PCR實驗室新冠核酸培訓考核試題(題庫與答案)一、單選題（每題2分，共30分）1.新冠病毒核酸檢測中，常用的采樣拭子類型是（）A.海綿拭子B.聚酯纖維拭子C.植絨拭子D.棉拭子答案：C。植絨拭子具有采集和釋放效率高的特點，是新冠病毒核酸檢測常用的采樣拭子。棉拭子可能會吸附核酸，影響檢測結果；海綿拭子和聚酯纖維拭子在核酸檢測采樣中應用相對較少。2.以下哪種標本新冠病毒核酸檢測陽性率相對較高（）A.鼻咽拭子B.口咽拭子C.痰液D.血液答案：C。痰液中病毒含量相對較高，其核酸檢測陽性率通常高于鼻咽拭子、口咽拭子。血液一般不作為新冠病毒核酸檢測的常規(guī)標本，在感染早期血液中可能檢測不到病毒核酸。3.進行新冠病毒核酸提取時，最常用的方法是（）A.酚氯仿抽提法B.磁珠法C.硅膠膜吸附法D.鹽析法答案：B。磁珠法操作簡便、自動化程度高、提取效率高，是目前新冠病毒核酸提取最常用的方法。酚氯仿抽提法操作復雜且有一定毒性；硅膠膜吸附法在一些核酸提取中有應用，但不如磁珠法廣泛；鹽析法一般較少用于病毒核酸提取。4.PCR反應中，引物的作用是（）A.提供模板B.催化DNA合成C.啟動DNA合成D.穩(wěn)定反應體系答案：C。引物是一小段單鏈DNA或RNA，它能與模板DNA特定區(qū)域結合，為DNA聚合酶提供起始合成的3'OH末端，從而啟動DNA合成。模板是待擴增的DNA序列；催化DNA合成的是DNA聚合酶；引物主要不是用于穩(wěn)定反應體系。5.新冠病毒核酸檢測中，通常檢測的靶基因是（）A.ORF1ab、N基因B.S基因、E基因C.M基因、N基因D.ORF1ab、S基因答案：A。在新冠病毒核酸檢測中，通常選擇ORF1ab和N基因作為檢測靶標。這兩個基因在新冠病毒基因組中相對保守，有利于準確檢測病毒。S基因、E基因、M基因也有一定的檢測意義，但不是最常用的檢測靶基因。6.PCR反應的三個基本步驟順序是（）A.退火、變性、延伸B.變性、退火、延伸C.延伸、變性、退火D.變性、延伸、退火答案：B。PCR反應首先需要高溫使雙鏈DNA變性為單鏈，然后在適宜溫度下引物與單鏈模板退火結合，最后DNA聚合酶在適宜溫度下將脫氧核苷酸添加到引物3'OH末端進行延伸，合成新的DNA鏈。7.新冠病毒核酸檢測實驗室屬于（）A.一級生物安全實驗室B.二級生物安全實驗室C.三級生物安全實驗室D.四級生物安全實驗室答案：B。新冠病毒核酸檢測實驗室一般屬于二級生物安全實驗室（BSL2），按照相關規(guī)范進行設計和管理，以確保檢測人員的安全和檢測結果的準確性。一級生物安全實驗室主要處理對人體、動植物或環(huán)境危害較低的微生物；三級和四級生物安全實驗室主要處理高致病性和高傳染性的病原微生物，新冠病毒核酸檢測通常不需要在這兩級實驗室進行。8.在核酸提取過程中，使用的生物安全柜應定期進行（）A.清潔B.消毒C.維護和校準D.以上都是答案：D。生物安全柜在核酸提取過程中是重要的防護設備，需要定期進行清潔以去除表面的污染物；消毒可以殺滅可能存在的病原微生物，防止交叉污染；維護和校準能確保其性能穩(wěn)定可靠，保證操作人員的安全和實驗的準確性。9.采集新冠病毒核酸標本時，采樣人員應采取的防護級別是（）A.一級防護B.二級防護C.三級防護D.普通防護答案：B。采集新冠病毒核酸標本時，采樣人員面臨較高的感染風險，應采取二級防護，包括穿防護服、戴護目鏡或防護面屏、戴醫(yī)用防護口罩、戴手套等，以有效保護自身安全。一級防護主要用于一般診療活動；三級防護用于為疑似或確診患者實施產生氣溶膠操作時；普通防護防護級別較低，不能滿足采樣人員的防護需求。10.新冠病毒核酸檢測試劑的有效期通常是（）A.36個月B.612個月C.1224個月D.2436個月答案：C。一般來說，新冠病毒核酸檢測試劑的有效期在1224個月，具體有效期會因不同廠家和產品而有所差異。試劑在有效期內使用才能保證其性能和檢測結果的準確性。11.核酸檢測結果為陽性，但Ct值較高，可能的原因是（）A.