要提供細(xì)胞繼續(xù)分裂、分化并發(fā)育成完整個(gè)體的細(xì)胞質(zhì)環(huán)境，所以受精卵和MⅡ期卵母細(xì)胞作為受體的區(qū)別主要是細(xì)胞質(zhì)環(huán)境不同，D符合題意。]2．腫瘤是機(jī)體細(xì)胞異常增生形成的一類疾病，最突出的特點(diǎn)是在身體局部形成腫塊。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)是研究抗癌藥檢測(cè)的重要手段，研究人員從寄主為夾竹桃的紅花桑寄生葉中提取一種物質(zhì)——Nispex，在兩組相同的培養(yǎng)瓶中裝入等量的癌細(xì)胞懸浮液，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組做相關(guān)處理后，一段時(shí)間后觀察腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和細(xì)胞凋亡率。下列分析錯(cuò)誤的是()A．腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的原理是細(xì)胞增殖B．腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)過程中需加入抗生素以防止雜菌污染C．實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組需分別加入一定量的Nispex和等量蒸餾水D．若實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組凋亡率高，則Nispex具有抗腫瘤的作用C[動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的原理是細(xì)胞增殖，A正確；通常在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中加一定量的抗生素，以防止培養(yǎng)過程中的雜菌污染，B正確；對(duì)照組加入等量生理鹽水，C錯(cuò)誤；實(shí)驗(yàn)組中癌細(xì)胞的凋亡率比對(duì)照組凋亡率高，則說明Nispex具有抗腫瘤的作用，D正確。]3．雙特異性抗體(BsAb)是一種能夠同時(shí)結(jié)合兩種抗原的抗體。CD19和CD47是淋巴瘤細(xì)胞廣泛表達(dá)的表面標(biāo)記物(CD19在B細(xì)胞表面普遍存在，CD47在正常組織細(xì)胞上普遍存在)。研究人員將兩種產(chǎn)生不同抗體的雜交瘤細(xì)胞融合成雙雜交瘤細(xì)胞，最終得到了能同時(shí)結(jié)合CD19和CD47的BsAb，它可以結(jié)合同一靶細(xì)胞上兩種不同的抗原，通過這種“雙靶向”模式增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性，在體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)中均可顯著殺傷淋巴瘤細(xì)胞。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．同時(shí)注射2種抗原后提取B細(xì)胞，易得大量同時(shí)分泌兩種抗體的漿細(xì)胞B．獲得BsAb的過程中，篩選雙雜交瘤細(xì)胞的依據(jù)是抗原抗體的特異性結(jié)合C．使用BsAb治療對(duì)正常細(xì)胞的損傷小于聯(lián)合使用CD19單抗和CD47單抗D．若BsAb的部分結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，可能會(huì)出現(xiàn)治療效果降低的情況A[漿細(xì)胞不能同時(shí)分泌兩種抗體，一個(gè)漿細(xì)胞只能分泌一種相應(yīng)的抗體，A錯(cuò)誤；雙雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生兩種特異性抗體，根據(jù)抗原與抗體可特異性結(jié)合，可篩選出能產(chǎn)生抗CD19和CD47的雙雜交瘤細(xì)胞，B正確；CD19在B細(xì)胞表面普遍存在，CD47在正常組織細(xì)胞上普遍存在，使用BsAb治療，可識(shí)別同時(shí)具有CD19和CD47的淋巴瘤細(xì)胞，能特異性殺傷淋巴瘤細(xì)胞，而聯(lián)合使用CD19單抗和CD47單抗，能殺傷淋巴瘤細(xì)胞的同時(shí)，也可殺傷B細(xì)胞和正常細(xì)胞，因此使用BsAb治療對(duì)正常細(xì)胞的損傷小于聯(lián)合使用CD19單抗和CD47單抗，C正確；若BsAb的部分結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，識(shí)別能力減弱，可能會(huì)出現(xiàn)治療效果降低的情況，D正確。]4．(2025·廣東深圳模擬)呼吸道合胞病毒(RSV)是一種引起下呼吸道感染的RNA病毒。科研人員選取病毒NS2基因獲得具有免疫原性的NS2蛋白，利用該蛋白及小鼠制備獲得了四株能分泌不同單克隆抗體的細(xì)胞系，為后續(xù)建立RSV檢測(cè)系統(tǒng)提供了實(shí)驗(yàn)材料。