COULTERLifesciencesBR-810A-cent-ruo1細(xì)胞外囊泡(EVs)是由脂質(zhì)雙分子層包裹的納米顆粒。EVs能夠攜帶多種貨物，在生理過程中和細(xì)胞間通訊中都發(fā)揮著重要的作用。所有活細(xì)胞都會自然分泌EVs，只是其生理來源和直徑不同。外泌體、微囊泡和凋亡小體均為EVs1。而外泌體作為生物標(biāo)志物和潛在的治療方法在臨床上顯示出巨大的應(yīng)用前景2-4。由于外泌體在大小、組成和功能方面具有多樣的異質(zhì)性，許多外泌體分離技術(shù)，由于純化的樣品中含有大利用超速離心(UC)的高分辨率純化能力，可以重復(fù)地分離出特定的外泌體亞群。UC是最常用的EVs純化技術(shù)，被廣泛認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn)5-6。UltracentrifugationPEGPrecipitationUltra?ltrationMicro?uidicDevicesAllothers050100150200250300350CountEES61.Minimalinformationforstudiesofextracellularvesicles2018(MISEV2018):apositionstatementoftheInternationalSocietyforExtracellularVesiclesandupdateoftheMISEV2014guidelines.2.Sheddinglightonthecellbiologyofextracellularvesicles.3.Exosomes:biogenesis,biologicfunctionandclinicalpotential.4.Apoptoticcell-derivedexosomes:messagesfromdyingcells.5.Methodsforextracellularvesiclesisolationinahospitalsetting.6.IsolationofExtracellularVesicles:GeneralMethodologiesandLatestTrends.一、差速離心（Diferentialultracentrifugation，DUC利用不同顆粒沉降快慢的差異性，逐步增加離心力的大小，進(jìn)行多次離心依次去除不同大小顆粒的方法。獲取外泌體之后還可以進(jìn)行下一步密度梯度..x.●●細(xì)胞/死細(xì)胞細(xì)胞碎片大的囊泡低密度外泌體高密度外泌體12,000xgxx12,000xgxxxxxxx10,000xgxx10min1010min10minxxxx4100,000x4100,000xg100,000xg70min7070min注意：離心力大小很大程度上取決于外泌體來源(例如，CHO細(xì)胞培養(yǎng)，血液等)。參考文獻(xiàn)確定的只?更短的離心路徑(更低k因子的轉(zhuǎn)子或耗材)?錐形管可以提高顆粒的回收率1.EfectiveSeparationofCancer-DerivedExosomesinBiologicalSamplesforLiquidBiopsy:ClassicStrategiesandInnovativeDevelopment.2.Optimizedmethodforextractionofexosomesfromhumanprimarymusclecells.3二、墊液差速離心（CushionedDUC在DUC離心過程中，向離心管底添加密度較大的液體溶液形成一層“緩沖層”(如蔗糖或碘克沙醇[OptiPrepTM密度梯度液])。該墊液層可以更溫和的進(jìn)行外泌體顆粒收●得率●xxxxxxx10,000xg10min100,000xg上清液●3hr●xx2,000xg10minx10,000xg10min100,000xg上清液●3hr●xxxxx純度60%w/v純度60%w/v碘克沙醇或70%w/v蔗糖2100,000xg70min100,000xg70min上清液2100,000xg70min100,000xg70min上清液墊液:..x.●●細(xì)胞/死細(xì)胞細(xì)胞碎片大的囊泡低密度外泌體高密度外泌體60%w/v碘克沙醇或70%w/v蔗糖墊液DUC與標(biāo)準(zhǔn)DUC的方法和原理幾乎相同，外泌體在高密度緩沖層上形成顆粒層，可以更好地保持其形態(tài)和功能的完整性。該方法在沒有增加操作時間的前提下提高了產(chǎn)品的質(zhì)量。兩種流程可供選供更好的得率(2)提供更高的純度。?更短的離心路徑(更低k因子的轉(zhuǎn)子或耗材)*本方法可在所有定角和水平轉(zhuǎn)子上運(yùn)行。轉(zhuǎn)子的最大運(yùn)行速度由樣品密度和轉(zhuǎn)子共同決定。使用高密度緩沖層時，請參考轉(zhuǎn)子使用說明書(IFU)，以確定安全運(yùn)行的最大速度。1.Cushioned-DensityGradientUltracentrifugation(C-DGUC)improvestheisolatione代ciencyofextracellularvesicles.2.Cushioned–DensityGradientUltracentrifugation(C-DGUC):ARe?nedandHighPerformanceMethodfortheIsolation,Characterization,andUseofExosomes.AcceleratingAnswers|4三、等密度梯度離心（IsopycnicDGUC在等密度梯度離心中，將梯度液加入到離心管中高速旋轉(zhuǎn)，直到梯度液形成線性(連續(xù))的密度梯度。