標本中病毒載量低B.試劑靈敏度低C.操作失誤D.以上都有可能答案：D。Ct值是指在PCR反應中，熒光信號達到設定閾值時所經歷的循環(huán)數(shù)。Ct值較高，可能是標本中病毒載量低，需要更多的循環(huán)數(shù)才能檢測到足夠的熒光信號；也可能是試劑靈敏度低，對低濃度病毒的檢測能力不足；操作失誤，如加樣不準確、核酸提取效率低等也可能導致Ct值升高。12.以下關于新冠病毒核酸檢測實驗室分區(qū)的說法，錯誤的是（）A.試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增分析區(qū)應嚴格分開B.各區(qū)之間可以不設置緩沖間C.各區(qū)的空氣流向應從清潔區(qū)到污染區(qū)D.各區(qū)應配備專用的儀器設備答案：B。新冠病毒核酸檢測實驗室的試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增分析區(qū)應嚴格分開，并且各區(qū)之間應設置緩沖間，以防止交叉污染。各區(qū)的空氣流向應從清潔區(qū)到污染區(qū)，同時各區(qū)應配備專用的儀器設備，避免不同區(qū)域的物品交叉使用導致污染。13.在核酸檢測過程中，防止氣溶膠污染的措施不包括（）A.規(guī)范操作，避免劇烈振蕩標本B.使用帶濾芯的吸頭C.定期對實驗室進行紫外線消毒D.增加實驗室人員數(shù)量答案：D。增加實驗室人員數(shù)量并不能防止氣溶膠污染，反而可能會因人員活動增加而增加氣溶膠產生和傳播的風險。規(guī)范操作，避免劇烈振蕩標本可以減少氣溶膠的產生；使用帶濾芯的吸頭能有效阻擋氣溶膠在移液器中的傳播；定期對實驗室進行紫外線消毒可以殺滅空氣中的病原微生物，減少氣溶膠污染的危害。14.新冠病毒核酸檢測標本在運輸過程中應保持（）A.常溫B.4℃C.20℃D.80℃答案：B。新冠病毒核酸檢測標本在運輸過程中一般應保持4℃，這樣既能保證病毒核酸的穩(wěn)定性，又便于運輸和保存。如果需要長期保存標本，可以將其置于20℃或80℃。常溫下病毒核酸容易降解，影響檢測結果。15.以下哪種情況不屬于假陽性結果的可能原因（）A.實驗室污染B.標本被交叉污染C.標本中存在抑制物D.試劑質量問題答案：C。標本中存在抑制物可能會導致假陰性結果，因為抑制物會影響PCR反應的進行，使病毒核酸無法有效擴增，從而檢測不到陽性信號。實驗室污染、標本被交叉污染、試劑質量問題都可能導致假陽性結果，使原本陰性的標本檢測為陽性。二、多選題（每題3分，共30分）1.新冠病毒核酸檢測采樣的注意事項包括（）A.采樣前患者應至少30分鐘內避免吸煙、飲酒、嚼口香糖B.采樣時應嚴格按照操作規(guī)程進行，避免損傷黏膜C.采樣后應及時將標本放入采樣管中，并密封好D.采樣人員應做好個人防護答案：ABCD。采樣前患者至少30分鐘內避免吸煙、飲酒、嚼口香糖，可減少對采樣部位的影響，提高采樣的準確性。采樣時嚴格按照操作規(guī)程進行，避免損傷黏膜，既能保證患者的安全，又能保證標本的質量。采樣后及時將標本放入采樣管并密封好，可防止標本污染和泄漏。采樣人員做好個人防護是防止自身感染的關鍵。2.常見的PCR反應體系成分包括（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.DNA聚合酶答案：ABCD。PCR反應體系通常包括模板DNA，即待擴增的核酸序列；引物用于啟動DNA合成；dNTP（脫氧核苷三磷酸）是合成DNA的原料；DNA聚合酶負責催化dNTP聚合形成新的DNA鏈。此外，還可能包括緩沖液等成分，以提供適宜的反應環(huán)境。3.新冠病毒核酸檢測實驗室的質量控制措施包括（）A.室內質控B.室間質評C.人員培訓和考核D.儀器設備的校準和維護答案：ABCD。室內質控是在實驗室內部對檢測過程進行監(jiān)控，確保檢測結果的準確性和穩(wěn)定性。