下列說法錯(cuò)誤的是()A．為獲得更多的B淋巴細(xì)胞，需向小鼠多次注射NS2蛋白B．用NS2蛋白可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生能分泌多種抗體的B淋巴細(xì)胞C．若要區(qū)分上述四株細(xì)胞系，可用NS2蛋白進(jìn)行抗體檢測(cè)D．單克隆抗體可準(zhǔn)確識(shí)別抗原的細(xì)微差異并能夠大量制備C[給小鼠多次注射NS2蛋白是為了刺激機(jī)體產(chǎn)生更多的已免疫的B淋巴細(xì)胞，A正確；由題意可知，用NS2蛋白可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生能分泌多種抗體的B淋巴細(xì)胞，B正確；四株細(xì)胞系均是利用NS2蛋白獲得的，所分泌的抗體可以和NS2蛋白的不同部位結(jié)合，區(qū)分上述四株細(xì)胞系，不能用NS2蛋白進(jìn)行抗體檢測(cè)，C錯(cuò)誤；單克隆抗體可準(zhǔn)確識(shí)別抗原的細(xì)微差異，與相應(yīng)的抗原特異性結(jié)合，并且可以大量制備，D正確。]5．單克隆抗體在疾病診斷治療和病原體鑒定中發(fā)揮重要作用。下列敘述正確的是()A．將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后就獲得了產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系B．單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞系所產(chǎn)生的不同于天然抗體的人工合成生物分子C．將細(xì)胞毒素與單克隆抗體結(jié)合可以實(shí)現(xiàn)特異性識(shí)別腫瘤抗原并殺傷腫瘤細(xì)胞D．將一種滅活病原體作為疫苗接種人體后會(huì)產(chǎn)生針對(duì)抗原的特異性單克隆抗體C[將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后就獲得了產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞系，但不是一種抗體，A錯(cuò)誤；單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞系所產(chǎn)生的與天然抗體相同生物分子，B錯(cuò)誤；將細(xì)胞毒素與單克隆抗體結(jié)合可以實(shí)現(xiàn)特異性識(shí)別腫瘤抗原并殺傷腫瘤細(xì)胞，C正確；將一種滅活病原體作為疫苗接種人體后會(huì)產(chǎn)生針對(duì)抗原的特異性的抗體，但不是單克隆抗體，單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的，D錯(cuò)誤。]6．我國(guó)科學(xué)家攻堅(jiān)克難，經(jīng)過多年反復(fù)試驗(yàn)，成功培育出全球首例體細(xì)胞克隆猴(2n＝54)，技術(shù)流程如圖所示。下列敘述正確的是()A．重構(gòu)胚細(xì)胞中含有4個(gè)染色體組，108條染色體B．克隆猴的遺傳物質(zhì)全部來自胎猴的體細(xì)胞C．組蛋白的甲基化和乙酰化都不利于細(xì)胞全能性的體現(xiàn)D．對(duì)重構(gòu)胚進(jìn)行基因編輯可獲得用于研究的突變型克隆猴D[根據(jù)題干和題圖可知，重構(gòu)胚細(xì)胞中含有2個(gè)染色體組，54條染色體，A錯(cuò)誤；去核卵母細(xì)胞中也含有遺傳物質(zhì)，因此克隆猴的遺傳物質(zhì)來自胎猴的體細(xì)胞和母猴的卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，B錯(cuò)誤；組蛋白的甲基化不利于細(xì)胞全能性的體現(xiàn)，而乙酰化有利于細(xì)胞全能性的體現(xiàn)，C錯(cuò)誤；對(duì)重構(gòu)胚進(jìn)行基因編輯可改變其基因，從而獲得用于研究的突變型克隆猴，D正確。]7．成體組織細(xì)胞能夠被用于兩種不同意義的“克隆”，具體流程如圖所示。下列有關(guān)克隆的敘述錯(cuò)誤的是()A．圖中含“紡錘體”的細(xì)胞為MⅡ期的卵母細(xì)胞B．經(jīng)“細(xì)胞融合”形成的重組細(xì)胞中，細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)來自成年母體的卵母細(xì)胞和另一成體組織細(xì)胞C．圖中“早期胚胎”內(nèi)部的空腔為囊胚腔，此時(shí)期胚胎可進(jìn)行孵化過程D．圖中兩種“克隆”均需要經(jīng)過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和胚胎移植等過程D[應(yīng)將卵母細(xì)胞培養(yǎng)至MⅡ期，再通過顯微操作去核，因此圖中含有“紡錘體”的細(xì)胞是處于MⅡ期的卵母細(xì)胞，A正確；由圖可知，重組細(xì)胞是由成體組織細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞形成的，因此經(jīng)“細(xì)胞融合”形成的重組細(xì)胞中，細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)來自成年母體的卵母細(xì)胞和另一成體組織細(xì)胞，B正確；圖中“早期胚胎”是囊胚期胚胎，其內(nèi)部的空腔為囊胚腔，囊胚可進(jìn)行孵化過程，即囊胚進(jìn)一步擴(kuò)大，導(dǎo)致透明帶破裂，胚胎從其中伸展出來，C正確；治療性克隆最終只獲得細(xì)胞或組織，不需要經(jīng)過胚胎移植過程獲得個(gè)體，D錯(cuò)誤。]