外泌體會遷移到與它們的浮力密度相同的那一層梯度液。Type70.1Type70.1TiRotor120,000xg24hr50%24hr在等密度梯度離心中，將外泌體樣品與碘克沙醇等梯度液一起放入管中。離心管中的梯度液被高速旋轉(zhuǎn)，直到達(dá)到平衡，形成線性的密度梯度。有很多可以優(yōu)化的方面，包括梯度液的層數(shù)，每一層梯度液的體積，樣品的位置(在層上，層間或?qū)酉?，樣品的初始密度，運(yùn)行速度和時間，轉(zhuǎn)子類型等。外泌體的浮力密度通常在1.08和1.20g/mL之間，但這取決于所使用的密度梯度液。?使用垂直轉(zhuǎn)子縮短離心半徑，以減少運(yùn)行時間*轉(zhuǎn)子的最大運(yùn)行速度由樣品密度和轉(zhuǎn)子共同決定。使用高密度緩沖層時，請參考轉(zhuǎn)子使用說明書(IFU)，1.IsolationofHigh-PurityExtracellularVesiclesbytheCombinationofIodixanolDensityGradientUltracentrifugationandBind-EluteChromatographyFromBloodPlasma.2.EndosomalsignallingviaexosomesurfaceTGFβ-1.3.Mesenchymalstemcellderived-exosomes:amodernapproachintranslationalmedicine.5四、平衡區(qū)帶密度梯度離心（EquilibriumzonalDGUC平衡區(qū)帶密度梯度離心與等密度梯度離心相細(xì)胞/死細(xì)胞細(xì)胞碎片大的囊泡低密度外泌體●高密度外泌體TLA-110移取離散的外泌體亞群TLA-110移取離散的外泌體亞群160,000xg4hr160,000xg4hr1.26g/ml的梯度液中g(shù)/mL:碘克沙醇平衡區(qū)帶密度梯度離心中，外泌體樣品被放置在裝有不同層級梯度液的離心管中。離心后，外泌體將遷移到與其浮力密度相等的梯度液位置，通常在兩個梯度液的界面層之間。與等密度梯度非常相似，這種分離方法有許多版本。然而，與等密度梯度相比，實驗在線性密度梯度形成之前就停止了（即維持特定的分層）。在這個例子中，外泌體在前處理步驟中先被沉淀，并以特定的密度直接重懸到緩沖溶液中，但這一?使用垂直(或近垂直)轉(zhuǎn)子短離心半徑，以減少*轉(zhuǎn)子的最大運(yùn)行速度由樣品密度和轉(zhuǎn)子共同決定。使用高密度緩沖層時，請參考轉(zhuǎn)子使用說明書(IFU)，1.Isolationofhumansalivaryextracellularvesiclesbyiodixanoldensitygradientultracentrifugationandtheircharacterizations2.IsolationofHigh-PurityExtracellularVesiclesbytheCombinationofIodixanolDensityGradientUltracentrifugationandBind-EluteChromatographyFromBloodPlasma.3.Detailedanalysisoftheplasmaextracellularvesicleproteomeafterseparationfromlipoproteins.AcceleratingAnswers|6五、速率區(qū)帶密度梯度離心（RatezonalDGUC）：將外泌體樣品放置在預(yù)先形成的線性密度梯度液(或不連續(xù)密度梯度液）的頂部。離心后，外泌體和其他顆粒將以不同的速率沉降，這取決于它們各自的沉細(xì)胞/死細(xì)胞細(xì)胞碎片大的囊泡低密度外泌體●高密度外泌體加入外泌體樣本6%w/v碘克沙醇NVT65180,000xg50min離散的外泌體亞群速率區(qū)帶密度梯度離心采用初始線性梯度液（或不連續(xù)密度梯度液樣品位于頂部。一旦離心開始，外泌體就開始在離心力的作用下以不同的速率向管底沉降，沉降速度取決于它們各自的*轉(zhuǎn)子的最大運(yùn)行速度由樣品密度和轉(zhuǎn)子共同決定。使用高密度緩沖層時，請參考轉(zhuǎn)子使用說明書(IFU)，1.VelocityGradientSeparationRevealsaNewExtracellularVesiclePopulationEnrichedinmiR-155andMitochondrialDNA2.Areexosomesthevehicleforproteinaggregatepropagationinneurodegenerativediseases?3.Progress,opportunity,andperspectiveonexosomeisolation-efortsfore代cientexosome-basedtheranostics.DUCCushionedDUCIsopycnicDGUCEquilibriumzonalDGUCRatezonalDGUCFA/SWFA/SWVT/NVTVT/NVTSW離心瓶/開口管離心瓶/開口管采用獨(dú)特結(jié)構(gòu)設(shè)計的各類轉(zhuǎn)頭旨在滿足不同的離心需求，以提高實驗整體效率和通量。