BDB21TechnicalProtocolfortheGeneticDeterminationofPhenotypicandMolecularTraits遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I II 1 1 1 13.2種質(zhì)資源germplasmr 1 13.4SSR標(biāo)記simplese 13.5遺傳多樣性geneticd 14表型性狀測定 14.1枝、葉測定 24.2花器官測定 24.3果、核、仁測定 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 4 5 6 7歸口管理部門通訊地址：遼寧省林業(yè)和草原局（沈陽市和平區(qū)太原北街2號），聯(lián)系電話：文件起草單位通訊地址：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)(沈陽市沈河區(qū)東陵路120號)，聯(lián)系電話：024-8841山杏表型及分子性狀遺傳測定技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)適用于遼寧省范圍內(nèi)山杏（Prunussibirica）適生地區(qū)山杏種質(zhì)下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改訂單）適用于本GB/T15776造林技術(shù)規(guī)程NY/T4201梨品種鑒定SSR分子標(biāo)記法NY/T3642桃品種鑒定SSR分子標(biāo)記法LY/T2745仁用杏品種鑒定技術(shù)規(guī)程SSR分子具有喜光、耐寒、耐旱、耐貧瘠、萌蘗力強等特點，杏仁具有較高的經(jīng)濟價值和市場開發(fā)前景。在遼寧地區(qū)主要以西伯利亞杏（Prunussibirica）為主。具體形態(tài)特征和生物學(xué)3.2種質(zhì)資源germplasm是選育新品種的基礎(chǔ)材料，包括野生資源、地方品種、選育品種、家系、品系、無性系、遺傳生育期、生物學(xué)特征特性、產(chǎn)量、抗病蟲、3.4SSR標(biāo)記simplesequ3.5遺傳多樣性genetic一個物種內(nèi)不同群體之間或一個群體內(nèi)不同個體之間的遺傳變異總和。它是生物多樣性的重要組4表型性狀測定2小枝選自植株東、南、西、北4個方向的外圍中、上部枝條，每株測4小枝，測量小枝長度、粗度。從4個方向分別選取成熟葉片10個～20個，測量葉長、葉寬、葉柄量。計算葉形指數(shù)，記載枝、葉質(zhì)量性狀。長度與粗度用游標(biāo)卡尺或卷尺測量。質(zhì)量性狀及其編碼在盛花期進(jìn)行。在植株東、南、西、北4個方向的小枝上各選取花10朵～20朵，測量花冠直徑，查數(shù)花瓣數(shù)量、雌蕊個數(shù)、完全花比例，記載花瓣顏色、花萼顏色、花絲顏色、花藥顏色等質(zhì)量性狀。花冠直徑用游標(biāo)卡尺測量。質(zhì)量性狀及其編碼見在果實成熟期進(jìn)行。在植株東、南、西、北4個方向的小枝上各選取果平均單果重、果皮厚度、核三徑、平均單核重、出核率、平均單仁重、出仁率。記載果實形狀、果皮顏色、果肉干燥程度、果肉開裂程度、核粘離性、果實口感、杏核形狀、核背基、核基部、核翼紋、核縫翅、核面光滑度、仁數(shù)/核、杏仁口感等質(zhì)量性狀。長度使用游標(biāo)卡尺進(jìn)行測量，重量采用千分之一分析天平進(jìn)行稱量。質(zhì)量性狀及其編碼參照LY/T2745進(jìn)行操作。選取山杏1年生嫩枝進(jìn)行葉片采集，編號標(biāo)記后，將嫩葉剪下包入錫紙內(nèi)，置于液氮罐中速凍，帶回試驗室，將用錫紙包好的葉片迅速置于-80℃超低溫冰箱中保存，以采用CTAB法提取山杏基因組總DNA，具體3（2）第一步體系溫度為94℃預(yù)變性持續(xù)5min；（4）退火溫度設(shè)為55℃（不同引物以實際摸索的最適退火溫度為準(zhǔn)），時間為30s；聚丙烯酰胺凝膠電泳的具體實驗方法參照NY（1）對山杏的枝、葉、花、果、核、仁測量結(jié)果應(yīng)用Excel2024進(jìn)行統(tǒng)計，對質(zhì)量性狀進(jìn)行編（2）參照Marker、對照樣本（測序樣本）、擴增條帶的大小、重復(fù)基元和重梯度凝膠電泳的結(jié)果通過軟件ImageLab4.0拾取擴分型結(jié)果，導(dǎo)入軟件DataTrans2.0和GenAlEx6.5轉(zhuǎn)換為分析軟件（I期望雜合度（HE）、固定指數(shù)（FIT）、近交系數(shù)（FIS）、遺傳分化系數(shù)（FST）及哈迪溫伯格平衡Chi-Square檢驗顯著性、基因流（Nm），采用Cervus3.（PIC（4）分別運用STRUCTURE2.3軟件和NTSYS2.1軟件對SSR標(biāo)記的擴4A.1形態(tài)特征枝光滑，呈褐色或灰白色。山杏不同于其它杏樹的主要特征在于它的小枝上常常布滿了刺狀核果，扁圓形，表面粗糙，有明顯縱溝，邊緣有銳棱，易與果肉分離。種仁多味苦，可入藥A.2生物學(xué)特性2000m之間。山杏具有極強的抗逆性，耐旱，耐寒，耐瘠薄，抗鹽堿芽萌發(fā)，遼寧地區(qū)一般在3月下旬花蕾膨大，4月上旬至中旬花開放，花期約一周左右。幼果在5~5山杏枝條、葉片、花器官、果實、杏核和杏仁1234567896微量移液器、電子天平、搖床、PCR擴增儀、磁力攪拌器、制冰機、微波爐、酸度計、凝膠氫氧化鈉、液氨、氯化鈉、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、菌20min，室溫保存；ddH2O定容至50mL，121℃高壓滅菌20min，室（5）氯仿一異戊醇（24:1分別量取240mL氯仿和10mL異戊醇，將兩7退火溫度(℃)X-6-FX-6-RX-9-FATAGCACCGGCAAGAGATTTGTX-9-RX-10-FACTCCGTATGGAGAAGGGCAX-10-RX-11-FX-11-RX-12-FATGAGGAAACACACAACCAX-12-RX-18-FX-18-RX-19-FX-19-RX-20-FX-20-RX-23-FX-23-RX-27-FX-27-RX-41H-FX-41H-RX-42H-FX-42H-RX-44H-FX-44H-RX-48H-FX-48H-RAGAAGTGCTAGTCTCACCCAX-50H-FAATCAAAGGCTAAAGACACCCX-50H-RX-51H-F8X-