生物實驗技術(shù)員筆試試題一、填空題（每題3分，共30分）在PCR實驗中，引物設(shè)計時，上下游引物的Tm值差異應(yīng)控制在______℃以內(nèi)。依據(jù)《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2008），生物安全二級實驗室（BSL-2）適用于操作______危害程度的微生物。進行蛋白質(zhì)SDS電泳時，SDS的作用是______。超凈工作臺使用前需提前______分鐘開啟紫外燈進行滅菌。流式細胞儀檢測細胞周期時，常用______染料標記DNA。在微生物培養(yǎng)中，高壓蒸汽滅菌的標準條件是121℃，維持______分鐘。核酸提取過程中，酚-氯仿-異戊醇（25:24:1）抽提的主要目的是______。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）中，封閉的作用是______。細胞培養(yǎng)時，常用的胰蛋白酶消化液濃度一般為______。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）進行樣品分析時，樣品需要具備______的特性。二、選擇題（每題3分，共30分）下列關(guān)于生物安全柜的使用，錯誤的是（）A.操作前需開啟風機運行10-15分鐘B.柜內(nèi)盡量保持物品少而有序C.可以在生物安全柜內(nèi)使用明火D.工作結(jié)束后，需對安全柜進行清潔和消毒在質(zhì)粒DNA提取實驗中，溶液Ⅱ（NaOH-SDS）的作用是（）A.裂解細胞并使DNA變性B.中和溶液，使DNA復(fù)性C.沉淀蛋白質(zhì)D.去除RNA關(guān)于Westernblot實驗，以下說法正確的是（）A.轉(zhuǎn)膜時，硝酸纖維素膜應(yīng)與凝膠的蛋白面緊密貼合B.一抗只能選擇鼠抗C.二抗不需要根據(jù)一抗的來源進行選擇D.封閉時只能使用脫脂牛奶進行細胞凍存時，凍存液的常用組成為（）A.10%DMSO+90%胎牛血清B.5%DMSO+10%胎牛血清+85%基礎(chǔ)培養(yǎng)基C.10%DMSO+20%胎牛血清+70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基D.20%DMSO+10%胎牛血清+70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基下列哪種方法不能用于檢測基因突變（）A.聚合酶鏈式反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（PCR-SSCP）B.基因芯片技術(shù)C.蛋白質(zhì)雙向電泳D.下一代測序技術(shù)（NGS）高效液相色譜（HPLC）分析中，影響分離度的因素不包括（）A.流動相的組成和流速B.固定相的性質(zhì)C.柱溫D.樣品的顏色下列關(guān)于無菌操作的描述，正確的是（）A.無菌操作區(qū)域不需要定期消毒B.操作時可以隨意交談C.進入無菌操作區(qū)前，需更換工作服、鞋套，洗手并消毒D.無菌物品取出后未使用完可以放回原容器在ELISA實驗中，出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)的原因是（）A.抗原過量B.抗體過量C.酶標記物過量D.底物過量微生物菌種保藏的常用方法不包括（）A.斜面低溫保藏法B.液氮超低溫保藏法C.沙土管保藏法D.室溫保藏法下列哪項不屬于實驗室廢棄物分類（）A.化學(xué)性廢棄物B.生物性廢棄物C.物理性廢棄物D.生活性廢棄物三、判斷題（每題2分，共10分）在進行動物實驗時，只要實驗方案合理，可以不遵循動物倫理要求。（）分光光度計使用前需要進行波長校正和空白校正。（）細胞培養(yǎng)過程中，CO?培養(yǎng)箱的CO?濃度一般設(shè)置為5%。（）核酸定量時，A???/A???比值在1.8-2.0之間說明核酸純度較高。（）實驗室發(fā)生火災(zāi)時，應(yīng)立即使用水滅火。（）四、簡答題（每題10分，共20分）簡述PCR實驗中出現(xiàn)非特異性擴增條帶的可能原因及解決方法。請詳細說明生物安全實驗室廢棄物處理的原則和主要流程。五、實驗設(shè)計題（10分）設(shè)計一個實驗，檢測某食品樣品中是否含有某種特定的致病菌（已知該致病菌的特異性基因序列），要求寫出實驗原理、主要實驗步驟和預(yù)期結(jié)果分析。生物實驗技術(shù)員筆試試題答案一、填空題答案2中等使蛋白質(zhì)解聚并帶上負電荷，消除蛋白質(zhì)分子之間的電荷差異和形狀差異30PI（碘化丙啶）15-30去除蛋白質(zhì)封閉固相載體上未結(jié)合位點，減少非特異性吸附0.25%揮發(fā)性好、熱穩(wěn)定性高二、選擇題答案1.C2.A3.A4.C5.C6.D7.C8.A9.D10.D三、判斷題答案1.×2.√3.√4.√5.×四、簡答題答案可能原因：①引物設(shè)計不合理，如引物特異性不強、引物之間存在互補配對等；②模板DNA濃度過高；③PCR反應(yīng)條件不合適，如退火溫度過低、循環(huán)次數(shù)過多等；④Taq酶用量過多。解決方法：①重新設(shè)計引物，通過BLAST等工具進行引物特異性比對；②適當稀釋模板DNA；③提高退火溫度，優(yōu)化PCR反應(yīng)程序，減少循環(huán)次數(shù)；④降低Taq酶用量。處理原則：①分類收集原則，將生物性、化學(xué)性、放射性等廢棄物分類收集；②安全處理原則，確保處理過程不會對人員、環(huán)境造成危害；③及時處理原則，避免廢棄物長時間存放帶來安全隱患；④環(huán)保原則，處理方法應(yīng)符合環(huán)境保護要求。主要流程：①分類收集，使用專用的容器和標識對不同類型廢棄物進行收集；②包裝，對收集的廢棄物進行妥善包裝，確保無泄漏；③消毒滅菌，對生物性廢棄物采用高壓蒸汽滅菌、化學(xué)消毒等方法進行處理；④交接與運輸，與有資質(zhì)的處理單位進行交接，并規(guī)范運輸；⑤最終處置，由專業(yè)單位對廢棄物進行無害化處理。五、實驗設(shè)計題答案實驗原理：利用PCR技術(shù)，以該食品樣品中提取的DNA為模板，針對致病菌的特異性基因序列設(shè)計引物進行擴增，若樣品中含有該致病菌，則能擴增出相應(yīng)的特異性條帶，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物。主要實驗步驟：①樣品處理：取適量食品樣品，采用合適的方法進行預(yù)處理，如研磨、勻漿等。②DNA提取：使用DNA提取試劑盒從處理后的樣品中提取總DNA。③引物設(shè)計與合成：根據(jù)已知的致病菌特異性基因序列設(shè)計特異性引物，并進行合成。④PCR擴增：在PCR反應(yīng)體系中加入提取的DNA模板、引物、dNTPs、Taq酶等，設(shè)置合適的