因此，無論通過沉rminrmaxrminrmax路徑長度?所有轉(zhuǎn)頭類型中剪切力最低，是保護(hù)敏感樣品完整性路徑長度?沉淀顆粒集中，有利于小顆粒樣品（如外囊泡/外泌體）沉降?等密度梯度離心和平衡區(qū)帶密度梯度離心定角（約定角（約20-45°)轉(zhuǎn)頭?路徑長度、轉(zhuǎn)速和容量保持適當(dāng)平衡，適用于密度梯度離rminrmaxrminrmax路徑長度路徑長度近垂直（約近垂直（約7-9°)轉(zhuǎn)頭?在密度梯度離心過程中使雜質(zhì)上浮或沉積，與目標(biāo)樣品rminrmax?有限的離心沉淀應(yīng)用路徑長度r?最高分辨率的密度梯度離心選擇，適用于空殼rmax路徑長度?離心路徑最短，密度載量高，是密度梯度離心max路徑長度7和Ultra-Clear（UC）透明度更高。70Type45Ti26.3Type70Ti,Type50.2TiType90Ti,Type70.1Ti,MLA-5570Type45Ti26.3Type70Ti,Type50.2TiType90Ti,Type70.1Ti,MLA-5510039Type45TiType70Ti,Type50.2Ti,VTi50.1Type90Ti,Type70.1Ti,NVT65,VTi65.1,MLA-5532.4Type70Ti,Type50.2Ti,SW32Ti,SW28,MLA-508.9Type90Ti,Type70.1Ti,MLA-554.9VTi90,VTi65.2,NVT90,NVT65.24.7Type50.4Ti,TLA-110?材質(zhì)和類型：聚碳酸酯(PC)和聚丙烯(PP)?容量范圍：8.5mL–250mL?材質(zhì)和類型：聚丙烯(PP)和超凈(UC)?容量范圍：175μL–94mL?材質(zhì)和類型：聚碳酸酯(PC)和聚丙烯(PP)?容量范圍：230μL–94mL?材質(zhì)和類型：薄壁聚丙烯(PP)和超凈(UC)?容量范圍：1mL–100mL?容量范圍：3.3mL–36.2mLAcceleratingAnswers作為超速離心機(jī)領(lǐng)域領(lǐng)先品牌，OptimaX系列堪稱貝克曼離心機(jī)當(dāng)之無愧的經(jīng)典。該系列產(chǎn)品從離心管、轉(zhuǎn)頭到離心機(jī)主體的所有部件均采用整體化的設(shè)計理念，貝克曼全情投入多年設(shè)計經(jīng)驗，全力打造易于使OptimaXE-100/90最大轉(zhuǎn)速：OptimaXE-100/90最大轉(zhuǎn)速：100,000/90,000rpm最大相對離心力：802,000/694,000xg最大容量：6×250mL重量：485kg最大轉(zhuǎn)速：100,000/90,000/80,000rpm802,000/694,000/548,300xg最大容量：6×250mL重量：485kg軟件：eXPert離心專家軟件，三級用戶OptimaMAX-XP最大轉(zhuǎn)速：150,000rpm最大相對離心力：1,019,000xg最大容量：6×32.4mLOptimaMAX-TL最大轉(zhuǎn)速：120,000rpm最大相對離心力：657,000xg落地式超速離心機(jī)作為一款智能型高效離心機(jī)，AvantiJ?系列以貝克曼庫爾特的先進(jìn)技術(shù)為強(qiáng)勁支撐，該系列備受研究人員推崇，廣泛應(yīng)用于各類實驗。因此，選擇貝克曼庫爾特離心機(jī)可最大限度重現(xiàn)與參考文獻(xiàn)相同的實驗條AvantiJXN-30最大轉(zhuǎn)速：30,000rpm最大相對離心力：110,500xg最大容量：4x1,000mLJA-30.50Ti108,860xg8x50mLJS-24.15JS-24.38103,900xg6x38.5mL作為高性能離心機(jī)JXN系列的一員，AvantiJXN-30通過搭配JA-30.50Ti定角轉(zhuǎn)子、JS-24.15水平轉(zhuǎn)子和JS-24.38水平轉(zhuǎn)子，即可達(dá)到純化外泌體所需的大于100,000xg的超速離心力，進(jìn)行外泌體分離和純化1-4。1.Nidogen1-EnrichedExtracellularVesiclesFacilitateExtrahepaticMetastasisofLiverCancerbyActivatingPulmonaryFibroblaststoSecreteTumorNecrosisFactorReceptor1.2.MALDI-MS-basedbiomarkeranalysisofextracellularvesiclesfromhumanlungcarcinomacells.3.PreservationofMesenchymalStemCell-DerivedExtracellularVesiclesafterAbdominalDeliveryintheExperiment.4.Tumourextracellularvesicle-derivedComplementFactorHpromotestumorigenesisandmetastasisbyinhibitingcomplement-dependentcytotoxicityoftumourcells.9/小規(guī)模大規(guī)模最大規(guī)模JA-10.100AvantiJ-15J