室間質評是通過參加外部質量評價活動，與其他實驗室進行比對，評估實驗室的檢測能力。人員培訓和考核能保證檢測人員具備專業(yè)的知識和技能。儀器設備的校準和維護能確保儀器的性能穩(wěn)定，為準確檢測提供保障。4.核酸提取過程中可能出現(xiàn)的問題有（）A.核酸提取量不足B.核酸純度低C.核酸降解D.交叉污染答案：ABCD。核酸提取量不足可能是由于樣本處理不當、提取方法不適合等原因導致。核酸純度低可能是因為提取過程中雜質去除不徹底。核酸降解可能是由于操作過程中存在核酸酶污染或保存條件不當。交叉污染可能是由于不同樣本之間的操作不當或實驗環(huán)境清潔不到位引起。5.以下關于新冠病毒核酸檢測結果報告的說法，正確的是（）A.檢測結果應及時報告給相關部門和患者B.報告應包括檢測方法、檢測結果、檢測時間等信息C.陽性結果應進行復核D.陰性結果不需要進行審核答案：ABC。檢測結果應及時報告給相關部門和患者，以便采取相應的措施。報告應詳細包括檢測方法、檢測結果、檢測時間等信息，使報告具有可追溯性。陽性結果應進行復核，以確保結果的準確性。陰性結果也需要進行審核，審核過程可以發(fā)現(xiàn)可能存在的問題，保證檢測質量。6.為防止PCR實驗室的交叉污染，可采取的措施有（）A.嚴格分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.定期對實驗室進行清潔和消毒D.不同區(qū)域的工作服應分開使用答案：ABCD。嚴格分區(qū)操作可以避免不同操作區(qū)域之間的相互污染。使用一次性耗材可以減少因重復使用物品導致的交叉污染風險。定期對實驗室進行清潔和消毒能殺滅可能存在的病原微生物。不同區(qū)域的工作服分開使用可以防止人員在不同區(qū)域之間傳播污染。7.新冠病毒核酸檢測標本采集的部位有（）A.鼻咽部B.口咽部C.痰液D.下呼吸道分泌物答案：ABCD。鼻咽部和口咽部是常用的采樣部位，操作相對簡便。痰液中病毒含量相對較高，也是重要的采樣標本。下呼吸道分泌物在一些特殊情況下，如重癥患者，也可作為采樣部位，能更準確地反映病毒感染情況。8.PCR反應中，影響Ct值的因素有（）A.模板濃度B.引物濃度C.酶的活性D.反應溫度和時間答案：ABCD。模板濃度越高，Ct值越低，因為需要較少的循環(huán)數(shù)就能達到設定的熒光閾值。引物濃度、酶的活性會影響PCR反應的效率，從而影響Ct值。反應溫度和時間不合適，會導致PCR反應不能正常進行，也會影響Ct值。9.核酸檢測試劑的性能評估指標包括（）A.靈敏度B.特異性C.重復性D.線性范圍答案：ABCD。靈敏度是指試劑能夠檢測到的最低病毒載量；特異性是指試劑只對目標病毒產生陽性反應，而對其他非目標物質不產生反應；重復性是指在相同條件下多次檢測結果的一致性；線性范圍是指試劑在一定濃度范圍內能夠準確檢測的范圍。這些指標都能反映核酸檢測試劑的性能優(yōu)劣。10.新冠病毒核酸檢測實驗室的人員資質要求包括（）A.具有醫(yī)學或相關專業(yè)背景B.經過專業(yè)培訓并考核合格C.熟悉實驗室操作規(guī)范和生物安全知識D.具有一定的臨床診斷經驗答案：ABC。新冠病毒核酸檢測實驗室的人員應具有醫(yī)學或相關專業(yè)背景，以便理解和掌握檢測原理和方法。經過專業(yè)培訓并考核合格，能保證其具備從事檢測工作的技能。熟悉實驗室操作規(guī)范和生物安全知識是確保檢測工作安全、準確進行的基礎。核酸檢測實驗室人員主要負責檢測工作，不一定需要具有臨床診斷經驗。三、判斷題（每題2分，共20分）1.新冠病毒核酸檢測標本采集后可在常溫下長時間保存。（）答案：錯誤。新冠病毒核酸檢測標本采集后一般應盡快處理和檢測，如需保存，短期可4℃保存，長期需20℃或80℃保存，常溫下長時間保存會導致病毒核酸降解，影響檢測結果。2.PCR反應中，循環(huán)次數(shù)越多，擴增產物的量就一定越多。（）答案：錯誤。