ICS65.020.20CCSB385107IDB5107/T157—2025前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4廠房建設(shè) 5設(shè)施設(shè)備 6菌種生產(chǎn)工藝流程 7菌種生產(chǎn) 8檢查 39記錄 3 3 4附錄A（規(guī)范性）萌發(fā)菌及蜜環(huán)菌原種培養(yǎng)基配方 5附錄B（規(guī)范性）萌發(fā)菌及蜜環(huán)菌栽培種培養(yǎng)基配方 6DB5107/T157—2025本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由綿陽(yáng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院提出。本文件由綿陽(yáng)市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。本文件起草單位：綿陽(yáng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院、平武縣中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)服務(wù)中心、平武縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局。本文件主要起草人：黎倩、鐘鉬芝、陳小敏、張躍非、陳杰、戴維、趙丹、葉坤浩、王鈞、賴強(qiáng)龍、徐大東、雍光玖、徐婷、閔翔、蘇紹艷、張瀚。DB5107/T157—20251天麻"兩菌"--萌發(fā)菌、蜜環(huán)菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了天麻“兩菌”—萌發(fā)菌和蜜環(huán)菌菌種生產(chǎn)的術(shù)語(yǔ)和定義、廠房建設(shè)、設(shè)施設(shè)備、菌種生產(chǎn)工藝流程、菌種生產(chǎn)、檢查、記錄、入庫(kù)、留樣。本文件適用于綿陽(yáng)市行政區(qū)域內(nèi)天麻產(chǎn)區(qū)萌發(fā)菌菌種和蜜環(huán)菌菌種的生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T12728食用菌術(shù)語(yǔ)GB14881食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品生產(chǎn)通用衛(wèi)生規(guī)范NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求DB5107/T116地理標(biāo)志產(chǎn)品平武天麻3術(shù)語(yǔ)和定義GB/T12728和DB5107/T116界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。4廠房建設(shè)選擇地勢(shì)高、通風(fēng)良好、給排水通暢、交通便利的場(chǎng)地。配備有相互隔離的原材料倉(cāng)庫(kù)、拌料裝袋間、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、菌種檢驗(yàn)室、菌種貯存室等。選址和廠區(qū)環(huán)境、廠房和車間應(yīng)符合GB14881的規(guī)定。5設(shè)施設(shè)備設(shè)施設(shè)備應(yīng)符合GB14881和NY/T528相關(guān)規(guī)定。6菌種生產(chǎn)工藝流程培養(yǎng)基制備→分裝→滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)（檢查）→成品。7菌種生產(chǎn)7.1母種DB5107/T157—202527.1.1獲取方式天麻“兩菌”的母種可以通過(guò)引進(jìn)和野生資源收集與分離兩種方式獲取。7.1.2引進(jìn)7.1.2.1萌發(fā)菌萌發(fā)菌母種應(yīng)菌絲潔白、致密、均勻、平整，背面無(wú)色素沉淀，邊緣整齊。母種感官要求應(yīng)符合NY/T1742的規(guī)定。7.1.2.2蜜環(huán)菌蜜環(huán)菌母種應(yīng)為氣生菌絲扭結(jié)形成的棕紅色菌索，基內(nèi)菌絲為白色菌索，偶有少量棕色分泌物，幼嫩菌索在暗處發(fā)出白色熒光。母種感官要求應(yīng)符合NY/T1742的規(guī)定。7.1.3野生資源收集與分離7.1.3.1萌發(fā)菌7.1.3.1.1每年5月至6月，在野生天麻產(chǎn)區(qū)收集濕潤(rùn)的枯枝落葉，與天麻花粉拌勻后，覆土培養(yǎng)，保持土壤濕度60%～65%，60d后獲得含有萌發(fā)菌的原球莖。7.1.3.1.2嚴(yán)格按無(wú)菌操作，將原球莖用1%的氯化汞溶液浸泡殺菌0.5min～1min，再用無(wú)菌水清洗3次，吸干水分，接種于符合NY/T528規(guī)定的PDA培養(yǎng)基上。恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)25℃避光培養(yǎng)，萌發(fā)后挑取尖端菌絲進(jìn)行純化。7.1.3.2蜜環(huán)菌7.1.3.2.1在野生天麻產(chǎn)區(qū)收集帶蜜環(huán)菌菌索塊莖。7.1.3.2.2嚴(yán)格按無(wú)菌操作，將天麻塊莖用1%的氯化汞溶液浸泡殺菌0.5min～1min，再用無(wú)菌水清洗3次，吸干水分，切成長(zhǎng)寬各1cm左右的小塊，接種于符合NY/T528規(guī)定的PDA培養(yǎng)基上。恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)25℃避光培養(yǎng)，萌發(fā)后挑取尖端菌絲進(jìn)行純化。7.2原種7.2.1萌發(fā)菌及蜜環(huán)菌培養(yǎng)基制備按照附錄A中規(guī)定的配方，將原材料充分預(yù)濕混勻。7.2.2分裝將制備好的培養(yǎng)基分裝至500mL的原種瓶瓶頸處，培養(yǎng)基填裝要松緊適度，中間打一直徑1.6cm~1.8cm，深2cm～3cm的通氣孔，蓋上透氣蓋。7.2.3滅菌將分裝好的原種瓶放入滅菌鍋滅菌。高壓滅菌壓力為0.14MPa～0.15MPa，溫度為121℃~125℃,滅菌2h。7.2.4冷卻將滅菌后原種瓶搬入清潔、消毒后的冷卻室，自然冷卻至室溫。7.2.5接種DB5107/T157—20253嚴(yán)格按無(wú)菌操作，在超凈工作臺(tái)或接種箱內(nèi)，挑取長(zhǎng)寬各1.5cm左右的母種塊，接種于通氣孔內(nèi)，貼上標(biāo)簽記錄菌種名稱和接種時(shí)間。7.2.6培養(yǎng)將接種好的原種瓶放置于培養(yǎng)室，控制室溫23℃~25℃,空氣相對(duì)濕度60%～70%，通風(fēng)、避光培養(yǎng)。一般培養(yǎng)40d～45d萌發(fā)菌菌絲即可長(zhǎng)滿原種瓶，30d～35d蜜環(huán)菌菌絲即可長(zhǎng)滿原種瓶。7.3栽培種7.3.1萌發(fā)菌及蜜環(huán)菌培養(yǎng)基制備按照附錄B中規(guī)定的配方，將原材料充分預(yù)濕混勻。7.3.2分裝將制備好的培養(yǎng)基分裝至14cm×28cm的栽培袋中。培養(yǎng)基填裝要松緊適度，分裝至距袋口5cm處，中間打一直徑1.6cm～2.2cm，深6cm～8cm的通氣孔，蓋上透氣蓋。7.3.3滅菌將分裝好的栽培袋放入滅菌鍋滅菌。高壓滅菌壓力為0.14MPa～0.15MPa，溫度為121℃~125℃,滅菌2h～3h；常壓滅菌時(shí)快速升溫至100℃以上，滅菌10h～15h。7.3.4冷卻將滅菌后的栽培袋搬入清潔、消毒后的冷卻室，自然冷卻至室溫。7.3.5接種嚴(yán)格按無(wú)菌操作，在超凈工作臺(tái)或接種箱內(nèi)，將原種塊填滿栽培袋通氣孔，貼上標(biāo)簽注明菌種名稱和接種時(shí)間。7.3.6培養(yǎng)將接種好的栽培袋放置于培養(yǎng)室，控制室溫23℃~25℃,空氣相對(duì)濕度60%～70%，通風(fēng)、避光培養(yǎng)。一般培養(yǎng)66d～82d萌發(fā)菌菌絲即可長(zhǎng)滿栽培袋，34d～46d蜜環(huán)菌菌絲即可長(zhǎng)滿栽培袋。8檢查培養(yǎng)期間應(yīng)定期檢查，及時(shí)剔除長(zhǎng)勢(shì)差、長(zhǎng)速慢、感染、發(fā)臭等不合格菌種。母種、原種和栽培種感官要求應(yīng)符合NY/T1742的規(guī)定。9記錄應(yīng)詳細(xì)記錄生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，包括原材料來(lái)源、菌種來(lái)源、菌種名稱、裝瓶/袋日期、裝瓶/袋數(shù)量、滅菌時(shí)間、接種日期、培養(yǎng)時(shí)間、檢查情況、生產(chǎn)負(fù)責(zé)人。10入庫(kù)DB5107/T157—20254完成培養(yǎng)的菌種應(yīng)登記好菌種名稱、菌種級(jí)別、生產(chǎn)時(shí)間、存放位置后入庫(kù)。母種于4℃~6℃、原種和栽培種于1℃~4℃的冰箱或冷庫(kù)貯存。每批菌種都應(yīng)留樣備查，留樣數(shù)量應(yīng)為每個(gè)批次3支（瓶、袋）。母種于4℃~6℃、原種和栽培種于1℃~4℃的冰箱或冷庫(kù)貯存，直至該批菌種培育出天麻為止。DB5107/T157—20255（規(guī)范性）萌發(fā)菌及蜜環(huán)菌原種培養(yǎng)基配方A.1萌發(fā)菌原種培養(yǎng)基配方（重量百分比）木屑39%，棉籽殼39%，麩皮20%，白糖1%，石膏1%，含水量58%～62%。A.2蜜環(huán)菌原種培養(yǎng)基配方（重量百分比）木屑34%，棉籽殼34%，玉米面10%，黃豆粉10%，麩皮10%，白糖1%，石膏1%，含水量64%～66%。DB5107/T157—20256