2025安徽省pcr上崗證考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的中文名稱是（）A.聚合酶鏈反應(yīng)B.核酸內(nèi)切酶反應(yīng)C.連接酶反應(yīng)D.逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)答案：A2.PCR反應(yīng)中，哪種酶起關(guān)鍵作用（）A.限制酶B.逆轉(zhuǎn)錄酶C.Taq酶D.DNA連接酶答案：C3.在PCR反應(yīng)體系中，引物的作用是（）A.提供模板B.提供能量C.引導(dǎo)DNA合成的起始D.終止反應(yīng)答案：C4.PCR反應(yīng)的三個(gè)基本步驟是（）A.變性、退火、延伸B.變性、連接、延伸C.退火、連接、延伸D.變性、退火、連接答案：A5.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)的原料（）A.dNTPB.引物C.模板DNAD.RNA酶答案：D6.PCR反應(yīng)中，變性溫度一般為（）A.90-95℃B.50-55℃C.70-75℃D.30-35℃答案：A7.以下關(guān)于PCR產(chǎn)物分析方法，錯(cuò)誤的是（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.高效液相色譜D.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定答案：D8.PCR技術(shù)可用于（）A.基因克隆B.遺傳病診斷C.病原體檢測(cè)D.以上都是答案：D9.在進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，為避免污染應(yīng)采取的措施不包括（）A.分區(qū)操作B.試劑和器材的專用C.頻繁更換操作人員D.嚴(yán)格的清潔消毒答案：C10.PCR反應(yīng)中，退火溫度主要取決于（）A.模板長(zhǎng)度B.引物長(zhǎng)度和GC含量C.酶的活性D.dNTP濃度答案：B二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的特點(diǎn)包括（）A.特異性強(qiáng)B.靈敏度高C.操作簡(jiǎn)便D.快速E.對(duì)樣品要求低答案：ABCDE2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物設(shè)計(jì)C.酶的種類和活性D.反應(yīng)溫度和時(shí)間E.反應(yīng)體系中的離子濃度答案：ABCDE3.以下屬于PCR衍生技術(shù)的是（）A.反轉(zhuǎn)錄PCRB.巢式PCRC.實(shí)時(shí)熒光定量PCRD.多重PCRE.不對(duì)稱PCR答案：ABCDE4.在PCR實(shí)驗(yàn)室中，需要配備的儀器設(shè)備有（）A.基因擴(kuò)增儀B.離心機(jī)C.移液器D.電泳儀E.紫外檢測(cè)儀答案：ABCDE5.PCR反應(yīng)中可能出現(xiàn)的問(wèn)題有（）A.假陽(yáng)性B.假陰性C.非特異性擴(kuò)增D.引物二聚體形成E.擴(kuò)增效率低答案：ABCDE6.以下關(guān)于引物設(shè)計(jì)原則的說(shuō)法正確的是（）A.長(zhǎng)度一般為15-30bpB.GC含量在40%-60%為宜C.避免引物內(nèi)部形成二級(jí)結(jié)構(gòu)D.引物間不能有互補(bǔ)序列E.3'端要與模板嚴(yán)格互補(bǔ)答案：ABCDE7.可用于PCR反應(yīng)的模板類型有（）A.基因組DNAB.cDNAC.質(zhì)粒DNAD.線粒體DNAE.總RNA答案：ABCDE8.對(duì)于PCR反應(yīng)的產(chǎn)物，可采用以下哪些方法進(jìn)行檢測(cè)（）A.瓊脂糖凝膠電泳結(jié)合溴化乙錠染色B.熒光定量檢測(cè)C.測(cè)序分析D.酶切分析E.雜交分析答案：ABCDE9.在PCR反應(yīng)體系中，dNTP的作用包括（）A.提供合成DNA的原料B.提供能量C.調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pHD.穩(wěn)定酶的活性E.參與引物與模板的結(jié)合答案：AB10.以下關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室的布局要求正確的是（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)E.各區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分隔答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)可以在常溫下進(jìn)行。（）答案：錯(cuò)誤2.Taq酶具有熱穩(wěn)定性。（）答案：正確3.引物不需要與模板完全互補(bǔ)。（）答案：正確4.PCR反應(yīng)只能用于檢測(cè)DNA病毒。（）答案：錯(cuò)誤5.在PCR反應(yīng)中，反應(yīng)體系越大越好。（）答案：錯(cuò)誤6.所有的RNA都可以直接作為PCR的模板。（）答案：錯(cuò)誤7.瓊脂糖凝膠電泳只能用于定性分析PCR產(chǎn)物。（）答案：錯(cuò)誤8.巢式PCR比普通PCR的特異性更高。（）答案：正確9.只要引物設(shè)計(jì)正確，PCR反應(yīng)就不會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題。（）答案：錯(cuò)誤10.PCR實(shí)驗(yàn)室的各區(qū)域可以隨意人員流動(dòng)。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR反應(yīng)基于DNA的半保留復(fù)制原理。在體外，以DNA為模板，以四種dNTP為原料，在Taq酶等的作用下，經(jīng)過(guò)變性（使模板DNA雙鏈解開）、退火（引物與模板互補(bǔ)序列結(jié)合）、延伸（合成新的DNA鏈）三個(gè)基本步驟的多次循環(huán)，實(shí)現(xiàn)特定DNA片段的大量擴(kuò)增。2.說(shuō)出至少三種PCR反應(yīng)中防止污染的措施。答案：①分區(qū)操作，將試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析等區(qū)域分開；②使用專用的試劑和器材；③嚴(yán)格進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室的清潔消毒；④操作人員嚴(yán)格遵守操作規(guī)范，防止交叉污染等。3.簡(jiǎn)述引物設(shè)計(jì)的主要原則。答案：引物長(zhǎng)度一般為15-30bp，GC含量在40%-60%為宜，避免引物內(nèi)部形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，引物間不能有互補(bǔ)序列，3'端要與模板嚴(yán)格互補(bǔ)等。4.簡(jiǎn)要說(shuō)明實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)。答案：實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、能對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析、自動(dòng)化程度高、可避免產(chǎn)物的污染等優(yōu)點(diǎn)。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在新型冠狀病毒檢測(cè)中的應(yīng)用及意義。答案：PCR技術(shù)可特異性擴(kuò)增新冠病毒核酸片段，用于檢測(cè)患者是否感染。其意義在于快速、準(zhǔn)確地診斷病例，有助于早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療，控制疫情傳播，為公共衛(wèi)生決策提供依據(jù)。2.如何提高PCR反應(yīng)的特異性？答案：可從引物設(shè)計(jì)方面保證特異性，如遵循引物設(shè)計(jì)原則；優(yōu)化反應(yīng)條件，如合適的退火溫度；采用特異性更高的PCR衍生技術(shù)，如巢式PCR等。3.分析PCR反應(yīng)中假陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)的可能原因及解決辦法。答案：可能原