8．現(xiàn)代生物工程的操作常常涉及下面的流程，下列說法正確的是()A．若圖為核移植過程，則②從卵巢中獲取的卵母細(xì)胞直接作為受體細(xì)胞和①供體細(xì)胞融合B．若圖為單克隆抗體的制備過程，需要篩選出產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞C．若圖為試管動(dòng)物的培育過程，需培育到原腸胚才能進(jìn)行胚胎分割與胚胎移植D．若圖為植物體細(xì)胞雜交過程，則形成③常用滅活的病毒直接處理兩種植物細(xì)胞B[若題圖為核移植過程，在體細(xì)胞核移植過程中，應(yīng)選擇處于MⅡ期的卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞，因此需要將卵母細(xì)胞培養(yǎng)至MⅡ期，不是直接作為受體，A錯(cuò)誤；若題圖為單克隆抗體的制備，則①和②是經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞，形成融合細(xì)胞需要經(jīng)過篩選，篩出產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞，B正確；若題圖為試管動(dòng)物的培育過程，需培育到桑葚胚或者囊胚才能進(jìn)行胚胎分割與胚胎移植，C錯(cuò)誤；誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法有物理法，包括電融合法、離心法等，化學(xué)法，一般是用聚乙二醇(PEG)作為誘導(dǎo)劑，滅活的病毒是誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法，D錯(cuò)誤。]9．2019年1月，中國(guó)科學(xué)家首次利用CRISPR/Cas9技術(shù)，獲得一只生物節(jié)律核心基因BMAL1敲除的獼猴。并通過體細(xì)胞克隆技術(shù)，獲得5只生物節(jié)律紊亂的獼猴，用于研究生物節(jié)律機(jī)制，技術(shù)流程如圖所示(①②表示操作過程)。下列說法錯(cuò)誤的是()A．在核移植操作前，應(yīng)對(duì)成纖維細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)B．①是利用顯微操作技術(shù)去核，去核前需要先將采集的卵母細(xì)胞培養(yǎng)至MⅡ時(shí)期C．②可以通過電融合法使兩細(xì)胞融合，形成重組胚D．該技術(shù)得到的敲除BMAL1基因的克隆獼猴的遺傳物質(zhì)與獼猴甲相同D[在核移植操作前，應(yīng)將成纖維細(xì)胞置于適宜條件下進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，A正確；①是利用顯微操作技術(shù)去核，去核前需要先將采集的卵母細(xì)胞培養(yǎng)至MⅡ時(shí)期，MⅡ時(shí)期細(xì)胞具備受精能力，B正確；②可以通過電融合法使兩細(xì)胞融合，供體核進(jìn)入卵母細(xì)胞，形成重構(gòu)胚，C正確；該技術(shù)得到的敲除BMAL1基因的克隆獼猴的遺傳物質(zhì)主要來自獼猴甲，少量來自卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，D錯(cuò)誤。]10．抗原可分為胸腺依賴性抗原(TD抗原)和胸腺非依賴性抗原(TI抗原)。其中TI抗原直接與B細(xì)胞結(jié)合就能激活B細(xì)胞，但不產(chǎn)生記憶細(xì)胞。脂多糖(LPS)是細(xì)菌的主要致病毒素，屬于TI抗原，這制約了LPS疫苗的研發(fā)。多肽類抗原屬于TD抗原，利用多肽模擬細(xì)菌LPS，有望解決這個(gè)問題。(1)胸腺在免疫系統(tǒng)中屬于________。在胸腺中發(fā)育的淋巴細(xì)胞是________。(2)與TI抗原相比，TD抗原激活B細(xì)胞的方式有何不同？________________________________________________________________________________________。(3)在研發(fā)傷寒沙門氏菌LPS疫苗的過程中，為初步鑒定多肽A、B模擬LPS抗原特征的相似程度，研究人員利用抗LPS抗體進(jìn)行檢測(cè)，部分實(shí)驗(yàn)步驟如圖1，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2。①圖1步驟c中與多肽結(jié)合的抗體會(huì)被洗脫掉，未被洗脫的抗體因與________結(jié)合而殘留在檢測(cè)板上。②多肽模擬LPS抗原特征的相似程度越高，其與LPS競(jìng)爭(zhēng)抗體結(jié)合位