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T/NAIA0258-Technicalregulationsfordiagnosis,preventionandcontrolofBovinecoronavirusdisease2023-12-18發(fā) 2023-12-31實寧夏化學分析測試協(xié) 發(fā)T/NAIA0258-T/NAIA0258-GB/T1.1-20201部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)GB/T6682GB/T16568NY/T5030NY5047NY/T5049Bovine7～10虛弱、體溫低，少數(shù)犢牛出現(xiàn)發(fā)熱、臥地不起等癥狀，嚴重的犢牛會出現(xiàn)昏迷甚至死亡。成年牛常突然暴發(fā)，排出深褐色帶血稀糞，伴有產(chǎn)奶下降、沉郁及厭食等癥狀。3mLPBS采樣管中；也可無菌采集地上剛排出對于糞便樣品，放入盛有3mLPBS管中，充分振蕩，12000r/min4℃離心5min～8min，1g5mLPBS，混勻，8000r/min4℃離心5min，取上清備用。將上清于0.22μm濾器過濾，-80℃冰箱保存或直接接種細胞。RNA5.3.1RNA利用反轉(zhuǎn)錄試劑進行反轉(zhuǎn)錄（A.1,A.2）RPARPA方法進行病原核酸檢測，BRV引物序列（A.3）RPA擴增℃20minRPA144bp大小的條帶，且陰性對照不出現(xiàn)條帶（B.1）。4.1、4.24.3可判定為牛冠狀病毒病疑似病例。符合5.3.4加強飼養(yǎng)管理，保持衛(wèi)生清潔。按照GB/T16568和NY/T5049初生犢牛及時哺喂初乳。犢牛出生后1hNY5047NY/T50305%100mL～200mL。附錄表 反轉(zhuǎn)錄反應體RNase-free105×All-in-oneQrt4Enzyme15表 反轉(zhuǎn)錄反應程5015855表 輪狀病毒基礎(chǔ)RPA引物序列信引物序列片段大小BCoV-表 RPA反應體BRV-F1（101.2BRV-R1（101.2Rehydration14.7515.61.25附錄
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