在PCR反應初期，隨著循環(huán)次數(shù)的增加，擴增產物的量呈指數(shù)增長。但當循環(huán)次數(shù)達到一定程度后，由于引物、dNTP等反應物的消耗，酶活性的下降等因素，擴增產物的量不再增加，甚至可能出現(xiàn)平臺期，所以不是循環(huán)次數(shù)越多，擴增產物的量就一定越多。3.只要核酸檢測結果為陰性，就可以完全排除新冠病毒感染。（）答案：錯誤。核酸檢測結果受多種因素影響，如采樣方法、標本質量、檢測試劑的靈敏度等?？赡艽嬖诩訇幮郧闆r，例如在感染早期病毒載量低時可能檢測不到，所以陰性結果不能完全排除新冠病毒感染，需要結合患者的臨床癥狀、流行病學史等進行綜合判斷。4.新冠病毒核酸檢測實驗室的空氣可以直接排放到室外。（）答案：錯誤。新冠病毒核酸檢測實驗室的空氣含有可能的病原微生物，不能直接排放到室外，需要經過高效空氣過濾器（HEPA）等處理，去除空氣中的病原微生物后才能排放，以防止對環(huán)境造成污染。5.采集新冠病毒核酸標本時，拭子可以反復使用。（）答案：錯誤。采集新冠病毒核酸標本時，拭子為一次性使用耗材，反復使用會導致交叉污染，影響檢測結果的準確性，同時也不符合生物安全要求。6.核酸提取過程中，離心操作可以不使用離心機的平衡裝置。（）答案：錯誤。核酸提取過程中，離心操作必須使用離心機的平衡裝置。如果不使用平衡裝置，離心機在高速運轉時會產生不平衡的力，可能損壞離心機，還會影響離心效果，甚至導致標本泄漏和污染。7.PCR實驗室的清潔和消毒只需要在實驗結束后進行。（）答案：錯誤。PCR實驗室的清潔和消毒不僅要在實驗結束后進行，在實驗過程中也需要定期進行清潔和消毒，例如在更換樣本批次、操作不同區(qū)域時，都要對操作臺面、儀器設備等進行清潔和消毒，以防止交叉污染。8.新冠病毒核酸檢測試劑可以在任何實驗室使用。（）答案：錯誤。新冠病毒核酸檢測試劑需要在符合生物安全要求的實驗室使用，一般為二級生物安全實驗室，并且實驗室需要具備相應的儀器設備和經過專業(yè)培訓的人員，以保證檢測結果的準確性和操作人員的安全。9.核酸檢測結果的報告可以由未經授權的人員發(fā)出。（）答案：錯誤。核酸檢測結果的報告必須由經過授權的人員發(fā)出，報告人員需要對檢測結果的準確性和報告的規(guī)范性負責。未經授權的人員發(fā)出報告可能會導致報告信息不準確或出現(xiàn)其他問題。10.為了提高檢測效率，PCR反應的時間可以隨意縮短。（）答案：錯誤。PCR反應的時間是根據(jù)反應的原理和試劑的要求設定的，包括變性、退火、延伸等步驟都有合適的時間范圍。隨意縮短反應時間會導致反應不充分，影響擴增效果，從而降低檢測的準確性。四、簡答題（每題10分，共20分）1.簡述新冠病毒核酸檢測的基本流程。答：新冠病毒核酸檢測的基本流程主要包括以下幾個步驟：（1）標本采集：使用專用的采樣拭子采集患者的鼻咽拭子、口咽拭子、痰液等標本。采樣時，采樣人員需做好二級防護，嚴格按照操作規(guī)程進行，避免損傷患者黏膜。（2）標本運輸和保存：采集后的標本應及時放入含有保存液的采樣管中，密封好后在4℃條件下運輸至實驗室。如果不能及時檢測，可將標本置于20℃或80℃保存。（3）核酸提?。涸跇吮局苽鋮^(qū)，采用磁珠法等核酸提取方法，從標本中提取新冠病毒的核酸。提取過程需嚴格遵守操作規(guī)程，防止核酸降解和交叉污染。（4）PCR反應體系配制：在試劑準備區(qū)，根據(jù)檢測試劑的要求，配制包含模板核酸、引物、dNTP、DNA聚合酶等成分的PCR反應體系。（5）擴增和檢測：將配制好的PCR反應體系放入PCR擴增儀中，按照設定的程序進行變性、退火、延伸等循環(huán)反應。在反應過程中，通過熒光信號的變化實時監(jiān)測擴增產物的提供情況，得到Ct值。（6）結果分析和根據(jù)Ct值和檢測試劑的判定標準，分析檢測結果。陽性結果需進行復核，陰性結果也需審核。最終將檢測結果及時報告給相關部門和患者，報告內容應包括檢測方法、檢測結