環(huán)境微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)三微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌第一頁，共24頁。微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌目的要求實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)程序第二頁，共24頁。目的要求了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。熟悉分離、培養(yǎng)微生物前的有關(guān)準(zhǔn)備工作及操作方法。第三頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)材料藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O等。高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、細(xì)菌過濾器、紫外線殺菌燈。其它：天平、牛角匙、電爐、1NHCl、1NNaOH、pH試紙、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、帶玻璃珠的三角瓶、帶棉塞的無菌試管、無棉塞的空試管、培養(yǎng)皿、吸管、各種包裝紙、防水紙、繩索、棉花、標(biāo)簽等。第四頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序培養(yǎng)基的配制分離培養(yǎng)微生物常用器皿的準(zhǔn)備培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法第五頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序1

（培養(yǎng)基的配制）培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的配制方法和步驟三種培養(yǎng)基的配方及配制無菌水的制備第六頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序2

（培養(yǎng)基的種類）據(jù)組成成分可分為:

1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。2.半合成培養(yǎng)基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。3.天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.2—0.5%凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。第七頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序3

（培養(yǎng)基的種類）常用凝固劑為瓊脂（其次為明膠），又叫洋菜、凍粉。第八頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序4

（培養(yǎng)基的配制方法和步驟）稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。調(diào)pH值：用1NNaOH或1NHCl調(diào)pH，用pH試紙對照。加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補(bǔ)水。分裝：注意不要污染棉塞。包扎成捆，掛上標(biāo)簽（必須用鉛筆寫），注明何種培養(yǎng)基。滅菌備用：培養(yǎng)基滅菌后必須在370C下恒溫培養(yǎng)24h，確定無菌生長，方可使用。第九頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序5（培養(yǎng)基的配制方法和步驟）第十頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序6（培養(yǎng)基的配制方法和步驟）第十一頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序7

（三種培養(yǎng)基的配方及配制）牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)細(xì)菌，是一種天然培養(yǎng)基）配方如下：牛肉膏3g蛋白胨5g氯化鈉3g瓊脂20g自來水1000mLpH7.2~7.4滅菌1.05kg/cm2，25~30min第十二頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序8

（三種培養(yǎng)基的配方及配制）馬鈴薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)真菌之用，是一種半合成培養(yǎng)基），其配方如下：去皮馬鈴薯（或鮮豆芽）200g蔗糖（或葡萄糖）20g自來水1000mL瓊脂20gpH自然滅菌：（含蔗糖）1.05kg/cm220min（含葡萄糖）0.1kg/cm230min第十三頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序9

（三種培養(yǎng)基的配方及配制）淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏一號(hào)Gause′1），用于分離和培養(yǎng)放線菌，是一種合成培養(yǎng)基。配方如下：可溶性淀粉20.0gKNO31.0gK2HPO40.5gMgSO4?7H2O0.5gNaCl0.5gFeSO4?7H2O0.01g瓊脂20g自來水1000mL滅菌：1.05kg/cm230min

第十四頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序10

（三種培養(yǎng)基的配方及配制）無菌水的制備無菌水為下一次微生物分離實(shí)驗(yàn)中所需要的材料。100mL三角燒瓶（裝有玻璃珠），裝自來水45.0mL，試管中裝9.0mL自來水，塞上棉塞，包扎、滅菌備用。三角燒瓶和試管須預(yù)先塞好棉塞，并經(jīng)干熱滅菌。第十五頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序11（分離培養(yǎng)微生物常用器皿的準(zhǔn)備）清洗一些玻璃儀器：如三角燒瓶、試管、培養(yǎng)皿、吸管等。棉塞的制作包裝培養(yǎng)皿和吸管等。

第十六頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序12

（培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器加壓蒸汽滅菌法其步驟如下：1.滅菌器內(nèi)加入一定量的水，將用防水紙包扎好的物品放入其中。2.接通電源，進(jìn)行加熱。3.排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開，待排出大氣后關(guān)閉排氣閥；或關(guān)閉排氣閥，待壓力上升到0.5kg/cm2時(shí)再打開排氣閥，待壓力回復(fù)到0時(shí)再關(guān)閉排氣閥。4.當(dāng)壓力達(dá)15bl/in2（即1.05kg/cm2）時(shí)，此時(shí)滅菌器內(nèi)的溫度為1210C，維持30min。對熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸等物時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長時(shí)間。5.滅菌時(shí)間一到，切斷電源，待壓力降至零時(shí)，才能打開排氣閥，然后打開滅菌器蓋，取出物品。第十七頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序13第十八頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序14第十九頁，共24頁。實(shí)驗(yàn)程序15（培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）間歇滅菌法：待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，連續(xù)3d重復(fù)進(jìn)行。在每兩次蒸煮之間，將物品（指培養(yǎng)基）放在370C恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，以便下次蒸煮時(shí)殺滅。過濾除菌法：不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生